通心络通过PI-3K/Akt/HIF信号通路改善血管内皮细胞缺氧损伤

目的: 观察通心络对缺氧血管内皮细胞中缺氧诱导因子(HIF)及其上游信号转导通路PI-3K/Akt的影响,探讨PI-3K/Akt/HIF信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。方法: 将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为常氧对照组、通心络组、缺氧组和缺氧+通心络组。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,Western blotting 检测HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1、Bax表达变化及Akt的磷酸化情况。利用HIF-1α的显性负性突变体(DN-HIF)瞬时转染HUVECs,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况。利用PI-3K和Akt的显性负性突变体瞬时转染HUVECs,探讨PI-3K/Akt信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。结果: 与常氧条件下比较,通心络对缺氧内皮细胞虽有明显的促增殖作用,但程度明显减弱。通心络可显著上调HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平及Akt磷酸化水平,且下调Bax的表达。利用DN-HIF抑制HIF-1α的活化后,通心络提高缺氧HUVECs活性的程度明显下降,但仍可一定程度上降低细胞凋亡百分率。进一步利用PI-3K显性负性突变体(Δp85)和Akt显性负性突变体(DN-Akt)阻断HIF-1α上游信号通路PI-3K/Akt后,通心络上调缺氧HUVECs HIF-1α蛋白表达的作用明显减弱,促进Akt磷酸化的作用基本消失。结论: 在缺氧条件下,通心络上调HUVECs HIF-1α蛋白表达水平,促进抗凋亡因子同时抑制促凋亡因子的表达,降低细胞凋亡率,从而提高缺氧细胞的增殖率,这些作用在一定程度上依赖于PI-3K/Akt/HIF通路的活性。     

HIF-1α介导了间歇低氧对人肺腺癌A549细胞体外生物学行为的影响

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是否介导间歇低氧对人肺腺癌A549细胞体外活力、凋亡以及侵袭的影响。方法:采用体外转染方法将特异性针对HIF-1α的siRNA导入A549细胞,在间歇低氧条件下培养后通过real-time PCR和Western blot法检测HIF-1α及其下游Bcl-2、Bax、P53、P21、VEGF的mRNA和蛋白表达;通过MTT法和流式细胞术分别检测A549细胞的活力、凋亡及细胞周期;通过Transwell小室检测A549细胞的侵袭能力。结果:未转染HIF-1α-siRNA的A549细胞[间歇低氧空白对照组(IHC组)、间歇低氧空载体对照组(IHE组)及间歇低氧阴性对照组(IHN组)]经间歇低氧干预后的HIF-1α、Bcl-2及VEGF表达均明显高于常氧对照组(RA组),Bax及P21表达均明显低于RA组(P0.05),而转染HIF-1α-siRNA的A549细胞[间歇低氧siRNA组(IHS组)]较IHC组、IHE组及IHN组经间歇低氧干预后的HIF-1α、BCL-2及VEGF表达均明显下调,Bax及P21表达较均明显上调(P0.05);所有间歇低氧组A549细胞的P53表达均较RA组升高(P0.05),但各间歇低氧组之间无显著性差异。IHC组、IHE组及IHN组A549细胞经间歇低氧干预后较RA组的细胞活力增强,凋亡率下降,侵袭力增强(P0.05),而IHS组A549细胞经间歇低氧干预后细胞周期被阻滞于G1期,较未转染组的细胞活力下降,凋亡增加,侵袭能力下降(P0.05)。结论:间歇低氧可通过HIF-1α途径调控其下游基因表达进而促进A549细胞的活力和转移;通过RNA干扰技术造成HIF-1α基因沉默可以抑制间歇低氧引起的A549细胞生长和转移。     

一氧化碳对缺氧预适应小鼠缺氧诱导因子-1表达的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠中一氧化碳对缺氧诱导因子-1表达和缺氧耐受时间的影响。方法:小鼠腹腔注射生理盐水(NS)或氯化高铁血红素(hemin)后,进行重复缺氧4次实验,Western印迹法检测海马中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,并记录缺氧耐受时间。结果:缺氧1次和2次,注射NS和注射hemin小鼠海马中HIF-1α的水平基本相同,缺氧耐受时间相似。重复缺氧3次和4次,注射hemin小鼠海马中HIF-1α含量少于注射NS小鼠,缺氧耐受时间低于注射NS小鼠(P＜0.05)。结论:在缺氧预适应模型中,一氧化碳能减少海马中HIF-1α的表达,进而降低缺氧耐受时间。其机制可能为一氧化碳抑制血红素蛋白氧感受器的功能。     

