增强组织工程支架：纤维蛋白胶稳定性的初步研究

目的：研究抑肽酶和氨甲环酸对于减缓纤维蛋白胶支架降解速度的作用。方法：将抑肽酶和氨甲环酸加入纤维蛋白胶中，构建细胞标准支架复合物和细胞增强支架复合物，体外培养，观察软骨细胞在支架中的繁殖情况、形态学、超微结构检测以及载体降解情况。结果：两组复合物体外培养一二周后，其质量有显著性差异；两组复合物的细胞生长曲线无明显差别；软骨细胞在纤维蛋白胶支架中立体培养可分泌胞外基质。结论：在纤维蛋白胶中加入抑肽酶和氨甲环酸，可显著的减缓纤维蛋白胶的降解速度，并且对软骨细胞的繁殖、表型的维持、基质的分泌无不良影响。     

抑肽酶/氨甲环酸改良可注射性纤维蛋白凝胶的体外实验

背景：可注射性纤维蛋白凝胶为软骨缺损组织工程完全再生修复的临床应用带来了新的方向,其降解速度的调控是其中的关键问题之一。目的：在可注射性纤维蛋白凝胶中引入不同浓度的抑肽酶和氨甲环酸,观察其对纤维蛋白凝胶支架降解速率的影响。设计、时间及地点：体外细胞学实验,于2008-02/08在广东省构建与检测实验室进行。材料：以纤维蛋白原、凝血酶及氯化钙制备纤维蛋白凝胶。方法：取3周龄新西兰幼兔的关节软骨制取软骨细胞,体外单层培养、扩增后植于标准纤维蛋白凝胶支架和改良纤维蛋白凝胶支架（加入抑肽酶7500,12500,17500MIU/L及氨甲环酸15,20,25g/L复合液）上,进行体外培养、扩增6周。主要观察指标：支架降解情况。结果：支架细胞复合物体外培养3周时,标准组已完全崩解,改良各组体积尚不到原来1/2。培养6周时仍能保持其一定的外形,具有一定的厚度及弹性。不同浓度的抑肽酶和氨甲环酸,在体外环境下均显著地减缓了纤维蛋白胶的降解速度,低于12500MIU/L的抑肽酶和20g/L氨甲环酸对软骨细胞的繁殖、表型的维持、基质的分泌无明显不良影响,而高于此浓度的抑肽酶和氨甲环酸的加入明显抑制了细胞的增殖、表型的维持和基质的分泌。结论：通过调节纤维蛋白凝胶中抑肽酶和氨甲环酸的含量,可实现对纤维蛋白凝胶降解速度的调控。     

骨形态发生蛋白6对体外培养组织工程软骨的影响

背景:研究表明,骨形态发生蛋白复合物可促进软骨细胞的分化与基质的分泌,并影响软骨细胞的成熟与分化,其中以骨形态发生蛋白6作用明显.目的:拟观察骨形态发生蛋白6对体外培养组织工程软骨的影响.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的体外实验,于2006-01/2007-06在南方医科大学珠江医院中心实验室完成.材料:3周龄新西兰幼兔,体质量2.5 kg)用于采集软骨细胞.方法:以软骨细胞为种子细胞种植于改良纤维蛋白胶支架上,构建细胞改良支架复合物,体外培养,各培养孔内分别随机加入含2.5 g/L骨形态发生蛋白6的F12完全培养液或空白F12完全培养液2.0～3.0 mL.细胞支架复合物培养的第1～7天,每日骨形态发生蛋白6组和空白组中均随机取3孔标本,锥虫蓝染色,计活细胞数,绘制生长曲线.取1 g氨基己糖盐酸盐加蒸馏水至100 mL,随机选取部分组织工程软骨块,精确称取每份标本湿重各0.05 g,冷却后读取吸光度(A530)值.主要观察指标:苏木精-伊红染色、Alcian blue染色,光学显微镜下观察细胞生长、分化及支架降解情况.每组于培养的第7天和第14天,分别取12块标本,测细胞支架复合物质量.利用标准曲线计算出每份样品中的氨基己糖含量.结果:苏木精-伊红染色可见软骨细胞在纤维蛋白胶的空泡内贴壁样生长,部分细胞聚集成团.两组切片Alcian blue染色可见胞外基质蓝染,提示有酸性粘多糖的分泌.两组细胞生长速度无明显差异,空白组细胞倍增时间为5.0 d,骨形态发生蛋白6组为4.7d.细胞支架复合物质量测量结果显示骨形态发生蛋白6组为(135.13±0.64)mg,空白组为(117.87±0.37)mg,说明骨形态发生蛋白6组支架降解速度显著慢于空白组(P<0.05).骨形态发生蛋白6组氨基已糖含量为(72.06±1.11)mg/g,与空白组(67.12±1.83)mg/g相比,差异具有显著性意义(P<0.01),提示骨形态发生蛋白6组细胞外基质分泌较空白组多.结论:骨形态发生蛋白6可以促进体外培养在纤维蛋白胶软骨模块中的关节细胞分泌细胞外基质,从而有利于组织工程软骨的体外构建.     

