17-DMAG对肝癌HepG2细胞的作用研究

目的研究HSP90新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethy-laminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-DMAG)对肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 MTT比色法检测不同浓度的17-DMAG及5 mg/L的DDP对HepG2细胞的生长抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法检测经17-DMAG及DDP作用后HepG2细胞凋亡率的变化。结果 MTT法显示17-DMAG能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性。250 nmol/L的17-DMAG低浓度水平较DDP组对HepG2细胞的抑制率明显增高(P<0.05)。光学显微镜观察17-DMAG作用48 h后HepG2细胞密度减低,细胞体积变小,随着药物浓度增大,细胞数目明显减少。Annexin-FITC/PI双染法检测结果显示,400 nmol/L 17-DMAG干预48 h后细胞早期凋亡率为(22.42±1.83)%,5 mg/L顺铂干预48 h后细胞早期凋亡率为(6.50±1.20)%,未干预组48 h后细胞早期凋亡率为(0.58±0.49)%,表明17-DMAG能诱导HepG2细胞凋亡,且17-DMAG组凋亡率明显高于5 mg/L顺铂组及未干预组(P<0.05)。结论热休克蛋白90抑制剂17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖,随着药物浓度的加大,作用时间的延长,细胞增殖能力逐渐下降,并且能诱导HepG2肝癌细胞的凋亡。17-DMAG抑制肝癌细胞的作用较DDP强。     

罗格列酮对耐热肝癌细胞阿霉素耐受性的影响

目的：探讨耐热肝癌细胞能否产生阿霉素耐受性以及过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPARγ）配体罗格列酮（Rosiglitazone，RSG）能否逆转耐热肝癌细胞的阿霉素耐受性。方法：MTT比色法测定肿瘤细胞的增殖状况，PI染色流式细胞仪（flow cytometry，FCM）观测细胞凋亡，间接免疫荧光流式细胞术检测bcl-2表达。结果：在43℃环境培养24h后，耐热肝癌细胞（HepG2／thermotolerance）存活率较非耐热肝癌细胞（HepG2）n）明显升高，HepG2／thermotolerance细胞凋亡率较HepG2细胞明显下降；正常培养环境情况下（37℃）用1、10、100μmol L^-1的阿霉素（ADR）作用24h后，HepG2／thermotolerance细胞存活率较HepG2细胞明显升高。HepG2／thermotolerance细胞凋亡率较HepG2细胞明显下降；在37℃培养环境情况下，先用10、40μmol／L的RSG提前预处理HepG2／thermotolerance细胞1h，再用10μmol L^-1ADR作用24h，HepG2／thermotolerance细胞存活率明显下降，HepG2/thermotolerance细胞凋亡率明显增加；耐热肝癌细胞较非耐热肝癌细胞高表达bcl-2蛋白，而RSG能下调耐热肝癌细胞的bcl-2表达。结论：耐热肝癌细胞对阿霉素可产生耐受性，RSG对耐热肝癌细胞的阿霉素耐受性具有逆转作用，其机制可能与其下调耐热肝癌细胞bcl-2蛋白有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞增殖的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O2）对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。方法：应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验，研究As2O2对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和细胞毒作用。结果：AS：0，能显著抑制肝癌细胞的生长，5μmol／L As2O2抑制程度明显强于1μmol／L。1．5μmol／L和1μmol／L As2O2作用后细胞克隆形成率分别为（1．5±1．2）％和（12．3±2．2）％，明显低于对照组的（30．0±4．2）％，（P〈0．01）。As2O2对肝癌细胞有较强的细胞毒作用，且呈明显剂量和时间依赖性，其对肝癌细胞的杀伤率高于5-氟脲嘧啶（5-Fu）和丝裂霉素（MMC），但差异无统计学意义。As2O2与5-Fu及MMC存在协同效应，联合应用杀伤率明显升高。结论：As2O2具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用，有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值。     

青蒿琥酯增强顺铂对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用

目的 研究青蒿琥酯(Art)及其联合顺铂(DDP)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别采用不同浓度的Art(0.16、0.8、4、20、100μmol/L)、DDP(0.16、0.8、4、20、100 mg/L)及Art(4μmol/L)和DDP(4 mg/L)联合处理HepG2细胞24 h、48 h和72 h,MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测Art(4μmol/L)组、DDP(4mg/L)组和Art(4μmol/L)+DDP(4 mg/L)联合处理组细胞48 h的凋亡状况.结果 随着处理时间延长(24～72h),Art和DDP对HepG2细胞生长的抑制/杀伤作用明显增强;它们在暴露72 h的条件下分别在0.16 μmol/L和0.8 mg/L以上浓度具有浓度依赖性细胞毒作用.Art联合DDP处理细胞组对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用比单用Art或DDP组更强(P＜0.05);人肝癌HepG2细胞48 h的早期凋亡率分别为:Art组23.5％,DDP组27.8％,Art+DDP联合用药组49.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可抑制人肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡;它与顺铂联合应用可能增强后者对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用.     