缺氧后适应中HSP70对心肌细胞TLR4/NF-κB信号通路及免疫炎性损伤的影响

为探讨缺氧后适应(hypoxic postconditioning, HPC)中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤的作用及其机制,将H9C2心肌细胞分为4组:对照组(常氧培养10 h)、H/R组(缺氧4 h后复氧6 h)、 HPC组(缺氧4 h后行复氧5 min/缺氧5 min,共3次,再复氧6 h)、HPC+槲皮素(quercetin, Quer)组(缺氧前1 h加50μmol/L的HSP70抑制剂Quer后行HPC)。采用Hoechst 33242染色观察细胞形态变化,FACS检测细胞凋亡情况,Western blotting检测HSP70、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、Caspase-3蛋白表达水平。结果显示,HPC组HSP70、Bcl-2表达水平较H/R组显著升高(P0.05),TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平较H/R组显著下降(P0.05);HPC+Quer组HSP70、Bcl-2表达水平较HPC组显著下降(P0.05),TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平较HPC组显著升高(P0.05)。该研究提示,HPC可通过上调HSP70表达抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻H/R诱导的心肌细胞免疫炎症损伤。     

siRNA敲减缺氧诱导因子1α表达对口腔鳞癌细胞活力及癌胚抗原相关细胞黏附分子1表达的影响

目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与口腔鳞癌细胞活力和凋亡的关系以及作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测口腔鳞癌细胞系Tca8113和CAL27以及正常口腔上皮细胞NOK中HIF-1α和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)的mRNA和蛋白表达量; RNA干扰技术沉默口腔鳞癌CAL27细胞中HIF-1α的表达,实验分为空白对照组、无义对照组和siRNA-HIF1-α组,MTT实验检测敲减HIF-1α表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测HIF-1α、P21、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:HIF-1α和CEACAM1在口腔鳞癌细胞中的表达量显著高于正常口腔细胞(P 0. 05),且二者表达量呈正相关; HIF-1α和CEACAM1在CAL27细胞中的表达量显著高于Tca8113细胞(P 0. 05)。siRNA-HIF-1α组细胞中的HIF-1α蛋白表达量显著低于空白对照组(P 0. 05)。敲减HIF-1α表达显著抑制CAL27细胞的活力(P 0. 05),促进其凋亡(P 0. 05),显著增加P21和Bax的蛋白水平(P 0. 05),明显降低VEGF和Bcl-2的蛋白水平(P 0. 05)。结论:HIF-1α在口腔鳞癌中高表达,干扰HIF-1α的表达可显著抑制细胞的活力,促进其凋亡。这可能是通过调控HIF-1α下游靶基因的表达以及肿瘤血管的生成来发挥作用的。     

缺氧预适应小鼠中一氧化氮合酶与缺氧诱导因子-1的表达

目的　探讨缺氧预适应小鼠海马组织中内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)和缺氧诱导因子 1α的表达。　方法　HeLa细胞分为 :不缺氧 (H0 组 )、缺氧 1h(H1 组 )和缺氧 4h组 (H4组 ) ;小鼠分为 3组 :不缺氧 (M0 组 )、急性缺氧 1次 (M1 组 )和重复缺氧 4次组 (M4组 ) ,SDS PAGE和Western印迹法检测HIF 1α和eNOS的表达。　结果　H0 组HeLa细胞中未见HIF 1α ,H1 组出现少量HIF 1α ,H4组HIF 1α有所增加。M0 组小鼠海马中几乎检测不到HIF 1α ,可见eNOS ;M1 组可检测到较少的HIF 1α,eNOS无明显变化 ;M4组HIF 1α和eNOS水平均增高。　结论　慢性缺氧HeLa细胞中出现HIF 1α ,可作为检测HIF 1α的阳性对照 ;随着小鼠缺氧次数的增加 ,HIF 1α和eNOS的水平均升高 ,提示它们可能参与预适应的保护作用     

