KIF20A对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响

目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化,流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达,CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力,流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。     

下调MLLT3/AF9基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 本文旨在研究组蛋白甲基转移酶MLLT3/AF9在人肝癌组织中的表达,观察体外下调MLLT3/AF9的表达对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 应用Real-time PCR技术检测100例肝癌组织、癌旁组织和肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2、Hu7、BEL-7402中MLLT3/AF9基因的表达水平;应用RNA干扰下调MLLT3/AF9的表达,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测MLLT3/AF9下调组和对照组SMMC-7721细胞的增殖及侵袭能力。结果 Real-time PCR检测结果显示肝癌组织中的MLLT3/AF9基因的表达量显著高于癌旁组织; Real-time PCR和Western blot检测到LVMLLT3-RNAi组中MLLT3/AF9 mRNA和蛋白的表达水平都降低,CCK-8、Transwell和划痕实验结果显示LV-MLLT3-RNAi组细胞的增殖和侵袭能力降低。结论 MLLT3/AF9在肝癌组织中表达水平明显升高,体外下调MLLT3/AF9的表达可以有效抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖与侵袭。     

HOXB7基因敲除对人肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 研究同源异型盒基因HOXB7（Homebox7）对人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及部分机制。方法 采用荧光定量PCR法选取HOXB7 mRNA高表达的人肝癌SMMC-7721细胞和HepG2细胞;设计靶向HOXB7的shRNA,瞬时转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光定量PCR和Westernblot法检测shRNA靶向沉默的效果,CCK8、Transwell和划痕实验分别用于检测细胞增殖、侵袭和迁移能力;Western blot法测量肝癌SMMC-7721细胞中Smad3、p-Smad3表达水平。结果 HOXB7 shRNA转染的肝癌SMMC-7721细胞中HOXB7基因mRNA和蛋白表达水平均显著降低,同时细胞增殖、侵袭和迁移能力随之下降,且TGF-β通路中p-Smad3蛋白表达水平下调。结论 HOXB7可促进肝癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力,其机制可能与调节Smad3磷酸化水平有关。     

Runx2通过促进MMP9的表达增强肝细胞肝癌迁移侵袭能力

  目的   研究Runx2对肝癌细胞中MMP9的表达以及其对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。  方法   通过免疫组织化学染色法对2005年12月至2015年12月天津医科大学肿瘤医院和天津医科大学总医院189例肝细胞肝癌病例标本中Runx2和MMP9的表达进行分析;将Runx2过表达质粒和干扰质粒分别转染至肝癌细胞系HepG2和SMMC7721细胞中。使用Western blot法检测转染后HepG2和SMMC7721细胞中Runx2和MMP9的表达情况;划痕、侵袭实验检测Runx2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。  结果   免疫组织化学结果显示Runx2的表达和MMP9的表达相关。在HepG2细胞中上调Runx2的表达,促进了MMP9的表达,增强了HepG2细胞迁移侵袭能力;在SMMC7721细胞中下调Runx2的表达,降低了MMP9的表达,抑制了SMMC7721细胞的迁移侵袭能力。  结论   Runx2的表达可能参与促进肝细胞肝癌细胞MMP9的表达,进而促进肝细胞肝癌的迁移侵袭能力。      

细胞分裂周期7蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测细胞分裂周期7(CDC7)蛋白在人肝癌组织的表达,探讨CDC7过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDC7 mRNA在肝癌组织和癌旁组织的表达,检测CDC7 mRNA在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达。Western blot检测CDC7蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达,检测CDC7蛋白在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达水平。利用慢病毒载体构建稳定过表达CDC7的肝癌HCCLM3和SMMC 7721细胞株。细胞克隆实验和CCK-8法检测CDC7过表达对肝癌细胞增殖的影响。Transwell实验和划痕实验检测CDC7过表达对肝癌细胞侵袭迁移的影响。结果 与癌旁组织相比,CDC7 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达水平显著升高(P＜0.001);与正常肝细胞相比,肝癌细胞系的CDC7 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.001);CCK-8法、细胞克隆实验说明CDC7过表达会明显增强肝癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验说明CDC7过表达会明显提高肝癌细胞的侵袭能力。结论 CDC7蛋白在人肝癌组织高表达,其过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力。     

