百里醌对肾缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的：探讨百里醌对肾缺血再灌注损伤大鼠的抗氧化及线粒体保护作用。方法检测百里醌对大鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）、肾脏病理形态、肾组织匀浆中丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸（LD）、一氧化氮（NO）的水平以及肾组织线粒体膜电位和线粒体组分中的MDA、GPx、GSH、SOD含量和ATP酶活性变化的影响。结果百里醌可明显减少BUN、Cr、LD、NO、线粒体膜电位、肾组织和线粒体组分中MDA表达以及肾组织病理形态改变,但可明显增加ATP酶活性以及肾组织和线粒体组分中CAT、GPx与SOD的表达。结论百里醌预处理减轻肾缺血再灌注损伤可能与其抗氧化应激和保护线粒体的作用相关。     

MnSOD与GPx过表达保护活性氧诱导细胞死亡的效应比较

叔本基脂氢过氧化物和百草枯是一类具有细胞毒性作用和活性氧种，超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶是细胞内清除活性氧种的重要抗氧化物。本研究以稳定表达ＭｎＳＯＤ与ＧＰｚ与ＣＨＯ细胞系为细胞模型，通过分析细胞存活能力和线粒体功能比较研究了ＭｎＳＯＤ与ＧＰｘ对ｔＢＯＯＨ和Ｐａｒａｑｕａｔ诱导细胞死亡的不同影响。     

线粒体氧毒性损伤及氢气的拮抗作用

高分压氧产生的过量活性氧自由基是导致氧毒性的最主要损伤机制,这限制了氧在临床上的广泛应用。线粒体是氧代谢的主要场所,这使其成为活性氧自由基产生及引起损伤的主要部位,而线粒体的严重损伤会导致细胞死亡。近年研究证实氢气能够选择性地清除毒性作用极强的自由基,对高分压氧毒性所致的线粒体损伤有保护作用,从而保护细胞免受自由基损害。该文重点阐述高分压氧毒性所致的线粒体损伤及氢气的拮抗作用。     

线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔（mPTP）在天麻素抗氧化应激损伤的 保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组：正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌 素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A（mPTP开放剂）观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组 细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷（ATP）试剂盒检测ATP的 含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot 检测细胞内细胞色素C（Cyt C）含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢 组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组（1.98±0.18 vs 3.08±0.14）,差异有统计学意义（P=0.014）。环孢菌素A可以阻断 氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用（P<0.05）,并且在一定程度上阻断了天 麻素的抗凋亡作用（5.77±0.75）% vs（1.97±0.82）%,两者差异有统计学意义（P<0.001）。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发 生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。     

从漆树中分离的糖蛋白抑制BNLCL-2细胞中葡萄糖／葡萄糖氧化酶诱导的线粒体凋亡的信号途径

线粒体中的活性氧（ROS）对在病理和生理条件下的细胞凋亡起重要作用。有研究表明漆树Rhus verniciflua Stokes乙醇提取物具抗氧化、抗细胞凋亡、抑制人肿瘤细胞增殖等作用。作者研究了该植物中糖蛋白的抗氧化活性以及是否具有调节抗氧化酶、线粒体型细胞凋亡信号、NO产生，抑制葡萄糖／葡萄糖氧化酶（G／GO）诱导的BNLCL．2细胞凋亡等作用。     

黄芪注射液对微囊藻毒素LR致大鼠海马急性损伤的化学预防作用

目的探讨中药黄芪注射液（AI）对微囊藻毒素LR（MCLR）所致大鼠海马急性损伤的化学预防作用及机制。方法采用海马内注射MCLR制作毒素急性损伤模型,通过组织病变的病理学观察和生化检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性及丙二醛（MDA）含量的改变等实验方法观察黄芪注射液的作用。结果与对照组相比较,MCLR使海马CA1区细胞排列不规则,水肿、核固缩,海马MDA含量增加（P〈0.05）,抗氧化酶SOD、CAT、GPx活性增加（P〈0.05）,黄芪干预后能减轻海马CA1区形态学损伤,降低MDA含量（P〈0.05）,抗氧化酶SOD、CAT、GPx活性明显下降（P〈0.05）。结论黄芪注射液可改善MCLR导致的大鼠海马CA1区的病理改变,减少海马部位的脂质过氧化。     

