泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展

目的 筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用.方法 构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-PAGE和质谱对底物蛋白进行鉴定.在人肝...     

泛素结合酶2C通过Wnt/β-catenin信号通路促进肾恶性横纹肌样瘤的恶性进展

目的：探讨泛素结合酶2C(ubiquitin-conjugating enzyme 2 C,UBE2C)对肾恶性横纹肌样瘤（malignant rhabdoid tumor of the kidney,MRTK）的影响及作用机制。方法：采用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）以及免疫荧光法在收集的MRTK临床标本以及细胞系G401细胞中验证UBE2C的表达情况。从TARGET数据库下载MRTK的基因表达数据进行验证,Kaplan-Meier法（KM法）评估UBE2C与预后的关系。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制UBE2C在G401细胞中的表达。通过CCK-8检测转染后G401细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变。采用基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）探索UBE2C调控的相关通路,并通过WB验证通路蛋白的表达。结果：在MRTK临床标本中,UBE2C表达量是癌旁对照组的（3.189±1.900）倍（P=0.033）。...     

利用癌症基因组图谱数据库分析泛素结合酶E2S在肺腺癌中的表达及临床意义

目的 研究泛素结合酶E2S(UBE2S)在肺腺癌及其癌旁组织中的表达及临床意义。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载肺腺癌患者临床信息资料,比较337例肺腺癌组织与59例癌旁组织中UBE2S表达水平,分析UBE2S与肺腺癌患者临床病理特征的相关性及对预后的影响。并通过Cox比例风险模型分析影响肺腺癌患者预后的因素。结果 肿瘤组中UBE2S表达水平高于癌旁对照组(P<0.05),同一患者肺腺癌组织中UBE2S表达水平高于癌旁组织(P<0.05);UBE2S的表达水平与Stage分期、T分期、N分期有关(P<0.05);UBE2S表达水平与肺腺癌患者预后有相关性(P<0.05),高UBE2S表达水平及Stage分期是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 UBE2S在肺腺癌组织中表达上调,高表达提示患者预后差,UBE2S可能参与肺腺癌发生发展过程,进而影响预后。UBE2S可作为肺腺癌患者的潜在治疗靶点。     

泛素相关基因在肝细胞肝癌中 的表达及临床意义

目的 探讨泛素相关基因（URGs）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及临床意义。 方法 筛选癌症基因组图谱 （TCGA）数据库中 HCC 患者差异表达的 URGs，以差异表达最明显的泛素结合酶（UBE）2C 为对象，采用 qRT-PCR 法和免疫组 化法验证 UBE2C 的表达及与 HCC 患者临床病理特征、预后的关系；构建与 URGs 相关 HCC 临床预后模型，并绘制 ROC 曲线分 析模型预测患者 1、2、3 年生存期的效能。 结果 qRT-PCR 和免疫组化结果均证实，相比癌旁组织，UBE2C mRNA 和蛋白 在 HCC 组织中均显著高表达（均 P＜0.05）；生存分析结果显示，UBE2C 高表达组累计生存率显著低于 UBE2C 低表达组 （P＜0.01）。TCGA 数据显示 UBE2C 高表达与 HCC 患者年龄及肿瘤分级、分期、大小均显著相关（均 P＜0.01），UBE2C 高 表达是 HCC 患者较差预后的独立影响因素（P＜0.01）。临床数据发现 UBE2C 高表达与肿瘤分级、分期、血清甲胎蛋白 （AFP）及 HBsAg 相关（均 P＜0.05）；TCGA 中发现 11 个 URGs 与 HCC 不良预后相关。构建的预后模型预测患者 1、2 和 3 年生存期的 AUC 分别为 0.762、0.708 和 0.683。 结论 UBE2C 在 HCC 中高表达，且与 HCC 分级、分期、不良预后相关；利用 URGs构建预测HCC的临床预后模型可有效预测患者术后生存期。     

