雷公藤对豚鼠表皮c-fos基因表达及表皮再生能力的调节

目的:观察雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达的影响,探讨雷公藤甲素的有效作用浓度。方法:实验于2004-01/08在泸州医学院组织学与胚胎学实验室进行。将20只雄性豚鼠随机分成为4个实验组,分别为对照组、雷公藤甲素5mg/L组、雷公藤甲素10mg/L组和雷公藤甲素20mg/L组,每组5只。使用雷公藤甲素5,10,20mg/L3种浓度对局部皮肤真皮注射处理,免疫组织化学方法显示c-fos阳性细胞,用光学显微镜和图像分析仪对结果进行观察和分析。结果:20只豚鼠均进入结果分析。与对照组比较,雷公藤甲素5,10,20mg/L组豚鼠表皮角质细胞c-fos表达明显增强(149,162,144,87个/视野,P<0.05),吸光度明显增高(0.142±0.025,0.157±0.066,0.159±0.079,0.107±0.076,P<0.05)。不同浓度药物之间作用差异无显著性意义(P>0.05)。结论:雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达具有调节作用,其有效作用浓度范围较实验采用的5～20mg/L大。     

脊髓后角神经元蛋白激酶C活化与哮喘及地塞米松的关系

目的：探讨蛋白激酶C在哮喘豚鼠C7-T5段脊髓后角的表达及地塞米松的抑制作用。方法：实验于2003—03／06在中国医科大学神经生物实验室进行，健康白色豚鼠40只，随机分为4组：①生理盐水组8只，腹腔注射生理盐水1mL，10d后雾化吸入生理盐水，隔日1次，共20d。②单纯致敏组8只，腹腔注射100g／L卵蛋白(含等量氢氧化铝凝胶)1mL，10d后雾化吸入生理盐水，隔日1次，共20d。③哮喘组12只，腹腔注射100g／L卵蛋白(含等量氢氧化铝凝胶)1mL，10d后雾化吸入10g／L卵蛋白溶液(不含氢氧化铝凝胶)，隔日1次，共20d。④地塞米松组12只，操作同哮喘组，从激发哮喘后第6天起，每天于哮喘后腹腔注射地塞米松【2mg／(kg&;#183;d)】，1次／d，共5次。利用免疫组织化学和免疫蛋白印迹观察哮喘豚鼠C7～T5段脊髓后角蛋白激酶C(参与支气管平滑肌增殖)蛋白变化。结果：40只豚鼠均进入结果分析。C7～T5段脊髓后角蛋白激酶C的表达变化：生理盐水组与单纯致敏组豚鼠表达基本相近(0．113&;#177;0．009，0．116&;#177;0．007，t=1．554，P&;gt;0．05)；哮喘组豚鼠表达比生理盐水组明显上调(0．176&;#177;0．010，t=23．033，P&;lt;0．01)，地塞米松组表达则明显低于哮喘组(0．128&;#177;0．009，t=17．359，P&;lt;0．05)。结论：哮喘豚鼠内脏感觉传入部位C7～T5段脊髓后角蛋白激酶C呈过表达，应用地塞米松可抑制蛋白激酶C表达的增加。此结果进一步揭示了哮喘发病过程中有神经免疫机制的参与。     

