几种管家基因突变试验及其研究进展

某些基因能在所有细胞中表达和不断地被转录，并在维持细胞功能中起重要作用，有人称之为“维持基因”。这些基因出现于婴儿早期，并终生保留，因此又通称为管家基因（housekeeping gene）。管家基因的表达水平要高于其他基因的平均表达水平，其表达水平的几何均数为1200，而其他基因为150。目前已鉴定出的管家基因有数百个。管家基因排列紧密，其内含子、未翻译区和编码序列较短。     

硫化镍转化人细胞翻译启动因子的异常表达

目的探讨结晶型硫化镍(NiS)在诱发人支气管上皮细胞(16HBE)恶变过程中蛋白质翻译启动因子(TIF3)的异常表达，以阐明不容性硫化镍的人类分子致癌机制。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，以及敏感先进的荧光定量PCR方法，对异常表达的蛋白质翻译启动因子TIF进行检测。结果相对于非转化对照细胞，RT-PCR实验初步显示，这些镍转化细胞和成瘤细胞的TIF3基因表达水平显著升高，平均分别是对照细胞的2和4倍，表明TIF3的异常表达水平与硫化镍诱发人支气管上皮细胞的恶变程度有关。结论不容性结晶型硫化镍在诱发人支气管上皮细胞恶变过程中，存在明显的蛋白质翻译启动因子TIF3异常表达现象，其表达水平与细胞的恶变程度密切相关，可能是结晶型硫化镍诱发人细胞肿瘤的重要分子致癌机制之一。     

放射卫生

060398 电离辐射和丝裂霉素C诱导交叉适应性反应；060399 酵母TEL1基因对辐射诱发A-T细胞染色体畸变的影响；060400 不同辐射体核素诱发生殖细胞各发育期突变效应比较研究；060401 MTAP在人BEP2D细胞辐射致癌模型和肺癌中表达研究；060402 放射损伤小鼠骨髓组织中bFGF、VEGF的表达。     

腌制和发酵食品的致突变性研究

一些地区的特定食品与当地肿瘤发生有一定的联系。北京肿瘤所对胃癌高发区甘肃武威县民间习惯食用的家制酸菜及鱼露进行了致突变及致癌研究，从这类食品中检出8种致癌性亚硝胺，并在实验动物中诱发了胃腺癌。为了解浙江省的腌制和发酵食品的致突变性及与肿瘤发生的关系，对13种腌制和发酵食品进行抽样检测，并在基因突变水平上予以评价。现将结果报告如下。     

氯化镉诱发人支气管上皮细胞恶性转化中hMSH2基因表达和序列的变化

目的 观察氯化镉(CdCl2)诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中human MutS homologue 2(hMSH2)基因mRNA和蛋白动态变化的规律及其序列突变情况,进一步探讨CdCl2的致癌机制.方法 用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP)法检测16HBE细胞、CdCl2恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5、15、35代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因mRNA和蛋白的表达情况;并测序分析hMSH2基因第6、7、8、9、12外显子的序列情况.结果 随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA和蛋白的表达水平逐渐降低,到第35代细胞后表达明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).hMSH2基因第8外显子在第1、2、7位点上均出现胸腺嘧啶T缺失,第9外显子在第20、182位点出现腺嘌呤A缺失,第12外显子在241位点上出现腺嘌呤A插入,所有的突变均为移码突变.结论 CdCl2的分子致癌机制可能与hMSH2基因的下调和突变有关.     

非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平间的关联

目的:探讨EGFR基因发生突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者对铂类药物响应率较高的原因。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测50例NSCLC患者福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)样本EGFR基因突变以及ERCC1基因表达水平。结果:12/50(24.0%)的NSCLC患者癌组织中检测出EGFR基因激活突变,且在女性、腺癌、无吸烟史患者中的突变比例较高,分别为33.3%、28.1%、39.1%;未检测到耐药突变。ERCC1表达量的中位值为42.9(范围为7.5～124.8)。EGFR基因发生突变患者的癌组织中ERCC1基因表达水平显著低于EGFR基因为野生型的患者(P<0.01),但ERCC1基因表达水平在不同类型EGFR基因突变患者间无显著性差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者癌组织中EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平之间的关系,可能是EGFR基因突变患者对铂类药物化疗响应率较高的原因之一。     

多核细胞法和Brdurd法检测辐射诱发体细胞HPRT基因突变的比较研究

目的　研究放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因位点突变及其剂量 -效应关系 ,比较不同方法对HPRT基因位点突变的检出率。方法　给大鼠尾静脉注射晚期混合裂变产物后不同时间心脏穿刺取血。用多核细胞法和Brdurd法分别检测HPRT基因突变细胞 ,计算突变率 ,拟合出辐射诱发HPRT基因位点突变的剂量 -效应关系函数。结果　用多核细胞法检测的放射性核素内照射诱发HPRT基因位点突变率 (y ,‰ )和剂量 (D ,cSv)相关函数为y =1 14 98+0 1199lnD,r =0 970 6 ;用Brdurd法检测的相关函数为 y =6 5 310× 10 -2 +3 4 5 4 2× 10 -3 D ,r =0 984 6。多核细胞法检测HPRT基因位点突变检出率比Brdurd法高 11～ 17倍之多。结论　体细胞HPRT基因对电离辐射敏感 ,有可能作为辐射生物剂量计。多核细胞法对HPRT基因突变检出率高于Brdurd法     

