c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线。结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05)。存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P>0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别<0.05、<0.05、<0.01)。结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关。     

肺癌细胞株c-erbB-2基因与放疗抵抗的相关关系

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线.结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05).存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株D0值依次为1.18 Gy±0.05 Gy、1.67 Gy±0.13Gy和1.50 Gy±0.26Gy,细胞株间差异无统计学意义(F=0.287,P0.05),Dq值分别为3.98 Gy±0.03Gy、2.43 Gy±0.47Gy和1.32 Gy±0.08 Gy(F=61.670,P<0.05),其中CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株之间差异有统计学意义(P分别为<0.05、<0.05、<0.01).结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;三种细胞株中,CALU-3对?射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关.     

PHF1基因在不同类型非小细胞肺癌中的表达水平及其生物学功能

目的分析人植物同源结构域指蛋白1(PHF1)基因在不同类型非小细胞肺癌中的表达水平及其生物学功能,为非小细胞肺癌诊治提供更好方案。方法采用实时荧光定量PCR检测非小细胞鳞癌/腺癌组织及鳞癌细胞株(NCI-H520)/腺癌细胞株(A549)中PHF1 mRNA表达水平。设计并构建PHF1低表达和PHF1过表达重组慢病毒载体,将其分别转染NCI-H520细胞和A549细胞,同时验证其转染效果。采用CCK8法、Transwell实验和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。结果与癌旁正常组织比较,PHF1 mRNA在非小细胞鳞癌组织中明显增高,在非小细胞腺癌组织中明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);与腺癌细胞A549比较,鳞癌细胞NCIH520 PHF1 mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。第1天,鳞癌细胞NCI-H520和腺癌细胞A549四组细胞增殖、侵袭及凋亡率比较差异均无统计学意义(P0.05);从第3天开始,鳞癌细胞NCI-H520和腺癌细胞A549四组细胞增殖、侵袭及凋亡率比较差异有统计学意义(P0.05),其中在增殖和侵袭方面:NCI-H520表现为PHF1过表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1低表达组,而在A549表现为PHF1低表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1过表达组;在凋亡率方面:NCI-H520表现为PHF1低表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1过表达组,而在A549表现为PHF1过表达组阴性对照组≈空白对照组PHF1低表达组。结论 PHF1在非小细胞鳞癌中高表达,靶向抑制其可阻碍癌细胞增殖、侵袭及凋亡,过表达则反之;而在非小细胞腺癌中PHF1低表达,与鳞癌结果截然相反,有望成为鉴别非小细胞鳞癌与腺癌及个体化治疗的重要指标。     

宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究

目的比较宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力.方法体外培养宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取传代培养后1 d、3 d、5 d 3个时间点分别计数细胞,MTT检测3时间点细胞活力变化,并进行统计学分析比较.结果宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株各时间点比较,培养1 d、3 d、5 d组的细胞数量逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;同时,宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株3 d组细胞活力较1 d组增加,而5 d组的细胞活力较3 d组下降,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论不同肺腺癌细胞株体外增殖和细胞活力不完全一致.     

肺腺癌细胞的STAT3信号传导途径的研究

目的:探明STAT3在肺腺癌细胞中增殖分化、抗凋亡作用与耐药之间的关系.方法:采用浓度梯度递增法诱导A549细胞株形成耐药细胞系,免疫组化及蛋白印迹法联合检测A549及耐药株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:成功诱导了A549/CARP耐药细胞株.免疫组化:A549组、A549/CARP组STAT3阳性细胞数无显著性差异(P＞0.05);LRP、MRP阳性细胞数有显著性差异(P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(P＞0.05).蛋白印迹:A549组、A549/CARP组均存在STAT3蛋白的表达,二者无差异性(P＞0.05);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(P＞0.05).结论:STAT3参与了肺腺癌细胞的增殖分化和抗凋亡作用.并未参与介导肺腺癌的耐药;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;LRP、MRP介导的耐药机制与STAT3信号传导途径无关;可通过破坏STAT3信号传导来控制肿瘤细胞的生长和增殖,为肺癌的治疗提供了以STAT3为靶向的基因治疗.     

