肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因ubiquitin mRNA表达的影响

目的观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨DN的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察多项指标,通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果泛素mRNA(ubiquitin mRNA)在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,ubiquitin mRNA基因是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一。糖尿病状态下,ubiquitin mRNA基因表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中ubiquitinm RNA表达下调。肾消康对ubiquitin mRNA基因表达具有良性调节作用。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响

[目的]观察中药复方肾消康对糖尿病。肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机制,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。[方法]本实验采用链脲佐菌素（STZ）加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT—PCR法做验证实验研究。[结果]鸟嘌呤核苷酸结合蛋白cd2（Gna12）,在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康中剂量组表达上调。[结论]应用Aflymetrix Rat2302．0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,Gna12是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT—PCR测序分析。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,Gna12表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12表达上调,可见肾消康对Gna12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Alox12表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Alox12基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发生与Alox12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点。方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型。运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法,观察Alox12基因表达的变化。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶(Alox12),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论:在糖尿病肾损伤状态下,Alox12表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Alox12表达下调,可见肾消康对Alox12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Aloxl2表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Aloxl2基因表达的影响,探讨糖尿病肾痛(DN)的发生与Alox 12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点.方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型.运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox 12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT - PCR法,观察Aloxl2基因表达的变化.结果:花生四烯酸12-脂加氧酶( Aloxl2),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调.结论:在糖尿痛肾损伤状态下,Aloxl2表达上调,与糖尿痛肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Aloxl2表达下调,可见肾消康对Aloxl2基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究.     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因CcL5mRNA表达的影响

目的：比较糖尿病肾病（DN）大鼠和中药复方肾消康治疗组大鼠肾脏组织中基因表达的差异，并用Evegreen实时荧光RT—PCR技术定量检测CcL5mRNA在各组大鼠肾脏组织的表达水平。方法：（1）差异表达基因的筛选：实验大鼠分为空白组、模型组、治疗组。从肾脏组织中抽提mRNA，由纯化的总RNA合成双链cDNA，并将其纯化，以生物素标记cRNA合成，纯化和质控体外转录（IVT）产物，片断化cRNA，然后进行杂交、洗脱、染色、芯片扫描并用软件进行统计分析，筛选出差异表达数据。不同肾脏组织样本用灰度扫描图和杂交信号强度散点图表示。（2）荧光定量RT—PCR的检测：RNA样品反转录，荧光定量PCR反应。结果：仅对筛选出差异表达基因谱中的CcL5mRNA进行报告。糖尿病肾病模型组肾脏组织基因CcL5mRNA表达上调，中药复方肾消康治疗组肾脏组织基因CcL5mRNA表达下调。结论：CcL5mRNA在糖尿病状态下肾脏也有表达，并且表达上调，而中药复方肾消康可使其下调，这也是中药复方对糖尿病性肾组织损伤具有保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因CcL5mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病肾病（DN）大鼠和中药复方肾消康治疗组大鼠肾脏组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测CcL5mRNA在各组大鼠肾脏组织的表达水平。方法:（1）差异表达基因的筛选:实验大鼠分为空白组、模型组、治疗组。从肾脏组织中抽提mRNA,由纯化的总RNA合成双链cDNA,并将其纯化,以生物素标记cRNA合成,纯化和质控体外转录（IVT）产物,片断化cRNA,然后进行杂交、洗脱、染色、芯片扫描并用软件进行统计分析,筛选出差异表达数据。不同肾脏组织样本用灰度扫描图和杂交信号强度散点图表示。（2）荧光定量RT-PCR的检测: RNA样品反转录,荧光定量PCR反应。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的CcL5mRNA进行报告。糖尿病肾病模型组肾脏组织基因CcL5mRNA表达上调,中药复方肾消康治疗组肾脏组织基因CcL5mRNA表达下调。结论:CcL5mRNA在糖尿病状态下肾脏也有表达,并且表达上调,而中药复方肾消康可使其下调,这也是中药复方对糖尿病性肾组织损伤具有保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及对tensin表达的影响

