塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用塞来昔布作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮陛蓝比色法（MTT）测定细胞增殖活力的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot 检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度塞来昔布（25～100μmol/L）均能抑制鼻咽癌CNE-2 细胞生长,呈浓度和时间依赖性。流式细胞术结果显示塞来昔布（25～75μmol/L）浓度范围内能诱导鼻咽癌CNE-2 细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性。Western blot 结果显示塞来昔布作用于鼻咽癌CNE-2 细胞后,Bcl -2 蛋白表达水平下调和Bax蛋白表达上调呈浓度依赖方式。结论 塞来昔布具有抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2 蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

塞来昔布对胃癌BGC823细胞的放射增敏作用

目的：探讨环氧化酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人胃癌BGC823细胞株的放射增敏作用及其机制。方法：MTT实验测定塞来昔布对胃癌BGC823细胞株的抑制率,计算半数抑制浓度（IC50）。克隆形成实验检测塞来昔布联合不同剂量X线照射后细胞的存活率,计算放射敏感性相关参数,评价增敏效果。流式细胞仪（FCM）分析细胞周期分布情况。结果：MTT实验显示塞来昔布对BGC823细胞作用24h、48h、72h的IC50分别是162.6μmol/L、95.4μmol/L、62.1μmol/L;克隆形成实验测得联合组的D0、Dq及SF2均明显低于单纯照射组（1.705VS 2.185,1.032VS 2.327,0.495 VS 0.745）,SER为1.3。流式细胞仪检测联合组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。结论：塞来昔布能增强胃癌BGC823细胞的放射敏感性,其机制可能与减少肿瘤细胞亚致死性损伤修复和细胞周期再分布有关。     

塞来昔布对胃癌SGC7901细胞放射敏感性的实验研究

目的:探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对胃癌SGC7901细胞株的放射增敏作用及其机制。方法:MTT法检测塞来昔布对胃癌SGC7901细胞株的抑制作用,计算出塞来昔布的半数抑制浓度(IC50);克隆形成实验用于检测20%IC50这个浓度的塞来昔布对胃癌SGC细胞是否具有放射敏感性;流式细胞术(FCM)分析细胞周期的分布情况。结果:MTT实验显示塞来昔布对SGC7901细胞株的抑制率随浓度的升高而升高,48 h的IC50是34.38μmol/L;克隆形成实验显示,照射组+药物组与单纯照射组相比,反映放射敏感性指标的存活分数(SF2)、平均致死剂量(D0)及准阈剂量(Dq)均下降,放射增敏比(SER)升高。FCM检测细胞周期G2和M期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论:塞来昔布能增加胃癌SGC7901细胞的放射敏感性,其机制可能与其抑制肿瘤细胞亚致死性损伤修复能力和促进肿瘤细胞周期再分布有关。     

环氧化酶-2抑制剂对肺癌细胞的增殖抑制和放射增敏的实验研究

目的研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其对A549细胞的放射增敏作用.方法噻唑蓝(MTT)比色法检测塞来昔布对肺癌A549细胞存活的影响;流式细胞分析法(FCM)检测对A549细胞周期时相影响及凋亡的作用;体外培养克隆形成率的方法检测塞来昔布对A549细胞的放射增敏作用.结果塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,这种抑制作用有时间和剂量依赖性,50μmol/L处理24和72 h的抑制率分别为(4.27±1.33)%、(10.63±2.23)%,100μmol/L处理分别为(33.47±8.02)%、(61.97±7.32)%,主要是抑制增殖,使细胞聚集在G0/G1期,100μmol/L处理72 h还有细胞死亡.塞来昔布无凋亡诱导作用,也不增加放射诱导的凋亡.体外培养克隆存活曲线分析显示,100μmol/L塞来昔布处理24和72 h降低了各个照射剂量点的存活分数(72 h比24 h作用强),但在照射高剂量区更明显.对照、100μmol/L处理24、72 h在2 Gy剂量点的存活分数(SF2)分别为(0.53±0.06)、(0.52±0.11)和(0.46±0.05),处理24和72 h的放射增敏比为1.27和1.7(D0值比).结论塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G0/G1期,但无诱导凋亡作用.塞来昔布对肺癌A549细胞有放射增敏作用,在高照射剂量区增敏作用更为明显.     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制及放射增敏研究

