内质网应激在IL-1β诱导软骨细胞炎性损伤中的作用机制

目的 研究内质网应激(ERS)在白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞炎性损伤中的作用机制。方法 培养小鼠软骨细胞株ATDC5并随机分为对照组、IL-1β组、si-阴性对照(NC)组、si-NC+IL-1β组、si-C/EBP同源蛋白(CHOP)+IL-1β组、溶剂对照组、溶剂+IL-1β组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)拮抗剂+IL-1β组、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)抑制剂+IL-1β组。用10 ng/mL IL-1β处理以诱导细胞炎性损伤,分别转染CHOP siRNA或给予10.0μmol/L JNK拮抗剂、2.0μmol/L Caspase-12抑制剂处理。采用CCK-8法检测细胞增殖光密度(OD)_{490 nm}水平,采用TUNEL法检测凋亡率,采用Western blot检测GRP78、CHOP、p-JNK、Cleaved caspase-12的蛋白表达水平。结果 IL-1β组ATDC5细胞的OD_{490 nm}水平低于对照组(0.51±0.07 vs 1.06±0.12),细胞凋亡率高于对照组(9....     

软骨细胞凋亡与内质网应激

背景：软骨细胞的凋亡最终会导致骨关节炎的发生。目前发现的软骨细胞凋亡机制有很多,但内质网应激引起其凋亡的机制尚处于初始阶段。目的：综述分析内质网应激如何引起软骨细胞凋亡,并探寻骨关节炎治疗的新方法。方法：第一作者通过计算机检索,检索了PubMed、CNKI、万方数据库2000年1月至2015年1月的相关文献。使用PubMed检索时,输入检索词“endoplasmic reticulum stress,chondrocyte,apoptosis”之间以“AND”形式连接,使用CNKI、万方数据库检索时,输入主题词“内质网应激,软骨细胞,凋亡”之间以“并且/与”连接,选择模糊查询进行检索。选择文章内容涉及骨关节炎的文献,较多采用近期发表在权威杂志上的相关文献。结果与结论：初检得到中英文文献共计62篇,其中57篇符合纳入标准,对其进行综述。PERK、IRE1和ATF6三条信号通路对软骨细胞同样有重要作用。内质网应激介导的细胞凋亡机制有未折叠蛋白质反应和Ca²⁺起始信号2种,但具体机制及凋亡途径间的交叉作用还未明了。若从上述信号通路中探索软骨细胞凋亡效应的抑制分子,并将其作为治疗骨关节炎的靶点,可能会为治疗骨关节炎提供新的方法。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

沉默FSTL1减少衣霉素诱导软骨细胞内质网应激及细胞凋亡

目的探讨沉默卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)对衣霉素诱导软骨细胞内质网应激(ERS)及细胞凋亡的影响。方法取兔膝关节软骨,收集并培养软骨细胞,将细胞分为对照组、衣霉素组、衣霉素+siRNA-FSTL1组和衣霉素+siRNA-NC组;MTT法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测细胞中FSTL1、Bcl-2和Bax mRNA含量;Western blot检测细胞中PERK、p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP、Cal、e IF2α和p-e IF2α蛋白表达。结果与衣霉素组和衣霉素+siRNA-NC组相比,衣霉素+siRNA-FSTL1组细胞增殖能力显著提高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05);细胞中FSTL1和Bax mRNA相对表达量均降低,而Bcl-2 mRNA相对表达量均升高(P0.05);细胞中PERK和e IF2α蛋白相对表达量均升高,而p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP、Cal和p-e IF2α蛋白相对表达量均降低(P0.05)。结论特异性沉默软骨细胞中FSTL1可有效减少ERS及细胞凋亡,其机制可能与抑制PERK信号通路有关。     