目的：探讨肾消康对糖尿病肾病（DN）的保护作用及机理。方法：建立糖尿病肾病大鼠模型,以肾消康治疗,观察各组大鼠的血糖、尿素氮、肌酐、24h尿微量白蛋白的数值及tensin的表达。结果：正常大鼠肾脏tensin表达很弱,DN大鼠肾脏tensin表达明显增强（与正常对照组相比P〈0.01,有统计学意义）,肾消康对DN大鼠肾脏组织tensin的表达有下调作用（与模型组相比P〈0.01,有统计学意义）。同时肾消康能有效降低血糖、尿素氮、肌酐、尿微量白蛋白。结论：肾消康能够调节血糖水平,下调ten-sin的表达,降低尿素氮、肌酐、尿微量白蛋白,从而防止肾纤维化及延缓肾衰。     

中药复方糖肾康对实验性糖尿病大鼠肾组织中TNF-α mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方糖肾康胶囊对早期糖尿病肾病的肾脏保护机制.方法:大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、糖脉康治疗组(C组)、伊那普利治疗组(D组)、糖肾康治疗组(E组),每组10只.观察8周后,用RT-PCR检测各组肾皮质TNF-α mRNA的表达.检测体重、血糖、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾重指数.结果:B组8周后出现体重显著降低(P＜0.01);血糖、肾重指数、血BUN与Cr水平显著升高(P＜0.01);肾皮质TNF-α mRNA的表达明显增高(P＜0.01).经过糖肾康8周的治疗后,体重显著回升(P＜0.01);血糖、肾重指数、UAER显著降低(P＜0.01);肾皮质TNF-α mRNA的表达明显降低(P＜0.01).结论:糖肾康对早期糖尿病肾病的肾脏具有保护作用.其机制可能为糖肾康下调TNF-α系统的表达,后者有抑制细胞肥大、减少细胞外基质成分的合成的作用.     

糖心康对糖尿病大鼠心肌基因Alox 12mRNA表达的影响

观察中药复方糖心康对糖尿病心肌损伤大鼠的作用机理。方法：采用链脲佐菌素（S1Z）加高热量饮食建立糖尿病大鼠心肌损伤模型。采用美国Affymetrix Rat2302．0基因表达谱芯片及聚类分析，筛选差异表达基因，采用荧光定量RT—PCR法验证。结果：花生四烯酸12-脂加氧酶mRNA（Alox12mRNA）是筛选出的差异表达基因。在糖尿病状态下，Alox12mRNA基因表达上调，经糖心康治疗后表达下调。结论：Alox12mRNA和糖尿病心肌损伤有重要相关性，糖心康对其有良性调节作用。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌基因Alox 12mRNA表达的影响

观察中药复方糖心康对糖尿病心肌损伤大鼠的作用机理。方法:采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠心肌损伤模型。采用美国Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片及聚类分析,筛选差异表达基因,采用荧光定量RT-PCR法验证。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶mRNA(Alox12 mRNA)是筛选出的差异表达基因。在糖尿病状态下,Alox12 mRNA基因表达上调,经糖心康治疗后表达下调。结论:Alox12 mRNA和糖尿病心肌损伤有重要相关性,糖心康对其有良性调节作用。     

泽黄颗粒对糖尿病大鼠肾组织Nephrin表达的调节效应

目的探讨泽黄颗粒对糖尿病大鼠肾组织nephrin表达的调节。方法用高脂高糖饲料加小剂量STZ诱导糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病模型组(DM组)、泽黄颗粒治疗组(Z组)、格列吡嗪对照组(G组)和正常对照组(N组)。实验第12周末检测BG、Cc(r肌酐清除率)及UAER(尿白蛋白排泄率),观察肾组织病理改变,运用免疫组织化学、Western-Blot、Real-Time PCR法检测肾脏nephrin蛋白及mRNA表达的变化。结果泽黄颗粒可以改善DM大鼠Ccr,降低UAER,改善肾脏病理,减轻足突融合,维持足细胞相关蛋白分子的分布与表达。结论泽黄颗粒通过上调足细胞相关蛋白分子nephrin水平而减轻足细胞损伤,对糖尿病大鼠足细胞损伤有保护作用。     

肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠疗效的实验研究

目的通过中药肾糖颗粒对糖尿病大鼠的治疗作用,探讨其临床实验效果。方法采用高脂饲料喂养＋STZ腹腔注射方法制作糖尿病肾病大鼠模型。分为正常对照组、模型对照组、中药治疗组（肾糖颗粒）、西药治疗组（盐酸贝那普利）、中西药治疗组（肾糖颗粒＋盐酸贝那普利）,观察各组大鼠治疗前后一般情况,并测定治疗后空腹血糖,24h尿蛋白定量,尿微量白蛋白,α1-微球蛋白、β2-微球蛋白、尿转铁蛋白、尿视黄醇结合蛋白。结果经肾糖颗粒治疗8周后,大鼠一般状况较模型对照组改善较好,体质量增加。空腹血糖,与模型组比较,各治疗组显著降低;24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、α1-微球蛋白、β2-微球蛋白,各治疗组也分别显著低于模型组;尿转铁蛋白、尿视黄醇结合蛋白,各治疗组均分别显著低于模型组。结论肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠有治疗效果,可以改善其肾功能,延缓糖尿病的肾脏损伤。     

黄芩苷凝胶治疗糖尿病肾病伴牙周病大鼠的实验研究

目的：通过动物实验,观察黄芩苷凝胶对大鼠糖尿病肾病伴牙周病的疗效.方法：将65只健康雄性SD大鼠,随机分为健康对照组、模型对照组和黄芩苷凝胶组,模型对照组和黄芩苷凝胶组采用单侧肾切除、牙周结扎并腹腔注射链脲佐菌素（STZ）以建立糖尿病肾病伴牙周病大鼠模型.建模成功后,黄芩苷凝胶组用黄芩苷凝胶注射于该组大鼠第一磨牙牙周袋内.4周后,麻醉下截取包括实验区磨牙上颌骨,上颌第一磨牙牙周组织用10％的甲醛固定、15％ EDTA脱钙30天,常规梯度乙醇脱水,石蜡包埋,颊舌向制作5μm的切片,HE染色,光镜下观察牙周组织病理变化.结果：实验结束后,组织学观察,黄芩苷凝胶组牙龈指数和牙龈萎缩均低于模型对照组,但仍高于健康对照组,三组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：黄芩苷凝胶对糖尿病肾病伴牙周病有良好的治疗作用.     

雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾性炎性损伤的保护作用

目的观察分析雷公藤多苷改善糖尿病肾病大鼠肾性炎性损伤的保护效果。方法选择75只雄性SD大鼠作为研究对象,包含10只大鼠为对照组,另外65只大鼠为模型组,通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病大鼠模型,共64只大鼠成功,并采用随机数字抽取表法将成功的大鼠分为模型组、雷公藤多苷组和罗格列酮组,雷公藤多苷组又分为9mg/kg、18mg/kg。观察分析给药后不同组大鼠的尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白量、血清中IL-1β水平,血清IL-17水平、IFN-y水平。结果模型组与对照组相比,其尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白量含量、血清IL-1β、血清IL-17、IFN-y水平含量显著升高,数据比较差异具有统计学意义(P0.05);9mg/kg雷公藤多苷组、18mg/kg雷公藤多苷组和罗格列酮组与模型组相比,尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白量含量显著降低,数据比较差异具有统计学意义(P0.05)。18mg/kg雷公藤多苷组和罗格列酮组与模型组相比,血清IL-1β、血清IL-17、IFN-y水平显著降低,数据比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论雷公藤多苷改善糖尿病肾病大鼠肾性炎性损伤效果显著,能够明显降低血清和肾脏炎性因子水平,实现对肾脏的保护,具有较高的研究价值。     

黄芩苷对糖尿病肾病大鼠肾功能及其抗氧化应激作用的研究

目的研究黄芩苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能的影响,并从抗氧化应激反应的角度探讨其作用机制。方法采用链尿佐菌素单次腹腔注射法造成DN大鼠模型,腹腔注射黄芩苷水溶液。6周后所有大鼠称体重、肾重,并计算肾指数;收集大鼠24h尿液,测尿微量蛋白值、尿肌酐值;一侧肾脏做电镜及病理形态学检查,另一侧肾脏匀浆后测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果黄芩苷组尿微量蛋白含量明显减少,尿肌酐排泄量增加,与模型组比较差异有显著性(P<0.05);肾脏组织学观察显示,黄芩苷组肾小球基底膜较模型组明显变薄,系膜区细胞外基质(ECM)沉积减少,硬化的肾小球数量减少,肾小管上皮细胞水肿现象明显减轻,足细胞密度增加,足突融合现象减轻;黄芩苷组SOD活性升高,与模型组比较差别有统计学意义(P<0.05);黄芩苷组GSH-PX活性较模型组升高,但两者差别无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩苷可减轻DN大鼠蛋白尿、提高尿肌酐排泄功能、减少肾脏ECM沉积,延缓DN的发展进程,其作用机制可能与提高肾脏抗氧化系统功能,从而减轻DN时肾脏局部氧化应激反应有关。     

