气体冲击致豚鼠耳蜗损伤后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达

目的:观察气体冲击致豚鼠耳蜗损伤后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达。方法:实验于2005-01/06在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。选择健康白色红目豚鼠20只,随机分为正常对照组和气体冲击致伤组,各10只。实验组用30kPa压力气体冲击致伤豚鼠耳蜗,冲击20次,间隔20s/次;正常对照组不进行气体冲击致伤。实验前后测试听性脑干反应阈值,冲击波暴露后12h处死动物制作耳蜗标本。免疫组化法测定天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达。结果:纳入豚鼠20只,均进入结果分析。①实验组听性脑干反应阈值较正常对照组明显上升[(50.94±5.98),(5.60±1.78)dBnHL,t=22.98,P<0.01],听力下降明显。②免疫组织化学染色结果显示实验组豚鼠耳蜗天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3反应阳性,柯蒂氏器及血管纹、螺旋神经节细胞的细胞质内有染色程度不同的棕黄色颗粒分布,染色阳性细胞数以血管纹、螺旋神经节细胞较多,愈近底回愈多,愈近顶回则愈少。对照组无阳性表达。结论:天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3在气体冲击致豚鼠耳蜗损伤后呈阳性表达,提示耳蜗细胞凋亡在冲击波致聋的发病机制中起重要作用。     

冲击波对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞Caspase-3的影响及与听阈阈移相关性研究

目的:探讨气体冲击致豚鼠耳蜗损伤后耳蜗螺旋神经节细胞中Caspase-3的表达及与听阈阈移的相关性,对冲击波的致聋机制进行探讨。方法:20只豚鼠随机分为2组,实验组用气体冲击致伤装置对豚鼠耳蜗致伤,实验前后测试听力,12h后处死动物制作耳蜗标本,透射电镜、原位末端标记技术观察耳蜗螺旋神经节细胞凋亡情况及免疫组化法测定Caspase-3的表达。结果:实验组听性脑干反应(ABR)阈值较正常对照组明显上升,听力下降明显。透射电镜观察,实验组螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重,核变形,线粒体肿胀,粗面内质网增多;正常对照组螺旋神经节细胞核无变化,结构正常。原位末端标记显示,实验组耳蜗螺旋神经节细胞出现凋亡现象,愈近底回愈多,愈近顶回则愈少,正常对照组无凋亡现象。免疫组化显示,实验组耳蜗螺旋神经节细胞Caspase-3表达阳性,正常对照组无阳性表达。结论:气体冲击致豚鼠耳蜗损伤可致耳蜗螺旋神经节细胞发生凋亡并Caspase-3阳性表达,导致听力下降。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在豚鼠卡那霉素慢性中毒耳蜗螺旋神经细胞凋亡中的作用

目的：探讨在天冬氨酸残基后进行裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡中的作用。方法：实验于2004-01/12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。20只豚鼠随机分为正常对照组10只和卡那霉素耳慢性中毒组10只。卡那霉素耳慢性中毒组连续14d肌肉注射硫酸卡那霉素200mg／（kg&;#183;d），正常对照组连续14d等量肌肉注射生理盐水；用药前后测试听力．停药14d处死动物后制作耳蜗标本，透射电镜、原位末端标记技术观察螺旋神经节细胞凋亡情况及免疫组化法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。结果：实验豚鼠20只均进入结果分析。①听性脑干反应：卡那霉素耳慢性中毒组听脑干反应阈值较正常对照组明显上升（43．20&;#177;6．73，5．60&;#177;1．78，P〈0．01），听力下降明显。②透射电镜观察结果：卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重，核变形，线粒体肿胀，粗面内质网增多；正常对照组螺旋神经节细胞核无变化，核仁基本居中，线粒体结构正常。③原位末端标记显示：卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞出现凋亡现象，愈近底回愈多，愈近顶回则愈少，正常对照组无凋亡现象。④免疫组化显示：卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性反应，与正常对照组比较，有显著性差异。结论：卡那霉素耳慢性中毒可致螺旋神经节细胞发生凋亡并半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性表达，导致听力下降。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在豚鼠卡那霉素慢性中毒耳蜗螺旋神经细胞凋亡中的作用

目的:探讨在天冬氨酸残基后进行裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡中的作用。方法:实验于2004-01/12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。20只豚鼠随机分为正常对照组10只和卡那霉素耳慢性中毒组10只。卡那霉素耳慢性中毒组连续14d肌肉注射硫酸卡那霉素200mg/(kg·d),正常对照组连续14d等量肌肉注射生理盐水;用药前后测试听力,停药14d处死动物后制作耳蜗标本,透射电镜、原位末端标记技术观察螺旋神经节细胞凋亡情况及免疫组化法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。结果:实验豚鼠20只均进入结果分析。①听性脑干反应:卡那霉素耳慢性中毒组听脑干反应阈值较正常对照组明显上升(43.20±6.73,5.60±1.78,P<0.01),听力下降明显。②透射电镜观察结果:卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重,核变形,线粒体肿胀,粗面内质网增多;正常对照组螺旋神经节细胞核无变化,核仁基本居中,线粒体结构正常。③原位末端标记显示:卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞出现凋亡现象,愈近底回愈多,愈近顶回则愈少,正常对照组无凋亡现象。④免疫组化显示:卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性反应,与正常对照组比较,有显著性差异。结论:卡那霉素耳慢性中毒可致螺旋神经节细胞发生凋亡并半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性表达,导致听力下降。     