纤维蛋白胶塑形、异体微粒软骨脱细胞基质支架的人工软骨研究

目的:利用软骨微粒脱细胞基质这种新型支架材料及纤维蛋白胶,体外构建可塑形及具有良好生物相容性的组织工程化软骨。方法:制备绵羊关节软骨微粒脱细胞基质并与体外扩增的异体关节软骨细胞及纤维蛋白胶混合,塑成圆柱形,体外培养。结果:软骨微粒脱细胞基质及纤维蛋白胶与异体软骨细胞有良好的生物相容性,软骨细胞生长和分泌功能良好,塑成的复合物具有一定的硬度和弹性。结论:塑成的圆柱形软骨细胞-异体软骨微粒脱细胞基质-纤维蛋白胶复合物可于体外形成软骨样组织,可进一步应用于体内修复关节软骨缺损。     

模拟微重力培养骨髓间充质干细胞定向诱导复合改良纤维蛋白原支架修复兔关节软骨缺损

背景:模拟微重力培养系统通过模拟细胞生存的体内微重力环境,使细胞承受较低的剪切力, 提高细胞内外、细胞间物质传递效率,从而提高细胞分化质量.目的:观察微重力培养环境在构建组织工程模块修复关节软骨缺损中的作用.设计,时间及地点:体外实验采用自身对照;体内实验采用随机分组比较,于2007-12/2008-06在广东省构建与检测实验室及南方医院动物实验中心进行.材料:3周普通级龄新西兰兔1只用于骨髓间充质干细胞培养;3月龄新西兰兔48只用于体内验证实验.方法:以纤维蛋白胶粉、凝血酶、氯化钙、抑肽酶、氨甲环酸制备纤维蛋白原支架.体外培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞3周,使之吸附于改良纤维蛋白原支架上在微重力环境下三维立体培养3周.48只兔做软骨钻孔制备软骨缺损动物模型,每只兔4孔.实验分为4组,每组48孔,微重力培养组在孔内植入微重力培养下的软骨细胞组织模块;普通培养组在孔内植入普通培养下的软骨细胞组织模块;单纯支架组在孔内植入空白支架;空白组孔内不植入任何材料,分别于2,6,12周处死动物,取相应标本.主要观察指标:通过生长曲线、倒置相差显微镜、组织学检测微重力培养环境在三维立体培养对软骨细胞增殖及功能的影响,以及用组织工程学评分检测微重力环境下培养的软骨模块对缺损的修复效果.结果:模拟微重力培养条件下构建的模块体外培养3周,细胞数量明显增多,并分泌较多的细胞基质,包裹在软骨细胞周围.组织工程学评分显示微重力培养组修复软骨缺损的效果明显好于其他组.结论:模拟微重力培养环境对三维立体培养软骨细胞模块有比较良好的效果.     