宫颈癌p53和c-erbB-2蛋白表达及临床意义

目的:探讨宫颈癌p53、c-erbB-2蛋白的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学EliVision二步法检测43例宫颈癌组织切片的p53、c-erbB-2蛋白表达,并结合临床病理资料进行分析.结果:(1)p53、c-erbB-2蛋白阳性表达率分别为74.4%和69.8%;(2)p53蛋白的表达在鳞癌高于腺癌(P＜0.05),其表达与年龄、临床分期、临床分型、病理分级、宫旁浸润、近期疗效无明显相关(P＞0.05);(3)c-erbB-2蛋白的表达在鳞癌的病理分级、宫旁浸润中有显著差异(P＜0.01),在临床分期的表达中也有显著差异(P＜0.05),但与年龄、临床分型、近期疗效、病理类型、腺癌的病理分级无明显相关(P＞0.05);(4)p53与c-erbB-2蛋白共同阳性表达在癌旁浸润中,有显著差异(P＜0.01),二者阳性表达随宫颈癌临床分期表达增高(P＜0.05).结论:c-erbB-2蛋白阳性表达与宫颈癌恶性程度呈正相关;p53与c-erbB-2蛋白共同阳性表达与癌旁浸润有关,随临床分期表达增高,提示宫颈癌的发生发展可能有多种癌基因共同参与.     

STAT3、MRP、LRP在肺腺癌A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中的表达及关系的研究

目的:探明STAT3与肺腺癌细胞多药耐药之间的关系.方法:采用免疫组化法测定A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况.结果:STAT3在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数无显著性差异(t=1.519,P＞0.05);LRP、MRP在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数有显著性差异(t=3.350,P＜0.01)(t=3.747,P＜0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(r=0.061,P＞0.05).结论:STAT3并未直接参与介导肺腺癌的多药耐药性;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;STAT3信号传导途径与LRP、MRP蛋白的激活机制可能无关.     

卵巢癌不易发生脑转移的机制探讨

目的 分析卵巢癌明显脑转移少见的可能机制.方法 将肺腺癌A549细胞株和卵巢癌Skov3细胞株分别通过尾静脉、腹腔、颈总动脉、颅内途径注入雌性裸鼠体内(每个途径16只裸鼠):4～6周后处死裸鼠,取其脑、肺、肾、脾脏、肝脏、输卵管、卵巢及腹腔肿瘤包块,进行HE染色,分析脑内成瘤情况.结果 尾静脉注射途径Skov3细胞株组无脑转移,A549细胞株组有2例脑转移;腹腔注射途径Skov3细胞株组无脑转移,A549细胞株组有2例脑转移;颈总动脉注射途径Skov3细胞株组未发现脑内成瘤,A549细胞株组8例脑内成瘤.以上3种颅外注射途径,Skov3细胞株与A549细胞株在颅内成瘤率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).而直接颅内注入途径Skov3细胞株组14例脑内成瘤,A549细胞株组10例脑内成瘤,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血脑屏障可能在阻止卵巢癌脑转移过程中起了重要作用.     

肺腺癌A549细胞株的体外生长特性及Brdu的表达研究

目的探讨肺腺癌A549细胞株的体外生长特性.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及Brdu表达;取第1代培养后1 d、11 d、13 d 3个时间点分别计数细胞;MTT检测3个时间点细胞活力变化,并进行统计学分析.结果 4个肺癌标记物免疫组化染色,其中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性;Brdu在肺腺癌细胞中部分表达;肺腺癌A549细胞株培养18d,13 d组的细胞数量与1 d组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;11 d组与1 d组的细胞活力无明显差异,13 d组的细胞活力较1 d组和11 d差异有统计学意义（P〈0.05）.结论肺腺癌A549细胞株在体外早期处于增殖状态,而20 d时细胞活力明显上升.     

MSCT动态增强对肺腺癌与鳞癌的诊断价值

目的 评价MSCT动态增强技术对肺腺癌和鳞癌的诊断价值.方法 对25例(腺癌11例,鳞癌14例)符合病例入选标准的患者行MSCT动态增强扫描,观察肺腺癌、鳞癌平扫CT值及增强后CT净增值、时间-密度曲线、强化类型及强化峰值时间等的变化.结果 平扫及增强后各时相内腺癌CT值均高于鳞癌,但差异无统计学意义(P＞0.05);腺癌与鳞癌曲线形态均表现为类抛物线型,鳞癌的曲线位于腺癌的下方,腺癌的峰值高于鳞癌,但两者间差异无统计学意义(P＞0.05);肺腺癌强化峰值略早于鳞癌,差异亦无统计学意义;肿块直径≤3cm时,腺癌与鳞癌的强化类型以均匀强化为主;当肿块直径＞3cm时,鳞癌较易出现不均匀强化.结论 同层CT动态增强扫描技术是鉴别肺腺癌与鳞癌组织学类型有价值的影像学方法,但尚需更进一步的研究证实.     