Hsp90特异性抑制剂对宫颈癌细胞存活机制的探讨

目的:研究Hsp90的特异性抑制剂格尔德霉素(GA)在宫颈癌Hela细胞存活中的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养人宫颈癌细胞株Hela,MTT法检测GA作用后细胞抑制率,RT-PCR方法检测GA作用后Bcl-2 mRNA的表达。结果:MTT法显示GA对Hela细胞有生长抑制作用,用药浓度越高,抑制率越高。不同浓度的GA处理宫颈癌Hela细胞后,Bcl-2 mRNA呈剂量依赖性降低,10μmol/L的GA抑制作用最强。10μmol/L的GA处理Hela细胞不同时间点后,Bcl-2 mRNA的表达呈时间依赖性降低。结论:在宫颈癌Hela细胞应用特异性Hsp90抑制剂GA,能够抑制宫颈癌细胞的生长,并通过抑制Bcl-2来促进其凋亡,Hsp90可以成为宫颈癌治疗中的一个新靶点     

青蒿素对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响

目的：探讨青蒿素对细胞株HepG2细胞增殖的影响。方法采用MTT法检测青蒿素对HepG2细胞作用后的增殖抑制率,流式细胞术检测药物作用HepG2后细胞周期及细胞凋亡的情况。结果80μmol／L的青蒿素对肝癌细胞株HepG2具有增殖抑制作用,其抑制率呈剂量、时间依赖效应,可使HepG2细胞周期阻滞于G0／S期,并诱导肝癌细胞发生凋亡。结论青蒿素能抑制肝癌HepG2细胞增殖。     

辣椒素对肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨辣椒素对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡诱导作用的机制。方法:以100、200、400μmol/L浓度辣椒素处理肝癌HepG2细胞后分别培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:随着作用浓度及时间增加,经辣椒素处理的肝癌HepG2细胞增殖活性明显降低(P<0.01);抑制率均显著增加,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);HepG2细胞凋亡率也随辣椒素浓度增加而上升;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Bad表达上升(P<0.05)。结论:辣椒素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

一氧化氮供体型齐墩果烷衍生物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

对一氧化氮（NO）供体型齐墩果烷衍生物（SO-10）对肝癌的抑制作用进行了研究。检测了NO在其诱导肝癌细胞凋亡中的作用。MTT法检测显示SO-10能显著抑制肝癌细胞株（HepG2、BEL-7402和SMMC-7721）的增殖,SO-10作用48 h 后的IC₅₀分别为HepG2（1.19±0.12 μmol/L）、BEL-7402 (1.98±0.85 μmol/L) 和SMMC-7721 (5.92±0.58 μmol/L);流式细胞仪检测显示0.5-2 μmol/L的SO-10均诱导肝癌细胞株HepG2凋亡,细胞凋亡率随浓度增加而上升;Griess法显示SO-10作用后HepG2内的NO水平随着药物作用时间的延长而增加,用NO清除剂预处理后,随着NO浓度的降低,SO-10对HepG2细胞增殖的抑制作用也相应降低。提示SO-10对肝癌细胞有抗增殖作用和诱导凋亡作用,可能与SO-10在肝癌细胞中释放NO有关。     

鞣酸对人食管癌细胞系EC9706的抑制作用

目的 探讨鞣酸对体外培养的人食管癌细胞EC9706的生长抑制作用。方法 不同浓度鞣酸（100、200、300、400、500μmol／L）作用EC9706细胞24、48、72、96h后，通过MTT比色法研究鞣酸对EC9706细胞增殖的影响，采用流式细胞仪观察400μmol／L鞣酸能否诱导EC9706细胞凋亡。^3HTdR、^3HLeucine掺入法研究400μmol／L鞣酸对食管癌细胞DNA复制及蛋白合成的影响。结果 鞣酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增殖；流式细胞术检测显示出典型的凋亡峰，细胞凋亡率为46．8％；^3H—TdR、^3H—Leucine掺入量明显减少。结论 鞣酸可以抑制食管癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，可能是预防和治疗食管癌的一种新型化合物。     

