DNA甲基转移酶抑制剂对子宫内膜异位症异位灶的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷对子宫内膜异位症大鼠模型异位灶的影响。方法:根据大鼠自体移植方法构建大鼠子宫内膜异位症模型。4周后二次开腹判断造模是否成功,用游标卡尺测量记录异位灶体积后将大鼠随机分为实验组(n=12)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=12)和对照组(n=11),同时选取未造模的正常大鼠作为空白组(n=10)。实验组大鼠腹腔注射5-氮-2'-脱氧胞苷(2.5 mg/kg·d),PBS组注射等量PBS溶液对照组和空白组未用药。4周后取大鼠腹腔冲洗液及异位灶标本后处死大鼠,再次用游标卡尺测量备组异位灶体积大小。异位灶组织常规HE切片后显微镜下观察组织形态结构。应用免疫组织化学染色方法和Western Blot法检测备组异位灶内DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达情况。收集腹腔冲洗液用Elisa法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果:①50只大鼠根据大鼠子宫内膜自体移植方法成功35例,造模成功率为70%(35/50)。②实验组大鼠经药物处理后异位灶体积明显缩小(处理前后病灶体积分别为51.08±12.73 mm~3和5.56±3.68 mm~3),差异有统计学意义(P0.01)。③免疫组化检测实验组、PBS组、对照组异位灶组织中DNMT1表达的组织学评分分别为2.30±0.97分、3.80±1.77分、4.07±1.92分;Western Blot法检测实验组、PBS组、对照组异位灶组织中DNMT1蛋白的相对表达量分别为0.17±0.39、0.29±0.17、0.3 1±0.41。实验组异位灶组织中DNMT1表达低于PBS组及对照组差异有统计学意义(P0.05)。④实验组大鼠腹腔冲洗液中TNF-α含量较PBS组及对照组降低,实验组、PBS组、对照组均较空白组均升高差异有统计学意义(P0.05)。结论:DNA甲基转移酶抑制剂能明显减少异位灶中DNMT1的表达及腹腔冲洗液中TNF-α含量,缩小异位灶体积,促进异位灶萎缩,为子宫内膜异位症的靶向治疗提供了依据。     

趋化因子受体6在子宫内膜异位症在位内膜及异位灶中的表达

目的分析趋化因子受体6(chemokine receptor,CCR6)在子宫内膜异位症(内异症)患者的在位内膜及异位内膜中的表达水平,以探讨其在发病中的作用。方法采用免疫组化技术检测内异症患者在位内膜及异位灶CCR6的表达。结果对照组子宫内膜中CCR6的表达分泌期明显强于增殖期(P0.05);内异症患者在位子宫内膜间质和腺体CCR6的表达比较,差异无统计学意义(P0.05),但其表达强度高于对照组(P0.05),异位灶CCR6的表达明显高于对照组(P0.05),略高于在位子宫内膜,但无统计学意义(P0.05)。结论CCR6的表达具有周期特异性,可能受雌/孕激素调节,参与子宫内膜异位症的发生和进展。     

NEK2在子宫内膜异位症的表达及意义

目的:研究子宫内膜异位症组织中NEK2 mRNA和蛋白的表达情况及意义。方法:利用real-time RT-PCR和Western Blot免疫印迹的方法,对子宫内膜异位症的在位内膜组织(在位内膜组)、异位内膜组织(异位内膜组)和非子宫内膜异位症的在位内膜组织(对照组)进行NEK2 mRNA和蛋白水平的半定量分析。结果:NEK2 mRNA和蛋白在异位内膜组、在位内膜组及对照组中均有表达(0.506±0.311、1.509±0.408、1.820±0.621;0.344±0.093、1.298±0.594、1.577±0.167),异位内膜组的表达均低于在位内膜组和对照组,差异均有统计学意义(P0.01);在位内膜组和对照组表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:NEK2在子宫内膜组织中均表达,且在异位内膜中表达下调。NEK2表达可能与子宫内膜异位症有关,但其低表达以何种方式影响子宫内膜异位症的病程发展还需进一步深入研究。     

