兔肾VX2肿瘤模型超声显像与肿瘤增殖活性及侵袭性的关系

目的 探讨兔肾VX2肿瘤超声观测指标与其增殖活性及侵袭性的关系。方法 建立56只兔肾VX：肿瘤模型，种植3周后应用二次谐波和声像图定量技术检测癌灶大小、回声强度、边缘回声及能量面积比，并与肿瘤的组织病理学、流式细胞仪测定的增殖指数(PI)及倍体细胞率(PCR)相比较。结果 兔肾VX2肿瘤的PI及PCR与肿瘤边缘回声无明显相关，而与肿瘤大小、内部回声强度及血流丰富程度有一定关系。结论 超声观测指标可用于推测肾癌的增殖活性及侵袭性，为肾癌的早期诊断与疗效评估提供参考依据。     

TLR2通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨Toll样受体2(TLR2)通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭发生的机制。方法于陕西省咸阳市泾阳县医院普通外科采集20例配对的结肠癌组织及正常癌旁组织,其中男12例,女8例,采用免疫组化染色法检测人结肠癌组织及正常癌旁组织中TLR2表达。采用TLR2激动剂Pam3Cys(P3C)(0.1、1.0、10.0μg/mL)处理SW480及HCT116细胞作为观察组(P3C组),未作处理的细胞作为空白对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测人结肠癌细胞株HCT116、SW480增殖情况。采用划痕试验及Transwell小室检测细胞迁移能力及侵袭能力。采用蛋白免疫印迹法检测TLR2对结肠癌细胞PI3K/Akt和NF-κB通路的影响。结果免疫组化染色结果显示:结肠癌组织中TLR2蛋白表达阳性率为80%(16/20),明显高于正常癌旁组织的35%(7/20,P0.05)。划痕试验结果显示:HCT116经P3C处理后48h迁移率显著高于0h迁移率(P0.05);SW480经P3C处理后48h迁移率显著高于0h迁移率(P0.05)。Transwell试验结果显示:HCT116经P3C处理后穿透基底膜细胞数明显高于空白对照组(P0.01);SW480经P3C处理后穿透基底膜细胞数明显高于空白对照组(P0.01)。采用10.0μg/mL P3C刺激HCT116、SW480细胞,随着时间推移TLR2蛋白表达逐渐升高,磷酸化Akt及NF-κB表达显著升高。结论 TLR2高表达于结肠癌组织,可通过PI3K/Akt和NF-κB通路促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭。     

姜黄素上调caspase-3和p53表达后对人肺癌干细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨姜黄素干预人肺癌干细胞caspase-3与p53后对肺癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株A549中分选出CD44 +/CD133+的肺癌干细胞(carcinoma-initiating cells,CICS);用四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度姜黄素对肺癌干细胞增殖的影响;用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测肺癌干细胞系中caspase3和p53的mRNA和蛋白水平;Transwell小室侵袭实验检测姜黄素对肺癌干细胞体外侵袭能力的影响.结果:姜黄素浓度增加至40 μmol/mL后,姜黄素处理组的肺癌干细胞增殖抑制率大于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),姜黄素对肺癌干细胞体外增殖抑制呈显著的剂量依赖性(IC50为61.06 μmol/mL).姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和p53基因mRNA的表达水平(3.64±0.59,4.98±0.82)高于阴性对照组(1.00±0.04,0.99±0.07)和空白对照组(0.99±0.07,1.03±0.27),差异有统计学意义(P均＜0.01).姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和P53蛋白表达水平(0.65±0.12,0.43±0.05)高于阴性对照组(0.05±0.02,0.08±0.03)和空白对照组(0.09±0.03,0.12±0.17),差异有统计学意义(P＜0.01和0.05).姜黄素处理组侵袭细胞数(26±15)少于阴性对照组(82±13)和空白对照组(78±12),差异有统计学意义(P＜0.01).结论:姜黄素能上调caspase-3及p53的表达,能显著抑制人肺癌干细胞在体外的增殖及侵袭.     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