GDNF cDNA在神经及非神经细胞系中的表达

目的：研究重组GDNFcDNA在神经及非神经细胞系中的表达。方法：重组克隆，基因转染及RT－PCR。结果：CV1及SH－SY-5Y细胞中无GDNF内源性表达，转基因后出现GDNF表达条带。NG108－15细胞有GDNF的内源性表达，转基因后表达条带增强。结论：重组GDNFcDNA在神经及非神经细胞系中均有较强表达，提示以此制备的工程细胞在Parkinson’s病基因治疗中可能具有重要作用。     

Rb基因对人视网膜母细胞瘤株SO-Rb50的影响

目的：探讨视网膜母细胞瘤（Rb）的发生与Rb基因（Rb1）缺失、失活等异常的关系。方法：用逆转录病毒载体pDOR与全长4．7kb野生型Rb1cDNA构建逆转录病毒表达载体pDOR－Rb1+。用脂质体介导法将pDOR－Rb1+转入CRIP包装细胞系。结果：实验产生了0．5X105Cfu具有一次感染能力的重组逆转病毒。利用该病毒感染SO-Rb50，经G418筛选，获得了抗G418细胞群体。运用PCR及Southern杂交技术对转染细胞进行检测，结果表明该抗G418细胞中有完整的外源Rb1存在。Northern杂交发现其Rb1mRNA表达水平有所提高。对细胞群体生长速率、软琼脂集落形成能力的测定表明，外源Rb1的表达使SO-Rb50在软琼脂中集落形成能力降低，而群体生长速率无明显影响。结论：外源Rb1对SO-Rb50恶性表型有一定影响。     

野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用

目的：观察野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用。方法：以逆转录病毒为载体将野生型p53基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823，检测p53对肿瘤细胞的影响。结果：p53在转染细胞中表达水平提高。外源性p53的导入使肿瘤细胞增殖细胞核抗原（PCNA）水平明显降低；G0／G1期细胞数增加，S期降低。转染p53基因的MKN28细胞探鼠体内成瘤能力明显下降。结论：野生型p53基因参与调节DNA复制及细胞周期，抑制癌细胞过度增殖。     

抑癌基因P16INK4在sf9细胞中的表达和鉴定

目的利用杆状病毒表达系统在体外表达抑癌蛋白P16,为研究P16蛋白的结构与功能及其在肿瘤生物治疗中的应用奠定基础.方法①利用定向克隆的方法将P16全基因序列插入转移载体pSX-IVVI+X3的EcoRI、Sall位点上,经氨苄青霉素平板初筛、菌落原位杂交、PCR扩增酶切电泳鉴定后,分离含P16的重组转移载体一pSXIVVI+X3.16;②用昆虫杆状病毒TnNPV-SVI-G感染sf9细胞扩增病毒,用PEG法沉淀病毒、酚/氟仿抽提纯化病毒DNA;③CaCl2沉淀法使重组转移载体一pSXIVVI+X3-16和病毒TnNPV-SVI-G DNA共转染sf9细胞.通过多角体观察和PCR法鉴定重组病毒;④经空斑纯化法纯化重组病毒,重组病毒感染草地夜蛾细胞(sf9)使P16大量表达,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定所表达的P16蛋白.结果①筛选出两株含P16全基因的重组转移载体-pSXIVVI+X3-16;②构建了含P16全基因序列的重组杆状病毒TnNPV-p16;③SDS-PAGE电泳显示重组病毒TnNPV-P16感染sf9细胞的培养上清及胞体裂解物和阳性对照Hela细胞裂解物在16kD左右均有蛋白条带,而阴性对照TnNPV-SVI-G感染的sf9细胞培养上清中无此蛋白条带,经免疫印迹染色证实此蛋白为抑癌蛋白P16.结论利用我国自己构建的昆杆状病毒表达系统成功了表达P16蛋白,分子量大小及特异性与国外报道相同.     

P16蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的　探讨Ｐ１６ 基因蛋白表达与膀胱移行细胞癌的相关性。方法　采用免疫组化ＳＰ法检测７５ 例膀胱移行细胞癌组织Ｐ１６ 基因表达。结果　Ｐ１６ 蛋白异常表达率为４１ ．３％ （３１／７５） ,Ｐ１６ 阳性表达率与肿瘤病理分级、临床分期有密切关系（ Ｐ＜ ０ ．０５） ,与淋巴结及远处转移无关（ Ｐ＞ ０．０５）。结论　Ｐ１６ 蛋白的异常表达与膀胱癌的恶性程度、浸润性有关。     