UBE2T基因对卵巢癌细胞增殖的调控作用及其机制

目的 探讨泛素结合酶E2T (UBE2T)基因在卵巢癌组织中的表达水平及其对卵巢癌细胞增殖的调控作用和机制。方法 通过基因表达谱交互分析(GEPIA)网站分析UBE2T基因在卵巢癌组织与正常组织中的差异表达。收集52例卵巢癌组织和癌旁组织样本,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测UBE2T基因在卵巢癌组织和癌旁组织中的差异表达;采用MTT法检测细胞增殖的改变;采用Western blotting检测FA/BRCA通路FANCF和FANCD2蛋白的表达;采用彗星实验检测DNA损伤。结果 qRT-PCR结果显示,UBE2T基因在卵巢癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P <0.01)。转染cDNA-UBE2T至SKOV3细胞后UBE2T蛋白高表达,与阴性转染组比较,细胞增殖水平明显增加(P <0.05)。Western blotting结果显示,UBE2T过表达后可增加SKOV3细胞中FA/BRCA通路FANCF和FANCD2蛋白的表达(P <0.05)。彗星实验发现,UBE2T过表达可以抑制顺铂引起的卵巢癌细胞DNA损伤。结论 UBE2T基因在卵巢癌组织中高表达,...     

乳腺癌组织中UEV1A、UBE2N表达与上皮间质转化的关系及临床预后价值

目的 分析乳腺癌组织中泛素结合酶变体1A (UEV1A)、泛素连接酶E2N(UBE2N)的表达与上皮间质转化(EMT)基因表达的相关性及临床预后意义。方法 选取2016年2月—2017年2月琼海市人民医院/海南省东部区域医疗中心乳腺甲状腺外科诊治的乳腺癌患者124例为研究对象。采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织和癌旁组织中UEV1A、UBE2N及EMT通路基因E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vim)、Snail mRNA的表达;免疫组化法检测组织中UEV1A、UBE2N蛋白水平。比较不同临床病理特征乳腺癌患者癌组织中UEV1A、UBE2N蛋白水平差异。采用Pearson相关分析和Spearman秩相关分析乳腺癌组织中UEV1A、UBE2N mRNA与EMT相关基因表达的相关性,以及癌组织UEV1A与UBE2N蛋白水平的相关性。Kaplan-Meier生存分析UEV1A、UBE2N蛋白水平对乳腺癌患者生存预后的影响。多因素Cox回归分析影响乳腺癌患者生存预后的因素。结果 乳腺癌组织UEV1A、UBE2N及N-cad、Vim、Snail mRNA表达高...     

UBE2L3参与肺腺癌细胞有氧糖酵解的机制研究

目的 探讨泛素蛋白连接酶L3(UBE2L3)对肺腺癌细胞有氧糖酵解的作用及其分子机制。方法 通过生物信息学方法分析UBE2L3 mRNA表达水平与肺腺癌患者的总生存期的关系以及对肺腺癌组织中有氧糖酵解水平的影响。选择UBE2L3表达水平较低的HCC827细胞为研究对象,构建过表达质粒细胞HCC827/UBE2L3及HCC827/NC;选择UBE2L3表达水平较高的H1299细胞为研究对象,构建敲低细胞H1299/UBE2L3及H1299/NC,收集细胞用于后续实验。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用葡萄糖测定试剂盒测定葡萄糖消耗量,采用乳酸检测试剂盒测定乳酸生成量,采用Western blot检测有氧糖酵解关键蛋白M2-型丙酮酸激酶（PKM2）、L-乳酸脱氢酶（LDHA）表达水平。另外再通过磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)抑制剂Y294002阻断PI3K/Akt信号通路后检测细胞有氧糖酵解的变化。结果 肺腺癌组织中UBE2L3蛋白表达水平高于正常肺组织（P<0.05）。UBE2L3高表达组患者总生存期低于低表达组（P<0.05）。UBE2L3 mR...     

泛素结合酶2S在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨泛素结合酶2S(UBE2S)在胃癌(GC)组织中的表达情况,并探讨其与GC患者远期预后的关系。方法 将2016年1月—2016年12月蚌埠医学院第一附属医院胃肠外科收治的GC患者(101例)列为研究对象,收集所有患者肿瘤组织及临床信息,通过免疫组织化学法检测癌及癌旁组织中UBE2S蛋白水平,分析UBE2S与组织病理学检测值之间的关系,探讨UBE2S表达对GC预后的影响,绘制生存曲线。利用生物信息学手段分析UBE2S可能参与肿瘤发生的机制。结果 免疫组化分析显示,UBE2S在GC组织中的表达显著高于癌旁组织,与组织病理学参数的关系提示UBE2S的阳性表达与CEA、CA19-9、T分期、N分期均明显相关(均P<0.01),多因素分析提示UBE2S高表达为GC的独立危险因素(HR=2.832,95%CI:1.361～4.170;P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线显示,GC患者的术后生存率与UBE2S高低表达组别之间差异有统计学意义(log-rankχ²=27.512,P<0.01),ROC曲线结果显示AUC=0.789,敏感度和...     