目的 研究塞来昔布对人鼻咽癌细胞系CNE-2细胞生长影响及有无放射增敏作用.方法 (1)细胞生长抑制研究:用MTT法检测细胞生长抑制,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态,SP法检测细胞COX-2表达.(2)放射增敏研究:随机设置照射对照、药物对照、单纯照射、药物+照射组,其中成克隆实验单次照射2、4、6、8、10 Gy,细胞周期分布和凋亡实验单次照射6 Gy.结果 塞来昔布显著抑制CNE-2细胞生长并呈浓度和时间依赖性,IC50为80 μmol/L.细胞周期分布显示G0+G1期细胞显著升高(47.03±2.76:56.17±1.95,t=4.68,P=0.010),而S、G2+M期细胞明显下降(33.07±1.86:24.87±1.76,t=5.54,P=0.010;19.30±0.53:17.73±0.83.t=2.75,P=0.050)并呈浓度依赖性.凋亡率显著增高(1.57±0.47:10.47±0.31,t=27.39,P=0.000)并呈浓度依赖性.电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂等凋亡形态学改变.SP法检测塞来昔布显著下调CNE-2中COX-2表达[17.48±0.34、12.82±0.51(t=13.20,P=0.00)].塞来昔布的放射增敏比(D0值比为1.74:1.52)为1.15.4个组别细胞周期分布结果 显示单纯照射、药物+照射组的G2+M期细胞明显高于照射对照、药物对照组(68.00±1.65、54.27±5.74、17.60±0.80、14.86±1.23,t=47.70,P=0.000;t=11.63,P=0.000),且单纯照射与药物+照射组间也不同(t=3.99,P=0.020);单纯照射、药物+照射组的细胞凋亡率也明显高于照射对照、药物对照组(4.83±0.97、9.50±1.35、1.33±0.36、2.28±0.42,t=4.67,P=0.01;t=8.81,P=0.000),且单纯照射与药物+照射组也不同(t=4.85,P=0.010).结论 塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞生长和诱导凋亡,其机制可能涉及COX-2依赖途径.塞来昔布还能增强CNE-2细胞放射敏感性,可能机制与抑制放射后亚致死损伤修复、直接抑制细胞增殖和增强细胞对放射诱导凋亡率有关.     

塞来昔布对宫颈癌Hela细胞放射增敏效应的研究

目的:探讨塞来昔布(Celecoxib)对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用及其机制.方法:用四唑盐比色法(MTT)观察塞来昔布对Hela细胞的生长抑制情况;克隆形成实验检测放射增敏作用,流式细胞仪检测单用塞来昔布、放射以及二者联合使用时Hela细胞凋亡率和细胞周期变化.结果:MTT检测结果提示塞来昔布对宫颈癌Hela细胞的抑制作用呈剂量和放射强度依赖性;克隆形成实验提示塞来昔布对Hela细胞株有一定程度的放射增敏效应,塞来昔布+放射(D+R)组较单纯放射(R)组相比,放射敏感性指标SER、Do、Dq均呈现不同程度的下调;流式细胞分析显示:Hela细胞周期分布及凋亡率在塞来昔布(D)组、单纯放射(R)组及塞来昔布+放射(D+R)组中均有差异,表现为G0/G1期增加,S期减少,凋亡率增加.结论:塞来昔布对人宫颈癌Hela细胞有明显的放射增敏作用 ,为临床放疗及与塞来昔布联合运用提供了实验依据.     

