外周血T淋巴细胞亚群变化特点及血清因子表达水平的研究

目的探讨发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者外周血T淋巴细胞亚群变化特点及血清因子表达水平。方法选取2013年5月1日至2016年12月1日该院确诊并治疗的SFTS患者138例,作为SFTS组。利用流式细胞术检测患者外周血T淋巴细胞CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞2个亚群变化的特点,运用酶联免疫吸附方法检测外周血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-β(TNF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平。同时选取该院门诊体检健康者120例作为健康对照组,采用同样的方法检测相同的各项指标表达水平。结果 SFTS组患者外周血CD4~+T淋巴细胞数量明显减少,为(22.69±5.02)%,健康对照组CD4~+T淋巴细胞数量比SFTS组多,为(56.11±4.14)%,差异有统计学意义(P0.05);SFTS组CD8~+T淋巴细胞数量明显增多,为(39.03±4.09)%,健康对照组CD8~+T淋巴细胞数量比SFTS组患者少,为(24.51±4.82)%,差异有统计学意义(P0.05),CD4~+T/CD8~+T在感染布尼亚病毒(SFTSV)后明显降低。SFTS组IL-2表达水平为(55.81±7.52)μg/L,健康对照组为(117.02±5.31)μg/L;SFTS组TNF-β表达水平为(72.91±6.03)μg/L,健康对照组为(112.84±4.91)μg/L;SFTS组IFN-γ表达水平为(21.01±8.20)μg/L,健康对照组为(103.15±3.74)μg/L,SFTS组患者感染SFTSV后IL-2、TNF-β、IFN-γ均明显下降,2组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论 SFTS患者感染SFTSV后,导致外周血CD4~+T淋巴细胞减少,CD8~+T淋巴细胞增加,CD4~+T与CD8~+T比例失衡;造成外周血清中IL-2、TNF-β、IFN-γ因子表达水平降低。     

细菌脂多糖对人树突状细胞分化成熟及表达PD-L1的影响及意义

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对树突状细胞分化、成熟及表达PD-L1的影响。方法:获取人外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC),加入不同浓度LPS,流式细胞仪分析CD11c、CD80、CD86及PD-L1表达变化,MTT法测定其刺激T细胞增殖能力,ELISA测定培养上清液IL-12的水平。结果:DC表达CD80/CD86在刺激浓度为10μg/mL时达高峰,后逐渐下降;PD-L1的表达与CD80/CD86一致;而在持续刺激组CD11c、CD80、CD86和PD-L1均呈低水平表达。短期刺激浓度为1.0μg/mL时,DC刺激T细胞增殖能力最强,高于或低于此浓度刺激能力均下降。持续刺激组刺激T细胞增殖的能力最弱。培养上清液中IL-12的水平与T细胞增殖能力一致。结论:高浓度LPS可抑制DC成熟,一定浓度持续刺激可抑制单核细胞向DC分化;PD-L1分子随着DC成熟表达增高,提示PD-L1表达有助于维持适度而有效的免疫应答。     

地塞米松对小鼠骨髓源树突状细胞表型及功能的影响

目的:研究地塞米松(dexamethasone)对小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)表型及功能的影响。方法:用GM-CSF及IL-4定向诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化DC,分化过程中随机分为4组,A组,对照组;B、C、D组分别为100μg/L地塞米松组,100μg/LLPS组,100μg/L地塞米松+100μg/LLPS组。每组细胞培养8d。用流式细胞术测定BMDC表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1的表达,ELISA方法检测其培养上清IL-12的浓度,用混合淋巴细胞培养法检测其对同种异体T细胞的刺激能力。结果:与对照组比较,LPS刺激后,DC表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1表达明显增加,培养上清中IL-12浓度升高,其刺激同种异体T细胞的能力增强。与对照组和LPS组比较,地塞米松可使DC表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1表达明显降低,IL-12分泌减少,刺激同种异体T细胞的能力减弱。结论:地塞米松降低了BMDC细胞表型表达,抑制其细胞因子IL-12的分泌,降低其刺激同种异体反应T细胞增殖的能力。     

