敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的:通过观察敏咳清颗粒对体外培养的肺成纤维细胞(lung fibroblast,LFB)增殖、凋亡的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制.方法:将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高浓度组、敏咳清低浓度组、养阴清肺糖浆高浓度组、养阴清肺糖浆低浓组、地塞米松组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用MTT法检测LFB增殖,TUNEL法检测LFB凋亡.结果:①各组含药血清均可以不同程度地抑制肝素刺激下LIB的增殖,以敏咳清颗粒高剂量组抑制LFB增殖的作用最强,48 h的抑制作用强于24 h,呈剂量依赖性;②各组均出现不同程度细胞凋亡的形态改变,以敏咳清高剂量组诱导LFB凋亡细胞最多.结论:敏咳清颗粒能显著抑制LFB增殖,诱导LFB凋亡.     

不同齿科合金对成纤维细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的 探讨不同齿科合金对成纤维细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 小鼠成纤维L929细胞分为阴性对照组、金合金组、镍铬合金组和铜合金组,各组细胞培养48h后,MTT实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 金合金组和镍铬合金组细胞增殖率与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,铜合金组细胞细胞增殖率显著低于阴性对照组（P<0.01）;金合金组G₁期、S期和G₂期细胞与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）,镍铬合金组和铜合金组G₁期细胞显著低于阴性对照组,S期和G₂期细胞显著高于阴性对照组（P<0.05）;金合金组细胞凋亡率及Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）,镍铬合金组和铜合金组细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达均显著高于阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于阴性对照组（P<0.01）。结论 金合金组、镍铬合金组和铜合金组对成纤维细胞增殖凋亡均有一定的影响,金合金组的影响最小,不同齿科合金引起成纤维细胞凋亡的机制可能与调控Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞增殖凋亡的比较

目的 比较瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞生物学活性,以进一步探讨瘢痕疙瘩形成发展机制。方法 采用体外培养成纤维细胞技术对所有标本进行细胞培养,取6~8代细胞作为实验对象。噻唑蓝(MTT)比色法比较细胞接种后不同时间瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞的增殖活性和碘化丙啶（PI）染色、流式细胞仪比较它们在无血清培养条件下和在不同浓度Fas单克隆抗体(Fas mAb)作用下的细胞凋亡率。结果 瘢痕疙瘩边缘成纤维细胞增殖活性高于中央,两者均高于正常皮肤(P<0.01);无血清培养24 h后,瘢痕疙瘩边缘及中央细胞凋亡率均有所增加,但两者之间无显著性差异(P>0.05);Fas mAb作用下,瘢痕疙瘩边缘及中央细胞均不能正常凋亡,两者之间无显著性差异(P>0.05)。结论 瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞生物学活性不尽相同,瘢痕疙瘩边缘成纤维细胞增殖活性过高可导致其向周围不断增生并浸润生长。     

ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对人Tenon囊成纤维细胞增殖、凋亡和黏附性的影响

目的 观察ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(ocular Tenon capsule fibroblasts,OTFs)增殖、凋亡和黏附性的影响.方法 体外培养的第4～6代OTFs经溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导后,不同浓度Y-27632处理,采用MTT测定细胞增殖抑制率和细胞黏附抑制率,未经LPA诱导OTFs细胞同时采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术测定细胞凋亡率,以及细胞平板克隆增殖实验测定不同浓度Y-27632组OTFs细胞增殖克隆形成率.结果 6、30、150、750 μmol/L Y-27632各组经LPA诱导的OTFs细胞增殖抑制D(490)与LPA组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),OTFs细胞黏附抑制D(490)与LPA组比较,同样具有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).随着Y-27632浓度增加,细胞凋亡率相应增加.未经LPA诱导的OTFs细胞克隆形成率随着Y27632浓度的增高而降低.结论 Y-27632有效抑制LPA诱导的OTFs增殖和细胞间黏附,诱导细胞早期凋亡.     