肝细胞癌中UBE2S互作蛋白的筛选及预后模型构建

目的：筛选泛素结合酶E2S (UBE2S)互作蛋白并构建肝细胞癌（HCC）基于UBE2S互作蛋白的预后模型（UIPM）,分析UIPM评估HCC患者预后的价值。方法：采用免疫共沉淀（Co-IP）技术筛选与Flag-UBE2S结合的蛋白复合体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）和Western blotting法验证后,采用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）分析鉴定UBE2S互作蛋白,并对互作蛋白进行基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。采用R软件survival包筛选癌症基因组图谱（TGGA）中HCC预后相关蛋白与UBE2S互作蛋白取交集,通过LASSO回归分析从交集蛋白中获取关键蛋白构建UIPM,并建立预后模型风险评分公式,按照风险评分的中位值将TGGA中HCC患者分为高风险组和低风险组,通过受试者工作特征曲线（ROC）评估UIPM的预测准确性,并采用国际癌症基因组联盟（ICGC）数据库对UIPM预测准确性进行再次验证。采用单因素和多因素Cox回归分析评估UIPM风险评分是否为HCC的预后独立危险因素,并进一步构建列线图模型。...     

基于生物信息学分析UBE2C与乳腺癌患者预后及免疫治疗反应的关系

目的 探讨泛素结合酶E2C（UBE2C）与乳腺癌患者预后及免疫治疗反应的关系。方法 通过生物信息学对癌症基因组图谱（TCGA）数据库中1066例乳腺癌组织和112例癌旁正常乳腺组织中的UBE2C基因表达水平进行差异分析，通过Kaplan-Meier法分析研究UBE2C高低表达乳腺癌患者总生存期（OS）的差异。筛选UBE2C高低表达两组乳腺癌患者之间的差异基因，并进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析。通过CIBERSORT分析UBE2C与免疫细胞浸润，并利用癌症免疫组图谱（TCIA）数据库分析UBE2C与免疫治疗反应的相关性，最后通过芯片数据及免疫组化验证UBE2C在乳腺癌中的作用。结果 与癌旁正常乳腺组织相比，UBE2C在乳腺癌组织中表达明显上调，并且UBE2C高表达的乳腺癌患者OS显著缩短。UBE2C高低表达组间的差异基因主要在细胞增殖、分裂和细胞因子活性等发挥作用，且明显富集于细胞因子相关的信号通路。UBE2C高低表达组间免疫细胞浸润模式具有明显差异，UBE2C高表达组的免疫治疗效果可能更好。乳腺癌芯片与免疫组化数据均证实了UBE2C在乳腺癌中的作用。结论 UBE2C与乳腺癌患者的预后及多种免疫细胞浸润有关，可以作为预测乳腺癌免疫治疗反应的标志物。     

UBE2T通过JAK⁃STAT通路促进甲状腺乳头状癌细胞增殖

目的：探讨泛素结合酶E2T（ubiquitin-binding enzyme E2T,UBE2T）在人甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcino- ma,PTC）中的表达情况及其对患者预后的影响,同时探讨UBE2T在PTC细胞中的功能,旨在识别其可能的调控机制,为未来 PTC的靶向治疗策略提供理论依据。方法：采用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库,系统分析UBE2T在 PTC中的表达及其与患者预后的关系。通过Western blot技术检测UBE2T在甲状腺肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达。在 PTC细胞系（TPC-1、KTC-1）中进行UBE2T敲减实验,借助CCK-8、平板克隆、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot检测相关蛋白水平的变化。结果：TCGA数据库生物信息学分析表明,PTC组织中UBE2T显著升高, 且其表达与患者无疾病间隔、淋巴结转移相关（P ＜0.01）。UBE2T敲减导致TPC-1和KTC-1细胞增殖活力显著下降,同时抑制细胞迁移和侵袭,诱导STAT磷酸化下调。敲减UBE2T的细胞系加入STAT激活剂后,细胞增殖显著提高。结论：敲减UBE2T 能抑制PTC细胞系TPC-1和KTC-1的增殖、迁移和侵袭,UBE2T通过调控JAK-STAT信号通路促进细胞增殖,提示UBE2T有可能成为PTC的治疗靶点。     