Egr-1介导了IL-1β诱导的小鼠软骨细胞凋亡

目的:研究早期生长反应蛋白1(earlygrowthresponseprotein1,Egr-1)在白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡中的作用。方法:体外分离培养小鼠关节软骨细胞,用IL-1β刺激不同的时间后,用Hoechst33258染色,计算发生核皱缩细胞占全部细胞的比例;采用定量RT-PCR(qRT-PCR)方法检测Egr-1mRNA表达水平;采用Westernblotting方法检测Egr-1及激活型caspase-3蛋白的表达水平;采用LipofectamineRNAiMAX将Egr选择性干扰片段转染软骨细胞,采用qRT-PCR及Westernblotting观察RNA片段的干扰效率。结果:IL-1β刺激体外培养的软骨细胞4h、8h和12h后,分别引起约7%、22%和41%细胞凋亡,同时激活型caspase-3表达上调。IL-1β诱导软骨细胞凋亡的同时,Egr-1mRNA及蛋白质呈时间依赖的表达上调。2个siRNA片段成功干扰Egr-1表达后,细胞12h凋亡率从约40%下降到14%和12%,同时激活型caspase-3的表达被有效抑制。结论:Egr-1介导了IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,可能在骨关节炎的发病过程中发挥重要作用。     

内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡

目的探讨内质网应激(ERS)致雌激素受体阴性(ER-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡及钙激活中性蛋白酶2(calpain2)在凋亡效应中的作用。方法实验设空白对照组(DMEM)、对照组(DMEM+DMSO)和实验组,用不同浓度衣霉素(TM)诱导乳腺癌细胞不同时间,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率及凋亡率;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量,以GRP78表达最高点确定ERS模型建立,检测凋亡相关蛋白caspase4和CHOP表达以及calpain及其内源性抑制酶calpastatin的表达,用ERS抑制剂(4-PBA)和calpain抑制剂(calpeptin)分别预处理细胞2 h,观察对上述效应的影响。结果 9、12和18μmol/L TM诱导ERS对该细胞增殖有明显抑制效应,抑制率分别为33.88%±1.32%、51.51%±8.85%和55.77%±2.61%,细胞凋亡率分别为9μmol/L TM组16.70%±0.46%和12μmol/L TM组28.1%±1.09%,与对照组相比有明显差异(P0.05);9μmol/L TM诱导细胞24 h的GRP78表达上调最高(P0.01);ERS还可明显上调caspase4、CHOP和calpain表达,下调calpastatin表达(P0.01或P0.05),上述效应均能被4-PBA和calpeptin减弱或阻断(P0.05)。结论 ERS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,calpain2参与调控凋亡发生。     

SIRT1过表达可抑制衣霉素诱导软骨细胞内质网应激

目的探究SIRT1对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激的影响。方法分离人正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞,观察细胞形态,免疫细胞化学染色检测Ⅱ型胶原表达,Western blot检测SIRT1表达。将培养的软骨细胞分为对照组(OA软骨细胞、正常软骨细胞)、正常软骨细胞组(衣霉素组、SIRT1过表达组和衣霉素+SIRT1过表达组)。24 h后,Western blot检测ERS相关蛋白(CHOP、p-e IF2α和ATF4等)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和caspase-3等)以及p-P38的表达。ELISA检测NF-κB活性。结果与人正常软骨细胞相比,OA软骨细胞增殖缓慢,Ⅱ型胶原和SIRT1表达均显著降低(P0.05)。与正常软骨细胞对照组相比,OA对照组和0.5 mg/L衣霉素组CHOP、p-e IF2α、ATF4和p-P38表达上调,NF-κB活性增加,Bcl-2表达明显下调,Bax和caspase-3表达明显增加(P0.05)。SIRT1过表达处理则显著逆转上述蛋白表达。结论 SIRT1过表达可抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激和细胞凋亡,并下调P38/NF-κB活化。     