糖肾平对糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响＊

目的 探讨糖肾平对采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞损害的抑制和对PI3K/AKT信号转导通路的调控作用。方法 雄性Wistar大鼠74只，从中随机选取10只作为空白对照组，剩余大鼠进行一次性腹腔注射STZ造模，造模成功并且存活的大鼠随机分为：模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小剂量、糖肾平大剂量组。灌胃给药剂量为：厄贝沙坦组17.5 mg·kg^-1，1 mL/100 g；糖肾平小剂量组0.525 g·kg^-1，1 mL/100 g；糖肾平大剂量组2.1 g·kg^-1，1 mL/100 g；每4周称取大鼠体质量并测定24 h尿蛋白定量，第14周股动脉取血处死大鼠，称取肾脏质量；TUNEL染色观察肾组织足细胞凋亡；免疫组化测定肾组织PI3K、AKT、Bad蛋白表达情况；RT-PCR检测大鼠肾组织PI3K、AKT、Bad、CD2AP及nephrin mRNA表达情况。结果 与正常组比较，模型组大鼠多饮、多食、多尿、形体消瘦、皮毛干枯并且动作迟缓；大鼠肾组织中足细胞数目明显减少，PI3K及AKT表达明显降低，Bad表达明显升高（P ＜ 0.01）；经过治疗后各组大鼠一般情况均有明显好转，足细胞数目较模型组明显增多；与模型组比较，厄贝沙坦组PI3K及AKT表达明显升高，Bad阳性反应物明显较少（P ＜ 0.01）；糖肾平各治疗组PI3K及AKT表达升高，而Bad阳性反应物呈剂量依赖性得明显较少，有统计学显著差异（P ＜ 0.01）。结论 糖肾平能抵抗糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡，其作用机制与PI3K-AKT信号通路有关。     

葛根素对糖尿病肾病大鼠内皮素表达的影响

目的观察葛根素对糖尿病肾病内皮素表达的影响。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组。治疗12周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖、尿素氮、血肌酐,内生肌酐清除率、24 h尿蛋白排泄率,免疫组织化学检测肾小球ET表达。结果造模组大鼠均出现肾脏功能损害;葛根素能改善基本状况,降低糖尿病大鼠的尿素氮、血肌酐、24 h尿白蛋白排泄率,增加内生肌酐清除率,ET表达显著降低。结论葛根素具有确切的肾脏保护作用。     

糖肾清1号对糖尿病肾病模型大鼠肾组织MCP-1,RANTES表达的影响

目的:观察中药糖肾清1号高、中、低剂量对糖尿病肾病肾组织局部CC族细胞趋化因子表达的影响。方法:建立糖尿病肾病大鼠模型,设正常组、模型组、卡托普利组、糖肾清1号高、中、低剂量组,正常组和模型组每日予去离子水10 m L·kg~(-1)灌胃;卡托普利组每日予卡托普利2.33 mg·kg~(-1)灌胃,糖肾清1号高、中、低剂量组每日分别予糖肾清1号颗粒187,93.5,46.75 mg·kg~(-1)灌胃,连续给药12周后取材。采用时实荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)mRNA转录,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MCP-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定RANTES蛋白表达水平。结果:糖肾清1号可以下调肾组织的MCP-1,RANTES mRNA转录和蛋白表达(P0.05,P0.01),并且呈量效依赖性,肾组织MCP-1和RANTES的表达量为糖肾清1号高剂量组中剂量组低剂量组,中药各组以糖肾清1号高剂量组疗效明显。结论:糖肾清1号可通过抑制肾组织MCP-1,RANTES mRNA转录和蛋白表达,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

祛痰通络汤对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin蛋白表达的影响

目的 观察祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(nephrin)表达的影响,探讨其防治DN的作用机制.方法 制作大鼠糖尿病肾病模型,分为正常对照组、模型组、贝那普利治疗组及祛痰通络汤低、中、高剂量组,干预8周.观察各组24h尿蛋白定量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化观察肾组织nephrin蛋白表达的变化.结果 经过祛痰通络汤治疗后,24h尿蛋白定量下降;病理改变减轻;nephrin蛋白表达增加.结论 祛痰通络汤对DN大鼠具有一定的肾脏保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin蛋白表达有关.