大黄素次酸对皮肤黑素细胞一氧化氮合酶的调控作用及意义

背景：在影响黑素细胞功能的诸多信号介导途径中，一氧化氮被认为是一种极为重要的信号分子。大黄有效成分大黄素次酸可以影响黑素细胞的增殖及调节细胞中酪氨酸酶的活性。 目的：观察大黄有效成分大黄紊次酸对豚鼠皮肤黑紊细胞的一氧化氮合酶表达的影响，以期确定大黄在活体皮肤中对黑素细胞的黑素合成的有效作用浓度和作用机制。 设计：完全随机分组设计，对照实验。 单位：泸州医学院附属医院皮肤科。 材料：实验于2004-01／06在泸州医学院附属医院传染科实验室和泸州医学院组织学与胚胎学实验室完成。选用成年健康雄性封闭群豚鼠24只。随机将豚鼠分为6组：对照组，大黄素次酸2，5，10，20，40mg／L组，每组4只。 方法：①将大黄素次酸用二甲基亚砜溶解稀释为2，5，10，20，40mg／L，分别对大黄素次酸（中国生物医学制品检定所提供，该药品为实验室提取的白色粉末纯品）2，5，10，20，40mg／L组豚鼠臀部、背部两处局部皮肤进行相应质量浓度皮下注射处理，注射量均为1mL。24b后对其中一处皮肤加注1mL相同浓度大黄素次酸一次。48h后取材，常规石蜡切片（取对照组及大黄素次酸组未注射药物处皮肤作实验对照组）。②免疫组织化学方法法显示一氧化氮合酶的表达，用光学显微镜在高倍镜下观察，识别黑素细胞，观察细胞胞质的染色及特点。用MLAS-1000图像分析仪，每组随机选择5张切片，每张切片检测20个细胞，由计算机处理系统计算出各组黑素细胞胞质中阳性免疫产物的平均吸光度（A值）。③计量资料差异比较采用方差分析，并且用SNK-q进行组间比较。 主要观察指标：免疫组织化学方法显示黑素细胞内一氧化氮合酶的表达，用光学显微镜和图像分析仪获得实验结果。 结果：黑素细胞胞质中阳性免疫产物的平均A值：大黄素次酸2，5，10，20．40mg／L组明显低于实验对照组（0．126&;#177;0.118，0．103&;#177;0．082，0．118&;#177;0．097．0．122&;#177;0．095．0．112&;#177;0．078，0．196&;#177;0．066，P〈0．05）；大黄素次酸各质量浓度组间差异不明显（P〉0．05）。 结论：①大黄素次酸对黑色素细胞一氧化氮合酶的表达具有凋节作用，提示大黄对黑素细胞的调节通过一氧化氮信号传导通路。②大黄素次酸在240mg／L的质量浓度内，一氧化氮合酶的表达不随大黄素次酸的质量浓度改变而发生变化。     

穴位敷贴对支气管哮喘豚鼠肿瘤坏死因子及白细胞介素2的影响——空白对照与标准对照

目的：观察中药穴位敷贴对实验性哮喘豚鼠血清中哮喘相关细胞因子肿瘤坏死因子及白细胞介素2的影响，并与地塞米松的作用效应相比较。方法：实验于2004—05／06在广州中医药大学动物实验中心完成。选用健康Hartly豚鼠60只，随机分为4组，每组各15只。采用卵蛋白致敏制作豚鼠支气管哮喘模型，用中药穴位敷贴治疗（穴位敷贴组）与地塞米松组（标准对照）及模型组（空白对照）和正常对照组比较。①穴位敷贴组于造模成功，哮喘发作次日开始治疗。治疗穴位选择大椎、肺俞、肾俞。用大块胶布将药物敷贴固定于穴位处。每次敷药6h，隔日治疗1次，共治疗7次。②地塞米松组采用腹腔注射地塞米松0．5mg／kg，治疗时间与次数同敷贴组。③模型组造模成功后令其自然恢复。正常对照组不造模，不给予任何治疗。④各组动物治疗结束后血清肿瘤坏死因子和白细胞介素2水平的检测采用放射免疫分析法。结果：在造模及治疗阶段模型组死亡4只、穴位敷贴组死亡3只，地塞米松组死亡2只，正常对照组死亡2只。每组取10只共40只进入结果分析。①模型组豚鼠血清肿瘤坏死因子、白细饱介素2水平均高于正常对照组[（0．707&;#177;0．113），（0．377&;#177;0．134）mg／L；（1．552&;#177;0．315），（0．790&;#177;0．311）mg／L，P〈0．05]。②穴位敷贴组和地塞米松组血清肿瘤坏死因子、白细胞介素2水平明显低于模型组[（0．445&;#177;0．195），（0．330&;#177;0．132），（0．707&;#177;0．113）mg／L；（1．033&;#177;0．541），（0．971&;#177;0．502）。（1．552&;#177;0．315）mg／L，P分别小于0．05和0．01]。③穴位敷贴组和地塞米松组肿瘤坏死因子、白细胞介素2水平差异不显著[（0．445&;#177;0．195），（0．330&;#177;0．132）mg／L；（1．033&;#177;0．541），（0．971&;#177;0．502）mg／L，P〉0．05]。结论：穴位敷贴与地塞米松均可降低血清肿瘤坏死因子、白细胞介素2水平，但差异不显著，说明穴位敷贴与地塞米松的标准作用一致。穴位敷贴治疗哮喘可能是通过降低血清肿瘤坏死因子、白细胞介素暑水平这些炎症因子而发挥起效应。     