氧化低密度脂蛋白刺激内皮细胞程序性死亡配体-1的表达

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞的负性共刺激分子程序性死亡因子配体-1(PD-L1)袁达的影响,探讨动脉粥样硬化发病的免疫机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与不同浓度(10、50、100 mg/L)ox-LDL温育24 h,以PBS作阴性对照,采用逆转录聚合酶链反应、流式细胞技术分别检测人脐静脉内皮细胞PD-L1的mRNA及蛋白表达水平.结果:随着ox-LDL浓度的增加,人脐静脉内皮细胞的PD-L1表达逐步升高,低浓度(10 mg/L)OX-LDL与对照组比较差异无统计学意义,中浓度(50 mg/L)及高浓度(100 mg/L)ox-LDL组较对照组PD-L1表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:公认有致慢性炎症作用的ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞炎症反应时,上调负性共刺激分子PD-L1的表达,这种负反馈调节可能是抑制动脉粥样硬化的一种免疫机制.     

肺结核患者NO和FOXP3表达水平变化及意义

目的探讨肺结核患者一氧化氮(NO)和叉头蛋白3(FOXP3)表达水平的变化及临床意义。方法选择肺结核患者与健康者各40例,采用Griess比色法检测血清NO水平,采用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T淋巴细胞百分比;采用实时定量聚合酶链反应检测FOXP3mRNA水平。结果肺结核患者血清NO浓度为(15.71±1.26)μmol/L,高于健康者的(5.45±0.98)μmol/L(P0.05);肺结核患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞约占CD4+T淋巴细胞的(4.57±0.85)%,高于健康者的(1.83±0.49)%(P0.05);肺结核患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞高表达FOXP3。结论肺结核患者NO、FOXP3表达水平均升高,在肺结核免疫调节机制中起着重要作用;动态监测二者表达水平的变化有利于肺结核患者的诊治。     

血液透析和肾移植患者外周血淋巴细胞PD-L1的表达

目的:探讨PD-L1在血液透析和肾移植患者外周血淋巴细胞上的表达及意义.方法:选取2011年1月至2011年9月在我院住院的24例维持性血液透析患者、18例正常肾移植受者作为两个病例组,另外选择10例健康志愿者作为正常对照组.采集三组人群的外周血,运用流式细胞染色技术检测淋巴细胞PD-L1的表达情况.结果:维持性血液透析组淋巴细胞群中CD3+PD-L1+比例明显高于正常肾移植受者组(P＜0.05)和正常对照组(P＜ 0.001),且正常肾移植受者组亦高于正常对照组(P＜0.05).而淋巴细胞群中CD3-PD-L1+比例在维持性血液透析组和正常肾移植受者组中表达均高于正常对照组(P＜ 0.001和P＜0.05),但维持性血液透析组与正常肾移植受者组之间无统计学差异(P＞0.05).结论:PD-L1在血液透析和肾移植患者外周血淋巴细胞中表达上调,其可能参与了血液透析患者免疫功能低下状态的形成及正常肾移植受者免疫耐受的维持.     

碱性成纤维细胞生长因子对人晶体上皮细胞增殖及一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶体上皮细胞内一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、基因及蛋白表达的影响。方法:以含10%胎牛血清(FBS)与100mg/L青霉素和100mg/L链霉素的DMEM培养液培养及传代人晶体上皮细胞。用0.001,0.01,0.1,1,10和100μg/L浓度的bFGF作用于晶体上皮细胞,用MTT法检测晶体上皮细胞的增殖情况;用Griess法测定NO含量;分别用RT-PCR方法及westernblot法检测iNOS基因及蛋白的表达。结果:①bFGF对细胞增殖的影响:与对照组比较,除100μg/L组外,其余浓度为0.001～10μg/L的bFGF对人晶体上皮细胞的增殖效应均大于对照组,其中0.01～10μg/L的bFGF对人晶体上皮细胞的增殖效应差异显著(P<0.05)。②bFGF对晶体细胞NO水平、NOS活性及iNOS的基因和蛋白表达的影响:对照组和0.001,0.01,0.1μg/LbFGF组NO水平较低,而在1μg/L和10μg/L的bFGF使人晶体上皮细胞的NO含量增高,0.1～10μg/L的bFGF使人晶体上皮细胞的NOS活性增高、使iNOS的基因和蛋白表达增强。结论:可以促进人晶体上皮细胞的增殖,使NO含量和iNOS的活性和蛋白表达增高。     