雌激素的抗衰老作用及其机制研究

目的探讨雌激素抗人脐静脉内皮细胞（HUVEC）衰老的作用及其机制。方法用60μmoL／L过氧化氢（H2O2）作用HUVEC 72h产生诱导型细胞衰老模型，观察17β-雌二醇（E2）对内皮细胞衰老的干预作用。实验分空白组、H2O2刺激组、H2O2＋E2组及H2O2＋E2＋ICI 182780组。用β-半乳糖苷酶染色检测细胞的衰老，同时检测细胞线粒体细胞色素C氧化酶的活性，检测细胞内ATP水平及活性氧（ROS）水平，透射电镜观察线粒体结构变化。结果H2O2刺激组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例增加，细胞衰老明显，同时线粒体细胞色素C氧化酶的活性下降，ATP水平下降，ROS水平增加，线粒体结构受损；而H2O2＋E2组能明显减轻上述各种变化；H2O2＋E2＋ICI 182780组能明显阻断E2的各种保护作用。结论E2具有抗血管内皮细胞衰老的作用，其作用机制是通过保护线粒体而实现的。     

穿心莲内酯对乙醇诱导肝细胞氧化应激损伤的作用及机制

目的 研究穿心莲内酯(AD)对乙醇诱导肝细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 体外培养肝细胞L-02,用0~30 μmol/L AD孵育1 h后,采用酶学方法测定处理前后谷胱甘肽巯基转移酶(GST)及其过氧化物酶(GPx)和还原酶(GR)活性变化,实时定量PCR检测其mRNA表达;同时采用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)中p38,JNK和ERK以及Akt的磷酸化变化,并采用PI3K/Akt和ERK抑制剂LY294002和PD98059处理细胞,观察其在介导核转录因子Nrf2转位和GST、GPx和GR表达中的作用;MTT检测细胞活性变化。结果0~30 μmol/L AD处理L-02细胞后,GST、GPx和GR的酶活性显著增高,同时其mRNA表达也明显增多。AD也能诱导ERK和Akt磷酸化,但对p38和JNK无明显影响。采用LY294002或PD98059处理细胞后,可抑制AD诱导Nrf2核转位及Akt和ERK磷酸化,同时也能明显消除AD对乙醇处理后L-02细胞毒性的保护作用。结论AD经PI3K/Akt和ERK上调抗氧化蛋白GST、GPx和GR的表达而发挥对乙醇毒性的保护作用。     

维生素E对染镍肺泡巨噬细胞活性氧产生及抗氧化酶活性的影响

目的：研究维生素E拮抗三氧化二镍的细胞毒作用及机制。方法：采用体外细胞培养法测定在不同浓度的维生素E（25mol/L,50mol/L,100mol/L）作用下，体外染镍肺泡巨噬细胞的存活率及活力，同时观察细胞内活性氧的产生，以及过氧化氢酶（CAT）的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力的变化。结果：在体外染镍肺巨噬细胞中加入维生素E后可提高该细胞的存活率和活力，减少活性氧的产生，增强细胞内CAT，GSH－Px的活性，其中以100μmol/L的维生素E的作用最为明显。结论：镍可致细胞脂质过氧化，维生素E具有拮抗镍对肺泡巨噬细胞的细胞毒作用，可能与其抗氧化功能有关。     

鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响

摘以400mg／kg2次腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）建立大鼠急性肝损伤模型，并在注射TAA前1h以80mg／kg2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防，研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后，大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸（ADP）诱导的氧消耗、呼吸控制率（RCR）、磷／氧比（P／O）、氧化磷酸化率均低于对照组，而预防组线粒体ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率、P／O和氧化磷酸化效率均高于模型组；TAA降低了线粒体中谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶的水平，而鲨鱼肝蛋白粗提物则使线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的水平明显升高，说明鲨鱼肝蛋白粗提物能部分修复线粒体受损的呼吸功能，增强线粒体抗氧化能力。     

Oligomeric Procyanidins Induce Generation of Reactive Oxygen Species and Collapse of Mitochchondrial Membrane Potential in Glioblastoma Cell Lines

Objective The aim of the present study was to clarify the mechanism underlying glioma cell death upon oligomeric procyanidins (F2) exposure. Methods The cytotoxicity of F2 on U87 (human malignant glioblastoma cell line) and C6 (rat glioma cell line) cancer cells was evaluated, and changes of mitochondrial membrane potential (MMP) and production of reactive oxygen species (ROS) in drug-treated cells were monitored. Moreover, morphological changes associated with F2-induced cells death were examined. Results F2 induced a concentration-dependent increase in ROS production and decrease in MMP. Furthermore, pre-incubation with N-acetylcysteine (NAC) and rotenone (Rt), resulted in partial inhibition of F2-induced ROS generation and marked attenuation of cell death and the cytoplasmic vacuolization induced by F2. In addition, pretreatment with Rt markedly attenuated the MMP loss in F2-treated cells. However, pretreatment with NAC only markedly attenuated the MMP loss in F2-treated C6 cells. Conclusion The increase in ROS level is at least one of mechanisms associated with F2-induced glioma cell death as well as the cytoplasmic vacuolization formation that contribute to the cytotoxicity of F2 in glioma cells.     

Effects of copper-phenanthroline on pentachlorophenol-induced adaptation and cell death of Escherichia coli

Objective To evaluate the effects of copper-phenanthroline(CuOP) on pentachlorophenol(PCP)-induced adaptation and cell death of Escherichia coli. Methods Bacterial growth and adaptation to PCP were monitored spectrophotometrically at 600 nm. Inactivation of bacterial cells was determined from colony count on agar dishes. Cellular ATP content and accumulation of PCP were assessed by chemiluminescence and HPLC analysis respectively. The formation of PCP-Cu-OP complex was shown by UV-visible spectra. Results Escherichia coli(E. coli) could adapt to PCP,a wood preservative and insecticide used in agriculture. The adaptation of E. coli to PCP prevented its death to the synergistic cytotoxicity of CuOP plus PCP and declined cellular accumulation and uncoupling of oxidative phosphorylation of PCP. Furthermore,CuOP and PCP neither produced reactive oxygen species(ROS) nor had a synergistic effect on uncoupling of oxidative phosphorylation in E. coli. The synergistic cytotoxicity of CuOP and PCP in E. coli might be due to the formation of lipophilic PCP-Cu-OP complex. Conclusion Our data suggested that adaptation of E. coli to PCP decreased the synergistic effects of CuOP and PCP on prokaryotic cell death due to the formation of lipophilic PCP-Cu-OP complex,but it had no effect on the uncoupling of oxidative phosphorylation and production of reactive oxygen species in E. coli.     

SOD与ROS在As2O3作用于S180肉瘤细胞中的作用研究

目的：初步探讨超氧化物歧化酶(SOD)、细胞内活性氧(ROS)在三氧化二砷(As2O3)抗肿瘤中的作用。方法：对小鼠S180肉瘤细胞采用细胞培养，并建立S180移植瘤动物模型，体内体外观察As2O3对S180肉瘤的抑制作用，同时检测S180肉瘤细胞及S180移植瘤肿瘤组织内的总超氧化物歧化酶(TSOD)，含锰超氧化物歧化酶(MnSOD)，含铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)以及ROS的改变。结果：As2O3可以抑制小鼠S100肉瘤细胞生长并具有浓度依赖性，在一定浓度下其作用强于化疗药物阿霉素(ADM)；肿瘤细胞内及肿瘤组织内的TSOD以及MnSOD均表现出下降的趋势，ROS则表现出上升趋势。TS0D和ROS呈负相关。结论：As2O3是通过降低细胞内SOD值，使细胞内超氧阴离子(O2^*-)更多的积累以杀伤肿瘤细胞，这可能是As2O3，抗肿瘤作用机制之一。     