塞来昔布对不同COX-2表达肿瘤细胞株放射增敏作用及其机制研究

目的探讨选择性环氧化酶抑制剂塞来昔布对不同COX-2蛋白表达水平人类肿瘤细胞株的放射增敏作用及其发生机制。方法选用人乳腺癌细胞系MCF-7(低COX-2蛋白表达)和肺癌细胞系A549(高COX-2蛋白表达)为研究对象。RT-PCR检测COX-2表达,MTT法及成克隆分析法测定塞来昔布对两种细胞系的细胞毒作用及放射增敏作用及流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布、细胞凋亡指数。结果塞来昔布作用于MCF-7细胞30h后的IC_(50)值为(43.7±1.12)μmol/L,作用于A549细胞24 h后的IC_(50)值为(37.5±0.80)μmol/L。塞来昔布联合射线作用于A549细胞,与单纯照射组比较显示了放射增敏作用(P<0.05),而在MCF-7细胞中则没有观察到这些现象。细胞周期检测发现,两种细胞各组都出现了不同的周期分布。塞来昔布组G_0 G_1期细胞比例增加,照射组的细胞则大多处于G_2 M期。不同浓度的塞来昔布10～80μmol/L作用6h后,均未观察到明显的凋亡现象,两种细胞照射组与照射加药组测得的凋亡均无差异。结论塞来昔布对MCF-7、A549细胞都有增殖抑制作用,并呈时问和剂量依赖性,其作用不完全呈COX-2依赖。塞来昔布能增加A549细胞放射敏感性,其机制可能与抑制COX-2蛋白、改变细胞周期分布有关。     

雷公藤红素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖抑制和放射增敏作用的初步研究

目的初步探讨雷公藤红素对鼻咽癌CNE-1细胞的增殖抑制作用和放射增敏作用及其机制;为中药雷公藤红素的抗肿瘤作用以及寻找新的放射增敏提供初步的实验依据。方法利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定雷公藤红素对CNE-1细胞的抑制率,并通过细胞形态学观察雷公藤红素对CNE-1细胞的增殖抑制作用;应用集落形成方法和多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线;观察雷公藤红素对鼻咽癌细胞株CNE-1的放射增敏作用;流式细胞法观察雷公藤红素对CNE-1细胞周期分布的影响;免疫组织化学法观察雷公藤红素对Fas蛋白表达的影响。结果雷公藤红素对CNE-1细胞增殖具有明显抑制作用,随作用浓度的升高和作用时间的延长、细胞的增殖抑制率升高、抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性（IC50为32μg／m1）;镜下可见核浓缩、聚集、碎裂、凋亡小体形成等典型的凋亡特征;集落形成方法显示雷公藤红素和照射联合作用于CNE-1细胞,表现为剂量生存曲线左移,SER增加,Do减低,Dq变小,细胞的放射敏感性明显增强,雷公藤红素对鼻咽癌CNE-1细胞株有明显的放射增敏效应。流式细胞法结果显示雷公藤红素影响CNE-1细胞周期再分布,随药物浓度增加,作用48小时后CNE-1细胞G1期G2／M期比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐减少;免疫细胞化学染色法显示随着雷公藤红素作用浓度增加Fas蛋白表达上调。结论雷公藤红素对鼻咽癌细胞株CNE-1有明显的增殖抑制和放射增敏作用。放射增敏的机制可能与雷公藤红素使细胞周期阻滞在G1、G2／M期并使S期细胞减少以及细胞Fas蛋白表达变化导致凋亡增加有关。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制的实验研究

目的 研究环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响。方法 采用MTT法测定细胞代谢率,以流式细胞术观察细胞DNA含量和凋亡的变化情况,免疫组化SP法检测COX-2的表达情况。结果 塞来昔布对CNE-2细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性。细胞周期各时相DNA 含量改变明显,G₀～G₁期细胞显著升高 (由最初47.03%升至最高79.20%),而S、G₂～_M期细胞明显下降;凋亡率显著增高。塞来昔布明显下调细胞中COX-2蛋白的表达。结论 塞来昔布对鼻咽癌CNE-2 细胞有明显的增殖抑制作用,并且呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G₀/G₁期,其机制涉及COX-2依赖性途径。     

