甘草提取液对肠粘膜P-糖蛋白的作用

目的 研究甘草提取液对肠粘膜P-糖蛋白(P-gp)的调控作用.方法 通过体外Ussing chamber实验,研究甘草提取液对P-gP底物罗丹明123(R123)转运的直接影响,以及甘草灌胃后对R123和荧光素钠(CF)经空肠粘膜透过性的影响.结果 甘草提取液直接作用于肠粘膜时对R123吸收方向和分泌方向的影响无显著差异;灌胃相当原生药10 g·Kg~(-1)的甘草提取液每天2次,1周后,可显著提高R123吸收方向的转运,R123分泌方向有增加趋势,而对CF经空肠粘膜吸收和分泌方向的透过性均无显著影响.结论 甘草可能是P-gP的轻度抑制剂,通过抑制存在于肠粘膜的P-gP活性而发挥其增加底物药物R123吸收的能力.

Abstract：

Objective To investigate the effect of liquorice in functional modulation of intestinal P-glycoprotein (P-gp) in rats. Methods An in vitro diffusion chamber system (Ussing chamber) was used to examine the direct effect of liquorice decoction on rhodamine 123 (a subtrate of P-gp) transport and evaluate the permeability of rhodamine 123 or fluorescein sodium through rat jejunum membranes after oral administration of liquorice decoction. Results Direct application of liquorice decoction did not obviously affect rhodamine 123 transport across the intestinal mucosa. Oral administration of liquorice decoction (10 g/kg, twice daily for a week) significantly increased the absorption of rhodamine 123 and also enhanced rhodamine 123 secretion across the jejunum mucosa. Liquorice had no obvious effect on the transport of CF across the jejunum mucosa. Conclusion Liquorice may slightly inhibit P-gp function in the intestinal mucosa to increase the intestinal absorption of rhodamine 123.     

罗丹明123及P-糖蛋白在人支气管损伤修复过程中的表达

目的 研究离体人支气管上皮经氟尿嘧啶(5-FU）损伤前后及修复过程中罗丹明123(Rh123)的染色及P-糖蛋白的表达情况。方法 取5-FU作用前后及修复3、6、24h的人支气管上皮。进行如下实验：采用酶消化法获取细胞悬液，Rh123染色，流式细胞仪分析；用免疫荧光及蛋白印迹法观察P-糖蛋白的表达，RT—PCR法检测P-糖蛋白mRNA的表达。结果 5-FU作用后支气管上皮中Rh123阴性染色细胞占活细胞的比例较正常组增多；随着损伤的修复，Rh123阴性活细胞所占比例逐渐降至接近正常。免疫荧光法可见5-FU作用后的上皮细胞涂片上有P-糖蛋白的表达，在蛋白及mRNA水平，5-FU作用后支气管上皮的P-糖蛋白表达均较正常组增加。结论 5-FU作用后，Rh123染色阴性、表达P-糖蛋白的支气管干细胞占残留活细胞的比例增多。由它们完成损伤的修复。     

葡萄糖对SVAREC细胞P-糖蛋白转运和表达的影响

目的探讨葡萄糖对内皮细胞SVAREC膜转运蛋白P-糖蛋白的底物转运和表达的影响。方法 1.用含10％胎牛血清的DMEM培养液将SVAREC细胞传入24孔板,等细胞贴壁后将细胞分成4组,分别换以下条件刺激,A组:低葡萄糖(5.5mmoL/L);B组:高葡萄糖(25mmol/L);c组:低葡萄糖(5.5mmol/L)+Verapamil(10~(-4)Mol);D组:高葡萄糖(25mmol/L)+Verapamil(10~(-4)/Mol);每组都同时用不同浓度的秋水仙碱(0;12.5;25;50ug/ml)刺激72小时,以MTT法测定细胞的耐受性。2.按上述方法将细胞传入培养皿中,待细胞贴壁后,分别换葡萄糖浓度为5.5mmol/L,25mmol/L和50mmol/L的DMEM培养液继续培养72小时,提取细胞膜蛋白,Westem-blot检测P-糖蛋白的蛋白表达。结果高糖处理的细胞对秋水仙碱(P-糖蛋白的转运底物)细胞毒的耐受性明显低于低糖处理的细胞,在秋水仙碱浓度为25ug/ml时,差异最为显著(P<0.01),Verapamil(P-糖蛋白转运的特异抑制剂)共处理的低糖组细胞对秋水仙碱的耐受性显著降低(秋水仙碱浓度为25ug/L时,P<0.01),而Verapamil处理后的高糖和低糖组细胞对秋水仙碱的耐受性无显著性差异。Westem-blot结果显示5.5mmol/L葡萄糖刺激的细胞P-糖蛋白蛋白表达明显高于25mmoL/L和50mmoL/L葡萄糖刺激的细胞,而25mmol/L和50mmol/L之间没有显著差异。结论高糖能够降低内皮细胞P-糖蛋白对其底物的转运和表达,增加其底物秋水仙碱在细胞中的积累,使细胞的耐受性下降。     