细胞间粘附分子-1在子宫内膜异位症在位内膜、腹腔液及异位灶中的表达及分析

目的:探讨ICAM 1与子宫内膜异位症的关系。方法:收集子宫内膜异位症患者(研究组)腹腔液30份、在位子宫内膜2 1份、异位病灶组织8份及非子宫内膜异位症患者中正常盆腔(对照组)腹腔液2 5份、子宫内膜2 0份。应用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法测定腹腔液sICAM 1和免疫组化方法测定在位内膜、异位灶内膜ICAM 1表达。结果:子宫内膜异位症患者腹腔液中sICAM 1水平明显高于对照组(P <0 .0 1 ) ,子宫内膜的ICAM 1表达低于对照组同期子宫内膜的表达(P <0 .0 5 ) ,异位灶组织ICAM 1表达明显高于其在位内膜(P <0 .0 1 )及对照组内膜(P <0 .0 5 )。结论:子宫内膜异位症患者子宫内膜、腹腔液、异位灶内膜细胞间粘附分子的异常表达可能与子宫内膜异位症的发生发展关系密切。     

白细胞介素-1β及C-反应蛋白与子宫内膜异位症的相关性

目的 探讨参与子宫内膜异位症发生、发展有关的细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)和C-反应蛋白(CRP)在其内膜组织和血清中的表达变化及在子宫内膜异位症发生过程中的作用.方法 选取2005年11月至2006年8月在解放军昆明总医院妇产科就诊的Ⅲ～Ⅳ期卵巢子宫内膜异位症囊肿患者(子宫内膜异位症组)20例及对照组17例(同龄、因其它原因需行子宫内膜诊刮或子宫切除的患者),获取异位和在位子宫内膜组织及患者空腹血,用RT-PCR检测IL-1β mRNA在内膜组织中的表达,用ELISA法检测血清中CRP值.结果 子宫内膜异位症组和对照组子宫内膜IL-1βmRNA表达比较差异具有显著性意义(增生期1.21±0.33和分泌期1.43±0.34对0.54±0.12,P＜0.05);子宫内膜异位症组分泌期内膜组织IL-1β mRNA表达与增生期相比,差异有显著性意义(1.43±0.34对1.21±0.33,P＜0.05);子宫内膜异位症组CRP高于对照组,差异有显著性意义[增生期(5.23±1.72)mg/L和分泌期(6.76±2.23)mg/L对(1.58±0.74)mg/L,P＜0.05].结论 IL-1作为前炎性因子可能参与了内膜组织的局部免疫调控,减低腹膜清除异位内膜细胞的能力,促进子宫内膜细胞的黏附和转移;IL-1β和雌二醇有协同上调作用,促使形成异位内膜的趋化因子增加,参与子宫内膜异位症的发生、发展;CRP的检测对子宫内膜异位症患者的辅助诊断可能有意义.     

骨髓间充质干细胞参与子宫内膜异位症形成的实验研究

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否参与子宫内膜异位症的形成。方法:20只雌性大鼠在动情期采用自体子宫内膜组织皮下移植法进行手术造模。取第2代雄性大鼠BMSCs行PKH26标记示踪。造模术后6小时,随机分入实验组和对照组。实验组10只雌性大鼠尾静脉注射1×107个PKH26标记的BMSCs(用DMEM-F12悬浮成单细胞悬液1 ml)。对照组10只雌性大鼠尾静脉注射DMEM-F12 1 ml。6周后取出子宫内膜异位病灶分别进行Y染色体性别决定基因-PCR(SRY-PCR)检测和冰冻切片荧光显微镜下观察标记细胞在子宫内膜异位灶中的分布情况,免疫荧光染色检测标记细胞角蛋白的表达。结果:实验组大鼠子宫内膜异位症病灶中检测到SRY-PCR均阳性,均可见PKH26标记细胞散在分布于子宫内膜异位症病灶中,腺上皮中少量标记细胞角蛋白染色阳性。对照组子宫内膜异位症病灶中SRY-PCR检测阴性,均未见标记细胞。结论:BMSCs可以迁移至子宫内膜异位症病灶,少量细胞可以向异位内膜腺上皮细胞分化,参与子宫内膜异位症的形成。     

卵巢子宫内膜异位症异位和在位内膜S100A6表达及意义

目的探讨卵巢子宫内膜异位症(OEms)异位和在位内膜中S100A6的表达及意义。方法应用Elivision Tmplus免疫组化方法检测30例OEms异位、在位内膜和非子宫内膜异位症(EMs)子宫内膜组织(对照组)中的S100A6,并应用计算机图像分析系统对结果进行体视学指标积分光密度(IOD)的检测。计算各组内膜组织中的细胞凋亡指数(AI)。结果 OEms异位内膜及在位内膜和对照组中S100A6的IOD分别为(10.96±6.28)、(23.77±16.90)及(67.10±36.46),AI分别为(1.44±0.53)%、(3.10±0.75)%及(4.79±0.69)%,差异均有统计学意义(P﹤0.01);OEms组在位内膜分泌期S100A6低于增生期(t=4.690,P﹤0.01);S100A6和AI在各组内膜中表达均呈正相关(P﹤0.01)。结论 S100A6可能影响EMs的细胞凋亡,可能与EMs的发生、发展相关。     