奥沙利铂对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长抑制和凋亡作用的研究

目的:观察奥沙利铂对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的生长抑制和凋亡作用,为其临床应用提供理论依据.方法:将浓度为0、10、20、40、80μg/ml的奥沙利铂与CNE-2细胞作用24、36、48h,用SRB法检测奥沙利铂对CNE-2细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态学变化.结果:奥沙利铂对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大.流式细胞仪分析显示奥沙利铂主要将CNE-2细胞阻滞于G2/M期.奥沙利铂浓度为80μg/ml 作用48小时,CNE-2细胞生长抑制率为(97.46 ± 1.76)%,CNE-2细胞的早期凋亡率为(4.48 ± 1.23)%、晚期凋亡和继发坏死率为(9.48 ± 2.30)%.荧光显微镜下观察用药组有凋亡细胞存在.结论:奥沙利铂能够抑制人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的增殖,能使CNE-2细胞阻滞于G2/M期,可诱导CNE-2细胞发生一定的凋亡.     

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2放射增敏作用的初步研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞CNE1、CEN2的放射增敏作用及其可能机制。方法:体外培养CNE1、CNE2细胞,CCK-8实验得到EGCG IC20值50μg/ml,即为实验浓度。实验分为4组,对照组:含有和其他组相等浓度的DMSO溶解剂;药物组:DMSO溶解的EGCG;照射组:X线照射组;实验组:EGCG联合X线照射组。体外培养CNE1、CNE2细胞至对数生长期,药物组及实验组分别给予药物即EGCG处理,培养24h后进行相应剂量的X线照射后收集细胞。采用克隆形成实验检测不同射线剂量（0、2、4、6、8、10Gy）处理后各组的克隆形成率、细胞存活率及放射增敏比（SER）,流式细胞分析法检测各组细胞的凋亡情况及细胞周期,Western bolt检测Akt蛋白的表达,RT-PCR检测Akt mRNA的表达。结果:平板克隆实验:照射组及实验组随着X线剂量的逐步增加,克隆形成率随之下降,细胞存活分数下降,呈现剂量依赖效应（P＜0.05）;相同剂量下,实验组比照射组克隆形成率低,实验组Do、Dq明显低于单纯照射组（P＜0.05）,CNE1细胞株SER为1.4962,CNE2细胞株SER为1.1846,说明EGCG具有放射增敏作用（P＜0.05）。流式细胞分析:各实验组与对照组相比,G2/M期百分比升高（P＜0.05）,表明存在G2/M期阻滞,单纯射线组比单纯药物组对G2/M期的阻滞作用更明显,二者联合的实验组表现为协同作用。实时荧光定量实验:各实验组与对照组相比,Akt mRNA表达下降（P＜0.05）,实验组比单纯照射组及单纯药物组更明显。Western blot实验:各实验组与对照组相比,Akt蛋白表达均有下降（P＜0.05）,实验组比单纯照射组及单纯药物组更明显。结论:EGCG对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2具有放射增敏作用,其机制可能是通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞周期、抑制射线诱导的Akt活化而产生。     

羟基喜树碱放射增敏作用的离体研究

目的　应用克隆形成方法 ,研究羟基喜树碱 (HCPT)对人鼻咽癌细胞系 (CNE)和胃癌细胞系 (BGC 82 3)的放射增敏作用。方法　实验分为单纯照射组和照射加药组。照射加药组在照射后均立即给予HCPT 2 μg/ml(药物剂量为ID50 剂量 ) ,37℃孵箱内作用 4h。应用克隆形成方法 ,观察单纯照射和照射加HCPT对细胞的杀伤作用。计算细胞存活率 ,用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图。结果　BGC 82 3细胞单纯照射组D0 值为 1 17Gy,Dq 值为 1 91Gy,N值为 5 14;照射加HCPT组D0 值为 0 95Gy ,Dq 值为 0 0 1Gy ,N值为 1 0 1;放射增敏比 (SER)为 1 2 3(1 17/ 0 95 )。CNE Ⅰ细胞单纯照射组D0 值为 1 6 0Gy ,Dq 值为 0 6 5Gy ,N值为 1 5 ;照射加HCPT组D0 值为 0 95Gy ,Dq 值为 0 0 1Gy ,N值为 1 0 1;SER为 1 6 8(1 6 / 0 95 )。结论　研究结果显示 ,HCPT具有一定的放射增敏作用 ,为临床的放疗和HCPT的联合应用提供了实验依据。     