纤维蛋白胶塑形、异体微粒软骨脱细胞基质支架的人工软骨研究

目的：利用软骨微粒脱细胞基质这种新型支架材料及纤维蛋白胶，体外构建可塑形及具有良好生物相容性的组织工程化软骨。方法：制备绵羊关节软骨微粒脱细胞基质并与体外扩增的异体关节软骨细胞及纤维蛋白胶混合，塑成圆柱形，体外培养。结果：软骨微粒脱细胞基质及纤维蛋白胶与异体软骨细胞有良好的生物相容性，软骨细胞生长和分泌功能良好，塑成的复合物具有一定的硬度和弹性。结论：塑成的圆柱形软骨细胞一异体软骨微粒脱细胞基质—纤维蛋白胶复合物可于体外形成软骨样组织，可进一步应用于体内修复关节软骨缺损。     

模拟微重力培养骨髓间充质干细胞定向诱导复合改良纤维蛋白原支架修复免关节软骨缺损

背景：模拟微重力培养系统通过模拟细胞生存的体内微重力环境,使细胞承受较低的剪切力,提高细胞内外、细胞间物质传递效率,从而提高细胞分化质量。目的：观察微重力培养环境在构建组织工程模块修复关节软骨缺损中的作用。设计、时间及地点：体外实验采用自身对照;体内实验采用随机分组比较,于2007-12／2008-06在广东省构建与检测实验室及南方医院动物实验中心进行。材料：3周普通级龄新西兰兔1只用于骨髓间充质干细胞培养：3月龄新西兰兔48只用于体内验证实验。方法：以纤维蛋白胶粉、凝血酶、氯化钙、抑肽酶、氨甲环酸制备纤维蛋白原支架。体外培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞3周,使之吸附于改良纤维蛋白原支架上在微重力环境下三维立体培养3周。48只兔做软骨钻孔制备软骨缺损动物模型,每只兔4孔。实验分为4组,每组48孔,微重力培养组在孔内植入微重力培养下的软骨细胞组织模块;普通培养组在孔内植入普通培养下的软骨细胞组织模块;单纯支架组在孔内植入空白支架;空白组孔内不植入任何材料,分别于2,6,12周处死动物,取相应标本。主要观察指标：通过生长曲线、倒置相差显微镜、组织学检测微重力培养环境在三维立体培养对软骨细胞增殖及功能的影响,以及用组织工程学评分检测微重力环境下培养的软骨模块对缺损的修复效果。结果：模拟微重力培养条件下构建的模块体外培养3周,细胞数量明显增多,并分泌较多的细胞基质,包裹在软骨细胞周围。组织工程学评分显示微重力培养组修复软骨缺损的效果明显好于其他组。结论：模拟微重力培养环境对三维立体培养软骨细胞模块有比较良好的效果。     

多细胞生长因子联合作用软骨块修复关节软骨缺损的实验

目的:观察β-成纤维细胞生长因子、β1-转化生长因子和骨诱导形成蛋白-6多种细胞生长因子联合构建改良纤维蛋白胶支架软骨膜块修复关节软骨缺损的作用。方法:实验于2004-12/2005-06在南方医科大学附属珠江医院骨科医学中心及珠江医院中心实验室完成。采用健康新西兰大白兔49只,其中3周龄新西兰大白兔1只,余均为3个月龄左右。取3周龄新西兰大白兔自体软骨细胞进行体外培养后移植于改良纤维蛋白原支架上进行体外培养,分成生长因子培养组、单纯支架细胞组、单纯支架组及空白组;并将所培养的软骨细胞模块随机分布种植于48只3个月龄新西兰大白兔软骨缺损模型内,12只/组,进行动物体内培养2～12周;体外培养观察细胞生长情况,分别于体内培养2、6、12周处死大白兔,对软骨膜块进行组织学观察和组织工程学评分。结果:48只大白兔均进入结果分析。①体外培养:单纯细胞支架组细胞倍增时间为5.0d,多种细胞生长因子培养系统组为3.8d,两组细胞生长速度有明显差别。②体内培养:细胞生长因子组修复软骨与邻近软骨整合紧密、厚度较一致、细胞数量最多,具有良好的分泌基质能力;单纯细胞支架组细胞软骨与邻近软骨整合欠佳、厚度稍差、细胞数量较正常少,具有一定的分泌基质能力;单纯支架组为纤维组织覆盖;完全空白组内为一松散的纤维疤痕组织敷盖及部分炎性细胞的存在。组织工程学评分细胞生长因子组明显好于单纯细胞支架组[空白组(10.94±1.77)分,单纯支架组(9.38±1.89)分,细胞支架组(7.31±1.54)分,生长因子组(3.81±1.10)分,各组之间相比P<0.01]。多细胞生长因子用于构建软骨膜块修复关节软骨缺损模型可促进种子细胞增殖和组织工程软骨膜块的形成。结论:多细胞生长因子作用于改良纤维蛋白胶软骨膜块中可明显促进组织工程软骨膜块构建以及关节软骨缺损的修复。     