丹参酮ⅡA对心肌细胞肥大的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及原癌基因c-fos mRNA表达的影响。 方法：实验于2005—09／12在十堰市人民医院临床研究所完成。①将100只出生后1周内乳鼠心肌细胞原代培养24h后，按随机数字表法分为6组：对照组：心肌细胞培养液中未加入任何药物；血管紧张素Ⅱ组：心肌细胞培养液中加入1&;#215;10^-6mol／L血管紧张素Ⅱ；血管紧张素Ⅱ＋丹参酮ⅡA组：心肌细胞培养液中预先加入1&;#215;10^-6mol／L丹参酮ⅡA作用30min后，再加入1&;#215;10^-6mol／L血管紧张素Ⅱ（中国药品生物制品检定所提供，批号0766—200010）；血管紧张素Ⅱ＋缬沙坦组：心肌细胞培养液中预先加入1&;#215;10^-6mol／L缬沙坦后，再加入1&;#215;10^-6mol／L血管紧张素Ⅱ；丹参酮ⅡA组：心肌细胞培养液中加入1&;#215;10^-5mol／L丹参酮ⅡA；缬沙坦组：心肌细胞培养液中加入1&;#215;10^-6mol／L缬沙坦。所有实验均重复3次。②持续加药作用7d后采用流式细胞仪检测心肌细胞总蛋白含量。采用^3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率。采用反转录聚合酶链式反应检测心肌细胞原癌基因c-fos mRNA表达。③计量资料差异比较采用单因素方差分析。 结果：①血管紧张素Ⅱ可以使心肌细胞蛋白总量增多（P〈0．01），预先加入丹参酮ⅡA或缬沙坦作用30min，可阻断血管紧张素Ⅱ的作用（P〈0．01）。②血管紧张素Ⅱ作用24h后，血管紧张素Ⅱ组心肌细胞合成速率明显高于对照组[（1900&;#177;97），（1205&;#177;75）min^-1，P〈0．01]，丹参酮ⅡA和缬沙坦本身对心肌细胞蛋白质的合成没有影响，但能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞蛋白质合成速率的增加（P〈0．01）。③在培养液中加入血管紧张素Ⅱ作用30min后，c-fos mRNA的表达显著增强（P〈0．01），预先加入丹参酮ⅡA或缬沙坦作用30min，可阻断血管紧张素Ⅱ的作用（P〈0．01），而丹参酮ⅡA和缬沙坦本身对原癌基因c-fos mRNA的表达无影响。 结论：丹参酮ⅡA可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大，这与其抑制了原癌基因c-fos的表达有关。     

汉防己甲素预防椎板切除术后硬膜外粘连

目的：观察汉防己甲素对预防椎板切除术后硬膜周围瘢痕粘连的作用。方法：实验于2005—08／10在贵阳医学院动物实验中心完成动物实验，光镜观察完成于贵州省人民医院病理科，电镜观察在贵州师范大学电镜中心完成。①30g/L汉防己甲素制备：用0．1mol／L的HCl30mL将3．0g980g／L汉防己甲素（杭州中香化学有限公司）充分溶解，再以0．1mol／L的NaOH反滴定至pH值5．5，最后以生理盐水（pH=5．5）定容至100mL，4℃保存备用。②40只成年大白兔采用随机数字法分为4组，每组10只。将兔行L3节段椎板切除术，形成一处10mm&;#215;5mm的硬脊膜裸露区。生理盐水组：予0．5mL生理盐水覆盖；明胶海绵组：予明胶海绵覆盖；汉防己甲素组：予0．5mL汉防己甲素覆盖；汉防己甲素＋明胶海绵组：予浸湿汉防己甲素的明胶海绵覆盖。③术后2，4，8周取材作大体、光镜、透射电镜观察；8周行硬膜外粘连分级及计算机图像分析。结果：40只大白兔全部进入结果分析。①瘢痕生长情况：大体、光镜、电镜观察生理盐水组及明胶海绵组硬膜外瘢痕粘连日趋明显。汉防己甲素组及汉防己甲素＋明胶海绵组炎性细胞渗出较少，成纤维细胞较少，胶原纤维形成较少，硬膜外瘢痕无粘连。②瘢痕面积和粘连长度／硬膜周长比值测定：生理盐水组两项指标均大于汉防己甲素组、汉防己甲素＋明胶海绵组[（0.237&;#177;0．004），（0.087&;#177;0.004），（0.099&;#177;0．006）mm。；0．201&;#177;0．006，0．059&;#177;0．024，0．063&;#177;0．008；P〈0.01]；明胶海绵组上述两指标也大于汉防己甲素组、汉防己甲素＋明胶海绵组（P〈0．01）；而生理盐水组和明胶海绵组，汉防己甲素组和汉防己甲素＋明胶海绵组间则差异无显著性（P〉0．05）。结论：汉防己甲素可以有效地预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的形成。     