塞来昔布对人肝癌细胞增殖抑制及放疗增敏作用

目的探讨塞来昔布对肝癌细胞huh-7增殖抑制及放疗增敏作用。方法以人肝癌细胞株huh-7为研究对象,以塞来昔布和高能射线作为干预手段,采用四唑氮蓝还原法(MTT),检测不同浓度塞来昔布和作用不同时间对huh-7细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞技术,检测塞来昔布联合放疗对huh-7细胞凋亡和周期的影响。结果 MTT显示塞来昔布对人肝癌细胞huh-7生长有显著抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;塞来昔布对肝癌放疗具有明显增敏作用。与对照组比较,药物组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,G2/M变化无明显意义;照射组G2/M期细胞比例升高,联合组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论塞来昔布能提高人肝癌细胞株huh-7放疗敏感性作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布来实现的。     

环氧合酶-2抑制剂对人舌鳞癌Tca8113/BLM 细胞MDR1/P-gp表达的影响

 目的 探讨环氧合酶 2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌耐药细胞系Tca8113/BLM细胞多药耐药基因和P-糖蛋白表达的影响。方法 采用BLM（30 μg/ml）反复24h暴露法处理人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,采用不同浓度的塞来昔布作用于Tca8113/BLM细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定P-gp的表达水平,RT-PCR检测多药耐药基因mRNA的表达。结果 塞来昔布显著抑制Tca8113/BLM细胞增殖、下调Tca8113/BLM细胞MDR1基因表达,其作用呈剂量依赖关系。结论 塞来昔布以剂量依赖方式抑制人舌鳞癌耐药细胞系Tca8113/BLM细胞MD1l/P-gp表达,并抑制细胞增殖,这种作用可能与COX-2抑制剂增强抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用有关。     

CRISPR-Cas9敲除Notch1对CNE2细胞增殖及辐射敏感性的影响

背景与目的：Notch信号转导通路对鼻咽癌的发生、发展及维持肿瘤干细胞的自我更新等具有重要作用，既往研究方法难以使Notch通路中特定基因功能完全丧失。本研究旨在利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Notch1基因敲除的CNE2鼻咽癌细胞系，并观察Notch1敲除对CNE2细胞增殖、辐射敏感性的影响。方法：采用蛋白质印迹法（Western blot）检测人鼻咽癌细胞CNE2及鼻咽正常上皮细胞NP69中Notch1表达水平；利用sgRNA在线设计工具，针对Notch1设计sgRNA；利用PX459质粒构建含sgRNA的敲除载体PX459-Notch1-sgRNA；将质粒瞬时转染CNE2细胞，经过药物筛选、克隆化培养、Western blot检测、免疫荧光染色验证得到Notch1敲除的CNE2鼻咽癌细胞系；采用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）检测方法、克隆形成实验检测Notch1敲除组（Notch-KO）与未转染亲本组（Parental）、转染PX459空载体水平较的对照组（Ctrl）的增殖活性及辐射敏感性，并进一步采用流式细胞术检测侧群细胞比例。结果：与NP69细胞相比，CNE2细胞中Notch1蛋白水平较高；Western blot检测、免疫荧光染色验证Notch1基因被完全敲除。Notch1基因敲除可抑制细胞增殖活性（P<0.05）；Notch1-KO组的D₀、D_q和SF2值分别为1.160、1.881和0.630 Gy，低于Parental（1.176、2.533和0.824 Gy，P<0.001）和Ctrl组（1.182、2.516和0.819 Gy，P<0.001）；Notch1-KO中侧群细胞比例［（1.13±0.01）％］较Parental［（3.81±0.03）％］、Ctrl［（3.70±0.03）％］明显下降（P<0.001）。结论：运用CRISPRCas9技术可成功敲除CNE2细胞中的Notch1基因，Notch1基因敲除导致CNE2细胞增殖能力下降、辐射敏感性增加、侧群细胞比例降低。     