人卵巢癌细胞SKOV3中壳多糖酶3样蛋白1的表达和对细胞增殖及侵袭的影响实验研究

目的　探讨壳多糖酶3 样蛋白1（chitinase-3-like-protein-1, CHI3L1）在卵巢癌细胞SKOV3 中的表达和对SKOV3 细胞增殖和侵袭的影响。方法　构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3,使得卵巢癌细胞中的CHI3L1 基因沉默;pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒转染卵巢癌细胞SKOV3,同时转染空载质粒作为阴性对照,通过Western Blot 检测SKOV3 细胞中CHI3L1 蛋白表达水平;平板细胞克隆形成试验观察对卵巢癌细胞SKOV3 增殖的影响;采用Transwell 实验检测卵巢癌细胞SKOV3 侵袭能力的变化。结果　成功构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3 后,观察到大量的绿色荧光细胞,且和对照组相比,pll3.7-CHI3L1 shRNA 转染组卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 蛋白表达水平下降,卵巢癌SKOV3 细胞的克隆数目减少,侵袭能力下降。结论　卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 的表达下调,抑制了SKOV3 细胞的增殖和侵袭能力。     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离COPD患者和健康人外周血单个核细胞后,提取总RNA并逆转录为cDNA,用实时定量PCR检测TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的拷贝数。结果COPD患者外周血单个核细胞的TLR3和TLR9mRNA表达较正常健康人明显增高(P<0.05),而TLR7和TLR8mRNA的表达在COPD患者和正常健康人之间却无显著差异(P>0.05)。在COPD患者中,急性期和稳定期患者的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9无显著差异(P>0.05)。结论TLR3和TLR9的升高可能是COPD患者对病毒敏感性增高的一个重要机制。     

TLR4和NF-κB p65表达与结肠癌的关系

目的 评价结肠癌和癌旁正常组织中TLR4 mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平与结肠癌发生发展的相关性.方法 取手术切除的新鲜结肠癌组织和距癌组织2 cm以上的癌旁组织各63份,其中:结肠癌高分化型组23份,中分化型组17份,低分化型组20份,其他分化类型3份;伴淋巴结转移组27份,不伴淋巴结转移组36份;Dukes A期组18份,Dukes B期组14份,DukesC期组22份,Dukes D期组9份.采用实时荧光定量RT-PCR检测结肠癌组织和癌旁组织中TLR4 mRNA的表达水平;用WB法检测NF-κB p65蛋白的相对表达水平.结果 结肠癌组织中TLR4 mRNA表达量为86.42±15.16,明显高于癌旁组织的32.74±9.44,差异有统计学意义(t=22.354,P＜0.01).高、中、低分化型结肠癌TLR4 mRNA表达量分别为69.58±11.27、64.57±13.91、97.12±15.44,低分化型结肠癌表达量高于高、中分化型结肠癌(t值分别为11.304、12.223,P均＜0.01).伴淋巴结转移组TLR4 mRNA表达量(89.91±13.33)与不伴淋巴结转移组(81.16±13.59)比较,差异无统计学意义(t=0.959,P＞0.05).Dukes A期组TLR4 mRNA表达量(59.05±11.66)低于Dukes B～D期组的表达量(分别为92.32±17.51、91.41±15.21、101.46±17.43),差异有统计学意义(t值分别为8.708、9.664、9.525,P均＜0.05);结肠癌组织和癌旁组织NF-κB p65蛋白表达量分别为0.63±0.11、0.34±0.08,结肠癌组织NF-κB p65表达量高于癌旁组织(t=18.266,P＜0.01),高、中、低分化型结肠癌组织中NF-κB p65蛋白表达量分别为0.46±0.09、0.72±0.11、0.77±0.14,中低分化型组表达高于高分化型(t值分别为11.223、10.875,P均＜0.01),伴淋巴结转移组与不伴淋巴结转移组NF-κB p65表达量分别为0.82±0.17、0.57±0.12,且差异有统计学意义(t=18.269,P＜0.05).Dukes A期的NF-κB p65表达量(0.39±0.06)低于Dukes B～D期(分别为0.72±0.12、0.69±0.14、0.76±0.13),且差异有统计学意义(t值分别为10.442、9.889、9.721,P均＜0.01).结论 TLR4/NF-κB p65信号通路的表达水平升高与结肠癌的临床进展和病理分级密切相关;NF-κB p65可能是结肠癌转移的分子指标之一,TLR4/NF-κB p65升高可促进结肠癌的发生发展.     