射干麻黄煎剂影响哮喘豚鼠外周血浆白细胞介素5，10的变化

目的：观察射干麻黄汤对哮喘豚鼠外周血浆促炎细胞因子白细胞介素5、抑炎细胞因子白细胞介素10生理性平衡的影响。方法：实验于2005-09／2006-02在广东药学院动物实验室完成。选取健康Hartley种雄性豚鼠70只，随机数字表法分成7组：正常对照组、哮喘模型对照组、激素治疗组、氨茶碱治疗组、中药0.16g／mL浓度组、中药0.32g／mL浓度组、中药0.64g／mL浓度组，10只／组。除正常对照组外，其余各组均建立哮喘动物模型。建模第22天，于每次卵蛋白溶液激发后1h灌胃给药，1次／d，连续7d，给药量均为23．25mL／kg。①正常对照组、哮喘模型对照组给予生理盐水治疗。②激素治疗组精确称取醋酸强的松片33．33mg，溶于100mL生理盐水中。③氨茶碱治疗组精确称取氨茶碱片100mg，溶于100mL生理盐水中。④中药配方：射干9g，麻黄12g，半夏12g，紫菀9g，款冬花9g，大枣12g，细辛9g，生姜12g，五味子12g。中药0．16g／mL浓度组生药用量为上述配方的1／2，中药0．32g／mL浓度组生药用量与上述配方相同，中药0．64g／mL浓度组生药用量为上述配方的1倍。各组生药分开煎制，按传统煎药方法制300mL中药煎剂，每毫升溶液含生药量分别为0．16g，0．32g，0．64g。⑤分别于建模第21，28天心脏穿刺取血，离心收集上清液，ELISA法检测各组豚鼠外周血白细胞介素5、白细胞介素10的浓度。结果：实验选取70只豚鼠均进入结果分析。治疗前后各组外周血白细胞介素5、白细胞介素10浓度的变化：①正常对照组、哮喘模型对照组外周血白细胞介素5、白细胞介素10的浓度治疗前后均基本相似（P〉0．05）。②激素治疗组、氨茶碱治疗组治疗后白细胞介素5浓度均明显低于治疗前[（130．21&;#177;19．43），（507．14&;#177;56．17）：（173．69&;#177;28．97），（507．60&;#177;51．29）ng／L；P均〈0．05]；但白细胞介素10浓度均与正常对照组基本相似（P〉0．05）。③中药0．16，0．32，0．64g／mL浓度组治疗后白细胞介素5浓度均低于治疗前[（265．61&;#177;42．55），（505．83&;#177;33．62）；（193．34&;#177;29．84），（506．66&;#177;51．29）；（166．30&;#177;36．44）．（505．91&;#177;66．16）ng/L；P均〈0．05]，但明显高于正常对照组（P〈0．05或0.01）；白细胞介素10浓度均高于治疗前（P〈0．05或0．01），但明显低于正常对照组、激素治疗组、氨茶碱治疗组（P〈0．05或0．01）。结论：中药射干麻黄汤能改善促炎／抑炎细胞因子失衡，从而起到抑制炎症、缓解气道高反应性的作用。     