IL—1β诱导人软骨细胞合成和分泌IL-6

软骨细胞与粘蛋白的合成和降解的动力学平衡调节有关,炎风湿性关节炎和其他炎性疾病或退行性关节病可阻碍这种平衡。近年来的研究表明,软     

粉防己碱减轻IL-1β诱导的体外人关节软骨细胞损伤

目的 粉防己碱(Tet)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导原代人关节软骨细胞损伤的影响。方法 将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂[二甲氧基雌二醇(2-ME2)]组、Tet低、中、高浓度组,每组设置6个重复。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA检测细胞中炎性相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)的水平以及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性;Western blot检测细胞中HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果 与对照组相比,IL-1β组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均升高,细胞存活率、SOD和GPx活性均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β组相比,2-ME2组和Tet低、中、高浓度组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均降低,细胞存活率、SOD...     

β_1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡

目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达。利用亲和层析法纯化的β_1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β_1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况。结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β_1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周。与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加。β_1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加。与β_1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β_1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降。结论:β_1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡。     

4-苯基丁酸抗内质网应激诱导胰岛β细胞凋亡

目的 探讨4-苯基丁酸（4-PBA）对2型糖尿病（T2DM）大鼠胰岛β细胞内质网应激（ERS）诱导的细胞凋亡的保护作用。方法 高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立SD大鼠T2DM模型,造模成功后取其中10只给予4-PBA灌胃20d。放射免疫法检测各组大鼠游离脂肪酸（FFA）、血糖及胰岛素的变化。醛品红染色观察胰岛形态改变,RT-PCR检测内质网相关蛋白（Caspase-3、GRP78、CHOP）的mRNA表达变化。结果 高脂对照组（EM> n/EM>＝10）和T2DM组（ EM>n/EM>＝8）大鼠血清FFA比正常对照组（EM>n/EM>＝10）显著增加,4-PBA治疗后显著下降（ EM>n/EM>＝8）。4-PBA治疗升高了T2DM造成的     

连翘苷对IL-1β诱导的人关节软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响

目的探究连翘苷(phillyrin,PHN)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的人关节软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的作用及机制。方法将细胞分为Control组、IL-1β组、PHN(2 mg/ml)组、PHN(5 mg/ml)组和PHN(10 mg/ml)组,用IL-1β处理软骨细胞30 min后加入相应浓度的PHN处理细胞,MTT检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,RT-PCR检测炎症介导因子以及collagenⅡ、基质金属蛋白酶(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)和AMAMTS-5的基因表达水平,Western blot检测细胞增殖、凋亡、细胞外基质和NF-κB相关蛋白的表达,免疫荧光检测NF-κB的入核情况。结果与Control组比较,IL-1β组细胞活性及PCNA蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率及促进细胞凋亡蛋白的表达水平显著升高;与IL-1β组比较,PHN(2、5、10 mg/ml)组细胞活性和PCNA、Bcl-2、PARP蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率及p53、Bad、Bax、cl-caspase-3的表达水平明显降低。IL-1β促进炎症介导因子的表达,而PHN抑制炎症接到因子的表达。同时,与Control组比较,IL-1β组细胞collagenⅡ和aggrecan的蛋白和基因表达水平明显降低,SOX-9、TIMP-1、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因及蛋白表达水平明显升高;PHN(2、5、10 mg/ml)组collagenⅡ和aggrecan基因和蛋白表达水平显著高于IL-1β组,PHN(5、10 mg/ml)组SOX-9、TIMP-1、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-5基因和蛋白表达水平明显降低。此外,IL-1β能显著抑制IκBα表达,促进p-IκBα和NF-κB p65表达,并促进NF-κB转移入核;PHN(5、10mg/ml)能显著减弱IL-1β对IκBα、p-IκBα、NF-κBp65表达及NF-κB转移入核的调控作用。结论连翘苷能抑制IL-1β诱导的人软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