纤维蛋白支架三维培养人羊膜细胞的生物学特性

背景:未足月胎膜早破是产科常见的妊娠期并发症,三维培养可使组织缺损恢复解剖学上的完整性,使得细胞培养成为更有实用价值的技术.目的:通过观察人羊膜细胞在纤维蛋白支架上三维培养后的生物学特性变化,探讨细胞/支架复合物模拟体内羊膜组织用于未足月胎膜早破破口修复的可能性,并与普通平面二维培养结果进行比较.设计、时间及地点:细胞～支架学体外观察,于2007-12/2008-11在重庆医科大学基础研究所完成.材料:剖宫产孕妇的羊膜组织,由重庆医科大学附属第一医院妇产科提供.纤维蛋白原为Sigma公司产品.方法:将酶消化法和反复贴壁法相结合,体外分离培养并纯化羊膜上皮细胞和羊膜问质细胞.纤维蛋白原聚合后,取处于对数生长的上皮细胞,接种于纤维蛋白支架表面,模拟胶上型二维立体培养;在纤维蛋白原聚合前,将处于对数生长的间质细胞和纤维蛋白溶液混合,模拟胶内型三维立体培养.同时将上皮细胞年间质细胞接种于24孔板中,进行普通平面二维培养.主要观察指标:倒置显微镜及电镜下观察细胞的形态学特征,不同培养条件下间质细胞的增殖情况,间质细胞和支架的相互作用.结果:在纤维蛋白支架表而,上皮细胞形态较平面培养圆润,细胞间可见伪足伸出,表面微绒毛丰富;在纤维蛋白胶中,间质细胞呈梭形,沿支架伸展,可见细胞在不同平面形成刚络状.三维立体培养下,间质细胞增殖活性平稳,但增长幅度较平面培养缓慢.在胶内型三维立体培养中,随时间的延长纤维蛋白胶发生收缩,凝胶厚度逐渐降低,至第5天纤维蛋白胶厚度占原厚度的40%左右,第15天收缩到原厚度的10%左右.结论:羊膜上皮细胞和羊膜间质细胞能够在纤维蛋白支架上立体生长,增殖活性平稳:在细胞-纤维蛋白支架复合物中,可观察到纤维蛋白胶随着时间推移而发生收缩的现象,提示羊膜细胞-纤维蛋白支架复合物可模拟体内组织,作为胎膜早破破口修复的生物学材料.     