阿司匹林对慢性心力衰竭患者凝血状态的干预作用

目的：了解慢性心力衰竭患者体内凝血状态的变化，并观察短期使用小剂量阿司匹林对其凝血状态的干预作用。方法：选择2004-01／2005-07安徽医科大学第一附属医院收治的60例慢性心力衰竭患者（心功能Ⅱ～Ⅳ级），随机分为标准抗心力衰竭组30例及阿司匹林组30例。标准抗心力衰竭组接受标准抗心衰治疗，包括血管紧张素转化酶抑制剂单用或加用利尿剂，合用地高辛0．125～0．25mg／d，心功能Ⅱ～Ⅲ级患者加用β-受体阻滞剂；阿司匹林组在标准抗心衰治疗基础上，加阿司匹林75～100mg／d。在进入试验第1天和治疗2周后采集血标本，分别测定血浆P-选择素、血浆血管性假性血友病因子、D-二聚体水平。以30例同期健康体检者为正常对照组。结果：90例受试者全部进入结果分析。①慢性心力衰竭患者血P-选择素、血管性假性血友病因子和D-二聚体水平明显高于正常对照组[（21．17&;#177;4．05），（16．78&;#177;3．26）g／L；（175．63&;#177;28．16）％，（125．78&;#177;24．95）％；（0．86&;#177;0．24），（0．51&;#177;0．15）mg／L，P均〈0．05]。②标准抗心力衰竭组治疗后P-选择素、血管性假性血友病因子和D-二聚体水平较治疗前均下降[（18.02&;#177;2.65），（21.45&;#177;3.97）g/L；（156.23&;#177;20．13）%，（175．23&;#177;25．6）%；（0．62&;#177;0．19），（0．87&;#177;0．21）mg／L；P均〈0．05]。③阿司匹林组治疗后P-选择素、血管性假性血友病因子和D-二聚体水平较治疗前也显著下降[（16．39&;#177;3．05），（20．87&;#177;4．06）g／L；（149．21&;#177;23．56）％，（176．01&;#177;28．12）％；（0．56&;#177;0．20）mg／L，（0．84&;#177;0．19）mg／L；P均〈0．05]。④标准抗心力衰竭组和阿司匹林组患者治疗前血P-选择素、血管性假性血友病因子和D-二聚体水平差异无显著性（P〉0．05）；治疗后阿司匹林组组各指标均低于标准抗心力衰竭组，但无统计学意义（P〉0．05）。结论：慢性心力衰竭患者体内存在高凝状态，有血栓形成的倾向，短期使用小剂量阿司匹林对心衰的凝血状态影响小，慢性心力衰竭患者阿司匹林使用的剂量及疗程有待于进一步研究。     

神经再生素对糖尿病大鼠周围神经病变的保护作用

目的：通过电生理学检测，探讨神经再生素对糖尿病大鼠周围神经病变的治疗作用，并与甲钴胺药物进行比较。方法：实验于2002—04／2003—05在南通医学院完成。选用健康的雄性SD大鼠38只。先取30只大鼠建立糖尿病模型，将模型制备成功的大鼠26只随机分为3组，甲钴胺治疗组8只：给予45斗g／kg甲钴胺；神经再生素治疗组8只：给予10mg／kg神经再生素；模型组10只：给予等体积的灭菌生理盐水。另取8只大鼠为对照组：给予等体积的灭菌生理盐水。每只大鼠每日腹腔注射1次，连续给药8周后检测坐骨神经感觉神经动作电位和腓肠肌复合肌肉动作电位。并分别记录其潜伏期、波幅和神经传导速度。结果：参加实验38只大鼠，其中有4只大鼠在造模时死亡，模型组在治疗过程中死亡2只，共有32只大鼠进入结果分析，每组8只。①各组大鼠坐骨神经感觉神经动作电位：神经再生素治疗组坐骨神经感觉神经动作电位波幅、神经传导速度明显高于糖尿病模型组[（598．63&;#177;15．22），（506．63&;#177;27．01）&;#168;V；（51．25&;#177;3．19），（37．37&;#177;3．07）m／s，〈0．01[。潜伏期明显低于糖尿病模型组f（1．16&;#177;0．05），（1．36&;#177;0．08）ms，P〈0．01]。神经再生素治疗组和甲钴胺治疗组各项指标较接近（P〉0．05）。②各组大鼠腓肠肌复合肌肉动作电位：神经再生素治疗组坐骨神经感觉神经动作电位波幅、神经传导速度明显高于糖尿病模型组[（16．87&;#177;1．55），（11．75&;#177;1．91）mV；（40．13&;#177;1．73），（33．13&;#177;1．13）m／s，〈0．011。潜伏期明显低于糖尿病模型组[（1．44&;#177;0．07），（1．93&;#177;0．18）ms，〈0．01]。神经再生素治疗组和甲钴胺治疗组各项指标较接近（P〉0．05）。结论：①神经再生素能提高链脲佐菌素糖尿病大鼠的神经传导速度，能有效保护糖尿病周围神经病变的神经纤维的损害功能，尤其对糖尿病周围神经病变的感觉神经的保护作用更为明显。②神经再生素治疗组动作电位的潜伏期、波幅以及传导速度与甲钴胺治疗组十分接近。     