SREBP-2沉默抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激

目的:探究固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激(ERS)的影响。方法:分离人正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞培养,衣霉素和SREBP-2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后,实时荧光定量PCR检测对微小RNA-185(miR-185)表达的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western blot法检测对SREBP-2、CHOP、p-e IF2α和ATF4等ERS相关蛋白,Bcl-2、Bax和caspase-3等凋亡相关蛋白水平的影响;caspase-3活性试剂盒检测对细胞caspase-3活性的影响。结果:与对照组相比,OA组和衣霉素组SREBP-2表达增加,miR-185表达降低(P0.05)。SREBP-2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR-185降低(P0.05)。miR-185过表达能够下调SREBP-2蛋白水平(P0.05)。与对照组相比,OA组和衣霉素组CHOP、pe IF2α和ATF4的蛋白水平明显上调,Bcl-2表达下调,Bax和caspase-3表达增加(P0.05);SREBP-2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达(P0.05)。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致(P0.05)。与衣霉素组相比,SREBP-2 siRNA转染明显下调caspase-3活性,miR-185抑制则明显逆转上述作用(P0.05)。结论:SREBP-2沉默可通过上调miR-185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。     

IL-1β通过加重脂质诱导的内质网应激导致人系膜细胞损伤

 目的： 探讨白细胞介素1β（IL-1β）加重脂质诱导的内质网应激（ERS）而导致人肾小球系膜细胞（HMCs）损伤的分子机制。方法：将HMCs分为对照组、高脂组（LDL）、IL-1β+高脂组（IL-1β+LDL）及4-苯基丁酸(4-PBA)干预组（4-PBA+IL-1β+LDL）。油红O染色检测HMCs胞内脂质沉积;real-time PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA水平;免疫细胞化学分析GRP78蛋白水平; Western blotting检测NF-κB p65水平;ELISA法测定细胞培养上清IL-6和TGF-β1含量。结果：与LDL组相比,IL-1β+LDL组胞内脂质沉积、GRP78 mRNA与蛋白水平、PERK mRNA水平、NF-κB p65水平及IL-6分泌量均显著增高（均P＜0.05）;4-PBA可减少胞内脂质沉积,降低GRP78 mRNA与蛋白及PERK mRNA水平,抑制NF-κB p65的表达,减少IL-6的分泌（均P＜0.05 vs IL-1β+LDL组）。与LDL组相比,IL-1β+LDL组α-SMA mRNA表达增高（P＜0.05）,4-PBA可显著降低其表达（P＜0.05 vs IL-1β+LDL组）。结论：IL-1β可加重脂质诱导的ERS,从而导致细胞损伤。     

内质网应激与细胞凋亡

内质网（ER）是细胞内重要的细胞器,参与多种细胞进程,这些进程对于维持细胞存活和发挥细胞的正常生理功能具有重要的作用。然而在多种生理病理条件下,内质网稳态会发生变化而失衡,从而诱发内质网应激（ERS）,此时机体通过激活未折叠蛋白反应（UPR）来恢复内质网的正常功能。当持续的ERS状态无法恢复时,ERS就会触发细胞凋亡程序,通过不同的凋亡途径引起细胞凋亡。     

内质网应激对胰岛β细胞凋亡的损伤效应

胰岛β细胞具有高度发达的内质网,是对内质网应激最敏感的细胞之一.内质网应激是胰岛β细胞在受到应激条件下,细胞的适应性反应.内外环境中的多种因素：氧化损伤、脂毒性、细胞因子作用等均可打破内质网的稳态,导致蛋白质折叠障碍或错误折叠,进而触发内质网应激.严重而持久的应激将导致β细胞的凋亡,参与多种代谢性疾病乃至多种疾病的发生.综述多种因素诱导的内质网应激对胰岛β细胞的损伤效应.     

钙联蛋白调控内质网应激诱导的细胞凋亡

内质网应激(ERS)可诱导多种细胞凋亡,与疾病发生发展密切相关.钙联蛋白(CNX)是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,通过参与未折叠蛋白反应募集凋亡相关因子、激活IRE1-JNK激酶等途径,调控ERS诱导的凋亡.本文就其研究现状进行阐述.     