以逆转录病毒为载体的IL-2基因转染K562细胞的研究

目的研究以逆转录病毒为载体将IL-2基因转入K562细胞及表达情况.方法应用脂质体介导的基因转移法,将质粒PGEN/IL-2导入包装细胞PA317,将K562细胞与PA317/IL2细胞共培养,检测IL-2cDNA整合,mRNA转录情况,以IL2依赖性CTLL-2细胞测定培养细胞上清中IL-2产量,比较转染前后细胞的体外生长情况和致瘤性.结果IL2 cDNA成功整合入K562细胞基因组中并稳定表达,K562/IL-2细胞培养24h上清中IL-2活性为100U/ml,体内外观察均见细胞生长减慢.结论以脂质体介导的以双顺反子逆转录病毒为载体的基因转移方法,可成功地将人IL2基因转入人白血病细胞株K562,并持续分泌高活性的IL-2,为下一步将IL-2基因转入CML造血细胞的研究打下基础.     

5个不同肺癌细胞株的基因差异表达谱

目的 :希望获得细胞间基因表达的异同 ,对癌细胞的形成和发展中基因参与提供分析线索。方法 :选用 5个不同转移潜能及来源的体外培养肺癌细胞株H12 99,HLAMP ,PAa ,PGCL3和NiS作为研究对象 ,以永生化的支气管上皮细胞 16HBE为对照 ,采用含有 80 0个基因探针的肺癌相关基因芯片LUs,研究了基因表达的差异。结果 :5个肺癌细胞株差异表达的基因共有 35 5个 ,但共同上调或下调的基因仅有 4个 ,基因表达的变化在不同细胞株之间明显表现出多态性。比较三个高转移细胞株和两个低转移细胞株 ,有 12个基因表达改变出现在高转移细胞株而在低转移株未见明显变化 ,其中有 3个已报道的转移相关基因和 9个未报道和转移相关的基因 ,这些基因大多是膜蛋白、细胞骨架蛋白或 /和细胞信号转导有关 ,基因功能复习提示和肿瘤转移有可能的关联性。结论 :cDNA芯片对于肺癌相关基因的筛选是一个非常有效的研究手段 ;对于临床诊断应用 ,需要在大规模数据收集的基础上建立必要的模式 ,通过多基因系统分析 ,才能获得有效的应用。     

淋巴系统肿瘤免疫球蛋白和T细胞受体重排基因的指纹图谱特征

目的确定淋巴系统肿瘤的免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排的特征。方法：用PCR和单链构象多态性等分析108例各类淋巴系统肿瘤。结果：不同患者各有特征性指纹图谱。54％的急性淋巴细胞白血病（ALL）和43％多发性骨髓瘤（MM）存在IgH或者TCRγ双等位基因重排，6例ALL和3例MM存在寡克隆性。结论：指纹图谱可判断恶性克隆之间的基因差异和寡克隆性。     

基因PTTG、PTEN在泌乳素腺瘤中的表达及意义

目的:研究泌乳素(PRL)腺瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)和抑癌基因PTEN在泌乳素腺瘤中的表达及意义。方法:52例泌乳素腺瘤分为侵袭组24例和非侵袭组28例,采用免疫组化方法分别检测腺瘤组织中PTTG蛋白和PTEN蛋白的表达水平;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测腺瘤组织中PTTG-mRNA的表达水平;应用免疫印迹(Western-blot)方法检测腺瘤组织中PTTG蛋白的表达水平并进行定量分析。结果:PTTG蛋白在侵袭组中有23例阳性表达,积分光密度(IOD)为9874.24±2143.56,平均吸光度为28.13±4.31,显著高于非侵袭组;RT-PCR检测显示,48例腺瘤标本有PTTG-mRNA特异扩增条带,但侵袭组表达水平有不同程度的增高;PTEN蛋白在非侵袭组中有8例阳性表达,IOD为6489.12±1523.45,与侵袭组比较差异有统计学意义。结论:基因PTTG与PTEN表达与肿瘤的侵袭性密切相关,对肿瘤的发生、发展有重要作用,可以作为临床判定肿瘤侵袭生长的分子标志。     

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定

目的：P58．2基因克隆与鉴定。方法：采用RT—PCR技术，从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P58．2基因全长cDNA，经酶切后构建重组克隆载体，双酶切和测序鉴定。结果：RT—PCR获得了预期的扩增产物P58．2全长cDNA，成功构建了pSPORT1-P58．2重组克隆载体，酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P58．2cDNA全长碱基序列一致。结论：pSPORT1-P58．2重组克隆载体构建成功；P58．2基因序列与文献报道一致，为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。