氯胺酮对甲醛溶液致炎小鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ和α表达的影响

目的：观察氯胺酮对甲醛溶液致炎小鼠疼痛行为学的影响以及脊髓背角蛋白激酶Cγ和α表达的变化。 方法：实验于2005-01／04在华中科技大学同济医学院附属同济医院进行。将成年健康昆明种小鼠25只随机分为正常组，盐水注射组，甲醛溶液组，甲醛溶液＋20mg／kg氯胺酮组，甲醛溶液＋40mg／kg氯胺酮组，后3组小鼠分别于右后足底注射体积分数为0．05的甲醛溶液100μL制成急性炎性痛模型，甲醛溶液＋20mg／kg氯胺酮组，甲醛溶液＋40mg／kg氯胺酮组小鼠再立即分别经腹腔注射20mg／kg或40mg／kg的氯胺酮，观察甲醛溶液注射后第一时相（0～5min）和第二时相（15～60min）各组大鼠摔腿，舔足等疼痛行为学变化，2h后处死小鼠，心内灌注固定，免疫组化方法检测各组小鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ和α表达。 结果：参加实验25只小鼠，灌注前意外死亡小鼠3只，随机补充3只，进入数据分析小鼠仍为25只。①甲醛溶液注射后1h内小鼠均出现明显的摔腿、舔足，跛行、致炎足不能着地等疼痛行为学改变，注射足呈高度肿胀。盐水注射组无任何异常行为学变化，20mg／kg氯胺酮注射后甲醛溶液致炎后第一时相和第二时相的疼痛行为学反应次数明显少于甲醛溶液组，差异具有极显著性（12&;#177;3．5，123&;#177;4．5；20&;#177;2．5，80&;#177;2．5，P〈0．01）；而40mg／kg氯胺酮注射组可使小鼠翻正反射消失，并使小鼠疼痛行为学反应完全抑制。②正常组和盐水注射组脊髓背角的蛋白激酶Cγ和α的表达量极低，蛋白激酶Cγ主要局限于脊髓背角的Ⅱ层内侧，蛋白激酶Cα的表达主要位于脊髓背角的Ⅰ～Ⅱ层，甲醛溶液组蛋白激酶Cγ和α的表达明显高于正常组和盐水注射组（蛋白激酶Cγ：0．5740&;#177;0．0128，0．4345&;#177;0．0172，0．4323&;#177;0．0148；蛋白激酶Cα：0．5541&;#177;0．0151，0．4325&;#177;0．0143，0．4323&;#177;0．0151，P均〈0．001），而20mg／kg氯胺酮组脊髓背角蛋白激酶Cγ和α的表达（0．4834&;#177;0．0137，0．4722&;#177;0．0139）明显低于甲醛溶液组（P〈0．01），40mg／kg氯胺酮组脊髓背角蛋白激酶Cγ和α的表达（0．4341&;#177;0．0146，0．4331&;#177;0．0143）明显低于20mg／kg氯胺酮组（P〈0．05）。 结论：在急性甲醛溶液炎性疼痛时，腹腔内注射氯胺酮在完全阻断小鼠疼痛行为学的同时，可减少脊髓背角蛋白激酶Cγ和α的表达。     

Durable and stratum-specific gene expression in epidermis

A number of genetic disorders are manifested in cutaneous epithelium and gene therapy approaches for treatment of such diseases are being considered. A successful gene therapy protocol requires durable and correctly targeted gene expression within the tissue. The continuous renewal and high levels of compartmentalization in epidermis are two challenges for a successful gene therapy of skin disorders. For those disorders which affect the upper layers of epidermis, vectors must be available that target stem cells, but remain silent until the progeny of these cells undergo differentiation. To explore the potential of long-term and targeted vector expression in epidermis, a hybrid retroviral vector encoding the reporter enhanced green fluorescent protein (EGFP) was constructed. The viral enhancer in the long terminal repeat of the vector was replaced with a 510-bp enhancer element of the human involucrin promoter. Keratinocyte-specific expression directed by the hybrid vector was demonstrated in culture and suprabasal-specific expression was observed in organotypic human epidermal cultures. In vivo transduction of mouse skin with this hybrid vector indicated long-term and stratum-specific expression of the transgene in mouse epidermis. The design of similar vectors for various gene therapy applications constitutes an important step toward clinically effective gene therapy.     