核因子-κB信号通路中小泛素样修饰蛋白与2型糖尿病的关系

小泛素样修饰蛋白化是通过一系列小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)酶介导的生化级联反应将SUMO共价结合于靶蛋白的赖氨酸残基上,提高蛋白质稳定性,介导靶分子定位和功能调节的过程。经典通路κB抑制蛋白激酶(inhibitory proteinκB kinaseβ,IKKβ)/核因子κB(nuclear factorsκB,NF-κB)途径是炎性反应的关键信号转导通路。而NF-κB是公认的参与炎症和免疫反应的调节因子。研究发现,不仅NF-κB抑制蛋白(inhibitory protein,IκBa)的SUMO化修饰参与NF-kB信号通路的调节,而且SUMO酶可以直接介导NF-kB对靶基因的转录调控,某些蛋白也可能与SUMO化蛋白有相互作用。文中对SUMO修饰系统、SUMO循环及参与SUMO化循环的酶对NF-kB信号通路的转录调控及其与2型糖尿病相关性研究进行综述。     

Notch2在肝细胞癌中的表达及相关microRNAs的筛选

目的 探讨Notch信号通路受体分子在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义,筛选可能调控Notch2基因的microRNAs.方法 应用RT qPCR检测38例HCC和癌旁肝组织Notch受体mRNA的表达,寻找关键的Notch信号受体;应用组织芯片免疫组织化学法检测106例HCC和癌旁肝组织Notch2蛋白的表达,分...     

UBE2T-siRNA对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 探讨沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.方法 体外培养人乳腺正常细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、MDA-M B-468、HCC1937,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各细胞系中UBE2T mRNA的表达水平.将乳腺癌MDA-MB-231细胞系进行UBE2T-siRNA转染,并分为对照组、阴性转染组、UBE2T-siRNA组.qRT-PCR检测各组细胞中UBE2T mR-NA的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率.流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.Transwell检测各组细胞侵袭情况.Western blot检测各组细胞蛋白细胞周期素D1 (CyclinD1)、β-cate-nin、神经型钙黏蛋白(N-cad)、上皮型钙黏蛋白(E-cad)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达.结果 与MCF-10A比较,HCC1937、MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231细胞中UBE2T mRNA表达均升高,其中MDA-MB-231细胞升高最明显.与对照组和阴性转染组比较,UBE2T-siRNA组细胞UBE2T mRNA的表达明显降低(P＜0.05);细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G2/M期细胞百分比明显升高,G0/G1期细胞百分比、细胞侵袭数目明显降低(P＜0.05);细胞蛋白CyclinD1、β-catenin、N-cad表达明显降低,E-cad、caspase-9的表达明显升高(P＜0.05).结论 沉默UBE2T能够促进乳腺癌细胞的凋亡,抑制其增殖和侵袭,UBE2T可能是乳腺癌治疗的潜在研究靶点.     

泛素蛋白连接酶复合体KPC的研究进展

泛素蛋白酶体途径是真核生物体内最重要的蛋白质降解途径之一,其中,目标蛋白的泛素化过程涉及泛素激活酶、泛素结合酶和泛素蛋白连接酶(E3)。目标蛋白识别中起关键作用的是E3,Kip1泛素-促进复合体(KPC)是一种E3复合体,由KPC1和KPC2组成,KPC1在C端含有一个环指结构域作为催化亚基,是E3不可缺少的组成部分,KPC2含有一个类泛素结构域和两个泛素相关结构域。KPC广泛存在于真核生物中,在神经系统疾病、血液系统疾病、肿瘤疾病等方面起着重要的调控作用。     