催乳素对葡萄球菌肠毒素A诱导T细胞凋亡的影响

目的:观察作为重要细胞因子的催乳素在T细胞活化诱导凋亡过程中的作用。方法:实验于2005-03/2006-06在校级实验室新乡医学院免疫学实验室完成。实验材料:正常人外周血由新乡医学院第一附属医院提供,葡萄球菌肠毒素A(sigma)。实验方法:①T细胞活化诱导凋亡模型的建立:取健康人外周血5mL,加入等体积淋巴细胞分离液,采用密度梯度离心法获得淋巴细胞。完全1640培养基重悬细胞,加入葡萄球菌肠毒素A(SEA),置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养,至第4天,800r/min离心10min,以新鲜完全1640培养基换液,尽可能除去SEA。培养液中加入人白细胞介素2继续培养2周待用。②催乳素干预:将获得细胞离心并弃去培养液,用新鲜完全1640培养基重悬,调整细胞密度为5×109L-1,加入24孔板中,分别加入4mg/LSEA诱导细胞凋亡,同时加入20,300,1000μg/L催乳素,以不加催乳素的为对照组。③实验评估:于培养0,16,24h时采用MTT法检测T细胞增殖情况。培养16h时用流式技术检测细胞凋亡情况,并通过琼脂糖凝胶电泳检测T细胞凋亡DNA,并采用流式细胞术检测T细胞膜表面Fas和FasL,WesternBlot法检测T细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax。结果:①MTT法检测T细胞增殖:不同质量浓度催乳素干预组在16,24h的T细胞数量较对照组明显增多[吸光度值:对照组:0.65±0.02,0.54±0.04;20μg/L催乳素组:0.81±0.04,0.71±0.11;300μg/L催乳素组:1.14±0.10,1.22±0.10;1000μg/L催乳素组:1.12±0.12,1.22±0.12,P<0.01]。0～24h内300,1000μg/L催乳素组T细胞数量呈上升趋势(P<0.01),20μg/L催乳素组T细胞数量呈下降趋势(P<0.01)。②流式细胞术检测T细胞凋亡率:培养16h时,与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组T细胞凋亡率降低[(46.80±9.21)%,(31.40±7.03)%,(17.50±4.29)%,(10.20±3.84)%,P<0.05]。③流式细胞术检测T细胞膜表面Fas、FasL:与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组Fas和FasL细胞阳性率均下降[Fas:(88.0±17.3)%,(43.0±13.1)%,(22.0±6.7)%,(25.0±8.2)%,P<0.01;FasL:(46.0±17.5)%,(33.0±11.4)%,(31.0±14.0)%,(28.0±13.8)%,P<0.05]。④WesternBlot检测T细胞Bcl-2、Bax:与对照组比较,20μg/L催乳素组Bax和Bcl-2表达均无明显差异(P>0.05),300μg/L,1000μg/L催乳素组Bax表达明显降低(P<0.05),Bcl-2表达明显升高(P<0.05)。结论:在葡萄球菌肠毒素A诱导的T细胞活化诱导凋亡过程中,催乳素以细胞因子的身份,可通过抑制Fas、FasL和Bax表达,提高Bcl-2表达,来抑制T细胞凋亡,维持T细胞增殖。     

肾复康汤剂对IgA肾病患者外周血T淋巴细胞体外作用研究

目的观察肾复康汤剂体外对Ig A肾病患者外周血T淋巴细胞活化功能的影响。方法检测75例Ig A肾病患者和38例对照组CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞上活化指标CD25、CD69、HLA-DR的表达,并将PBS、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的肾复康汤剂作用于Ig A肾病患者的CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞,观察CD25、CD69、HLA-DR的表达变化。结果 Ig A肾病患者组中CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞上HLA-DR的表达率均高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=5.03、5.87,P均<0.05)。两组中CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞上CD25、CD69的表达比较,差异均没有统计学意义(t分别=1.43、1.64、1.91、1.69,P均>0.05)。不同浓度肾复康汤剂和PBS孵育对照组间的CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上的CD25、CD69、HLA-DR表达率比较,差异均无统计学意义(F分别=0.19、0.49、0.20、0.59、0.78、0.51,P均>0.05)。结论肾复康汤剂对Ig A肾病患者肾脏的保护作用可能和其能降低外周血T淋巴细胞的活化潜能有关。     