The calmodulin content of the epidermis in psoriasis

The calmodulin content of epidermis was determined by assay of biologically active and radioimmunoassayable calmodulin in epidermal biopsy samples of 16 normal control subjects and 36 patients with psoriasis. Calmodulin levels in the involved epidermis of patients with psoriasis were significantly greater than in epidermis of control subjects, with both methods of calmodulin measurement. Levels of calmodulin in the uninvolved epidermis were also elevated but to a lesser degree, achieving statistical significance only when measured by radioimmunoassay. However, the degree of correlation between the two measurements of calmodulin was poor for the patient samples, suggesting that each may measure a different form of calmodulin. The specificity of the elevated calmodulin in psoriatic epidermis was investigated by measuring calmodulin in another unrelated tissue. Calmodulin activity in circulating peripheral blood lymphocytes of seven patients with psoriasis was similar to that found in the lymphocytes of ten normal volunteers. The relationship between calmodulin and the hyperproliferative state of the psoriatic epidermis was investigated. No significant increase in calmodulin activity was found after mitogen stimulation of lymphocyte proliferation or after Sellotape-stripping of the epidermis by a protocol which has been shown to cause hyperproliferation of the epidermis.     

Ultrasound-induced intercellular space widening in fish epidermis

Transmission electron microscopy was employed to determine the effects of therapeutic ultrasound (US) (I(sata) < or =2.2 W cm(-2), 3 MHz), sonicated at different angles and durations, on the external epithelia of fish skin. Sonication at 1.7 W cm(-2) (90 s), where the ultrasonic beam was perpendicular to the skin surface, produced minor intercellular space widening (ICSW), as well as the disruption of desmosomes connecting between the cells. Increasing the intensity to 2.2 W cm(-2) increased ICSW, the extent of which was positively correlated to the duration of exposure (30 to 90 s). Perpendicular sonication produced ICSW, almost exclusively between cells of the two outermost cell layers, parallel to the skin surface. Sonicating at 45 degrees (2.2 W cm(-2), 90 s) produced ICSW in deeper cell layers in the tissues, in which the spaces were at seemingly random orientations. Mucous cells and macrophages were also found to be damaged, as were apoptotic epidermal cells. The suggested mechanism for ICSW is the formation of transverse (shear) waves at the interface between the aquatic medium and the skin surface. The waves, which are damped out within a few cell layers, give rise to shear stresses that, in turn, cause strains that act to separate between cells and damage some of the relatively weaker cells.     

The role of allogeneic epidermis in murine graft rejection

Skin equivalents containing allogeneic fibroblasts in a collagen matrix and overlaid with isologous epidermal cells have been successfully grafted to rodents. By contrast, skin equivalents containing isologous fibroblasts and allogeneic epidermal cells provoke a strong rejection response, characterized by the infiltration of mononuclear cells into the epidermis at 1 week and occlusion of the microvasculature and destruction of the epidermis by lymphocytes 2 weeks after grafting. Based on these findings, skin equivalents containing allogeneic fibroblasts could be used in the treatment of burn injuries, but the epidermis should be obtained from the patient.     

Quantitative studies on sunburn cell formation in mouse epidermis

Sunburn cell (SC) formation induced by single or combined doses of monochromatic ultraviolet-A (UV-A), ultraviolet-B (UV-B) and ultraviolet-C (UV-C) was studied quantitatively using mouse epidermal sheet preparations (NaBr split, H & E stain). Results were as follows: 1) Action spectra for SC formation showed that wavelengths shorter than 300 nm were most effective. 2) A significant number of SCs was produced when a high dose of UV-A (360 nm) was administered, and it was estimated that approximately 600 times more UV-A (360 nm) energy was required to produce the same number of SCs as was required with UV-B (300 nm). 3) SC formation by UV-B (300 nm) and UV-C (260 nm) showed a logarithm-like dose-response relationship. 4) Time course studies showed that the maximum number of SCs was attained at 18 hr after UV-C (260 nm) irradiation, at 24 hr after UV-B (300 nm) irradiation and at 30 hr after UV-A (360 nm) irradiation. 5) A high dose of UV-A (360 nm) significantly increased the number of SCs induced by UV-B (300 nm) or UV-C (260 nm) when combined with them.