HNF4A充当肿瘤抑制基因抑制结直肠肿瘤进展的实验

目的 探究HNF4A在结直肠肿瘤进展中的作用。方法 构建HNF4A过表达或敲除的结直肠癌细胞系,通过实时定量PCR和Western blot检测构建的细胞系HNF4A的表达水平;通过软琼脂及平板克隆形成实验检测细胞系的克隆形成能力,CCK-8法检测细胞的增殖能力;Western blot检测干细胞标志物的表达水平;最后通过Transwell迁移与侵袭实验检测细胞的迁移侵袭能力,R2基因分析平台分析结直肠癌中HNF4A与基质金属蛋白酶MMP2及MMP9表达的相关性并通过Western blot验证。结果 过表达HNF4A抑制了结直肠肿瘤细胞的增殖与克隆形成能力及迁移侵袭能力,敲低HNF4A促进了结直肠癌细胞的增殖与克隆能力及迁移侵袭能力,Western blot显示HNF4A抑制了结直肠癌干细胞的标志物CD133、CD44及EpCAM的表达和基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,在HNF4A敲低的细胞系中得出了同样的结论。结论 HNF4A通过抑制结直肠癌干细胞特征及金属蛋白酶的表达来抑制结直肠肿瘤的进展。     

miR-199-3p通过对FGF2的调控抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖、迁移作用及机制

目的:探讨miR-199-3p通过靶向调控抑制靶基因FGF2从而抑制肝癌MHCC97H细胞的增殖和迁移及机制。方法:qRT-PCR检测癌旁正常组织及肝癌肿瘤组织中miR-199-3p的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测肝癌细胞株Huh7、MHCC-97L、SMMC7721、HepG2和MHCC97H株其侵袭能力;qRT-PCR检测miR-199-3p在5株肝癌细胞系中的表达量;通过生物信息软件预测靶基因FGF2 mRNA 3' UTR的碱基存在miR-199-3p可能互补结合的位点并用荧光报告基因法及WB进行验证;通过qRT-PCR、免疫组化及Western blot检测FGF2在肝癌肿瘤组织和癌旁正常组织及各类肝癌细胞株表达的影响;Transwell、划痕、CCK8及流式细胞法检测miR-199-3p与FGF2对肝癌MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移及周期S期聚集能力的调控;采用MHCC97H细胞构建肝癌肿瘤异种移植小鼠模型进行肿瘤观测及免疫组化实验验证miR-199-3p对肝癌的调控作用。结果:miR-199-3p的表达水平与肝癌细胞侵袭转移能力相关;miR-199-3p能够通过抑制FGF2的mRNA翻译,抑制FGF2蛋白水平表达;FGF2与肝癌细胞侵袭转移能力相关;miR-199-3p可以负调控FGF2抑制肝癌MHCC97H细胞的生物行为;miR-199-3p 可抑制肝癌细胞中阳性信号,细胞增殖水平显著降低。结论:miR-199-3p通过抑制FGF2抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖和迁移。     

β-榄香烯调节HULC表达对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨肝癌高表达转录本(HULC)在β-榄香烯调控肝癌细胞恶性生物学行为中的作用。方法 生物信息学分析TCGA数据库肝癌组织中HULC的表达,采用实时定量PCR检测肝癌细胞中HULC的表达,SMMC-7721细胞转染HULC过表达质粒pcDNA3.1-HULC或小干扰RNA si-HULC,利用CCK-8法评估β-榄香烯和HULC对肝癌细胞增殖的影响,划痕和Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力的变化情况,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。结果 肝癌组织和细胞中HULC表达上调。β-榄香烯处理或敲低HULC均可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移侵袭和EMT过程。此外,β-榄香烯处理可降低HULC表达,而HULC过表达可部分阻断β-榄香烯对细胞增殖、迁移侵袭和EMT过程的抑制作用。结论 β-榄香烯可能通过下调HULC表达来调节肝癌细胞的恶性生物学行为,为β-榄香烯靶向HULC作为肝癌治疗的潜在应用提供了新见解。     