胶原/羟基磷灰石复合支架负载软骨细胞构建组织工程软骨

背景:新型复合软骨组织工程支架克服了传统支架的诸多不足,如组织相容性差、生物力学性能不足、降解过快、材料单一、难与关节软骨的分层结构相匹配等,为软骨组织工程的发展提供新的途径。目的:观察具有柱状分层结构的胶原/羟基磷灰石复合支架对软骨细胞的吸附作用,以及对软骨细胞生物学性状的影响,评价其作为软骨组织工程支架的可行性与价值。设计:开放性实验。单位:中山大学附属第三医院骨科,华南理工大学材料学院。材料:实验于2004-06/11在中山大学附属第三医院动物实验中心完成。选取2周龄普通级健康新西兰白兔1只,雄性,饲养环境温度20℃,湿度40%。方法:①在羟基磷灰石中加入少量的去离子水,分散后加入I型胶原溶液搅拌复合,并按一定比例加入碳二亚氨,调配形成不同比例的胶原/羟基磷灰石复合物,并逐层加入模具,最上层采用纯胶原,底层为纯羟基磷灰石。将制备好的柱状分层的胶原/羟基磷灰石复合材料冷冻干燥后,经环氧乙烷气体消毒后备用。②体外培养幼兔关节软骨细胞并扩增,吸附于多孔胶原/羟基磷灰石复合支架上三维立体培养,通过相差倒置显微镜、组织学、扫描电镜及免疫组织化学检测支架对软骨细胞的表型、增殖及功能的影响。主要观察指标:①胶原/羟基磷灰石多孔支架的形貌观察。②体外培养的软骨细胞生物学性状观察。③胶原/羟基磷灰石多孔支架材料与软骨细胞相容性的观察。结果:①胶原/羟基磷灰石多孔支架的形貌观察:胶原/羟基磷灰石为具有一定力学强度的柱状分层的三维多孔支架,最上层为纯胶原,底层为纯羟基磷灰石,中间为胶原与羟基磷灰石复合。扫描电镜可见支架内具有不规则的通孔结构,孔径较均匀,相互连通,平均孔径约为147μm。②体外培养的软骨细胞生物学性状观察:刚分离的软骨细胞为球形,活细胞率达95%。24h后细胞开始贴壁,逐渐伸展为三角或多角形,内含分泌颗粒。细胞保持单层生长,传代后增殖速度加快,4d铺满培养瓶。随着传代次数的增加,增殖速度开始减慢,当传到第6代时,细胞分裂能力明显下降,细胞变形明显,体积变大,梭形为主,边沿模糊,折光性弱,表现出细胞老化和向成纤维细胞反分化的趋势。③胶原/羟基磷灰石多孔支架材料与软骨细胞相容性的观察:多孔胶原/羟基磷灰石复合支架亲水性好,软骨细胞吸附于支架表面,增殖并逐渐顺孔隙迁徙至支架内部,在孔壁贴附良好,表型维持稳定,分泌胞外基质。结论:柱状分层结构的胶原/羟基磷灰石复合支架具有良好的细胞相容性,较单纯胶原力学性能更强,是比较理想的软骨组织工程支架材料。     

可注射性纤维蛋白凝胶/脱钙骨基质复合支架延缓兔骨关节炎软骨退变

背景:纤维蛋白凝胶及脱钙骨基质都有优良的生物相容性及生物降解性,因此可以作为软骨组织工程支架培养软骨种子细胞.这两种材料分别可以作为生长因子的载体缓慢释放生长因子,并达到持续发挥促软骨细胞生长的功能.目的:验证可注射性纤维蛋白凝胶,脱钙骨基质复合支架延缓骨性关节炎的可行性及有效性.方法:实验为同体对照动物实验.16只兔切断双后肢前交叉韧带制备兔膝关节骨性关节炎模型,兔一侧膝关节内注射复合支架材料与软骨细胞混悬液为实验组.另一侧膝关节内注射等量生理盐水为对照组,12周后取关节软骨,分别进行苏木精-伊红染色,Masson染色,Ⅱ型胶原免疫组化染色,并根据Wakitani标准及Outerbridge分类重新制定标准进行评分,评价实验组与对照组软骨退变的程度.结果与结论:实验组关节软骨表面尚光滑,可见软骨陷窝,结构软骨退变较对照组轻;软骨细胞及Ⅱ型胶原较正常软骨组织轻度减少,关节囊组织无明显Ⅱ型胶原表达.实验组综合评分低于对照组(P<0.01).表明可注射性纤维蛋白凝胶/脱钙骨基质复合支架为早期骨性关节炎及骨缺损修复提供了一种优良的复合支架材料.     

纤维蛋白凝胶与大鼠嗅鞘细胞的生物相容性

背景:纤维蛋白凝胶已被证实为优质的生物材料,其在神经组织工程中亦得到应用,既往研究表明纤维蛋白凝胶可以做为一些移植细胞的支架材料.目的:观察纤维蛋白凝胶与大鼠嗅鞘细胞的生物相容性.设计、时间与地点:体外细胞学对比观察,于2007-08/2008-02在南通大学神经生物学研究所完成.材料:将纤维蛋白单体与催化剂混合制成纤维蛋白凝胶;取SD大鼠嗅球,行嗅鞘细胞原代培养.方法:实验分为对照组(单纯培养嗅鞘细胞)和纤维蛋白凝胶组(嗅鞘细胞与纤维蛋白凝胶联合培养).培养1周后冰冻切片,行免疫荧光抗体标记,显微镜下观察及检测.主要观察指标:嗅鞘细胞形态学,细胞计数、胞体面积及细胞周长.结果:嗅鞘细胞接种到纤维蛋白凝胶后,大多数嗅鞘细胞能在纤维蛋白凝胶内生长,悬浮在纤维蛋白凝胶之中,以下层为主,接种7 d后细胞胞体呈梭形或三角形,多为双极或三极.纤维蛋白凝胶组的嗅鞘细胞数明显多于对照组(P<0.05),且胞体相对较大(P<0.05),两组细胞周长差异无显著性意义(P>0.05).结论:纤维蛋白凝胶与嗅鞘细胞具有良好的生物相容性,嗅鞘细胞能够在纤维蛋白凝胶内存活和增殖.     