五味子对细胞色素P450酶和P-糖蛋白作用研究进展

药物的相互作用多发生在药物的代谢阶段,其中由细胞色素P450酶（cytochrome P450,CYP）介导的代谢性相互作用发生率最高。同CYP一样,P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）由于在其底物的吸收、分布和排泄等药动学过程中发挥着重要作用,同样可介导体内多种药物间的相互作用。本文从CYP和P-gp两方面,阐述五味子及其单一化学组分对药物代谢的影响的研究进展。     

洛美利嗪对大鼠脑微血管内皮细胞上P-糖蛋白功能的影响

目的：研究洛美利嗪对大鼠脑微血管内皮细胞上P-糖蛋白功能的影响。方法：使用荧光分光光度计和流式细胞术分析大鼠脑微血管内皮细胞内P-糖蛋白底物-罗丹明123的荧光强度。结果：环孢素A和洛美利嗪与大鼠脑微血管内皮细胞孵育后能明显提高胞内罗丹明123的荧光强度。人脐静脉内皮细胞内荧光强度则不受环孢素A和洛美利嗪的影响。结论：洛美利嗪能显著地抑制大鼠脑微血管内皮细胞上P-糖蛋白的活性,提高P-糖蛋白底物的胞内浓度。     

白血病耐药细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶对P-糖蛋白药物泵出功能的影响

目的探讨人白血病多药耐药细胞株K562/AO2中葡萄糖神经酰胺合酶（GCS）对P-糖蛋白（P-gp）泵出功能的影响,以便进一步研究GCS在白血病细胞耐药形成中的作用机制。方法采用RNA干扰技术分别靶向干扰K562/AO2中的GCS和多药耐药基因1（MDR1）,并通过荧光定量PCR检测小干扰RNA（siRNA）的干扰效果;用流式细胞术检测细胞内罗丹明123（rh123）的滞留量,以rh123的平均荧光强度（MFI）反映P-gp蛋白的泵出功能。结果 GCSsiRNA和MDR1siRNA对各自靶基因的抑制率分别是（68±5.72）%和（75.3±2.62）%;转染siRNA 48 h后,GCS干扰组MFI为255.75±76.1,MDR1干扰组MFI为357.25±41.57,分别是阴性干扰组的3.3倍和4.6倍。结论特异性的沉默GCS基因可以降低P-gp的泵出功能,提示GCS可通过协同P-gp的药物泵出功能参与白血病细胞的耐药形成过程。     

P-糖蛋白诱导作用的研究进展

P-糖蛋白(P-gp)是ATP结合盒转运体家族中重要的外排转运体。诱导作用可上调细胞外排转运体的表达并增强其功能,从而减少外源性有害异物造成的伤害,对维持细胞内环境稳态有重要作用。本文结合课题组的研究,综述了近年来P-gp的诱导模型、实验方法及其在新药研究中的应用。重点总结了多种P-gp的体外细胞诱导模型和体内动物诱导模型,检测P-gp基因、蛋白表达水平和外排转运功能的实验方法,以及P-gp与代谢酶、其他转运体的共同调节作用。同时介绍了以P-gp诱导进行临床解毒治疗的策略以及计算机辅助设计的P-gp诱导药效基团模型。本综述为临床前药物设计、新合成化合物诱导活性的筛选和潜在临床药物相互作用的预测提供一定的指导。     

血脑屏障上的P-糖蛋白及其转运功能研究进展

P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是一个由分子量170-180KD组成的糖蛋白,其主动的药物外排作用是造成肿瘤细胞产生多药耐药性(Multidrug resistance,MDR)的重要原因。近年来研究发现,P-糖蛋白在机体正常组织如血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)也呈高度表达。本文归纳了P-糖蛋白的逆转剂及其底物的特征,系统介绍了血脑屏障上P-糖蛋白的转运功能及其研究方法,期望为P-糖蛋白逆转剂的应用以及中枢神经系统疾病的治疗提供帮助。     

肠道P-糖蛋白和细胞色素P450 3A对口服药物吸收的联合作用

药物在肠道的I相代谢和主动转运是决定口服药物生物利用度的关键因素。细胞色素P450(CYP)3A和P-糖蛋白在胃肠道的吸收细胞中高表达,肠道P-糖蛋白和(或)CYP 3A的抑制剂可以增加口服药物的生物利用度。本文综述了肠道P-糖蛋白和CYP 3A对口服药物吸收的联合作用、可能的机制及其在药学中的应用。     