莪术油对鼻咽癌CNE22 细胞的凋亡及放疗 增敏机制的影响

 目的　探讨莪术油、莪术油联合γ2射线照射对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE22 的增殖抑制和诱 导凋亡作用;分析莪术油是否具有放疗增敏的作用,并研究其机制。方法　体外培养CNE22 细胞,莪术 油以体外直接加药的方式作用于CNE22 细胞,采用MTT、流式细胞术、电镜等分子生物学手段,检测莪 术油单用或联合γ2射线对CNE22 的诱导凋亡作用、放疗增敏作用。结果　莪术油单独使用,对CNE22 细胞有确切的增殖抑制及诱导凋亡作用,并与常规化疗药物52Fu 有相近的抑制作用( P > 0. 05) 。莪术 油的药物抑制作用呈现浓度依赖性,最低起效浓度为10μg/ ml ,最佳作用时间为48 小时; 5μg/ ml 、100 μg/ ml 、300μg/ ml 的莪术油联合100 cGy 的γ2射线作用2 天后凋亡率由0. 5 %、2. 15 %、10. 2 %显著提高 到8. 6 %、14 %和26 % ,细胞的死亡率均在5 %以下有明显的协同增效作用( P < 0. 01) ;联合作用96h 后 试验组的细胞主要以死亡为主,凋亡较少;500μg/ ml 的莪术油主要导致细胞死亡,有明显的细胞毒性。 流式细胞仪结果显示较高浓度时,莪术油使CNE22 细胞阻滞在G1 期。电子显微镜观察细胞凋亡的超微 结构可以看到凋亡小体。结论　莪术 油可以抑制鼻咽癌细胞CNE22 的增 殖并诱导其凋亡;莪术油和100 cGy 的 γ2射线联合作用有明显的增敏作用; 其作用机制与诱导肿瘤细胞发生凋亡 及影响细胞生长周期有关。     

E1A基因对鼻咽癌细胞放射敏感性影响的初步实验研究

目的 探讨E1A基因对鼻咽癌细胞放射增敏作用及相关机制.从而为提高鼻咽癌放射治疗疗效提供实验依据.方法 经腺病毒介导,将E1A基因导入人鼻咽癌细胞系CNE2细胞.经RT-PCR鉴定,获得含E1A的阳性克隆.将未转染的CNE2细胞、转染对照空载体Ad-B-gal的CNE2细胞和转染Ad-E1A的CNE2细胞用6 MV X线分别照射0、2、4、6、 8 Gy后进行成克隆分析并绘制细胞存活曲线,计算放射增敏比.流式细胞术和RT-PCR检测转染前后的细胞周期分布以及wtp53表达情况.结果 转染后阳性克隆细胞RT-PCR结果说明E1A已整合到细胞基因组中并且稳定表达.细胞存活曲线结果显示转染E1A的CNE2细胞放射增敏比分别为1.37(D_0值比)、1.95(D_q值比)、1.46(SF_2值比).未转染及空载体转染后的CNE2细胞照射后细胞存活曲线分析结果显示无差异,D0D_qSF2值分别为1.57 Gy及1.53 Gy、1.82 Gy及1.78 Gy、0.89及0.82.流式细胞术显示细胞周期出现G_2+M期阻滞,RT-PCR结果显示E1A基因能提高wtp53的表达.结论 E1A基因能显著提高人鼻咽癌细胞的放射敏感性,其作用机制可能与E1A基因提高叭p53基因的表达和引起G2+M期阻滞有关.     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。