肼对大鼠心肌成纤维细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的:不同浓度的肼处理体外培养的心肌成纤维细胞,观察其增殖和凋亡情况。方法:用MTT法检测对细胞增殖的影响;光学倒置相差显微镜和Hochest33258荧光染色观察细胞处理前后的形态学变化,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率。结果:MTT检测显示细胞增殖受到抑制;荧光染色后观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核聚集形态;流式细胞仪检测显示细胞凋亡率和坏死率与对照组比较差异均有显著性。结论:肼可抑制心肌成纤维细胞增殖,其作用随浓度增加而加强,低浓度(2mmol·L-1以下)的肼可导致心肌成纤维细胞凋亡,浓度大于2mmol·L-1则导致细胞坏死。     

体外不同张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的 观察不同张应力对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)增殖活性的影响，进一步了解HPDLF的应力-生物学效应及其在正畸治疗中可能的生长增殖规律。方法 利用自行设计的膜式动态张应力-体外细胞培养研究系统对分离培养的HPDLF进行对照组(0kPa)、静张应力组(5kPa)、动态张应力组1(5kPa-0kPa-5kPa)、动态张应力组2(5kPa-2．5kPa-5kPa)不同水平及频动范围张应力加载，每组再分16h、24h和32h3个观察时间点，以^3H-TdR掺入法检测其S期细胞增殖活性。结果 静张应力对HPDLF具有明显的促增殖作用，有使其增殖高峰提前的趋向;动态张应力对HPDLF的增殖活性有一定的抑制作用。结论 不同张应力对HPDLF的增殖活性的影响明显不同，静张应力作用具有明显的促增殖作用，而动态张应力有一定的抑制作用。     

富组蛋白1促进人成纤维细胞增殖和迁移

目的了解富组蛋白1(histatin1,Hst1)对人成纤维细胞增殖和迁移功能的影响。方法将人成纤维细胞按常规方法传代培养,分为空白对照组(DMEM+1%小牛血清)、A组(100μg/ml Hst1)、B组(30μg/ml Hst1)、C组(3μg/mlHst1),细胞计数法观察不同浓度Hst1(3～100μg/ml)在不同时相点(24、48、72 h)对人成纤维细胞增殖功能的影响;将已融合的人成纤维细胞分为丝裂霉素C处理组及丝裂霉素C未处理组,各组中再次分为空白对照组(DMEM+1%小牛血清)、Ⅰ组(30μg/ml Hst1)、Ⅱ组(10 ng/ml rhEGF)、Ⅲ组(30μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF)、Ⅳ组(15μg/ml Hst1+5 ng/mlrhEGF)、Ⅴ组(15μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF),通过体外细胞划痕实验考察Hst1对人成纤维细胞迁移功能的影响。结果①不同浓度的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,与浓度及时间无明显依赖关系,24 h时间点A、B组细胞数显著高于其余各组(P<0.01);②30μg/ml Hst1能促进细胞划痕创面愈合,8 h划痕愈合率约37.7%,与rhEGF联合应用时促划痕愈合率高于单独用药;利用丝裂霉素C排除细胞增殖作用后,30μg/ml Hst1较空白对照组无促进细胞迁移功能(P>0.05),划痕愈合率较丝裂霉素C未处理对应组下降,但无统计学意义,且与rhEGF联合应用时促划痕愈合率与单独用药无统计学差异(P>0.05)。结论 Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,但促迁移功能不明显。Hst1联合rhEGF使用时对人成纤维细胞划痕创伤愈合具有协同促进作用。     

芩丹胶囊对成纤维细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨芩丹胶囊(QC)含药血清对血管外膜成纤维细胞(AF)增殖和迁移的影响。方法 组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,MTT和Transwell法观察小RNA干扰(siRNA)技术沉默Smad2及大剂量［750㎎/(㎏·d)］、小剂量［150㎎/(㎏·d)］ QC含药血清对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导AF增殖和迁移的影响;实时定量PCR及Western blot检测Smad2和Smad7的基因和蛋白表达情况。结果 siRNA-Smad2及大、小剂量QC含药血清均能显著抑制AF的增殖和迁移(P＜0.05);用药组Smad2基因及蛋白的表达较单纯刺激组显著降低,Smad7则显著升高(P均＜0.01)。结论 QC含药血清能显著抑制AF增殖和迁移,其机制可能与Smads信号转导通路有关。     

丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的　研究天然药物丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗增生性瘢痕的有效药物。方法　以四甲基偶氮唑 (MTT)法和特异性荧光染色及原位末端标记技术检测丹参酮ⅡA对成纤维细胞增殖及凋亡的影响。结果　丹参酮ⅡA对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,且呈浓度和时间依赖性。采用荧光染色和TUNEL法检测凋亡指数 ,均呈剂量依赖性增高 (P <0 0 1)。结论　丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,并且能够诱导其发生凋亡 ,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物提供了新的思路。     

亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响

目的：探讨亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响。方法：使用原代培养的人真皮成纤维细胞和表皮细胞，采用直接细胞计数法和MTT法检测亚砷酸钠对两种细胞系生长的影响。结果：成纤维细胞较表皮细胞易于培养；MTT法检测，不同剂量的亚砷酸钠与对照组比较，吸光度值均有提高，有剂量－效应关系（P＜0.01)；0.5-8.0μmol/L的亚砷酸钠对成纤维细胞有明显增殖作用；低浓度（0.8μmol/L、1.6μmol/L)对表皮细胞有明显的增殖作用，浓度高于3.2μmol/L时，表皮细胞生长受抑制；10.00μmol/L亚砷酸钠对成纤维细胞有毒性作用。结论：无机砷诱导人皮肤细胞的增殖作用可能是引起慢性砷中毒皮肤损伤的重要原因，具体作用机制有待进一步研究。     

氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究激素对体外培养的成纤维细胞增殖及分泌功能的影响,初步探讨其治疗瘢痕的作用机制.方法:采用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法,观察氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响.结果:氢化可的松(0.1 g/L)能够抑制体外培养成纤维细胞增殖(MTT值0.523±0.051 vs 0.347±0.036,P<0.05)及分泌胶原的功能[3H-脯氨酸掺入量(248±6) Bq vs (181±6) Bq,P<0.05],并呈剂量依赖性(r=-0.8208).结论:氢化可的松可通过抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成,从而达到治疗瘢痕的作用.     

瑞舒伐他汀对晚期内皮祖细胞增生、迁移及凋亡的影响

目的观察不同浓度及不同时间的瑞舒伐他汀(rosuvastatin)对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增生(proliferation)、迁移(migration)和凋亡(apoptosis)的影响。方法采用密度梯度法从大鼠骨髓获取单个核细胞,培养28 d,通过FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色鉴定为正分化晚期EPCs。以不同浓度的瑞舒伐他汀(0.001、0.01、0.1、1.0、10、100μmol/L)和晚期EPCs共培养24 h,分别采用MTT比色法、Transwell小室及Tunel法检测其增生、迁移及凋亡功能;以浓度为0.1μmol/L的瑞舒伐他汀与晚期EPCs分别共培养1、3、6、12、24、48 h,应用同样方法检测其增生、迁移及凋亡功能。结果体外培养7 d时,细胞呈典型长梭形;28 d时,呈铺路石样,并可摄取FITC-UEA-I和DiI-acLDL。不同浓度的瑞舒伐他汀组与对照组相比均可明显地改善晚期EPCs的增生(P<0.05)、迁移(P<0.05)及凋亡(P<0.05)功能,且浓度为0.1μmol/L的瑞舒伐他汀改善细胞功能最强(P<0.05)。当瑞舒伐他汀浓度为0.1μmol/L、共培养不同时间后,与对照组相比可增强晚期EPCs的增生(P<0.05)、迁移(P<0.05)及抗凋亡(P<0.05)功能。结论瑞舒伐他汀能够提高晚期内皮祖细胞的增生、迁移功能,减少细胞的凋亡,且呈浓度及时间依赖性。     