吐温-80对p-糖蛋白底物罗丹明123经肠粘膜透过性的影响

目的 观察低浓度吐温-80对肠粘膜P-gp的调控作用.方法 使用体外扩散池评价罗丹明123(R123)经空肠,回肠和结肠粘膜的经时吸收方向和分泌方向的透过量和透过系数,并测定不同浓度吐温-80对R123和荧光素钠经肠粘膜透过性的影响.R123和荧光素钠在接受室中的浓度用荧光分光光度法测定.结果 R123经肠道粘膜的透过性存在部位差.即以空肠、回肠和结肠的次序透过性依次减少.另一方面,R123经肠道分泌方向的透过性显著地高于其吸收方向的透过性.低浓度的吐温-80具有增加R123经吸收方向的透过性.但实验浓度的吐温-80对荧光素钠的肠道转运没有影响.结论 低浓度的吐温-80可通过对P-gp功能的抑制而用于改善受P-gp介导药物的吸收,有望提高此类药物的口服生物利用度.     

低浓度聚氧乙烯蓖麻油对p-gp底物罗丹明123经肠黏膜透过性的影响

目的观察低浓度聚氧乙烯蓖麻油对肠黏膜p-gp的调控作用。方法使用体外扩散池法评价罗丹明123（R123）经空肠、回肠和结肠黏膜的经时经吸收方向和分泌方向的透过量和透过系数（Papp）,并测定不同浓度表面活性剂对R123和荧光素钠（CF）经肠黏膜透过性的影响。R123和CF在接受室中的浓度用荧光分光光度法测定。结果R123经肠道黏膜的透过性存在部位差,空肠、回肠和结肠的次序透过性依次减少;R123经肠道分泌方向的透过性显著高于其吸收方向的透过性。低浓度的聚氧乙烯蓖麻油具有增加R123经吸收方向的透过性,减少经分泌方向的透过性。但试验浓度的表面活性剂对CF的肠道转运没有影响。结论低浓度的聚氧乙烯蓖麻油可通过对p-gp功能的抑制而用于改善受p-gp介导药物的吸收,有望提高此类药物的口服生物利用度。     

辣椒素大鼠不同肠段在体给药药代动力学

目的：通过在体环境下对辣椒素经不同肠段的吸收情况进行检测来验证体外实验与体内实验的相关性。方法采用在体肠封闭实验研究辣椒素经不同肠断的吸收情况,辣椒素的血药浓度检测采用已经建立的LC-MS/MS 检测方法,并计算各种药代动力学参数。结果辣椒素经不同肠段吸收后,在结肠的浓度时间曲线下面积（AUC0鄄240min）和最高血浆浓度（Cmax）的平均值大于回肠和空肠,但无统计学差异。结论体内研究结果并没有出现体外研究中所呈现的具有显著性的结肠特异性吸收特性,体外研究和体内研究的完全相关性仍然是值得进一步探究。     

血管活性肠肽对便秘大鼠排便及结肠组织中#br# VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的：观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对便秘大鼠肠道水液代谢、环磷酸腺苷-蛋白激酶A信号通路(cyclic AMP protein kinase A signaling pathway,cAMP-PKA)和水通道蛋白3(water channel protein 3,AQP3)的影响,探讨VIP治疗便秘的作用及机制。方法：45只健康成年Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型组、模型+ VIP组。给药4周后,墨汁灌胃法检测大鼠首粒黑便排出时间;根据大鼠粪便干湿重计算粪便含水率;HE染色观察各组大鼠结肠组织形态学变化;Western 印迹检测各组大鼠结肠组织中 VIP和AQP3蛋白表达水平;定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)检测各组大鼠结肠组织中cAMP,PKA和AQP3 mRNA的表达水平。结果：与空白对照组比较,模型组大鼠首粒黑便出现时间延长,粪便含水率明显减少(均P<0.01);结肠黏膜上皮部分破坏,杯状细胞体积减小,数量明显减少;结肠组织中VIP和AQP3蛋白含量明显减少,AQP3,cAMP和PKA mRNA相对表达水平均有所降低(均P<0.05)。与模型组比较,模型+VIP组大鼠首粒黑便出现时间缩短,粪便含水率明显增加(均P<0.05);结肠黏膜上皮完整性明显改善,杯状细胞体积增大,数量增多;结肠组织中VIP和 AQP3蛋白含量增多,CAMP,PKA和AQP3 mRNA相对表达水平升高(均P<0.05)。结论：VIP静脉注射能够调节肠道水液代谢,改善大鼠便秘症状,其机制可能与调节VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关。     