听力阈值变化与卡那霉素耳慢性中毒豚鼠耳蜗细胞凋亡

目的：探讨卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法：实验于2003-01／12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。75只豚鼠随机分为正常对照组(n=15)，卡那霉素耳慢性中毒组(n=60)。卡那霉素耳慢性中毒组进行硫酸卡那霉素200mg／(kg&;#183;d)连续肌肉注射14d，根据停药时间分为卡那霉素停药1，3，7，14d组，每组15只。分别处死正常对照组及卡那霉素停药1，3，7．14d组豚鼠，处死前检测其听脑干反应的变化，处死后以原位末端标记技术及耳蜗毛细胞核荧光染色计数等检测耳蜗细胞凋亡情况。结果：①豚鼠连续应用卡那霉素14d，停药1d耳蜗细胞即出现凋亡现象(原位缺口末端标记法阳性细胞数：柯蒂氏器0．69&;#177;0．57，螺旋神经节1．22&;#177;0．51．血管纹1．01&;#177;0．67)，随停药时间延长，耳蜗细胞凋亡数增多(14d组原位缺口末端标记法阳性细胞数：柯蒂氏器4．91&;#177;0．94，螺旋神经节8．84&;#177;1．35，血管纹7．39&;#177;1．63)，且愈近底回愈多，愈近顶回则愈少．对照组无凋亡现象。②豚鼠卡那霉素耳慢性中毒后，随停药时间延长，听脑干反应阈值14d组为43，20&;#177;6．73，正常对照组为5，60&;#177;1．78，14d组较正常对照组明显上升(P&;lt;0．01)。结论：①卡那霉素耳慢性中毒可引起耳蜗细胞发生凋亡，细胞凋亡是豚鼠耳蜗损伤的一条途径。②耳蜗细胞凋亡可能是卡那霉素耳慢性中毒听力损伤的形态学基础之一。     

庆大霉素中毒性耳聋豚鼠耳蜗热休克蛋白70的表达及川芎嗪的保护作用

背景：川芎嗪具有降低庆大霉素的耳毒性作用，但川芎嗪能否通过增加耳蜗热休克蛋白70表达，从而拮抗庆大霉素的耳蜗毒性作用。目的：应用免疫组化及图像分析技术并结合听性脑干反应测试，观察川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的影响。设计：随机对照实验，直线相关分析。单位：沈阳医学院生理教研室和中国医科大学听力研究室。材料：选用清洁级耳郭反射灵敏的健康白色红目豚鼠40只，体质量200～250g，雌雄不拘。随机分为庆大霉素组、川芎嗪＋庆大霉素组、川芎嗪组、正常对照组，每组10只。方法：川芎嗪＋庆大霉素组每日左侧腹腔注射川芎嗪注射液140mg／kg，同时在右侧腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／ks。庆大霉素组：每13腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／kg。川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液140mg／kg。正常对照组每日腹腔注射生理盐水2．5mL／kg，各组皆连续用药10d。各组动物混合饲养，每13测量体质量调整药量。在用药前和停药后分别检测各组大鼠听性脑干反应阈值，停药处死后应用SABC免疫组化和图像分析技术，观察各组豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达情况。主要观察指标：①各组大鼠听性脑干反应阈值。②各组大鼠耳蜗热休克蛋白70表达。结果：①豚鼠听性脑干反应阈值：川芎嗪＋庆大霉素组、庆大霉素组均明显高于正常对照组[（21．09&;#177;4．50）dBnHL，（36．55&;#177;6．13）dBnHL，（2．50&;#177;2．75）dBnHL，t=15．764-22．665，P〈0．001]。川芎嗪＋庆大霉素组明显低于庆大霉素组（t=9．092，P〈0．001）。②豚鼠耳蜗各部位热休克蛋白70表达：庆大霉素组耳蜗Corti＇s器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值低于正常对照组[（88．24&;#177;4．34，96．85&;#177;1．05；121．24&;#177;0．92，128．76&;#177;1．59；96．15&;#177;1．10，98．78&;#177;0．54；117．73&;#177;1．18，120．51&;#177;0．80），（t=6．097～18．307，P〈0．001）]。川芎嗪＋庆大霉素组耳蜗Corti＇s器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值明显高于庆大霉素组（92．53&;#177;2．25，88．24&;#177;4．34；125．20&;#177;1．43，121．24&;#177;0．92；98．71&;#177;0．91，96．15&;#177;1．10；118．91&;#177;0．46，117．73&;#177;1．18，t=3．925～10．415，P〈0．001）。③各组各部位热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值与听性脑干反应阈值高度相关（r=-0．8141--0．9841，P〈0．001）。结论：应用川芎嗪注射液可降低听性脑干反应阈值和庆大霉素中毒耳蜗热休克蛋白70的表达，以减轻庆大霉素的耳毒性损伤，从而改善听功能。     

顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的研究

目的：观察顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70（HSP70）的表达特点。方法：制备顺铂内耳中毒听力损伤模型。分别于第3天、第6天处死豚鼠，取耳蜗做石蜡包埋切片，进行HSP70免疫组化（SP法）染色，检测耳蜗HSP70的表达和分布特点，图像分析采用计算机图像分析系统。结果，对照组中Corti器，血管纹，螺旋缘、螺旋神经节呈弱阳性，Ⅱ组中Corti器，血管纹，螺旋缘，螺旋神经节的HSP70表达增强。Ⅲ组中Corti器，血管纹，螺旋缘，螺旋神经节呈强阳性。Ⅲ组平均灰度值较对照组有显性差异（P＜0．01）。结论：顺铂能够诱导HSP70在豚鼠耳蜗中的表达，使HSP70在豚鼠耳蜗中的表达增强。     

川芎嗪对庆大霉素耳中毒血管纹热休克蛋白70表达的影响

目的：研究川芎嗪(TMP)对庆大霉素(GM)中毒豚鼠耳蜗血管纹热休克蛋白(HSP)70表达的影响，探讨TMP对GM耳毒性损伤的保护作用。方法：将30只健康白色红目豚鼠按随机数字表随机分为3组：TMP+GM组每日左侧腹腔注射TMP140mg／kg，同时在右侧腹腔注射硫酸GM注射液100mg／kg；GM组每日腹腔注射与TMP+GM组等量的硫酸GM；正常对照组每日腹腔注射GM等量的生理盐水2．5mL／kg，连续用药10d。应用SABC免疫组化及图像分析技术并结合听脑干反应(ABR)测试各组豚鼠。结果：GM组耳蜗血管纹HSP70表达的平均灰度值和ABR阈值为：(121．24&;#177;0．92)和(36．55&;#177;6．13)dB；TMP+GM组对应值分别为：(125．20&;#177;1．43)和(21．09&;#177;4．50)dB，两组之间差异有显著意义(t=18．307，10．445，P&;lt;0．01)。各组HSF10表达与ABR阈移高度相关(r=-0．8734～-0．9841；P&;lt;0．001)。结论：TMP可减少耳蜗血管致HSP70表达，改善听功能．     

加减味耳聋左慈丸对庆大霉素耳毒性的防治及其机制研究

目的：观察耳鸣、耳聋的传统中药方剂“耳聋左慈丸”加减味对庆大霉素耳毒性的防治作用，并探讨其作用机制。方法：选用耳郭反射正常，体质量为300～350g的健康杂色豚鼠，雌雄兼用，随机分成3组，对照组15只，肌肉注射生理盐水2mL／(k&;#183;d)，生理盐水4mL／(kg&;#183;d)灌胃；庆大霉素组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／(kg&;#183;d)，生理盐水4mL／(k&;#183;d)灌胃；中药组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组，中药煎剂浓缩液4mL／(kg&;#183;d)灌胃。各组连续用药均25d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠听阈的变化；用组织化学的方法检测耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的变化。结果：用药前对照组、庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值分别为：32．28&;#177;2．55，32．34&;#177;2．52和32．32&;#177;2．54；用药后第27天分别为：32．30&;#177;2．73，54．95&;#177;18．62和41.76&;#177;9．36。用药后27d庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值升高，差异有显著性意义(t=3．466，P&;lt;0．01)。耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶染色的变化：耳蜗铺片在光镜下观察：正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞酸性磷酸酶染色呈棕褐色，显色分布均匀，毛细胞排列整齐；庆大霉素致耳聋的豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶显色变化依动物耳聋程不同，出现染色缺失程度亦不同；庆大霉素组酸性磷酸酶染色缺失显著，中药组酸性磷酸酶染色缺失变化轻，两组耳蜗铺片显示有明显差别。结论：该中药方剂能降低庆大霉素的耳毒性；保护耳蜗毛细胞溶酶体的完整性，降低庆大霉素对溶酶体的损坏而造成的毛细胞自溶性损伤，是该方剂降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的研究

目的观察顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70(HSP70)的表达特点。方法制备顺铂内耳中毒听力损伤模型,分别于第3天,第6天处死豚鼠,取耳蜗做石蜡包埋切片,进行HSP70免疫组化(SP法)染色,检测耳蜗HSP70的表达和分布特点。图像分析采用计算机图像分析系统。结果对照组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节呈弱阳性。Ⅱ组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节的HSP70表达增强。Ⅲ组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节呈强阳性。Ⅲ组平均灰度值较对照组有显著性差异(P<0.01)。结论顺铂能够诱导HSP70在豚鼠耳蜗中的表达,使HSP70在豚鼠耳蜗中的表达增强。