松花江四方台水源地水体有机提取物致癌活性的实验研究

目的 研究松花江有机提取物对体外细胞的致癌活性,探讨水体有机污染物的致癌机制。方法 采用松花江水样120L的乙醚提取物进行体外细胞转化实验和单细胞凝胶电泳（SCGE）实验,同时用免疫组化检测和抑癌基因p53、p16和p21的表达情况及用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果 江水有机提取物可以诱发BALB/C胚胎成纤维细胞恶性转化和细胞DNA损伤;诱发转化之后的细胞中p53、p21和p16的表达缺失,转化细胞凋亡率降低。结论 松花江水有机提取物具有潜在致癌性。     

hprt基因突变分析技术及其在辐射生物学中的应用

随着核能、核科学技术的广泛应用，人们越来越关注来自电离辐射的可能危害。而这些危害所引起的临床症状要在多年后才能出现。因此，需要建立和发展基因损伤的生物标记物来监测人们接受电离辐射情况并分析疾病。在分析和定量体细胞基因突变增高的方法中，应用最广泛的是TG（6-thioguanineresistance）分析，用于检测体细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypox－anthine-guaninephosphoribosyltransferase，简称hprt）基因位点的突变。这个位点突变作为生物标记物有几个优点：①细胞对hprt酶活性不是必需，因此可发生的突变类型是无限制的…     

大肠癌患者外周血CK20表达及p53基因突变的研究

目的建立高效、快速的外周血中细胞角蛋白20(Cytokeratin 20，CZK20)表达的检测方法，探讨大肠癌患者外周血中CK20的表达与微转移的关系，研究大肠癌与p53基因突变的关系。方法运用荧光监测技术结合RT—PCR，检测36例大肠癌患者术前和术后不同时间外周血中的CK20的表达。用SSCP技术对大肠癌患者进行p53基因的突变检测。结果36例患者的外周血中检出CK20表达的有27例，阳性率为75％，手术后24h患者外周血中检出CK20表达的有30例，阳性率为83.3％，术后早期化疗结束后仅13例为阳性，阳性率为36％。36例患者的p53基因的SSCP突变检测中未检测到突变。结论运用荧光PCR技术检测外周血中CK20的表达可以监测癌症微转移的发生，简便快速，检出率高。     

二羟环氧苯并芘诱发细胞恶变后基因和蛋白表达差异分析

目的研究苯并(a)芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的基因和蛋白表达的改变,探讨苯并(a)芘致癌的分子机制.方法应用含4096条人类全长基因的cDNA芯片检测反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因表达谱的变化;应用二维凝胶电泳技术和相应软件ImageMaster2D 3.10分析反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点.结果BPDE诱发的恶性转化细胞与阴性对照细胞比较,cDNA芯片结果显示差异表达基因有143条,其中52条基因在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达增高,91条基因在恶性转化细胞中表达降低;二维凝胶电泳显示有72个蛋白斑点出现表达差异,其中44个蛋白斑点在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达升高,28个蛋白斑点在恶性转化细胞中表达降低,对其中7个表达明显差异的蛋白斑点的鉴定显示,原癌基因v-erbb2同源3、锌指蛋白127、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、KIAA0471蛋白在恶性转化细胞中高表达,而钙结合蛋白5、锌指蛋白Aiolos、Kelch样蛋白3在恶性转化细胞中低表达.结论反式-BPDE诱发16HBE恶性转化的基因表达谱和蛋白表达谱发生了显著的变化,这些表达改变的基因和蛋白可能参与了BPDE诱发细胞恶变的过程.     

X射线工作者体细胞HPRT基因位点突变频率的测定与分析

采用多核细胞法检测了３０例Ｘ线工作者的体细胞ＨＰＲＴ基因突变频率，并根据Ｘ线诱发的人体细胞ＨＰＲＴ基因位点突变剂量效应刻度曲线，推算了受照者的累积剂量和年剂量当量，对其工龄与突变率的关系等进行了分析。     

错配修复基因在氯化镉致16HBE细胞转化中作用

目的 探讨氯化镉诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中错配修复基因hMSH2和hMLH1的mRNA和蛋白动态变化情况.方法 用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5,15,35代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因和hMLH1基因的mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,至第35代细胞后表达明显下降(P<0.01);而hMLH1基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中无明显变化差异(P>0.05).结论 错配修复基因hMSH2表达水平的下调可能是镉化物分子致癌的重要机制.     