缬沙坦大鼠在体肠吸收动力学

通过大鼠在体单向肠灌流模型(SPIP),采用反相高效液相色谱法测定大鼠肠液中缬沙坦的浓度,研究缬沙坦的肠吸收动力学与P-糖蛋白(P-gp)和有机阴离子转运多肽(OATP)对缬沙坦肠吸收的影响。结果表明,缬沙坦为全肠段吸收,吸收速率与灌流液的pH和肠段部位有关,吸收速率按十二指肠、空肠、结肠和回肠顺序下降。缬沙坦在十二指肠的非线性吸收动力学参数为Ka=0.328 h-1;Vm=72.652μmol/(L.h);Km=10.968μmol/L;Vms=69.115μmol/(L.h);Kms=0μmol/L。空肠、结肠和回肠的吸收速率常数分别为(0.595±0.091),(0.586±0.153)和(0.551±0.030)h-1。与原药组相比,含P-gp抑制剂药物组Papp显著增加,含OATP抑制剂药物组Papp显著减少(P<0.05)。缬沙坦的肠吸收机制为主动转运-被动扩散混合吸收,符合非线性动力学过程。     

体外垂直型扩散池技术评价原花青素对大鼠不同区段肠黏膜药物透过特性的影响

目的 评价原花青素对P-糖蛋白(P-gp)底物罗丹明123(R123)和荧光素钠(FS)在大鼠不同区段肠黏膜透过特性的影响.方法 采用体外垂直型扩散池(Ussing Chamber)技术,分别计算原花青素20 mg/L时R123和FS经空肠、回肠和结肠黏膜吸收与分泌方向的累计透过率和表观渗透系数(Papp),R123和FS在接收池的样品浓度用荧光分光光度计法测定.结果 原花青素具有增加R123经空肠、回肠与结肠吸收方向透过性的趋势,同时具有降低R123经空肠、回肠与结肠分泌方向透过性的趋势,与正常对照组相比,原花青素使结肠R123分泌方向透过性明显降低(P<0.01).结论 原花青素具有抑制R123经肠黏膜外排的作用,该作用可能与原花青素抑制肠黏膜上皮P-gp功能有关.     

地佐环平对边缘叶癫痫发作大鼠海马P-糖蛋白表达的影响

目的 观察兴奋性谷氨酸受体（NMDA受体）拮抗剂地佐环平（MK801）对边缘叶癫痫大鼠发作后P-糖蛋白（P—gp）表达的影响,探讨NMDA受体是否能对癫痫发作后P—gp表达进行调控。方法 制备氯化锂．匹罗卡品癫痫发作大鼠模型,60只大鼠,随机分为6组：对照组、癫痫发作终止后0、3、6、24和72h组,用实时荧光定量RT-PCR检测癫痫大鼠发作终止后不同时程海马组织P—gp mRNA的表达。另取60只大鼠随机分为对照组、癫痫持续状态发作模型（SE）组、MK801干预组,各组均分为发作终止后6h和24h时间点。用实时荧光定量RT—PCR检测癫痫发作终止后6h大鼠海马P-gp mRNA的表达,用免疫组化检测大鼠癫痫发作终止后24h海马组织P—gp蛋白的表达。结果 癫痫发作终止后72h内的所有动物海马组织多药耐药基因1a（mdr1a）的表达均显著高于对照组,SE终止即刻其表达显著升高[5．6（2．9）×10^5 mRNA拷贝数／40ng总RNA,P〈0．05],SE终止后3h时其表达进一步升高[7．6（6．3）×10^5,P〈0．01],此后至SE终止后72h,mdrla mRNA的表达一直维持在该水平;mdr1b的表达在边缘叶发作动物呈一过性增高,发作终止后3、6h[分别为（3．3±0．4）×10^4和（3．6±1．0）×10^4,为对照组的2．2、2．4倍]均明显高于对照组（P〈0．01）。另外,在发作终止后6h时,MK801组mdr1a[（4．3±0．8）×10^5]和mdr1b[（2．0±0．7）×10^4]基因表达明显低于SE组（P〈0．01）;发作终止24h时,MK801组P—gp[（26．6±5．0）个微血管／400倍视野]蛋白表达也明显低于SE组[（39．0±4．1）个微血管／400倍视野,P〈0．01]。结论 NMDA受体拮抗剂MK801下调癫痫大鼠发作后P-gp的过度表达,提示NMDA受体可能参与癫痫发作过程中P—gp表达的调控,有效抑制NMDA受体的过度活化可能有助于防止癫痫发作后P—gp的过度表达。