低氧及一氧化氮对SW480细胞缺氧诱导因子-1α、VEGF及iNOS 表达的初步研究

目的：观察一氧化氮(NO)对低氧培养的人结肠腺癌细胞株SW480中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法： 运用免疫细胞化学检测HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白表达，Western blot检测HIF-1α蛋白表达。原位杂交法检测HIF-1α mRNA表达。结果： 免疫细胞化学染色图像分析结果显示：低氧组细胞HIF-1α、VEGF和iNOS蛋白表达水平显著高于常氧组(P<0.01，P<0.01，P<0.05)和低氧＋genistein（三羟基异黄酮）组（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。低氧条件下，SNP（硝普钠）显著抑制HIF-1α、VEGF蛋白的表达,但对iNOS表达无明显影响；NOC5（NO发生剂）诱导HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达；NO抑制剂L-NAME(N-硝基精氨酸甲酯)则抑制3者的表达。 Western blot结果显示：低氧培养条件下，HIF-1α呈强表达，给予genistein能显著抑制其表达；而给予SNP和L-NAME后，蛋白表达量减少，给予NOC5，则蛋白表达增强。原位杂交结果显示：常氧组、低氧组及低氧＋genistein组、低氧＋SNP组、低氧＋NOC5组、低氧＋L-NAME组HIF-1α mRNA表达A值组间均无显著差异。结论： 低氧诱导SW480细胞HIF-1α蛋白表达量增高，从而上调VEGF和iNOS表达。低氧条件下，NO供体SNP抑制SW480细胞HIF-1α蛋白及VEGF表达，而另一种供体NOC5则促进HIF-1α表达，两种供体对HIF-1表达的影响可能存在不同的机制。     

通心络对低压低氧性肺动脉高压大鼠HIF-1α及相关因子的作用

目的:探讨通心络对低压低氧性肺动脉高压大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及相关因子的影响。方法:30只体重200-250g的SD雄性大鼠,随机分为常压常氧对照组(对照组)、低压低氧模型组(模型组)、低压低氧+通心络干预组(通心络干预组),每组10只。采用低压低氧舱模拟海拔5 000m的高原环境(大气压50kp,氧浓度10%)。模型组和通心络干预组大鼠每日入舱8h,其余时间为常压常氧环境。通心络干预组每天入舱前给予通心络1.2g生药/kg灌胃1次,对照组于同一实验室的常压常氧环境中饲养。4周后比较各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室(RV)肥厚指数以及血清HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)等因子水平。结果:4周后,与对照组相比,模型组大鼠mPAP、RV肥厚指数及HIF-1α、VEGF、ET-1等因子水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,通心络干预组大鼠mPAP、RV肥厚指数及血清HIF-1α、VEGF、ET-1等因子水平均显著降低(P0.05),且RV肥厚指数及血清HIF-1α、ET-1水平与对照组水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:通心络可能通过降低HIF-1α水平等干预低压低氧性肺动脉高压的发生发展。     

急性重复低氧预适应小鼠海马组织蛋白磷酸酶1γ表达的变化

目的:检测急性重复低氧预适应小鼠海马脑组织中蛋白磷酸酶(protein phosphatase,pp)1γ的变化,探讨pp1γ的变化在低氧预适应脑保护中的作用。方法:成年昆明小鼠随机分成低氧暴露1次组(H1)或低氧暴露4次(H4)组和常氧组(H0)。低氧结束后取海马组织,应用Real-time PCR技术和蛋白印记技术检测pp1γ表达的变化;应用磷酸酶活性实验对pp1活性的变化进行检测;应用甲基化测序实验对pp1γ启动子区(95~321 bp)甲基化变化进行检测。结果:pp1γ的mRNA在H4组表达较H0组降低,差异有统计学意义(P0.01);pp1γ的蛋白质变化与mRNA变化一致,在H4组的表达较H0组降低,差异有统计学意义(P0.05);pp1γ水解磷酸的活性在H4组和H1组均低于H0组(P0.05);pp1γ启动子区(95~321 bp)DNA甲基化情况在三组间未见差异。结论:pp1γ变化可能参与了低氧预适应小鼠获得的脑保护,但该变化可能与其启动子区(95 bp~321 bp)的甲基化无关。     

HIF-1α/SDF-1信号轴在低氧诱导祖细胞迁移和黏附中的作用

目的: 分析低氧对大鼠肺动脉内皮细胞低氧诱导因子(HIF-1α)及间质细胞衍生因子(SDF-1)表达的影响,探讨二者的相互关系(即是否存在HIF-1α/SDF-1信号轴)及其在低氧诱导祖细胞迁移和黏附中的作用。方法: 免疫磁珠分离纯化SD大鼠外周血CD34/CXCR4阳性祖细胞,免疫荧光、Western blotting及ELISA法检测不同低氧时间HIF-1α和SDF-1在大鼠肺动脉内皮细胞的表达,迁移和黏附实验检测常氧组、低氧组、HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2)组、SDF-1中和抗体组及同时加2ME2和SDF-1中和抗体组祖细胞的迁移指数和黏附率。结果: HIF-1α和SDF-1的表达与低氧时间有关,低氧12 h时二者表达到峰值(均P<0.01),应用2ME2可使SDF-1表达下调(P<0.05),应用2ME2或SDF-1中和抗体后均下调祖细胞的迁移指数和黏附率(P<0.05)。结论: 低氧可诱导肺动脉内皮细胞HIF-1α及受其调控的下游因子SDF-1的表达,提示HIF-1α与SDF-1存在信号调节关系。HIF-1α/SDF-1信号轴在介导祖细胞迁移和黏附至肺动脉内皮细胞的过程中起重要作用。     