HBx蛋白抑制DKK4表达的机制及对肝癌细胞系增殖和迁移的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白下调DKK4的机制及对肝癌细胞系增殖和迁移能力的影响。方法 将编码乙型肝炎病毒X蛋白的腺病毒（Ad-HBx）分别感染肝癌细胞系HepG2和SMMC7721细胞,同时设感染GFP腺病毒（Ad-GFP）为对照组,用去乙酰化酶抑制剂（TSA）处理肝癌细胞系,并用小干扰RNA-组蛋白去乙酰化酶1（si-HDAC1）及过表达DKK4的慢病毒转染肝癌细胞系。Western blot检测DKK4、HDAC1及SIRT1的表达情况。MTT实验、结晶紫实验和Transwell实验分别检测肝癌细胞系的增殖和迁移能力。结果 Ad-HBx感染肝癌细胞系后DKK4蛋白表达水平下降（P<0.05）,TSA处理后DKK4蛋白表达水平回复（P<0.05）。Ad-HBx感染肝癌细胞系后,HDAC1及SIRT1蛋白水平显著升高（P<0.05）。小干扰RNA沉默HDAC1后能够恢复DKK4的表达（P<0.05）,沉默HDAC1和（或）过表达DKK均能抑制肝癌细胞系的增殖和迁移能力（P<0.05）。结论 乙型肝炎病毒X蛋白通过上调HDAC1、SIRT1来抑制DKK4的表达,沉默HDAC1及过表达DKK4蛋白表达能够抑制感染Ad-HBx肝癌细胞系的增殖和迁移能力。     

siRNA靶向沉默MALAT-1基因对人食管癌EC9706细胞体外侵袭迁移的影响

目的:研究长链非编码RNA MALAT-1对食管癌EC9706细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MALAT-1的siRNA,脂质体法转染EC9706细胞,转染48h后RT-PCR和Western blot检测各细胞MALAT-1在mRNA和蛋白质水平的表达。Transwell实验检测迁移、侵袭能力改变。结果:小干扰RNA下调MALAT-1表达后,RT-PCR和Western blot证实食管癌EC9706细胞中MALAT-1的表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显下调,Transwell实验证实食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力下降。结论:抑制MALAT-1表达能够使食管鳞癌细胞的侵袭转移能力明显降低。     

过表达CHD5基因对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响

目的:探讨过表达CHD5基因对人肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响。方法:采用脂质体法将CHD5过表达质粒及对照质粒分别转染SMMC-7721细胞,Western blotting检测SMMC-7721细胞中CHD5蛋白的表达情况,CCK-8法检测SMMC-7721细胞生长增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:转染CHD5过表达质粒后,SMMC-7721细胞CHD5蛋白表达水平显著增高（P<0.01）,抑制了细胞增殖、迁移和侵袭（P<0.05）,促进了细胞凋亡（P<0.05）。结论:过表达CHD5基因可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导其凋亡。     

miR-224-5p靶向调控KIF23通过NF-κB信号通路影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探索微小RNA-224-5p(miR-224-5p)对驱动蛋白超家族23(KIF23)的靶向关系及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用实时定量PCR(qPCR)检测正常宫颈细胞(H8)和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、MS751、HT-3)中miR-224-5p和KIF23 mRNA表达,选择miR-224-5p表达量最低的HeLa细胞开展后续研究。在HeLa细胞中转染si-KIF23或miR-224-5p,探讨敲减KIF23或过表达miR-224-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blot)检测KIF23、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和NF-κBp65蛋白水平;生物学信息预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-224-5p和KIF23之间的靶向关系;共转染si-KIF23和anti-miR-224-5p,观察miR-224-5p低表达对敲减KIF23诱导的HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和NF-κB信号通路活化的影响。结果:miR-224-5p在SiHa、HeLa、MS751、HT-3细胞中表达下调(P<0.05),KIF23 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。敲减KIF23或过表达miR-224-5p显著降低HeLa细胞存活率、细胞迁移数和侵袭数,并显著抑制CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平(P<0.05)。另外,敲减KIF23显著降低细胞中NF-κBp65表达量(P<0.05)。miR-224-5p靶向调控KIF23表达。miR-224-5p低表达可以逆转敲减KIF23抑制HeLa增殖、迁移、侵袭及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达的作用,以及逆转敲减KIF23抑制NF-κB信号通路活化的作用。结论:miR-224-5p靶向调控KIF23并通过NF-κB信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-122 Inhibits Hepatocarcinoma Cell Progression by Targeting LMNB2