定期单采血小板捐献者部分免疫指标变化的研究

目的了解定期单采血小板捐献者外周血T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA水平的变化。方法按捐献间隔期将87名男性单采血小板捐献者分为对照组:首次单采血小板捐献者;实验1组:2次单采血小板间隔45～73 d的捐献者;实验2组:2次单采血小板间隔29～44 d的捐献者。分别用流式细胞术和免疫比浊法检测其外周血T淋巴细胞亚群和免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的水平,比较3组捐献者上述指标的差异。结果外周血中CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞/CD3+CD8+T,在实验1组中为(51.33±10.47)%和1.36±0.43,在实验2组中为(50.48±9.50)%和1.34±0.51,在对照组中为(55.18±9.84)%和1.61±0.64。外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞、IgG、IgM、IgA,在实验1组中为(39.42±7.14)%、(13.13±2.56)g/L、(1.37±0.60)g/L、(2.55±0.70)g/L,在实验2组中为(40.72±9.24)%、(13.13±2.58)g/L、(1.31±0.70)g/L、(2.44±0.70)g/L,在对照组中为(37.32±8.30)%、(11.55±1.95)g/L、(1.08±0.40)g/L和(2.20±0.91)g/L。3组间上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论定期捐献单采血小板不会影响外周血T淋巴细胞亚群和IgG、IgM、IgA的水平。     

急性髓系白血病患者PD-L1和MicroRNA-138-5p的表达及其临床意义

目的:探讨PD-L1和MicroRNA-138-5p(miR-138)在急性髓系白血病(AML)患者外周血单个核细胞(PBMNCs)中的表达特点及其临床意义。方法:应用SYBR GreenⅠreal-time PCR方法分别检测20例初治AML患者、9例复发/难治AML患者和8例完全缓解患者PBMNCs中PD-L1 mRNA和miR-138的表达水平,并选择20例健康体检者外周血样本作为对照组。结果:初治AML组和复发/难治AML组患者PD-L1的表达水平均显著高于健康对照组(P0.01),而且复发/难治AML组患者PD-L1的表达水平显著高于初治AML组患者(P0.01);初治AML组和复发/难治AML组患者miR-138的表达水平均显著低于健康对照组(P0.01);在20例初治AML患者中共收集了8例完全缓解期标本,完全缓解组mi R-138的表达水平高于初治AML组(P0.05),而缓解组PD-L1的表达水平与初治AML组差异无统计学意义(P0.05);初治AML患者中PD-L1 mRNA与mi R-138表达呈负相关(P0.05)。结论:AML患者PBMC中PD-L1表达增加、miR-138表达下调,且两者间有相关性。     