反复低氧对小鼠脑内神经肽Y免疫反应活性的影响

目的:观察反复低氧对小鼠脑内神经肽Y(NPY)免疫反应活性的影响。方法:昆明小鼠40只随机分为对照组、低氧1次(H₁)组、低氧2次(H₂)组、低氧3次(H₃)组和低氧4次(H₄)组。对低氧各组动物分别行不同次数的反复低氧。各组动物脑内NPY的免疫反应活性采用放射免疫测定法测定。结果:小鼠对低氧的标准耐受时间随反复低氧次数的增加而显著增加。经1次低氧和2次低氧后小鼠脑内NPY的免疫反应活性明显提高,分别为正常对照组的145.5%±3.2%和147.3%±2.5%(P＜0.01);而低氧3次后则降到正常对照水平。结论:反复低氧通过预适应能显著提高小鼠对低氧的耐受性,并可诱导小鼠脑内NPY免疫反应活性在预适应形成的早期一过性地上升。     

西红花酸对H2O2诱发心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的影响

目的：探讨西红花酸对过氧化氢（H₂O₂）诱导的培养心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的作用。 方法： 通过光镜观察细胞形态、碘化丙啶（PI）染色法和流式细胞术相结合检测培养细胞凋亡率、免疫荧光染色法和流式细胞术相结合检测细胞中caspase-3、Bcl-2蛋白。 结果： 在本实验使用浓度范围内，各浓度H₂O₂组细胞形态明显改变、凋亡率明显高于正常对照组，1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂可使培养心肌细胞Bcl-2蛋白表达明显减少，而caspase-3表达明显增多；各剂量西红花酸组细胞形态学改变减少、凋亡率明显低于1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂组，细胞中Bcl-2蛋白减少幅度与caspase-3增加幅度均减小，且较高浓度（5×10^-5 mol·L^-1）西红花酸组比较低浓度（5×10^-7 mol·L^-1）西红花酸组作用也更明显（P<0.05）。 结论： 西红花酸能够减轻H₂O₂对培养心肌细胞的损伤性凋亡作用，可能与稳定细胞内凋亡相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2的功能有关。     

AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老及凋亡相关基因的表达

目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。方法: 体外培养人脐静脉内皮细胞, 采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率，用AngⅡ(10^-6mol/L)及valsartan（AngⅡ1型受体特异性拮抗剂）干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组及valsartan组，采用β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术鉴定细胞衰老，通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化，并利用免疫细胞化学染色法、RT-PCR法和Western blotting分析各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA及蛋白的表达水平。结果: 与对照组相比，10^-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的（81.90±0.04)%; (80.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色。流式细胞仪检测细胞周期停滞于G₀-G₁［(91.36±6.45)%］，证实细胞衰老；荧光显微镜可见明显的细胞凋亡［(31.84±2.86)%］。与AngⅡ诱导组相比，valsartan组Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05), Bax mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论: AngⅡ可诱导体外培养的HUVECs老化。经AngⅡ诱导的衰老HUVECs发生凋亡，提示细胞凋亡参与了AngⅡ诱导HUVECs细胞的衰老过程。AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老的分子机制之一可能与Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达的失衡有关。缬沙坦对血管内皮细胞衰老有一定保护作用。     

化学预处理对低氧预适应模型小鼠的影响

背景：低氧诱导因子1α调节一些增加抗低氧耐受的基因的表达。氯化钴是一种能够稳定低氧诱导因子1α的化学试剂。 目的：检测氯化钴预处理对急性重复低氧小鼠的影响。 方法：Balb/C小鼠随机分为预处理组和对照组,实验前3 h,两组分别注射氯化钴和生理盐水后, 分别进行0次(正常对照组),1次,4次缺氧暴露,随即分别取海马组织进行指标检测。 结果与结论：预处理组缺氧暴露1次对低氧耐受时间显著高于对照组缺氧暴露1次,预处理组缺氧暴露1次,4次低氧耐受时间差异无显著性意义。对照组中缺氧暴露4次组低氧诱导因子1的DNA结合活力显著高于缺氧暴露1次组和正常对照组,组间比较差异有显著性意义。预处理组中缺氧暴露1次组低氧诱导因子1的DNA结合活力显著高于正常对照组(P < .01),缺氧暴露4次组低氧诱导因子1的DNA结合活力急剧下降,显著低于缺氧暴露1次组和正常对照组。对照组促红细胞生成素和血管内皮生长因子mRNA 在缺氧暴露1次组和缺氧暴露4次组升高,各组间比较差异有显著性意义(P < 0.05)。预处理组促红细胞生成素和血管内皮生长因子mRNA表达组间比较差异无显著性意义。提示氯化钴预处理能够提高低氧耐受时间,降低低氧预适应诱导的耐受时间及低氧诱导因子1 DNA结合能力。     