血清PTX3、肺癌组织中LOXL2蛋白表达与NSCLC患者预后的关系

目的探讨血清正五聚蛋白3 (PTX3)、肺癌组织中的赖氨酰氧化酶样蛋白2 (LOXL2)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)预后的关系。方法选取我院2013年1月至2014年12月收治的90例NSCLC患者为NSCLC组、同期健康体检对象90例为对照组;采用免疫组化染色检测NSCLC患者癌组织及其癌旁组织中的LOXL2蛋白表达,采用ELISA法检测NSCLC组和对照组血清中的PTX3水平,并分析二者对NSCLC患者预后的影响。结果 NSCLC癌组织中的LOXL2蛋白阳性表达率76.67%显著的高于癌旁组织的15.56%,差异具有统计学意义(P<0.05);NSCLC癌患者血清PTX3水平显著的高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);NSCLC癌患者癌组织中的LOXL2蛋白表达与患者TNM分期、是否发生淋巴结转移有关(P<0.05);在不同分化程度、病理学类型、病灶大小、TNM分期、淋巴结转移的NSCLC癌患者血清PTX3水平差异均无统计学意义(P>0.05);Cox比例风险回归模型分析显示TNM分期增高、发生淋巴结转移、LOXL2蛋白阳性表达与患者的不良预后直接相关,是独立性危险因素(P<0.05)。结论 NSCLC患者血清PTX3、肺癌组织中LOXL2蛋白均表达增高,LOXL2蛋白阳性表达与患者临床病理学特征及不良预后具有一定关系。     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中论著TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达

目的 观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达.方法 用密度梯度离心法分离COPD患者和健康人外周血单个核细胞后,提取总RNA并逆转录为cDNA,用实时定量PCR检测TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的拷贝数.结果 COPD患者外周血单个核细胞的TLR3和TLR9 mRNA表达较正常健康人明显增高(P＜0.05),而TLR7和TLR8 mRNA的表达在COPD患者和正常健康人之间却无显著差异(P＞0.05).在COPD患者中,急性期和稳定期患者的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9无显著差异(P＞0.05). 结论TLR3和TLR9的升高可能是COPD患者对病毒敏感性增高的一个重要机制.     

白癜风患者外周血单个核细胞中TLR7、TLR9、NF-κB的表达及意义研究

目的探究白癜风患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)、核因子-κB(NF-κB)的表达情况及其意义。方法前瞻性选取2017年4月至2018年4月沈阳市第七人民医院收治的33例白癜风患者作为观察组,33例同期健康体检者为对照组。使用流式细胞仪检测两组PBMC中的TLR7、TLR9表达情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组PBMC中的NF-κB表达情况。结果流式细胞仪结果显示,观察组患者PBMC中的TLR7表达量为(94.65±3.931)%,高于对照组的(92.84±3.52)%,但差异无统计学意义(P0.05);而观察组患者PBMC中的TLR9表达量为(86.68±11.01)%,低于对照组的(90.75±5.74)%,但差异无统计学意义(P 0.05); PCR反应结果显示,观察组患者PBMC中的NF-κB mRNA表达量为(0.96±1.52),高于对照组的(0.24±0.35),差异具有统计学意义(P 0.05)。结论白癜风患者PBMC中TLR7表达过量,TLR9则低表达,但与正常健康者的表达情况未见较大差异,而该信号通路的信号分子NF-κB表达量远高于正常健康者,推测TLR7、TLR9、NF-κB的表达与白癜风可能存在一定的关系,但具体机制需进一步探寻。     