抗肿瘤抗生素云南霉素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的观察抗肿瘤抗生素云南霉素对人肝癌HepG,细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG,,MTT法检测云南霉素对细胞增殖的影响,Hoechest33342法检测细胞凋亡的形态变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP的表达,AnnexinV—FITC／PI双染结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果云南霉素对HepG2细胞增殖抑制的Ic,。值为24．13μmoL／L;HepG2细胞经云南霉素作用24h后,可诱导胞内凋亡标志蛋白PARP的切割,并随浓度的增高而作用增强;而HepG2细胞经云南霉素作用48h后,可出现典型的凋亡形态变化,呈剂量依赖性引起细胞凋亡。结论云南霉素可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞发生凋亡。     

抗肿瘤抗生素云南霉素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的观察抗肿瘤抗生素云南霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,MTT法检测云南霉素对细胞增殖的影响,Hoechest33342法检测细胞凋亡的形态变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP的表达,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果云南霉素对HepG2细胞增殖抑制的IC50值为24.13μmol/L;HepG2细胞经云南霉素作用24h后,可诱导胞内凋亡标志蛋白PARP的切割,并随浓度的增高而作用增强;而HepG2细胞经云南霉素作用48h后,可出现典型的凋亡形态变化,呈剂量依赖性引起细胞凋亡。结论云南霉素可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞发生凋亡。     

紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的 研究紫花牡荆素(Casticin)对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法 用终浓度为0、0.5、1.0及2.0 μmol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24及48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24 h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染.与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加.Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加.RT-pCR结果 显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达.结论 Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡的作用与其对survivin基因表达的抑制有关.     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

GnRH类似物对体外肝癌细胞Hsp90表达的影响及其意义

目的:探讨GnRH类似物阿拉瑞林对肝癌细胞Hsp90表达的影响及其意义。方法:用不同浓度GnRH类似物阿拉瑞林刺激HepG2肝癌细胞并观察其增殖阻抑作用;免疫组织化学方法检测HepG2肝癌细胞Hsp90表达的变化。结果:Hsp90在GnRH促进HepG2肝癌细胞凋亡的过程中表达减少并与时间呈正相关。结论:GnRH可能通过降调Hsp90发挥其对HepG2肝癌细胞的增殖阻抑作用。     

CKII抑制剂——肝癌治疗新靶点

目的探讨蛋白激酶（casein kinase 2,cK2）抑制剂影响肝癌细胞株HepG-2凋亡的机制,为其临床治疗肝癌提供可能的实验依据。方法本研究通过MTT法和流式细胞仪检测和观察不同作用时间、不同浓度CK2抑制剂四溴苯三唑（4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole,TBB）作用HepG-2肝癌细胞株后对其增殖和凋亡的影响,分别应用荧光定量PCR和Western blot实验分析可能机制。结果TBB在48h浓度为200μmol／L时对肝癌细胞的抑制作用最明显;150~mol／LTBB作用48h后,早期凋亡率明显增高,至（13．2±0．67）％,磷酸化P65在100μmol／LTBB实验组表达下调,而caspase-3、caspase-8、Bcl-2和Bcl—X等在两组间表达未见明显差异。结论CK2抑制剂TBB能够通过参与调控NF—KB信号转导通路抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡,可能成为未来肝癌治疗的一个新的靶点。     

山竹果皮提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨山竹提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度山竹提取物对HepG2细胞增殖的影响;分别应用Annexin-V/PI双重染色、PI单染法检测山竹提取物对HepG2凋亡和细胞周期的影响;天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)试剂盒检测山竹提取物对HepG2细胞Caspase-3酶活化的影响.结果 不同浓度(100 μmol/L、200μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物均可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖活性,且随着山竹提取物浓度及其作用时间的增加,细胞抑制率升高(P＜0.05);山竹提取物浓度为256.67 μmol/L时可诱导人肝癌细胞HepG2出现早期凋亡,并且随着山竹提取物作用时间的增加,凋亡早期癌细胞的比率增高.细胞周期分析结果显示随着山竹提取物的浓度升高(0 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L),G1期HepG2细胞比例升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05).与对照组(0 μmol/L)比较,各浓度(200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物组HepG2细胞的Caspase-3酶活性均升高(P＜0.05),给药组的酶活力单位随给药浓度的增加而明显增加(P＜0.05).结论 山竹提取物对人肝癌细胞HepG2有抑制增殖和促进凋亡的作用,其作用机制可能与抑制HepG2细胞进入S期和激活Caspase-3有关.     