Diazoxide对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用

目的： 研究线粒体膜上ATP敏感钾通道（MitoK_ATP）开放剂diazoxide和线粒体膜电位（ΔΨm）在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用，探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法： 取大鼠正常肺组织，分离出肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）进行常氧或慢性缺氧培养。将样本分为6组：① 正常对照组；② 线粒体膜上ATP敏感钾通道（MitoK_ATP）开放剂diazoxide组；③ MitoK_ATP 阻断剂5-HD组；④ 慢性缺氧(CH)组；⑤ CH+diazoxide组；⑥ CH+5-HD组。利用激光共焦显微镜（Leica SP-1 USA）成像检测线粒体膜电位，荧光染色检测细胞内氧自由基含量，流式细胞仪检测细胞周期和MTT法检测细胞增殖情况。结果： ① Diazoxide作用24 h后，R-123荧光强度明显强于正常对照组，线粒体膜电位去极化，细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组，细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组，P<0.05；而5-HD作用24 h后，上述指标与正常对照组相比较，均无显著差异,P>0.05；②慢性缺氧24 h，结果与diazoxide组相似，R-123荧光强度明显强于正常对照组，线粒体膜电位去极化，细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组，细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组，P<0.05；CH+diazoxide组，R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显强于缺氧组，细胞内氧自由基含量明显高于缺氧组，细胞增殖明显多于缺氧组、凋亡少于缺氧组，P<0.05；CH+5-HD组，R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显弱于缺氧组，细胞内氧自由基含量明显低于缺氧组，细胞增殖明显少于缺氧组、凋亡多于缺氧组，P<0.05;R-123荧光强度、MTT的A值与细胞内氧自由基含量均呈显著正相关；凋亡细胞百分比与细胞内氧自由基含量呈显著负相关。结论： 本实验结果显示，diazoxide能够通过开放线粒体膜上ATP敏感的钾通道，引起ΔΨm去极化，ΔΨm的变化影响细胞内氧自由基的含量，氧自由基可能作为信号分子通过影响肺动脉平滑肌细胞的增殖/凋亡的平衡，参与了缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压的发生和发展过程。     

［Ca2+］i对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯离子通道的调节作用

目的： 探讨细胞浆内游离钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）在常氧、急性和慢性低氧条件下对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜钙激活氯离子通道（Cl_Ca）的调节作用。 方法: 常规离体血管灌流法检测急性低氧时肺动脉环张力变化；钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养PASMCs，观察常氧和慢性低氧条件下［Ca²⁺］_i的变化并由此对Cl_Ca的影响；同时用四唑盐(MTT)比色法观察当［Ca²⁺］_i变化时Cl_Ca对PASMCs增殖的影响。 结果: (1) Cl_Ca阻断剂尼氟灭酸（NFA）和indaryloxyacetic acid (IAA-94)可以舒张急性低氧引起的肺动脉环收缩。(2) 慢性低氧时［Ca²⁺］_i升高：常氧状态下, PASMCs ［Ca²⁺］_i为(123.63±18.98)nmol/L，低氧时为(281.75±16.48)nmol/L (P<0.01)。(3) 常氧时，NFA和IAA-94对［Ca²⁺］_i 无明显影响(P>0.05)。(4) 慢性低氧时, NFA和IAA-94使PASMCs ［Ca²⁺］_i由(281.75±16.48)nmol/L降低到(117.66±15.36)nmol/L (P<0.01)。(5)MTT比色法中，慢性低氧状态下NFA和IAA-94引起升高的吸光度(A)值降低，由0.459±0.058到0.224±0.025 (P<0.01)。 结论: 低氧引起［Ca²⁺］_i升高，这可能激活Cl_Ca，对［Ca²⁺］_i起正反馈作用，Cl_Ca可能在低氧肺动脉高压中起作用；慢性低氧条件下Cl_Ca可能参与促进大鼠PASMCs的增殖。