不同强度纤维蛋白胶作为免骨髓基质细胞培养支架材料的比较

背景:骨组织工程的支架材料主要作用为模拟细胞体内生长的空间环境,为细胞形成骨组织提供三维支架载体,但目前尚缺乏理想载体材料.目的:应用纤维蛋白胶作为细胞支架进行兔骨髓基质细胞立体培养,探讨其作为骨组织工程支架材料的可行性.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007 09/2008 01在吉林大学中日联谊医院及天津科技大学机械工程学院完成.材料:将纤维蛋白原和凝血酶按不同比例混合,制备不同强度的纤维蛋白胶.1月龄雄性新两兰大耳白兔1只,体质量0.25 kg.方法:以兔骨髓基质细胞作为种子细胞在CO2孵箱中进行传代培养后,收集扩增的骨髓基质细胞与支架材料纤维蛋白胶复合后再进行培养4周.主要观察指标:采用相筹显微镜观察纤维蛋白胶中培养的骨髓基质细胞的生长状况,以苏木精伊红染色观察不同时期纤维蛋白胶中骨髓基质细胞的活性,以电子显微镜观察培养4周后骨髓皋质细胞超微结构变化.结果:骨髓基质细胞在不同强度的纤维蛋白胶中的牛长状态不同,在低强度纤维蛋白胶中活性好,扩增迅速,而在高强度纤维蚩白胶中细胞生长缓慢,数量少或逐渐死亡.电镜观察纤维蛋白原和凝血酶比例为4:1的纤维蛋白胶培养4周的基质细胞,各细胞器清晰可见,细胞具有良好活性.结论:骨髓基质细胞在低强度形成固体时的纤维蛋白胶中能够良好扩增生长,以纤维蛋白原和凝血酶比例为4:1的效果最佳.     

Human articular chondrocytes on macroporous gelatin microcarriers form structurally stable constructs with blood‐derived biological glues in vitro

Biodegradable macroporous gelatin microcarriers fixed with blood‐derived biodegradable glue are proposed as a delivery system for human autologous chondrocytes. Cell‐seeded microcarriers were embedded in four biological glues—recalcified citrated whole blood, recalcified citrated plasma with or without platelets, and a commercially available fibrin glue—and cultured in an in vitro model under static conditions for 16 weeks. No differences could be verified between the commercial fibrin glue and the blood‐derived alternatives. Five further experiments were conducted with recalcified citrated platelet‐rich plasma alone as microcarrier sealant, using two different in vitro culture models and chondrocytes from three additional donors. The microcarriers supported chondrocyte adhesion and expansion as well as extracellular matrix (ECM) synthesis. Matrix formation occurred predominantly at sample surfaces under the static conditions. The presence of microcarriers proved essential for the glues to support the structural takeover of ECM proteins produced by the embedded chondrocytes, as exclusion of the microcarriers resulted in unstable structures that dissolved before matrix formation could occur. Immunohistochemical analysis revealed the presence of SOX‐9‐ and S‐100‐positive chondrocytes as well as the production of aggrecan and collagen type I, but not of the cartilage‐specific collagen type II. These results imply that blood‐derived glues are indeed potentially applicable for encapsulation of chondrocyte‐seeded microcarriers. However, the static in vitro models used in this study proved incapable of supporting cartilage formation throughout the engineered constructs. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

Feasibility of fibrin glue versus endoclips to close the transgastric peritoneal access site in NOTES in a survival porcine study