乙酰水杨酸铜对HCT-116细胞生长的抑制及诱导凋亡作用

目的 研究乙酰水杨酸铜对HTC-116细胞生长的抑制及诱导凋亡作用，探讨其抗肿瘤作用的机制。方法 采用MTT法检测乙酰水杨酸铜对HTC-116细胞的毒性作用；荧光显微镜照相及流式细胞术检测乙酰水杨酸铜诱导HTC-116细胞凋亡的作用。结果 乙酰水杨酸铜处理HTC-116细胞48h、72h的IC50值分别为6．10μmol／L和4．48μmoL／L；10μmol／L乙酰水杨酸铜处理HTC-116细胞24h镜下可见核分裂及凋亡小体形成，处理48h流式细胞术可检测出明显的亚二倍体峰，凋亡率达34．1％。细胞凋亡发生呈剂量和时间依赖性。结论 乙酰水杨酸铜可显著抑制HTC-116细胞生长并诱导其凋亡。     

芬维A胺对人肝癌细胞株HepG2增殖与细胞凋亡的影响

目的探讨分子靶向药物芬维A胺(Fenretinide)在体外对人肝癌细胞株Hep G2的细胞增殖与细胞周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在培养液中加入不同浓度的芬维A胺(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L),对照组培养液中不加芬维A胺,分别孵育48 h后,采用MTT法检测芬维A胺对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果芬维A胺能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;芬维A胺处理HepG2细胞72 h,可使G0~G1期细胞比例升高,G2~M、S期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05)。结论芬维A胺对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制增殖和促进凋亡。     

二氧化硒诱导肺癌细胞株A549和GLC-82细胞凋亡及对bcl-2、p53基因表达的影响

目的探讨二氧化硒（SeO2）对肺癌细胞株A549、GLC-82的增生、凋亡以及bcl-2和p53基因表达的影响。方法用MTT比色法检测二氧化硒（SeO2）对细胞增殖和存活的影响；用光学显微镜和荧光显微观察了细胞经过SeO2处理后的形态学改变；利用流式细胞术测定细胞的凋亡率及bcl-2和p53的表达。结果SeO2可明显抑制肿瘤细胞的增殖，促进细胞的凋亡。10μmol／L的SeO2作用48h后，A549细胞、GLC-82细胞的凋亡率分别为钾。8％、40．8％。用不同浓度（从3-30μmol／L）的SeO2处理肿瘤细胞48h，在A549细胞中，bcl-2的表达从65．8％下降至9．6％。结论SeO2对2种肺癌细胞株均有诱导凋亡的作用，在凋亡过程中涉及到bcl-2下调和p53上调。     

低表达bcl-2对神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的观察无血清条件下bcl-2对神经酰胺诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法通过脂质体介导的基因转染，建立稳定转染表达反义bcl-2 mRNA的cDNA片段的真核表达质粒的人肝癌细胞HepG2（HepG2—anti-bcl-2）并鉴定，采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，分光光度法测定Caspase-3活性。结果终浓度50μmol／L C2-神经酰胺作用24h，可诱导无血清培养的HepG2细胞、HepG2-vector细胞及HepG2-anti—bcl-2细胞发生凋亡。AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现。流式细胞仪检测显示C2-神经酰胺作用12，18，24h，HepG2—anti—bcl-2细胞凋亡率较同时间HepG2细胞及HepG2—vector细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。终浓度50μmol／L C2-神经酰胺作用12h，HepG2—anti—bcl-2细胞DNA凝胶电泳呈现梯状条带，而HepG2细胞及HepG2—vector细胞作用24h出现DNA梯状条带。HepG2细胞和HepG2-vector细胞Caspase-3活性随C2-神经酰胺（50μmol／L）作用时间延长而增强，HepG2-anti—bcl-2细胞Caspase-3活性始终维持较高水平。结论低表达bcl-2可通过增加Caspase-3活性从而促进C2-神经酰胺诱导的HepG2细胞凋亡。