子宫内膜异位症患者血浆及组织中骨桥蛋白表达及其作用机制的研究

目的:检测子宫内膜异位症(endometriosis,EM)组织中骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,探讨子宫内膜异位症的发病机制,OPN在子宫内膜异位症血浆中的含量以及OPN在子宫内膜异位症诊断及鉴别诊断方面的应用。方法:用免疫组化SP法检测56例子宫内膜异位症患者异位内膜及在位内膜中OPN、VEGF的表达,用酶联免疫吸附方法检测患者术前血浆OPN含量。结果:(1)异位内膜OPN表达主要分布于腺上皮细胞细胞膜,阳性(++~+++)表达率与在位内膜相似,明显高于对照内膜,差异有显著性(P<0.01),异位内膜细胞大多受挤压萎缩,缺乏典型的周期性改变;(2)VEGF在异位内膜胞浆染色,呈棕色颗粒,表达阳性,其中阳性(++~+++)表达率明显高于在位内膜及对照内膜(P<0.01);(3)异位内膜组织中OPN、VEGF表达有相关性(rs=0.596,P<0.01)。在子宫肌瘤对照内膜组织OPN、VEGF的表达则无相关性(rs=0.153,P=0.507);(4)子宫内膜异位症患者术前血浆OPN均值46.26±8.72ng/m l(15.54~139.12ng/m l),高于良性肿瘤及正常对照组(P<0.01),后二者无显著差异。卵巢癌患者术前血浆OPN均值81.32±14.41ng/m l(22.72~197.94ng/ml),较内异症患者水平高(P<0.01)。结论:OPN在异位内膜细胞高表达,可能推动异位内膜黏附和侵袭,OPN、VEGF可能通过促血管生成,共同促进异位内膜种植与生长,在子宫内膜异位症发生发展中起重要作用;OPN在盆腔包块鉴别诊断方面有一定应用价值。     

基质金属蛋白酶-1、2在异位内膜组织中的表达

目的 :探讨基质金属蛋白酶 1(MMP 1)和MMP 2在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法 :采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (S P法 )检测子宫内膜异位症 5 1例的异位内膜和在位内膜中MMP 1、2的表达 ;并用银染法观察嗜银网状纤维的完整性及细胞外基质的崩解情况。正常子宫内膜为对照组。结果 :在异位内膜组织中MMP 1、2均呈高表达状态 ,与正常子宫内膜和子宫内膜异位症在位内膜 ,差异有高度显著性 (P <0 .0 0 1) ,而且失去二者在内膜组织中表达的周期性变化。但在子宫内膜异位症在位内膜与正常子宫内膜之间没有差别 (P >0 .0 5 )。银染结果显示 :MMP 1的局部表达 (尤其间质中的表达 )与嗜银纤维网的完整性呈负相关 (P <0 .0 1)。在巧克力囊肿异位灶间质中 ,MMP 1、2的染色强度较紫蓝色结节灶中增强 ,二者的表达与异位灶的活性相关 (P <0 .0 5 ) ;但二者的表达强度与子宫内膜异位症的严重程度无明显的相关性 (P>0 .0 5 )。结论 :异位内膜组织中MMP 1、2过度表达 ,使异位内膜组织具有更强的侵袭力 ,可能在子宫内膜异位症的发生发展中起重要作用。     

来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症模型作用及机制的研究

目的:探讨第3代芳香化酶抑制剂(aromatase inhibitors,AIs)来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症模型的效果及作用机制。方法:用自体子宫内膜移植方法建立大鼠内异症模型,随机将20只建模成功大鼠分为来曲唑组和盐水对照组,比较治疗前后EM大鼠异位病灶体积的变化;免疫组化法检测异位内膜病灶中细胞色素P450芳香化酶(P450arom)、环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况;放射免疫分析法测定大鼠血清FSH、LH、E2水平。结果:来曲唑组异位病灶体积缩小(P<0.01);异位内膜中P450arom、COX-2、VEGF、PCNA蛋白表达与对照组相比均明显降低(P<0.05);来曲唑组异位内膜细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.01);两组大鼠血清FSH、LH、E2水平无明显差异(P>0.05)。结论:来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症模型有效。来曲唑通过降低异位内膜局部P450arom、COX-2、VEGF蛋白表达及抑制异位内膜增殖并促进凋亡发挥治疗子宫内膜异位症的作用。来曲唑对大鼠血清FSH、LH、E2水平无明显影响。