国产重组人粒细胞集落刺激因子临床应用研究

利用基因技术生产的重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）能作用于中性粒细胞系，具有显著的刺激中性粒细胞生成，释放并增强成熟中性粒细胞的功能，且没有明显毒副作用．但其产品美国的生白能（ＧＭ－ＣＳＦ），价格昂贵，应用受到限制．在国内首家开发出中国 ｒｈＧ－ ＣＳＦ：“吉粒芬”得到卫生部批准试用．由于价格适中，临床已较普遍应用，现把我们近两年使用情况报告如下．１资料与方法１．１对象本组使用吉粒芬患者４２例次，均是本院的住院病人：男２６例次，女１６例次，年龄５～６５岁．其中急性白血病１２例次，慢粒１０…     

重组人粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中表达的研究

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（hGM-CSF）主要来源于激活的T、B淋巴细胞、成纤维细胞和内皮细胞等,是刺激造血前体细胞分化及增殖的细胞因子。同时在机体免疫调节过程中具有重要作用。人的GM-CSF全基因长约2.5kb,含有4个外显子和3个内含子,定位于人第5号染色体长臂IL-3基因的下游。hGM-CSF是由127个氨基酸组成的造血生长因子，天然hGM-CSF由于糖基化程度不同，分子量在14．5～32kD不等。     

重组人粒细胞集落刺激因子对HL-60细胞影响的研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对HL-60细胞的影响。方法瑞氏染色观察细胞形态的变化,吖啶橙/溴化乙锭双染色观察凋亡情况,NBT和CD13测定观察成熟分化情况,MTT实验观察增殖活性。结果加入rhG-CSF 48 h后,HL-60细胞凋亡率升高,增殖活性下降,而且随着rhG-CSF浓度的升高,这种作用更加明显。成熟分化特征变化不明显。结论rhG-CSF有促进HL-60细胞凋亡并抑制其增殖的作用。     

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子联合抗生素治疗腹腔感染

目的： 探讨在抗生素的基础上应用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对大鼠腹腔感染预后的影响。方法： 68只雄性Wistar大鼠随机分为： rhGM-CSF+头孢呋辛/甲硝唑组（A组）26只、头孢呋辛/甲硝唑组（B组）27只、生理盐水组（C组）15只。盲肠结扎穿刺法（cecal ligation and puncture,CLP）制造腹腔感染的模型。术后观察体重、摄食量的变化,检测血白细胞计数以及骨髓像,分析术后5 d生存率。结果：与B、C两组比较, A组大鼠术后平均体重降幅较小,摄食量恢复明显,血白细胞计数升高,骨髓像增生极度活跃,术后5 d生存率为61.5%,显著高于B组和C组。结论：rhGM-CSF与头孢呋辛/甲硝唑联合应用可提高盲肠穿孔致腹腔感染大鼠的短期生存率,改善其行为活动。     

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在重组痘苗病毒中的 …

目的 观察人ＧＭ－ＣＳＦ（粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子）对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 大鼠体内观察。结果 从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ可同时表达ＧＭ－ＣＳＦ及ＨＳＶ－１ｇＤ（单纯疱疹病毒ｇＤ糖蛋白），但ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ／ＧＭ－ＣＳＦ免疫大鼠产生的抗－ＨＳＶ１ｇＤ特异性抗体水平与ＲＶＪＳＢ１１７５Ｄ组相比无显著性差异。结论 人ＧＭ－ＣＳＦ在大鼠体内对     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子研究进展

人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子是一种能促进骨髓粒系 ,单核细胞系 ,巨噬细胞系发育和成熟 ,增加外周血成熟粒细胞 ,单核巨噬细胞功能的一种细胞因子。本文着重综述了近几年国内外在人GM CSF基因表达调控 ,对效应细胞的调节以及与其相关的融合蛋白方面的研究进展。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

在整个生命过程中寿命短暂的成熟血细胞是不断产生的.在这一过程中,首先是多潜能的、自我繁殖的干细胞形成祖细胞,而祖细胞则不可逆地向六大类造血细胞系列中的一类分化.然后,这些祖细胞产生其子代细胞克隆,并进一步成熟,进入血液.一系列特异的体液糖蛋白可刺激祖细胞的克隆增殖,用半固体培养能监测成熟过程中子代细胞的集落形成.故此,这类刺激细胞增殖所必需的糖蛋白通称为"集落刺激因子(coony stimulating factors,CSFs)".对它们的性质了解得最清楚的是控制粒细胞-巨噬细胞系的CSFs.粒细胞和巨噬细胞是功能相关的群体,它们来自共同的祖细胞.     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建,表达和其 …

目的 为提高人重组炷细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ｒｈＧ－ＧＳＦ）的稳定性和活性,对ｒｈＧ－ＧＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法 利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,ＤＮＡ序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症模型小鼠的治疗作用

BACKGROUND: Granulocyte colony-stimulating factor has been shown to be used for the treatment of granulocytopenia, but its effect on sepsis is little reported. OBJECTIVE: To explore the treatment outcomes of recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor (rhGM-CSF) for sepsis mice. METHODS: A sepsis mouse model was established by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide, and then given subcutaneous injection of rhGM-CSF at 6 and 30 hours after modeling. The morphological change of mouse lung tissue, CD64 expression in peripheral neutrophils, and serum levels of tumor necrosis factor-α and interleukin-10 were ovserved, respectively. RESULTS AND CONCLUISON:(1) Complete bronchial epithelial, mild stromal hyperplasia, and a few neutrophil infiltration were found after rhGM-CSF treatment. (2) CD64 expression in peripheral neutrophils, and serum level of interleukin-10 in the treatment group were significantly higher than those in the model and control groups at 1, 3 and 7 days after treatment (P < 0.05). The serum level of tumor necrosis factor-α in the treatment group was significantly higher than that in the control group, but lower than that in the model group after 1, 3 and 7 days of treatment (P < 0.05). (4) These results show that rhGM-CSF can enhance neutrophil function and the anti-inflammatory effects in sepsis mice. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化