基于RLR信号通路的去泛素化酶对EV71感染的调控机制研究

目的 探讨基于维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLR)信号通路的去泛素化酶对肠道病毒71型(EV71)感染的调控机制.方法 将人横纹肌肉瘤细胞A-204分为空白对照组、空载质粒组、去泛素化酶组,空白对照组不作任何处理,空载质粒组转染10 nmol/L空载质粒48 h后加入EV71(MOI=0.5),去泛素化酶组转染10 nmol/L去泛素化酶USP4过表达质粒48 h后加入EV71(MOI=0.5).采用RT-PCR检测各组细胞中EV71 mRNA表达,Western blot检测各组细胞USP4、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、LGP2蛋白表达.结果 空载质粒组细胞USP4蛋白表达明显低于空白对照组(P＜0.05),去泛素化酶组细胞USP4蛋白表达明显高于空载质粒组和空白对照组(P＜0.05).空载质粒组和去泛素化酶组细胞EV71 mRNA表达明显高于空白对照组(P＜0.05),去泛素化酶组细胞EV71 mRNA表达明显低于空载质粒组(P＜0.05).空载质粒组细胞RIGⅠ、MDA5、LGP 2蛋白表达明显低于空白对照组(P＜0.05),去泛素化酶组细胞RIG-Ⅰ、MDA5、LGP-2蛋白表达明显高于空载质粒组和空白对照组(P＜0.05).结论 去泛素化酶USP4可能通过激活RLR信号通路而发挥抗EV71感染作用.     

SIAh2与Sprouty2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨SIAh2与Sprouty2在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况及二者的相关性。方法:通过免疫组化方法检测51例肝癌组织、33例癌旁组织(取距癌灶2 cm的组织)及16例正常肝组织中SIAh2及Sprouty2的表达。结果:SIAh2在HCC中的表达阳性率高于癌旁组织及正常肝组织,且癌旁组织表达阳性率高于正常肝组织,而Sprouty2在HCC中的表达阳性率低于癌旁组织及正常肝组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。SIAh2及Sprouty2在HCC中表达的阳性率与肿瘤分化程度及肿瘤大小呈负相关(P<0.05)。结论:SIAh2在HCC中高表达,而Sprouty2在HCC中低表达,二者呈负相关,SIAh2及Sprouty2可能影响HCC的发生、发展。     

S-期相关蛋白2与肿瘤关系研究进展

目的研究S-期相关蛋白2(S-phase kinase associated protein2,Skp2)与肿瘤关系研究进展。方法检索国内外相关文献,综述Skp2的生物学功能及其在细胞周期调控中的作用。结果Skp2不仅能够降解细胞周期调控因子,而且参与细胞周期的调控及细胞增殖。结论Skp2作为泛素蛋白酶体途径的底物识别序列,因能够泛素化降解细胞周期调控抑制因子p27及其它细胞周期调控因子参与细胞周期的调控。在许多肿瘤中都发现有Skp2表达的增高,而且其表达水平与肿瘤的预后、恶性进展都密切相关。     

Dickkopf家族在肝癌发生发展中的作用研究进展

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一,病毒感染和环境因素均可以导致肝癌。目前关于HCC的研究已有许多,但是其发展的具体分子机制仍不清楚。Wnt/β-catenin信号通路与肿瘤发生有着密切的关系,该通路的异常活化参与了包括肝癌等多种肿瘤的发病过程。Dickkopf（DKK）家族是Wnt信号通路的关键抑制剂,可以调节HCC的发生发展。此外,DKK在组织和血清中的表达对肿瘤也具有诊断和预后价值。本文对DKK家族成员在肝癌发生发展中的作用研究进展进行综述。     

Apaf-1通过wnt/β-catenin信号通路调控肝癌的机制研究

目的 研究Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中的作用及在肝癌细胞中的调控表达机制.方法 通过TOP-flash实验验证Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中调控作用机制;采用实时定量PCR方法检测各种肝癌细胞株(HepG2、H HCC、HB611)及正常肝细胞株(LO2)中Apaf-1基因的表达量;构建Apaf-1 RNA干扰质粒,转染到HepG2中并检测转染效率,检测相关基因及蛋白表达.结果 TOPflash实验发现Apaf-1可以抑制wnt/β-catenin信号通路,并且这种抑制作用具有剂量依赖效应;在肝癌细胞株中,Apaf-1表达量较正常肝细胞表达量降低,且在HepG2细胞株中表达量最低;在肝癌细胞株(HepG2)中RNA干扰Apaf-1基因,Apaf-1基因的的表达量显著降低,wnt信号通路下游基因及蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、wnt5a、STAT3、EGFR、APC)的表达量均显著性升高或降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Apaf-1基因通过wnt/β-catenin信号通路在肝癌细胞的生成过程中具有重要功能.