n-3多不饱和脂肪酸对慢性心力衰竭大鼠心肌组织TLR2／4表达的影响及机制初探

目的 观察n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFA）对心力衰竭大鼠心肌组织中Toll样受体2/4（TLR2/4）表达的影响,并初步探讨作用机制.方法 采用腹主动脉缩窄法复制慢性心力衰竭大鼠模型,分为正常对照组10只、假手术组10只、心力衰竭组10只和n-3 PUFA组10只.进行超声心动图心功能检测和心肌病理组织学检查;ELISA法检测各组大鼠血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的表达,real-time PCR法检测假手术组、心力衰竭组及n-3 PUFA治疗组心肌组织TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA 表达;Western blot检测心肌组织TLR2、TLR4蛋白表达.结果 n-3 PUFA组大鼠与心力衰竭模型组相比各项心功能指标均明显改善,左心室舒张末期内径（LVEDD）和左心室收缩末期内径（LVESD）明显降低,左心室射血分数（LVEF）及左心室短轴缩短率（LVFS）明显升高（P均〈0.05）;而且心肌损害明显减轻.心力衰竭组与假手术组相比,血清炎性细胞因子水平均明显升高（P均〈0.01）;经过n-3 PUFA喂养后的心力衰竭大鼠血清IL-1β、TNF-α与心力衰竭组相比明显降低（P均〈0.05）,但仍高于假手术组（P均〈0.05）.n-3 PUFA治疗组与心力衰竭组相比,心肌组织中TLR2、TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA 的表达水平明显下降（P均〈0.05）;心力衰竭组心肌组织TLR2/4蛋白表达均高于假手术组（P均〈0.05）,而n-3 PUFA治疗组与心力衰竭模型组相比,TLR2、TLR4表达则是下调的（P均〈0.05）.结论 n-3 PUFA可能通过下调心力衰竭模型心肌组织中TLR2/4表达,抑制NF-κB激活和前炎性细胞因子如IL-1β、TNF-α的表达来减轻心力衰竭大鼠的症状.     

慢阻肺急性加重患者外周血单核细胞CD64，TLR2及TLR4水平表达与预后的关系研究

目的　研究慢阻肺急性加重（AECOPD）患者外周血单核细胞CD64和Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)与预后的关系。方法　将南京医科大学附属江苏盛泽医院2017.06~2020.06间收治的96例慢阻肺急性加重（AECOPD）患者纳为研究对象,同时将30例稳定期COPD患者纳为稳定组,30例健康志愿者纳为对照组。采集三组外周静脉血,检测单核细胞亚群CD64,TLR2和TLR4的表达水平,分析其与炎症标志物降钙素原（PCT）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞计数（WBC）及肺功能间的相关性,随访6个月,统计AECOPD组中再次急性复发的患者,绘制受试者特征工作曲线（ROC）,分析外周血单核细胞亚群CD64表达,TLR2和TLR4在AECOPD急性复发中的预测价值。结果　COPD组以及AECOPD组外周血CD64水平（32.69±6.43,39.69±7.79 vs 26.74±5.14）,TLR2水平（169.79±29.07,181.15±22.44 vs 140.03±28.74）以及TLR4水平（186.25±34.15,200.58±33.47 vs 153.65±35.14）均高于对照组,差异均有统计学意义（F=51.774,26.957,2.488,均P<0.05）,AECOPD组外周血CD64,TLR2以及TLR4水平均高于COPD组,差异具有统计学意义（t=4.466,2.249,2.037,均P<0.05）;随访6个月,96例AECOPD患者中共20例患者因再次急性复发入院,再次复发者首次入院时外周血TLR2（249.66±40.52 vs 163.21±35.64）、TLR4（253.66±36.85 vs 186.69±45.21）及CD64（53.69±13.58 vs 35.41±14.47）水平均高于无复发者,差异均有统计学意义（t=9.379,6.105,5.089,均P=0.000）。相关性分析提示,AECOPD患者外周血CD64与其吸烟史,IL-6,PCT水平呈正相关（r=0.36,0.33,0.31,均P<0.05）,与FEV1/FVC呈负相关（r=-0.45, P<0.05）。TLR2与其PCT水平呈正相关（r=0.34, P<0.05）,与FEV1/FVC呈负相关（r=-0.35, P<0.05）,TLR4与其他临床指标无相关性（r=0.07,0.11,0.13,0.13,-0.17,-0.23,-0.26,0.29, 均P >0.05）。绘制ROC曲线发现,血清CD64,TLR2及TLR4在预测AECOPD患者再次急性复发中均具有良好的应用效能,各指标单独应用时以TLR2应用效能最高,其AUC=0.805,95%CI(0.679~0.931),三指标联合应用的预测效能最高,AUC=0.833,95%CI(0.703~0.964)。结论　AECOPD患者外周血CD64,TLR2及TLR4水平均较COPD者明显升高,且其在预测患者半年内再次急性复发中具有良好的效能。     

LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞（Mφ）,细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P〈0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P〉0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P〈0.05。②随着LPS浓度增加,TNFα分泌量逐渐升高,呈剂量依赖关系。但当LPS浓度达10μg/ml时,TNFα分泌量下降。结论LPS能够诱导Mφ胞膜表面TLR4表达和TNFα分泌升高,并且在一定浓度范围内呈量-效关系.     