甲基莲心碱可抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡

背景：细胞凋亡参与了关节退行性疾病的形成过程,因此抗软骨细胞凋亡可能是治疗骨关节炎的有效途径。甲基莲心碱具有抗炎、抗肿瘤、抗凋亡等广泛的药理活性,其对软骨细胞凋亡的影响尚不明确。目的：探讨甲基莲心碱对白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡的影响,阐明可能的作用机制。方法：(1)取对数生长期大鼠软骨细胞,分5组干预：对照组常规培养,模型组加入白细胞介素1β处理2 h后常规培养24 h,低、中、高浓度药物组加入白细胞介素1β处理2 h后分别加入5,10,20μmol/L甲基莲心碱培养24 h。培养结束后,检测细胞凋亡、细胞上清中软骨糖蛋白39及Ⅱ型胶原水平、凋亡相关蛋白的m RNA与蛋白表达、PERK/ATF4信号通路相关蛋白的m RNA与蛋白表达。(2)取对数生长期大鼠软骨细胞,分4组干预：对照组与模型组干预同上,药物组加入白细胞介素1β处理2 h后再加入20μmol/L甲基莲心碱培养24 h,激活剂组加入白细胞介素1β处理2 h后再加入20μmol/L甲基莲心碱、PERK/ATF4信号通路激活剂CCT020312培养24 h。培养结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,...     

人重组IL-1β刺激可使乙酰胆碱释放增加

０４４　人重组ＩＬ－１β刺激可使乙酰胆碱释放增加［英］／ＭａｍｅｙａＳ…／／ＪｐｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌ．一１９９４，６４（Ｓｕｐｐｌ１）．一２８２～３６８肠炎能引起肠运动机能障碍，这可能系炎性递质对肠神经元以及平滑肌细胞的作用所介导。ＩＬ－１β是各种...     

APP/PS1双转基因AD小鼠早期内质网应激诱导的凋亡

目的观察APP/PS1双转基因AD小鼠神经细胞凋亡,及内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白（GRP78）和内质网促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的改变,探讨APP/PS1双转基因AD小鼠早期内质网应激诱导的凋亡。方法选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和同月龄同背景的野生型小鼠（WT）,分为5月龄WT组、5月龄APP/PS1组、7月龄WT组和7月龄APP/PS1组,每组6只,应用原位细胞凋亡检测法（TUNEL）检测凋亡细胞,免疫组织化学方法检测其脑内GRP78和Caspase-12的表达水平。结果 TUNEL检测凋亡率分别为7月龄APP/PS1鼠（35.0±6.31）%、5月龄APP/PS1鼠（9.0±2.78）%、7月龄WT鼠（4.0±1.89）%、5月龄WT鼠（4.0±1.83）%,其中7月龄APP/PS1鼠凋亡率显著升高（P〈0.05）;免疫组织化学检测GRP78阳性率分别为7月龄APP/PS1鼠（30.0±5.43）%、5月龄APP/PS1鼠（10.0±2.12）%、7月龄WT鼠（2.0±1.71）%、5月龄WT鼠（3.0±1.41）%,7月龄APP/PS1鼠GRP78表达明显升高（P〈0.05）;免疫组织化学检测Caspase-12阳性率分别为7月龄APP/PS1鼠（33.0±5.98）%、5月龄APP/PS1鼠（12.0±2.60）%、7月龄WT鼠（4.0±2.56）%、5月龄WT鼠（2.0±1.79）%,7月龄APP/PS1鼠Caspase-12表达明显升高（P〈0.05）。结论 7月龄的APP/PS1双转基因小鼠出现了内质网应激诱导的凋亡。本实验结果为临床AD早期预防和治疗提供了重要依据。