Introduction: Safe peritoneal access and gastric closure are the most important concerns in clinical applications of NOTES. Our past study demonstrated usefulness of the submucosal tunnel technique for safe peritoneal access and closure with endoclips. However, such closure is sometimes difficult and time‐consuming. This study investigated the feasibility of fibrin glue for submucosal tunnel closure in a NOTES porcine model. Methods: In 10 female pigs each weighing 40 kg, transgastric peritoneoscopy was performed through a 60 mm‐long submucosal tunnel created using the endoscopic submucosal dissection technique. After transgastric peritoneoscopy for 30 min, the submucosal tunnel was closed with endoclips in five pigs and fibrin glue in five pigs. After a 7 d follow‐up period, the pigs were euthanized for post‐mortem examination. Outcome measures included (a) technical feasibility of closure with endoclips versus fibrin glue, (b) clinical monitoring for 7 d, (c) follow‐up necropsy at 7 d, and (d) histopathologic examination of the peritoneal access site. Results: Transgastric peritoneoscopy with submucosal tunnel technique was successful in all pigs. Mean time required to close the mucosal incision site with fibrin glue was 1.6 ± 0.5 versus 19 ± 18.7 min with endoclips. All pigs survived well without complications. Necropsy revealed no peritonitis. There were no differences in transgastric peritoneal access sites between endoclips and fibrin glue. Histopathologic examination of the submucosal tunnel demonstrated wound healing with transmural fibrosis. No adverse effects from fibrin glue were noted. Conclusion: Compared with endoclips, the application of fibrin glue is easy and simple in the closure of transgastric peritoneal access in NOTES.     

纤维蛋白胶与异种骨复合支架中立体培养的免骨髓基质细胞

背景:单一的支架材料往往具有一些自身难以克服的缺点,拟构建一种具有较多优越性的复合支架,希望能够解决种子细胞与支架材料黏附的问题.目的:应用纤维蛋白胶、异种无机骨构建骨组织工程复合支架材料,探讨兔骨髓基质细胞在这种复合支架材料中立体培养情况.设计、时间及地点:观察实验,于2007-11/2008-03在吉林大学中日联谊医院骨科研究室、天津理工大学机械工程学院完成.材料:纤维蛋白原与凝血酶按比例制备纤维蛋白胶,牛松质骨经去脂去蛋白等无机化处理后与纤维蚩自胶复合,制成复合骨支架材料.方法:将兔骨髓基质细胞作为种子细胞进行传代培养,收集后在纤维蛋白胶、异种无机骨构成的复合支架中进行立体培养.主要观察指标:采用相差显微镜、透射电子显微镜等手段观察骨髓基质细胞在纤维蛋白胶中的生长状况.结果:相差显微镜下观察见骨髓基质细胞均匀分布于复合支架中,具有良好活性,细胞不断增殖、分化,培养4周骨髓基质细胞形成密集立体网状.透射电子显微镜下见复合支架中培养4周的基质细胞内细胞器结构完整,局部有细突起,胞质内可见线粒体,核糖体,粗面内质网.结论:在纤维蚩白胶与异种无机骨构建的复合支架中骨髓基质细胞具有良好活性,可迅速扩增生长.     

Degradation of fibrin and elastin by intact human alveolar macrophages in vitro. Characterization of a plasminogen activator and its role in matrix degradation.

