急性淋巴细胞白血病Rb基因的分析

应用限制性内切酶片段长度多态性分析了３２例原发急性淋巴细胞白血病Ｒｂ基因的等位基因变化，采用＾３２Ｐ－标记的ＲｂＣｄｎａ３．８ｋｂ探针，结果在８例患者中发现Ｒｂ基因结构异常。其中４例出现新的３．１ｋｂ和２．３ｋｂ片段，选用Ｒｂ基因外显子１８，１９，２１，２２，２７五对引物，对已发现Ｒｂ基因异常的６例患者进行了分析，发现１例在外显子１８和２１无扩增产物。     

端粒序列长度变异与白血病关系研究

对１９例白血病患和２０例正常对照外周血基因组ＤＮＡ端粒限制性片段长度分析以探讨端粒序列与白血病形态的关系。结果发现,正常对照的ＴＲＦ长度在７．２－９．２ｋｂ,平均长度８．４±１．２ｋｂ;白血病患为２．９－７．７ｋｂ,平均长度５．０±１．７ｋｂ,其中,急性白血病患的为３．０－７．７ｋｂ,平均长度４．８±０．９ｋｂ;慢性白血病患的为２．９－７．０ｋｂ,平均长度５．２±１．３ｋｂ。通过ｔ检验发现     

急性白血病细胞Rb蛋白表达的研究

作者用免疫组化方法检测了４０例急性白血病细胞中Ｒｂ基因蛋白的表达情况，结果发现：Ｒｂ蛋白表达缺失率为３７．５％，以Ｍ５型亚型多见，占４１．６％，结果表明，Ｒｂ基因表达状态与急性白血病的类型有关，并影响患者的疗效和预后。     

急性淋巴细胞白血病微量残留病的PCR监测

探讨急性淋巴细胞白血病微量残留病检测的临床意义。方法：应用筑巢式多聚酶链反应对３２例ＡＬＬ进行了Ｔ细胞受体Ｖδ２Ｄδ３基因重排检测。结果 １８例Ｂ系ＡＬＬ中有１５例，４例Ｔ系ＡＬＬ中有１例，存在ＴＣＲＶδ２δ３基因重排。同时对１６例进行３９例次微量残留病动态监测，其中６例ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性病人随访５．１７－１６．１７年，无１例复发，１０例ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者，２例分别于阳性后０．２５，１．００年骨     

APC抑癌基因在髓系恶性疾病中的杂合性缺失

目的近年研究表明位于５ｑ２ｌ的ＡＰＣ抑癌基因涉及多种肿瘤的发生发展，而关于其与存在５ｑ频繁丢失的髓系恶性疾病的关系尚未见报道。此文分析７例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）和３６例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中ＡＰＣ的等位基因缺失，并讨论其与髓系表型特异性、临床表现及预后的相关性。方法采用杂合性缺失（ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）试验（包括ＰＣＲ＋ＲＦＬＰ及ＰＣＲＳＳＣＰ技术），分析ＭＤＳ和ＡＮＬＬ中ＡＰＣ基因的缺失频率，并以正常人作对照。同时建立一个瘤细胞标本纯度参照体系以降低标本不纯对ＬＯＨ分析的影响。结果能提供缺失信息的包括９例正常人、２２例ＡＮＬＬ和４例ＭＤＳ。正常组未见１例发生ＬＯＨ（０／９），ＭＤＳ组１例ＲＡＥＢ阳性（１／４），而ＡＮＬＬ中ＬＯＨ阳性的有４例，其中３例为Ｍ２：（３／６），１例为Ｍ４ａ（１／１）。统计学证实Ｍ２ａ的阳性率与正常组差别有显著性（Ｐ＝０．０４４）。ＬＯＨ阳性的ＡＭＬ共同点有：（１）中老年人偏多；（２）外周血白细胞数较高，但浸润现象不明显；（３）对化疗较敏感。结论ＡＰＣ基因的异常可能是发生于髓系恶性疾病中粒系异常克隆的一个独立分子事件，代表着一部分具有特     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

粒细胞集落刺激因子治疗白血病化疗后粒细胞缺乏16例疗效观察

我们采用基因重组人粒细胞集落刺激因子（rhG－CSF）治疗白血病化疗后粒细胞缺乏，取得较好疗效，现报告如下：１资料和方法１．１临床资料：治疗组：急性白血病１６例，年龄１８～４９岁，平均３４岁，按张之楠主编的血液病诊断及疗效标准，急性淋巴细胞白血病（ALL）３例，急性非淋巴细胞白血病１３例（ANLL），其中M１３例，M２７例，M４１例，M５２例。对照组：为同期白血病患者１８例，男１０例，女８例，年龄１６～５７岁，平均３５岁，ALL５例，ANLL１３例，其中M１２例，M２６例，M４２例，M５３例。１．２化疗方法：AN…     