工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化,并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhG-CSFa进行纯度分析。利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价。结果表明,rhG-CSFa表达量占全菌蛋白的31.2%,通过优化复性条件,rhG-CSFa复性率达到11.36%,纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11%。体外活性实验显示,与野生型G-CSF相比,rhG-CSFa在相同浓度下能诱导NFS-60细胞株获得更高的细胞增殖率。rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa,可用于工业化大规模生产,生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度。rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础。     

重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子在啤酒酵母中的表达和分泌

利用啤酒酵母α－因子启动子和前导肽区与中国人ＧＭ－ＣＳＦ基因编码区正确融合后能产生具有正确Ｎ－端的分泌型表达载体,ＧＭ－ＣＳＦ基因在啤酒酵母细胞中得到表达和分泌。Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交和染糖结果表明酵母细胞能识别ｈＧＭ－ＣＳＦ中潜在的糖化位点。表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ以不同程度的糖化形式存在。体外生物学活性测定表明,培养上肩能刺激骨髓干细胞的增殖,形成集落,其生物学活性为１．２５ｘ１０４Ｕ／ｍＬ。     

粒细胞集落刺激因子在人卵泡颗粒细胞中的表达

粒细胞集落刺激因子(GCSF)属于糖蛋白生长因子家族，为造血细胞的生存、生长和分化所必需，而且能影响外周成熟血细胞的功能。人们发现，一些非造血组织，如胎盘、卵巢肿瘤和胎儿的器官组织等，也能表达GCSF和GCSF受体(GCSSFR)。有些研究显示，GCSF能使内皮细胞迁移和增生，提示GCSF在非造血组织中生长、发育的调节作用以及在肿瘤发生中的可能作用。本研究旨在揭示GCSF在人卵泡生长发育中的作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子促进兔手术联合化疗后的切口愈合

目的 评价重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对手术同时使用化疗的兔切口感染程度及血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响.方法 新西兰大白兔24只,随机分为3组,空白组单纯进行手术,常规换药;对照组和治疗组均于手术前当日给予表阿霉素静脉输注,常规换药,治疗组换药时涂抹重组人粒细胞集落刺激因子.于手术后第7天观察切口愈合等级,进行病理检查,通过免疫组化检测各组VEGF表达水平,酶联免疫吸附法检测TNF-α水平.结果 使用重组人集落刺激因子后切口愈合情况及等级均优于对照组(P＜0.05),VEGF表达水平升高,而TNF-α与对照组相比无明显差别.结论 重组人粒细胞集落刺激因子可以提高切口部位VEGF表达水平,对手术同时使用化疗的切口有促进愈合作用.     

重组人粒细胞集落刺激因子干预后自体骨髓移植对骨折愈合的影响

背景:自体骨髓经皮移植促进骨折愈合已经成为临床一种治疗手段,其中骨髓间充质干细胞在局部微环境下所起到的作用已经得到共识。但是如何提高其在移植骨髓中的含量仍是目前面临的难题。已经有研究报道重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocy tecolony-stimulating factor,rhG-CSF)可动员外周骨髓间充质干细胞快速增殖。目的:探讨rhG-CSF干预的自体骨髓移植对兔桡骨骨折愈合的促进作用。方法:制备桡骨中段3mm宽骨折模型白兔56只,随机分为4组,每组14只。术后1h,rhG-CSF组,自体骨髓组与PBS对照组均在白兔背部皮下注射rhG-CSF,1次/d,连续5d。模型组皮下注射相应体积的生理盐水。术后5d,自体骨髓组抽取自体骨髓经皮回植骨折部位,PBS对照组在骨折处注射相应体积的生理盐水。术后14,28d取材进行影像学、组织学、组织形态计量学检测与分析。结果与结论:rhG-CSF,自体骨髓,PBS对照组新生血管、骨小梁形成、4种骨痂记分、外骨痂厚度均优于模型组,尤以自体骨髓组效果最显著(P0.01或P0.05)。说明rhG-CSF干预能够促进骨折愈合,结合自体骨髓移植促进骨折愈合的效果更佳。     

重组人粒细胞集落刺激因子增加脑缺血周边区纤维结合蛋白的表达

目的:验证重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是否能改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,并观察纤维结合蛋白表达。方法:线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞模型,皮下注射rhG-CSF,10μg·kg^-1·d^-1,连续5d。进行神经功能缺损评分。采用免疫组织化学方法观察纤维结合蛋白以及5溴-2脱氧尿苷(Brdu)的表达。运用免疫荧光双标法,观察缺血周边区Brdu和纤维结合蛋白以及神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP)和纤维结合蛋白的双阳性表达。结果:①手术7d、14d、21d干预组的神经功能缺损评分分别为4.00±0.89、3.83±1.17、3.50±1.38,手术对照组分别为5.50±1.38、5.83±1.47、5.66±1.63,手术干预组明显低于手术对照组(P<0.05);②手术干预组缺血周边区的纤维结合蛋白和Brdu免疫阳性细胞数均明显多于手术对照组(P<0.05);③手术组缺血周边区见Brdu和纤维结合蛋白以及GFAP和纤维结合蛋白的双阳性细胞;④手术干预组缺血周边区的血管周围可见簇状分布的纤维结合蛋白免疫阳性细胞。结论:rhG-CSF可增加脑缺血之后缺血周边区纤维结合蛋白的表达和改善神经功能。