吡格列酮抑制肺组织TLR2、TLR4的mRNA表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制探索

目的:探讨吡格列酮减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制。方法:将30只健康雄性SD大鼠,随机（随机数字法）分为假手术组、模型组、吡格列酮组,每组10只。假手术组大鼠麻醉后,胰胆管逆行注射生理盐水。模型组麻醉后,胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建重症急性胰腺炎肺损伤模型。吡格列酮组腹腔注射吡格列酮后再构建模型。每组随机选择6只大鼠于手术后12 h剖杀,留取肺组织及静脉血。检测并比较三组大鼠血清淀粉酶水平及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平;采用RT-PCR检测并比较三组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达情况;比较三组间肺组织病理损伤评分和肺渗漏指数。分析TLR2和TLR4的mRNA表达情况与肺病理损伤评分、肺渗漏指数的相关性。结果:模型组血清淀粉酶及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标水平均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平以及肺组织病理损伤评分、肺渗漏指数均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。由Spearman相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺组织病理损伤评分呈显著正相关关系（rs=0.959, P<0.001;rs=0.924, P<0.001）;由Pearson相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺渗漏指数均呈显著正相关关系（r=0.957, P<0.001;r=0.958, P<0.001）。 结论:吡格列酮可能通过抑制肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA的表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤程度。     

吡格列酮抑制肺组织TLR2、TLR4的mRNA表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制探索

目的:探讨吡格列酮减轻重症急性胰腺炎肺损伤的机制。方法:将30只健康雄性SD大鼠,随机（随机数字法）分为假手术组、模型组、吡格列酮组,每组10只。假手术组大鼠麻醉后,胰胆管逆行注射生理盐水。模型组麻醉后,胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建重症急性胰腺炎肺损伤模型。吡格列酮组腹腔注射吡格列酮后再构建模型。每组随机选择6只大鼠于手术后12 h剖杀,留取肺组织及静脉血。检测并比较三组大鼠血清淀粉酶水平及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平;采用RT-PCR检测并比较三组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达情况;比较三组间肺组织病理损伤评分和肺渗漏指数。分析TLR2和TLR4的mRNA表达情况与肺病理损伤评分、肺渗漏指数的相关性。结果:模型组血清淀粉酶及肺组织匀浆中TNF-α、NO水平均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标水平均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平以及肺组织病理损伤评分、肺渗漏指数均显著高于假手术组,吡格列酮组上述指标均显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。由Spearman相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺组织病理损伤评分呈显著正相关关系（rs=0.959, P<0.001;rs=0.924, P<0.001）;由Pearson相关分析可见肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与肺渗漏指数均呈显著正相关关系（r=0.957, P<0.001;r=0.958, P<0.001）。 结论:吡格列酮可能通过抑制肺组织TLR2 mRNA、TLR4 mRNA的表达进而减轻重症急性胰腺炎肺损伤程度。     

TLR4/NF-κB通路及相关细胞因子表达水平变化与急性胰腺炎病情发展的关系

【目的】探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路及相关细胞因子表达水平变化与急性胰腺炎(AP)病情发展的关系。【方法】将本院收治的127例AP患者依据病情严重程度分为AP组(75例)和重症急性胰腺炎(SAP)组(52例),并选择同一时间段在本院进行体检的80例健康志愿者作为对照组。比较三组对象的临床资料、TLR4、NF-κB表达水平及血清炎性因子水平。采用Pearson相关性分析TLR4/NF-κB通路及相关细胞因子表达水平变化与AP床旁严重度指数(BISAP)的关系。【结果】AP组和SAP组血清脂肪酶、淀粉酶均显著高于对照组(P<0.05)。AP组和SAP组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA水平均高于对照组(P<0.05),且SAP组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA均显著高AP组(P<0.05)。AP组和SAP组的白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)水平均显著高于对照组(P<0.05);SAP组IL-6、TNF-α及IL-1β水平均显著高于AP组(P<0.05)。TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、TNF-α及IL-1β水平与BISAP评分均呈正相关(P<0.05),IL-6水平与BISAP评分无相关性(P>0.05)。【结论】TLR4/NF-κB通路及相关细胞因子表达水平变化与AP病情发展具有一定的相关性,可作为临床评估AP疾病进展的参考依据。     