稳定表达MnSOD细胞系的建立及对电离辐射损伤的作用

通过基因转染技术将人ＭｎＳＯＤｃＤＮＡ载体导入中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞，建立了稳定表达有义和反义ＭｎＳＯＤ的细胞系，并用此细胞模型初步探讨了ＭｎＳＯＤ在电离辐射损伤中的作用，从正反两个方面说明了ＭｎＳＯＤ对电离辐射敏感性的影响。     

Protective effect of chrysoeriol against doxorubicin-induced cardiotoxicity in vitro

Background The use of doxorubicin （DOX） is limited by its dose-dependent cardiotoxicity. Reactive oxygen species （ROSs） play an important role in the pathological process of DOX-induced cardiotoxicity. The aim of this study was to evaluate the protective effect of chrysoeriol, a flavone compound, against DOX-induced apoptosis and death in H9c2 cells and to find out its preliminary mechanism. Methods We used 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide （MTT） assay, Hoechst33258 staining and measurement of lactate dehydrogenase （LDH） release to evaluate the protective effect of chrysoeriol against DOX-induced apoptosis and death in H9c2 cells. To find out the mechanism of this protective effect, we observed the immunofluorescence of intracellular ROS and measured the activities of malondialdehyde （MDA）, superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GPx）. Furthermore, we evaluated the effect of chrysoeriol on the antitumor activity of DOX in HeLa cells with MTT assay. Results The results of MTT assay, Hoechst 33258 staining and measurement of LDH release showed that chrysoeriol significantly reduced doxorubicin-induced apoptosis and cell death. Chrysoeriol at a dose of 20 μg/ml notably reduced intracellular ROS, decreased the concentration of MDA in the supernatant of DOX-treated H9c2 cells and increased SOD and GPx activities to their normal levels. Further study showed that the addition of chrysoeriol did not affect the antitumor activity of DOX. Conclusion Chrysoeriol could potentially serve as a novel cardioprotective agent against DOX-induced cardiotoxicity without affecting the antitumor activity of DOX.     

Tamarind seed coat extract restores reactive oxygen species through attenuation of glutathione level and antioxidant enzyme expression in human skin fibroblasts in response to oxidative stress

ObjectiveTo investigate the role and mechanism of tamarind seed coat extract (TSCE) on normal human skin fibroblast CCD-1064Sk cells under normal and oxidative stress conditions induced by hydrogen peroxide (H₂O₂).MethodsTamarind seed coats were extracted with boiling water and then partitioned with ethyl acetate before the cell analysis. Effect of TSCE on intracellular reactive oxygen species (ROS), glutathione (GSH) level, antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and catalase activity including antioxidant protein expression was investigated.ResultsTSCE significantly attenuated intracellular ROS in the absence and presence of H₂O₂ by increasing GSH level. In the absence of H₂O₂, TSCE significantly enhanced SOD and catalase activity but did not affected on GPx. Meanwhile, TSCE significantly increased the protein expression of SOD and GPx in H₂O₂-treated cells.ConclusionsTSCE exhibited antioxidant activities by scavenging ROS, attenuating GSH level that could protect human skin fibroblast cells from oxidative stress. Our results highlight the antioxidant mechanism of tamarind seed coat through an antioxidant enzyme system, the extract potentially benefits for health food and cosmeceutical application of tamarind seed coat.     