Becker型肌营养不良一家系分子遗传学研究

目的应用分子遗传学方法对患者在基因水平上作出诊断。方法应用ｄｙｓｔｒｏｐｉｎｃＤＮＡ１４ｋｂ探针（包括６个亚探针１－２ａ，２ｂ－３，４－５ａ，５ｂ－７、８、９－１４）与一名１８岁的临床表现温和肌营养不良患者及２例对照者（１例正常２５岁男性及１例１２岁ＤＭＤ患者）的基因组ＤＮＡ／ＨｉｎｄⅢ片段进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析。结果前者在与亚探针５ｂ－７杂交中，发现其１．５ｋｂ，０．５ｋｂ杂交带缺失，在与亚探针８杂交中，发现１０．０ｋｂ杂交带缺失，表明这三个Ｈｄ片段分别含有ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因的４５、４６、４７号外显子。结论证明患者缺失了４５、４６、４７号外显子，故诊断该患者为Ｂｅｃｋｅｒ型肌营养不良，从而为该家系的遗传咨询获得了可靠的资料。     

慢性乙型肝炎患者外周血中T细胞受体基因重组及其作用

运用ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ技术分析１０９例慢性乙型肝炎患者外周血Ｔ细胞受体基因β链（ＴｃｅｌｒｅｃｅｐｔｏｒｇｅｎｅＢｅｔａｃｈａｉｎ，ＴＣＲβ）重组。发现有４．５ｋｂ，５．０ｋｂ，２１ｋｂＥｃｏＲ１重组带和５．５ｋｂ，１６ｋｂ，１８ｋｂＨｉｎｄⅢ重组带。白人患者的５．０ｋｂＥｃｏＲ１和５．５ｋｂＨｉｎｄⅢ重组带出现的频率（分别为４４．４％）高于亚裔患者（１０．８％和１８．８％）和土著患者（１５．６％和２５．６％）。表明：慢性乙型肝炎患者对ＨＢＶ的应答由寡克隆参与，优势克隆分别由Ｃ１区和Ｃ２区参与重组，白人患者对ＨＢＶ感染有较强的应答能力。     

大鼠谷胱甘肽S-转移酶P1基因顺式调控元件的搜寻

目的搜寻大鼠谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｐ１基因（ｒａｔｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓ－ｆｅｒａｓｅＰ１，ｒＧＳＴＰ１）上游３．０ｋｂ区域内顺式调控元件。方法采用高灵敏度的荧光素酶报告基因载体，以外切酶Ⅲ（ＥｘｏⅢ）、Ｓ１核酸酶对上述３．０ｋｂ片段进行删切后造成缺失，将所获得的一系列缺失质粒分别转染ＨｅＬａ细胞，测定转染细胞裂解液荧光素酶活性。结果当删切从－２．９ｋｂ进展至－２．３ｋｂ时，荧光素酶活性降低６７％（Ｐ＜０．０５），－２．５ｋｂ～－２．２ｋｂ区域能以不依赖于位置、方向性的方式增强基因表达强度，从－１．８ｋｂ缺失到－１．３ｋｂ时，荧光素酶活性升高４倍（Ｐ＜０．０５）。结论ｒＧＳＴＰ１基因上游在－２．５ｋｂ～－２．２ｋｂ及－１．８ｋｂ～－１．３ｋｂ区域内分别存在增强子元件和负调控序列。     

Analysis of Rb gene in primary acute lymphoid leukemia

Theretinoblastomasusceptibilitygene(Rb)istheprototypeforaclassofgenestheinactivationofwhichappearstobecausallyrelatedtocancer;thesegenesarethereforereferredtoastumorsup-pressorgenes-ItsactivityisrelatedtoDNAsyn-thesisorcellcycleregulation.Structuralandfunc-tionaldefectsintheRbgenehavebeendemon-stratedinanumberofprimarytumorssuchassmallcelllungcancer,breastcancer,bladdercar--cinomaandhematopoieticmalignancies['J.Theseobservationshadpromptedustoinvestigatethestatusofthisgeneinacutelymphoidleuk…     

A Study of Rb Gene in Oral Squamous Cell Carcinoma

Thefirsttumorsuppressorgenemolecularlyisolatedistheretinoblastoma(Rb).ThedeletionofRbplaysanessentialroleinRetinoblastoma[1].TheosteosarcomaisalsoassociatedwiththedoublelossoftheRbgene[2].AbnormalitiesinthestructureandexpressionoftheRbgenehadbeenidentifiedinsmallcellcanceroflung[3]andbreastcancers[4].ThesefindingssuggestthattheRbgeneisapleiotropicsuppressorgene.Oralsquamouscellcarcinomaisthecommonmalignanttumor,whichaccountsfor80%ofthetotalofmalignanttumorsinoralmaxillofacialregion.Theprog…     

成人急性白血病患者骨髓中p16基因的表达

目的：研究成人急性白血病患者p16基因纯合缺失和甲基化变化与其表达之间的关系，探讨其成人急性白血病发生发展中的生物学意义，方法：分别用多重聚合酶联反应（PCR）技术及甲基化敏感限制性内切酶－PCR技术检测了71例成人急性白血病患者DNA中p16基因纯合缺失及甲基情况；应用原位杂交及免疫技术检测p16基因mRNA及p16基蛋白表达，结果：71例成人急性白血病患者中，2例检测出p16基因纯合缺失，在无p16基因纯合缺失的病例中，5例急性淋巴细胞白血病（5／26）和9例急性髓性白血病（9／43）患者测出p16基因甲基化，p16mRNA及p16蛋白的阳性率分别为70．4％（50／71例）、61．9％（44／71例），结论：在成人急性白血病的发生发展中，p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义；p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关。     