Fibrin deposition is prominent in the histopathology of a number of inflammatory lung diseases. Plasmin, activated locally in the lung, can degrade not only this fibrin but potentially structural proteins important to normal lung architecture. Because alveolar macrophages are prominent in inflammatory processes of the lung, we examined the plasminogen activator (PA) activity of human alveolar macrophages. Intact alveolar macrophages from each of 10 healthy subjects expressed PA activity. There was no difference in activity between smoking and nonsmoking individuals. The activator activity was largely cell-associated, but under certain culture conditions, macrophages released a soluble activator into the culture medium. The membrane-bound activator had an apparent molecular mass of 52-55 kD in nonreduced sodium dodecyl sulfate (SDS) gels, and monospecific antibody to urokinase neutralized the enzyme activity. Immunoprecipitation of [35S]methionine-labeled cells showed that human alveolar macrophages actually synthesize the PA in vitro. SDS-gel analysis of the immunoprecipitated material revealed the predominant species of PA to be structurally similar to reduced, active urokinase. We also examined the role of PA in the degradation of both insoluble fibrin and elastin matrices by live macrophages. Cells degraded an insoluble fibrin matrix in the presence of plasminogen whether or not the macrophages contacted the fibrin as long as proteinase inhibitors were not in the culture medium. In the presence of serum proteinase inhibitors, macrophages still degraded a fibrin matrix, but only if they were in contact with the fibrin. Live macrophages also degraded insoluble elastin only when in contact with the elastin but could do so even in the presence of serum proteinase inhibitors. In matrices containing a mixture of fibrin and elastin, cells did not degrade elastin unless plasminogen was added to the medium. These results indicate that normal alveolar macrophages synthesize and express, probably at the cell surface, a PA. The PA is physically and immunochemically similar to urokinase but is membrane bound. The PA is critical to the degradation of fibrin matrices by normal alveolar macrophages. Under tissue conditions where elastin is embedded within other structural proteins, the activator may be rate-limiting in elastin degradation as well. The findings also suggest that live macrophage proteolytic activity is relatively insensitive to the presence of serum proteinase inhibitors, suggesting a mechanism for proteolytic lung injury even in the presence of proteinase-proteinase inhibitor balance in the soluble phase.     

Expanded adipose-derived stem cells for the treatment of complex perianal fistula including Crohn's disease

Background: Complex perianal fistulising disease is a distressing condition. In patients without Crohn's disease, surgery is the mainstay treatment but faecal incontinence and recurrence are high. Infliximab is used in Crohn's patients but not all respond to therapy. Objective: After an evaluation of the current treatment options, we discuss studies of adipose-derived stem cell (ASC) therapy, a novel approach for treating complex perianal fistulas. Methods: ASCs are obtained from a liposuction procedure and a subsequent expansion process. They are administered according to a strict protocol which involves infusion of the cells into the target lesion along with fibrin glue. Results/conclusions: A Phase IIb study comparing ASC and fibrin glue therapy with fibrin glue therapy alone showed that ASCs were effective at inducing healing in complex perianal fistulas.     

Impact of fibrin glue versus suture closure on double-headed pterygia in Asian eyes – a 7-year study in a tertiary institution

BackgroundTo compare the recurrence rate and outcomes of double-headed pterygia using fibrin glue versus suture closure of conjunctival autograft.MethodsAll patients with double-headed pterygia who underwent pterygia excision with conjunctival autograft from January 2012 to January 2019 in the National University Hospital of Singapore were included. Patients were divided into 2 groups depending on whether fibrin glue or sutures were used to secure the conjunctival autograft in place. All patients had a minimum of 6 months follow-up.ResultsA total (26 patients) of 22 eyes had fibrin glue, while eight eyes underwent suture closure of their conjunctival autograft. Fibrin glue group had 4.5% recurrence rate, while suture group had 37.5% recurrence rate (p = .021). There is statistically significant improvement for overall visual acuity (p = .009) and cylinder (p = .002). There is also statistically significant improvement for visual acuity in the glue group (p = .026), but not in the suture group. Fibrin glue group had a shorter operation duration time compared to suture group (p < .001).There were no cases of graft dislocation, contraction or limbal stem cell deficiency.ConclusionsLow recurrence rates and good postoperative visual outcomes can be achieved with the split conjunctival autograft technique. Our study suggests that fibrin glue has an additional benefit over the use of sutures in the management of these complex cases.     

纤维蛋白胶在胸外科手术中的应用

目的：了解纤维蛋白胶在胸外科手术中应用的效果。方法：在手术中将纤维蛋白胶喷至漏气、渗血、血管残端和支气管残端等处。结果：所有患者均未出现不良反应；术后平均漏气天数为0．14d，平均第1天引流量为273．5m1，平均第2天引流量为164.4ml，平均拔管时间为2．09d，术后胸管引流通畅未发现因蛋白胶脱落所致的胸管堵塞；所有患者均未发生术后局部感染；远期随访无支气管胸膜瘘发生。结论：纤维蛋白胶在胸外科领域有很好的应用前景。