酶释放法用于细胞介导的细胞毒试验问题分析

目的 :检验分析酶释放法用于细胞毒试验存在的问题。方法 :用51Cr释放法和MTT比色法、NAG比色法 ,单独或相互比较 ,检验分析细胞毒试验中效靶细胞相互作用规律 ,酶在细胞代谢中分布情况 ,细胞死伤前后酶释放特点。结果 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面 ,而以NAG为底物的酶分布在细胞内。细胞有自主释放酶的功能 ,正常细胞与受损伤细胞释放酶速度不同。细胞毒作用过程中效应细胞也有损伤 ,也有酶释放 ,与靶细胞死伤后释放的酶属于同一类 ,而且混合在一起 ,目前尚无可行的定量分离和鉴别方法。酶释放法用于细胞毒试验 ,对于不同状态的标本检验结果没有规律性 ,不能反映机体免疫功能状态。结论 :酶释放法不宜用于细胞介导的细胞毒试验。     

氯贝丁酯影响肝线粒体功能而致肝损伤的观察

目的 研究氯贝丁酯对离体小鼠肝线粒体和体外培养的AML-12肝细胞损伤的作用机制。方法 用荧光染料JC-1对线粒体膜电位进行标记,检测膜电位变化。通过DCFDA的标记,检测对线粒体膜自由基的影响。加入环孢素（CsA）和抗氧化剂维生素C、甲磺酸去铁胺、过氧化氢酶等,观察对细胞的保护作用。结果 当氯贝丁酯浓度大于0.3mmol/L时,能迅速降低肝细胞中的线粒体以及小鼠肝脏离体线粒体的膜电位。CsA通过拮抗线粒体膜通透性,抑制膜电位下降,从而抑制细胞死亡。用氯贝丁酯处理过的肝细胞及线粒体内自由基显著增加。抗氧化剂维生素C、甲磺酸去铁胺、过氧化氢酶等能够保护细胞,抑制安妥明引起的损伤和死亡。结论 安妥明通过影响线粒体功能,从而诱发过多的自由基产生,最终导致细胞死亡。     

抑制线粒体钙单向转运体对大鼠急性胰腺炎氧化应激的作用研究

目的 探讨抑制线粒体钙单向转运体（MCU）减弱线粒体钙超载对雨蛙肽诱导的大鼠急性胰腺炎（AP）及胰腺氧化应激的影响。方法 将32只雄性SD大鼠分为对照组、急性胰腺炎组（AP组）、急性胰腺炎+钌红干预组（AP+RR组）、钌红组（RR组）,每组8只。模型复制24 h后处置大鼠,检测各组大鼠血清淀粉酶（Amy）、脂肪酶（Lipase）、白细胞介素6（IL-6）水平,HE染色观察胰腺组织病理改变;倒置荧光显微镜下观察腺泡细胞活性氧（ROS）、线粒体内Ca²⁺、胞内游离Ca²⁺荧光强度;检测胰腺组织还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量;Western blotting检测胰腺组织MCU、沉默信息调节因子3（SIRT3）、MnSOD蛋白的表达;透射电镜观察腺泡细胞超微结构。结果 各组大鼠胰腺HE评分和血清Amy、Lipase、IL-6水平比较,经方差分析,差异有统计学意义（P <0.05）,AP组较对照组高（P <0.05）。AP组MCU相对表达量,线粒体内Ca²⁺、胞内游离Ca²⁺浓度高于对照组、RR组（P <0.05）,AP+RR干预组低于AP组（P <0.05）。AP组MnSOD、SIRT3、GSH低于对照组（P <0.05）,ROS、MDA高于对照组（P <0.05）,与AP组比较,AP+RR干预组ROS、MDA低于AP组（P <0.05）,MnSOD、SIRT3、GSH高于AP组（P <0.05）。结论 抑制MCU可减弱腺泡钙超载,同时可能通过调节SIRT3/MnSOD途径改善雨蛙肽诱导的AP氧化应激,但对胰腺组织病理学和生化指标无明显改变。