美洲大蠊提取物对人胚胎皮肤成纤维细胞增殖的影响*

目的 研究美洲大蠊提取物Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E、Ento-F对体外培养人胚胎皮肤成纤维细胞（CCC-ESF-1）增殖的影响。方法 在不同时间用不同浓度的美洲大蠊提取物作用CCC-ESF-1,同时设不加药的阴性对照组（含等量细胞重悬液）和只加培养液的空白组。结果 与阴性对照组比较,3和 10?μg/ml的Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果较好,300?μg/ml Ento-F对CCC-ESF-1细胞的增殖有抑制作用。3?μg/ml Ento-A作用24?h时对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果最好,3、10?μg/ml Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E作用72和96?h时对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果较好,Ento-F对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用不佳,均弱于其他5种。结论 美洲大蠊提取物能抑制体外CCC-ESF-1细胞的增殖。     

不同浓度葛根素溶液对人皮肤成纤维细胞生物学效应的影响

[目的] 观察不同浓度的葛根素溶液对人皮肤成纤维细胞(HDF)生物学效应的影响。[方法] 体外培养人皮肤成纤维细胞,选用葛根素溶液100、200、300、400、500 μg/mL五个不同的药物浓度,观测葛根素溶液在5个药物浓度下对HDF的生物学效应的影响。[结果] 与对照组相比较,药物浓度为100、200、300、400 μg/mL的葛根素溶液,对体外培养的HDF的生物学效应无影响(P>0.05);药物浓度为500 μg/mL的葛根素溶液,对体外培养的HDF的增殖有抑制作用(P<0.05),且对HDF的细胞膜有一定的损伤作用(P<0.05)。[结论] 药物浓度500 μg/mL的葛根素溶液对体外培养的HDF有抑制增殖和细胞膜损伤的作用,此药物浓度可作为干预HDF的作用剂量,对瘢痕组织的治疗将起到一定作用。     

外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响

目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.     

他汀类药物对血管平滑肌细胞的影响及机制

心血管疾病尤其是冠状动脉硬化性心脏病具有很高的死亡率和发病率,对这些冠脉疾病的病因分析,认为动脉粥样硬化是主要原因。动脉壁脂质沉积和血管平滑肌细胞的异常迁移与增殖是动脉粥样硬化形成的两个关键步骤。目前抗动脉粥样硬化以调脂药物如三羟基三甲基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂（即他汀类药物）为主,临床实验和基础研究表明：他汀类药物不仅具有调控血浆胆固醇的主要作用,而且还涉及其非调脂的抗动脉粥样硬化作用,如抗炎症反应、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移、促进血管平滑肌细胞凋亡和改善内皮功能等。本文主要就他汀类药物对血管平滑肌细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其机制做如下综述。     

替普瑞酮对胃上皮细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：观察替普瑞酮对人正常胃上皮细胞增殖、迁移及凋亡等生物学现象的影响。方法体外培养人正常胃上皮细胞,M T T法检测不同浓度替普瑞酮对胃上皮细胞的增殖作用并确定替普瑞酮最佳作用浓度。T ransw ell实验、划痕实验检测替普瑞酮最佳作用浓度对胃上皮细胞运动能力及迁移作用的影响。流式细胞法检测替普瑞酮最佳作用浓度对胃上皮细胞凋亡的影响。结果替普瑞酮作用于胃上皮细胞24 h后,开始出现促进胃上皮细胞增殖的现象,从10～80μmol／L随着浓度增加,促进作用越明显,而＞80～320μmol／L随着浓度增加,促进作用无明显改变,据此确定药物最佳作用浓度为80μmol／L。80μmol／L浓度替普瑞酮处理胃上皮细胞24 h后,T ransw ell实验显示,对照组的迁移率为1．328±0．208,加药组为3．338±0．293,小室膜下蓝染的细胞加药组明显高于对照组（P＜0．01）;划痕实验显示加药组划痕区域细胞迁移率1．00±0．18,对照组0．72±0．08,加药组迁移率明显高于对照组（P＜0．05）。80μmol／L浓度替普瑞酮处理胃上皮细胞48 h后,加药组细胞凋亡率（11．90±1．53）％低于对照组（25．61±0．15）％,差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论替普瑞酮能够促进人胃上皮细胞增殖及迁移,抑制人胃上皮细胞凋亡。