氯化镉诱发人支气管上皮细胞恶性转化中hMSH2基因mRNA表达变化

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化过程中hMSH2基因mRNA动态变化的规律。方法用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)技术检测16HBE、氯化镉恶性转化16HBE系不同阶段(第5、15、32代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因mRNA的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA的表达逐渐降低,到第32代细胞后表达明显下降(P<0.01)。结论氯化镉诱发16HBE系恶性转化过程中hMSH2基因表达逐渐下降,hMSH2基因水平的改变可能是氯化镉的致癌机制之一。     

乙型肝炎病毒与肝细胞癌关系研究进展 鲍曼不动杆菌感染暴发的流行病学调查

[摘要]　HBV是一种诱发急、慢性乙型肝炎的DNA病毒，HBV感染是引起肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）的主要原因之一。HBV诱发HCC是一个多因素、多阶段的过程，包括HBV DNA整合到宿主基因中、HBV基因组突变和病毒调节蛋白HBx异常表达等分子机制，异常免疫攻击介导慢性肝损害的免疫机制和DNA甲基化等表观遗传相关机制以及细胞自噬。本文将对近年来HBV诱发HCC的各种机制的研究进展进行综述。     

二羟环氧苯并芘对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响

目的 探讨环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响.方法利用RT-PCR和Western blot方法,分别检测N-Ras基因在经BPDE恶性转化细胞中mRNA和蛋白表达水平的变化.利用免疫细胞化学方法检测N-Ras基因在经BPDE恶性转化细胞中定位和蛋白表达量的变化.结果 RT-PCR和Western blot实验表明,BPDE恶性转化细胞N-Ras基因的mRNA和蛋白水平分别是正常细胞的3.616和1.600倍.免疫细胞化学实验显示,在BPDE恶性转化细胞和正常细胞中,N-Ras基因在细胞膜和细胞浆中均有表达,且两者相比,前者中的N-Ras蛋白表达明显强于后者.结论 N-Ras基因可能在BPDE的致癌机制中起着重要作用.     

苯并[a]芘对小鼠肺细胞的DNA损伤

苯并[a]芘(benzo[a]pyrene，BaP)是一种广泛存在于环境中的多环芳烃类(PAHs)化合物，是目前公认的人类致癌物。动物实验证明苯并[a]眈可诱发肝癌、肺癌。流行病学调查也表明，接触较高浓度苯并[a]芘的钢铁厂炼焦车间工人肺癌患病率明显增高。IMP可诱发人肺癌细胞系p53蛋白异常高表达．DNA序列发生G→T突变；p21癌蛋白高表达，K-ran基因mRNA水平增高．并出现G→T突变，二者可能协同参与BaP致癌过程。     

张家港市新生儿常见耳聋基因突变特点分析

目的了解张家港市新生儿耳聋基因的流行病学特征,探讨新生儿遗传性耳聋基因筛查对降低该地区耳聋发生的指导意义。方法收集2017年8月-2018年6月张家港地区出生的新生儿,采集其足跟血进行4个耳聋基因15个突变热点检测,并采用Sanger测序法对听力诊断异常但基因筛查结果为通过或携带GJB2与SLC26A单/多杂合突变的新生儿血液样本进行GJB2全外显子检测。结果 6 800例新生儿中,检出携带耳聋基因突变357例,总携带率为5. 250%,7例为复合杂合突变,其中GJB2基因杂合突变174例(2. 559%),SLC26A基因杂合突变126例(1. 853%),线粒体DNA 12SrRNA基因突变32例(0. 471%),GJB3杂合突变18例(0. 265%)。22例听力诊断异常但基因筛查结果为通过或携带GJB2与SLC26A单/多杂合突变的新生儿中,9例携带GJB2:c. 109GA突变,突变率为40. 910%。结论张家港地区新生儿常见耳聋基因突变以GJB2基因突变和SLC26A4基因突变为主,药物性耳聋基因(线粒体DNA 12SrRNA)突变携带率较高。通过新生儿耳聋基因筛查不仅能够从分子水平发现可能出现听力损伤的高危新生儿,还能了解当地的耳聋基因突变特点,对制定有针对性的耳聋预防和干预措施提供参考。     

表皮生长因子受体基因突变检测方法及质量评价

表皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸激酶受体,它介导的信号转导途径调节细胞的生长、增殖和分化。EGFR基因突变的检测能为肿瘤靶向治疗提供依据。EGFR突变有多种检测方法,如何评价这些方法,规范产品,提升产品质量,保障临床检测质量,更好地为临床服务,是检测机构对试剂质量检测和考核的目标。本文就EGFR基因突变检测方法以及质量评价要点进行简要阐述。     

乙基亚硝基脲对人白血病细胞HPRT基因的影响

目的 探讨乙基亚硝基脲(ENU）诱导人次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因突变的分子图谱和发生机制。方法 采用单细胞克隆培养、双向筛选计数、多重聚合酶链反应扩增和电泳分析等方法。结果 随着ENU剂量的增加,细胞接种存活率非常显著下降(100～200μg/ml剂量组)、突变频率显著升高（12．5～200．0μg/ml剂量组)。自发突变没有全部基因外显子缺失型,只有7．7％检测出单个外显子缺失;而ENU诱发突变中却有79．7％显示缺失改变,其中缺失突变可以发生于：HPRT基因的每个外显子,且诱发突变中大多数是多个外显子连锁缺失(88．1％)。结论 ENU诱发：HPRT基因突变图谱与自发突变完全不同,易诱发较大遗传结构改变,提示其具有较强的致突变作用。