In the present study, we investigated the role of miR-122 in hepatocarcinoma progression and explored the mechanism. In hepatocarcinoma tissues and cells, we used qRT-PCR to validate the miR-122 expression level. Next, we used colony formation by crystal violet staining assay to compare cell proliferation ability, and we used scratch test or Transwell assay to compare cell migration or invasion ability. We then conducted bioinformatics or luciferase reporter gene assay to prove the regulation effect of miR-122 on lamin B2 (LMNB2), and the biological function of LMNB2 was analyzed. We used nude mouse tumorigenicity assay to test the inhibition effect of miR-122 ASO therapy against hepatocarcinoma. miR-122 was reduced in hepatocarcinoma tissues compared to the paracarcinoma tissues, which was relatively low or high in hepatocarcinoma cell line SMMC7721 or Hep3B, and overexpressed miR-122 inhibited proliferation, migration, and invasion in hepatocarcinoma cells. Additionally, some reports showed that LMNB2 was regulated by miR-122, which inhibited the expression of LMNB2. Moreover, LMNB2 functioned to promote cell proliferation, migration, and invasion. We could achieve the inhibition of hepatocarcinoma using miR-122 therapy through decreasing LMNB2 expression in vivo. Our data indicated that miR-122 could inhibit hepatocellular carcinoma cell progression by targeting LMNB2 and as a therapeutic target for hepatocarcinoma treatment.     

KIF14在肝细胞癌SMCC-7721获得性耐药机制中的研究

目的 探究抑制KIF14与肝细胞癌SMCC-7721对索拉非尼获得性耐药的关系.方法 采用浓度梯度法建立肝细胞癌索拉非尼耐药细胞系SMCC-7721-SR,后采用CCK-8法、流式细胞仪验证耐药细胞株的耐药性.在人正常肝细胞LO2、肝细胞癌SMCC-7721及其耐药细胞SMCC-7721-SR中,采用qRT-PCR及W...     

肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

Notch1 signaling inhibits growth of human hepatocellular carcinoma through induction of cell cycle arrest and apoptosis

Notch signaling plays a critical role in maintaining the balance between cell proliferation, differentiation, and apoptosis; hence, perturbed Notch signaling may contribute to tumorigenesis. Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant tumors in Africa and Asia. The mechanisms that orchestrate the multiple oncogenic insults required for initiation and progression of HCC are not clear. We constitutively overexpressed active Notch1 in human HCC to explore the effects of Notch1 signaling on HCC cell growth and to investigate the underlying molecular mechanisms. We show here that overexpression of Notch1 was able to inhibit the growth of HCC cells in vitro and in vivo. Biochemical analysis revealed the involvement of cell cycle regulated proteins in Notch1-mediated G(0)/G(1) arrest of HCC cells. Compared with green fluorescent protein (GFP) control, transient transfection of Notch1 ICN decreased expression of cyclin A (3.5-fold), cyclin D1 (2-fold), cyclin E (4.5-fold), CDK2 (2.8-fold), and the phosphorylated form of retinoblastoma protein (3-fold). Up-regulation of p21(waf/cip1) protein expression was observed in SMMC7721-ICN cells stably expressing active Notch1 but not in SMMC7721-GFP cells, which only express GFP. Furthermore, a 12-fold increase in p53 expression and an increase (4.8-fold) in Jun-NH(2)-terminal kinase activation were induced in SMMC7721-ICN cells compared with SMMC7721-GFP cells. In contrast, expression of the antiapoptotic Bcl-2 protein could not be detected in SMMC7721-ICN cells. These findings suggest that Notch1 signaling may participate in the development of HCC cells, affecting multiple pathways that control both cell proliferation and apoptosis.     

下调 miR -181a 对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨下调 miR -181a 对人胃癌细胞生物学行为的影响。方法：转染 miR -181a inhibitor 下调miR -181a 在人胃癌细胞 SGC -7901中的表达。通过 MTT 法、流式细胞仪、Annexin - V + PI 双染色法和 Tr-answell 实验,观察下调 miR -181a 表达对人胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭迁移等生物学行为的影响。结果：瞬时转染 miR -181a inhibitor 后胃癌细胞 SGC -7901中 miR -181a 的表达明显下调（P =0.0027）。转染 miR