丙泊酚通过下调Yes相关蛋白的表达抑制卵巢癌SKOV3细胞体外的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨丙泊酚对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 将SKOV3细胞分为空白对照组、溶剂对照组、25 μmol/L丙泊酚组、50 μmol/L丙泊酚组、100 μmol/L丙泊酚组,细胞功能学实验检测丙泊酚对SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响.免疫荧光实验和Western blot实验检测丙...     

小干扰RNA抑制成纤维细胞激活蛋白3的表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制成纤维细胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用流式细胞术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌的肿瘤干细胞(cancerstem cells,CSCs)。将肺癌CSCs分为3组:空白对照组(不转染任何质粒)、siRNA-FAP组(转染靶向沉默FAP3表达的siRNA质粒)、阴性对照组(转染包含随机序列的siRNA质粒)。采用MTT比色法检测靶向FAP3表达的siRNA(siRNA-FAP3)转染12、24、48和72h后对细胞增殖的影响;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测转染72h后细胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白质的表达情况;采用软琼脂克隆集落形成实验检测siRNA-FAP3对肺癌CSCs侵袭能力的影响。结果:转染48h和72h后,siRNA-FAP3组的细胞增殖抑制率[(24.67±1.08)%,(53.98±3.75)%]大于阴性对照组[(3.76±0.88)%,(4.53±1.01)%]及空白对照组[(2.34±0.41)%,(3.28±0.65)%],差异均有统计学意义(P分别<0.05和0.01)。转染72h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67基因的mRNA表达水平(0.32±0.06,0.18±0.02)显著低于阴性对照组(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白对照组(1.02±0.09,0.97±0.11),差异有统计学意义(P<0.01)。转染72h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67蛋白表达水平(0.16±0.05,0.25±0.09)显著低于阴性对照组(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白对照组(0.59±0.27,0.63±0.22),差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-FAP组细胞克隆形成率[(13.09±5.21)%]显著低于阴性对照组[(77.59±8.29)%]和空白对照组[(83.86±10.11)%],差异有统计学意义(P<0.01)。结论:转染siRNA可有效抑制肺癌CSCs中FAP3蛋白的表达,并且还可抑制CSCs的体外增殖和侵袭能力。     

过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2、TLR4、TLR6及与Treg相关细胞因子的表达

背景：Toll样受体介导的信号通路转导及调节性T细胞异常活化在过敏性紫癜发病中的作用不清楚。目的：研究Toll样受体TLR2、TLR4、TLR6在过敏性紫癜患儿外周血单核细胞的表达及调节性T细胞（Treg）的免疫应答,探讨TLR及Treg活化在敏性紫癜发病机制中的作用。方法：选择处于过敏性紫癜急性期的患儿42例为观察对象,另选取15名门诊健康查体儿童为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血单核细胞的TLR2、TLR4、TLR6的蛋白表达量;应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞TLR信号途径分子MyD88 mRNA的基因相对表达量;ELISA法测Treg细胞分泌的转化生长因子β、白细胞介素10的血浆水平;两组间比较采用独立样本t或t’检验,相关性分析采用Pearson相关检验。结果与结论：过敏性紫癜患儿外周血单核细胞的TLR2、TLR4、TLR6蛋白的表达及MyD88 mRNA基因的相对表达量均显著高于对照组（P〈0.01）;过敏性紫癜患儿血浆中转化生长因子β、白细胞介素10均高于对照组（P〈0.05）;过敏性紫癜患儿TLR2、TLR4、TLR6的蛋白表达量与Myd88 mRNA的基因相对表达量呈正相关（P〈0.01）,与血浆白细胞介素10、转化生长因子β水平无明显相关（P〉0.05）。提示TLR2、TLR4、TLR6活化后可能通过MyD88依赖的途径参与敏性紫癜的发病,而过敏性紫癜急性期Treg代偿性活化可能为机体的保护性免疫应答。