WWOX和p73基因在急性髓细胞白血病中的表达

目的研究WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)和p73基因在急性髓细胞白血病(AML)中异常表达的临床意义及其机制。方法收集AML患者骨髓58例,非白血病患者骨髓31例作为对照组,采用RT-PCR检测WWOX和p73基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR检测WWOX基因启动子区和p73基因第一外显子区的甲基化情况。结果 58例AML患者中,28例WWOX基因mRNA阳性表达,30例p73基因mRNA阳性表达;23例WWOX基因启动子区存在甲基化,21例p73基因第一外显子区存在甲基化。对照组中WWOX与p73基因mRNA均有表达29例,均未见甲基化现象。WWOX和p73基因在AML中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 WWOX与p73基因的甲基化可能导致其基因的沉默,使其mRNA表达减少或缺失,在AML的发病机制中起一定作用,WWOX与p73基因甲基化的检测对AML的诊断和疗效有一定意义。     

白血病细胞多巴胺受体基因甲基化研究

目的：探讨多巴胺受体（ＤＲＤ４）基因第一外显子中ＮｏｔＩ酶切位点甲基化与急性非洒巴细胞白血病（ＡＭＬ）的关系。方法：应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印记杂交与ＤＮＡ序列分析技术对ＡＭＬ患者骨髓标本进行分析。结果：在２７例白血病患者骨髓标本中１６例ＤＲＤ４基因甲基化（５９％），其中初治化疗敏感患者ＤＲＤ４基因甲基化发生率为５０％（９／１８），复发及难治患者甲基化发生率为７８％（７／９），而９例正常人骨髓标本ＤＲ     

人原发性食管癌组织中多种抑癌基因的研究

应用ＰＣＲ扩增与直接测序技术，分析１０例食管癌和癌旁组织标本中多个抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ和ＭＣＣ的突变与丢失。结果：１０例中６例有ｐ５３基因突变；５例有Ｒｂ基因改变；３例有ＡＰＣ改变；３例有ＭＣＣ基因改变；８例食管癌标本中至少有一种抑癌基因有改变；６例至少有两种或多种抑癌基因改变，１例癌旁组织中也有两个抑癌基因改变。结果表明，食管癌癌变与多个抑癌基因变化的累积有关。     

急性白血病钙素基因甲基化的PCR检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和２２例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度。结果表明,７例ＡＬＬ与１６例ＡＭＬ的ＣＴ基因都发生了高度甲基化。临床完全缓解的３例ＡＭＬ和２例ＡＬＬ中有１例ＡＬＬ为阳性,另有１例阴性的ＡＭＬ于１个月后转为阳性,随后出现临床复发。提示急性白血病ＣＴ基因高度甲基化的ＰＣＲ检测,对ＡＬＬ与ＡＭＬ微小残留病有很重要的诊断价值,特别为缺乏恒定肿瘤细胞标志的ＡＭＬ提供了一个新的分子基因标志。     

表达CD7抗原的成人急性髓性白血病

目的：探讨表达ＣＤ７抗原的急性髓性白血病（ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ,ＡＭＬ）患者的临床特征、免疫表型及细胞遗传学特征。方法：选择１９９２年８月至１９９６年９月在我院住院治疗的成人ＡＭＬ患者９９例,采用间接免疫荧光法及Ｇ显带进行免疫表型及染色体核型分析,治疗采用我院常规化疗方案。结果：１２例（１２．１２％）ＡＭＬ患者表达ＣＤ７抗原,其中１１例（１１／１２）同时表达ＨＬＡＤＲ;受检的８例患者（１００％）皆同时表达ＣＤ３８;骨髓染色体分析,３例异常,可见－７,１７ｐ＋,９ｑ＋,５ｑ－,＋８及ｔ（８;２１）。此外,肝肿大者６例（６／１２）,完全缓解（ｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｍｉｓｓｉｏｎ,ＣＲ）者５例（５／１２）,与ＣＤ７－组比较差异有统计学意义。结论：ＣＤ７＋ＡＭＬ多同时表达ＨＬＡＤＲ、ＣＤ３８,染色体核型无特征性异常,肝肿大发生率高,ＣＲ率低,预后不良     

人喉癌P_（53）、Rb基因突变的PCR－SSCP检测

应用聚合酶链式反应一单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析）技术，检测了喉癌中抗癌基因Ｐ５３第５～８和１１外显子及Ｒｂ基因第２０外显子的突变。结果表明：Ｐ５３、Ｒｂ基因突变与癌组织病理分化程度有关，中、低分化癌的突变例数明显多于高分化癌；Ｐ５３、Ｒｂ基因突变失活与喉癌发生、发展及恶性度有关。应用上述快速敏感的检测方法检测Ｐ５３、Ｒｂ基因突变，对判断喉癌恶性度及估计预后有一定的实用价值。