T淋巴细胞亚群和血脂水平与系统性红斑狼疮疾病活动度的相关性研究

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者T淋巴细胞亚群、血脂水平与SLE疾病活动度的相关性。方法 130例住院SLE患者为SLE组,同期体检健康者94例为对照组。SLE组根据SLE活动性指数(SLE disease activity index,SLEDAI)评分分为稳定组58例和活动组72例。采用流式细胞仪检测各组外周血CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞计数,检测各组血脂水平,采用Spearman相关性分析SLE患者外周血CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞计数和血脂水平与SLEDAI评分的相关性。结果活动组外周血CD4~+T淋巴细胞计数[261.50(189.25,398.00)个/μL]、CD8~+T淋巴细胞计数[262.00(165.00,424.75)个/μL]、高密度脂蛋白胆固醇[0.96(0.74,1.24)mmol/L]、白蛋白[33.00(25.43,35.75)g/L]明显低于对照组[732.52(607.23,975.00)个/μL、561.40(429.00,753.16)个/μL、1.40(1.08,1.67)mmol/L、47.00(42.75,51.25)g/L]和稳定组[308.00(255.00,605.00)个/μL、382.00(203.00,637.50)个/μL、1.09(0.88,1.40)mmol/L、36.75(33.13,39.95)g/L](P0.05),总胆固醇[4.62(3.94,6.08)mmol/L]、三酰甘油[1.99(1.43,2.87)mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[2.57(2.08,3.39)mmol/L]、24h尿蛋白定量[0.89(0.49,3.00)g/L]、血沉[26.50(14.00,41.75)mm/h]、C反应蛋白[11.92(4.96,16.70)mg/L]、胱抑素C[1.16(0.92,1.82)mg/L]水平明显高于对照组[3.34(2.68,4.25)mmol/L、0.70(0.32,1.19)mmol/L、1.26(1.00,1.71)mmol/L、0.08(0.05,0.13)g/L、11.00(7.75,14.25)mm/h、2.00(0.52,5.60)mg/L、0.86(0.79,0.96)mg/L]和稳定组[4.08(3.33,4.77)mmol/L、1.55(1.21,2.30)mmol/L、2.24(1.66,2.66)mmol/L、0.24(0.13,0.37)g/L、21.00(13.75,27.00)mm/h、3.89(2.78,7.51)mg/L、0.96(0.85,1.23)mg/L](P0.05);活动组CD4+/CD8+水平[1.08(0.77,1.52)]低于对照组[1.28(1.01,1.69)],与稳定组[0.92(0.63,1.53)]比较差异无统计学意义(P0.05);SLE患者外周血CD4+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数、高密度脂蛋白胆固醇、白蛋白水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.239,P=0.006;r=-0.242,P=0.006;r=-0.295,P=0.001;r=-0.478,P0.001);SLE患者总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、24h尿蛋白定量、血沉、C反应蛋白、胱抑素C与SLEDAI评分呈正相关(r=0.396,P0.001;r=0.291,P=0.001;r=0.348,P0.001;r=0.619,P0.001;r=0.229,P=0.009,r=0.458,P0.001;r=0.311,P0.001)。结论 T淋巴细胞亚群计数、血脂水平与SLE疾病活动密切相关,T淋巴细胞亚群计数、血脂联合检测可用于评估SLE病情的活动性,指导治疗。     

外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子表达水平对PD-1/ PD-L1抑制剂联合化疗治疗NSCLC疗效的预测效能分析

目的 探讨外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子表达水平对程序性死亡因子1(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L1)抑制剂联合化疗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)疗效的预测效能。方法 选取该院2019年5月至2021年4月行PD-1/PD-L1抑制剂联合化疗治疗的NSCLC患者48例,依据治疗4个周期后的效果分为缓解组(n=22)和未缓解组(n=26)。比较两组一般资料及治疗前、治疗4个周期后外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子(CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、PD-1)、肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]水平,分析NSCLC患者外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子与肿瘤标志物的相关性及NSCLC患者疗效影响因素,评价外周血各指标对治疗NSCLC疗效的预测价值。结果 两组治疗4个周期后外周血CD3⁺、CD4⁺水平均较本组治疗前提高,且缓解组高于未缓解组,外周血CD8⁺、...     

冠心病患者胆固醇逆转运调节基因三磷酸腺苷结合转运子A1的表达研究

目的观察冠心病患者及非冠心病患者外周血单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)的信使RNA表达差异;观察冠心病患者及非冠心病患者诱导ABCA1基因转录的肝X受体(LXR)的mRNA表达差异。方法接受过冠状动脉造影检查的患者(共58例),根据造影结果分为冠心病组(36例)和非冠心病组(22例)。所有患者均抽取空腹外周静脉血并分离、提取单核细胞RNA;逆转录PCR法检测血样中ABCA1的mRNA表达及LXR的mRNA表达。结果 (1)冠心病组ABCA1的mRNA表达水平显著低于非冠心病组[(0.35±0.17)μg/μlvs.(0.66±0.26)μg/μl,P<0.05],而LXRmRNA的表达未见统计学差异[(0.76±0.31)μg/μlvs.(0.56±0.34)μg/μl,P=0.80]。(2)ABCA1的mRNA表达随糖基化血红蛋白(HbA1c)的增加而降低(r=-0.55,P<0.05)。结论冠心病患者中外周血白细胞ABCA1的基因表达较非冠心病患者显著下降;冠心病患者ABCA1表达的调控机制可能不完全依赖于LXR的方式。ABCA1的mR-NA表达与HbA1c呈显著负相关,HbA1c可能是影响其表达的重要因素之一。     

他汀类药物通过抑制Akt通路调控急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡

目的:探讨他汀类药物对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:Jurkat及CCRF-CEM细胞经不同浓度的氟伐他汀和辛伐他汀药物处理24 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;Ed U法检测细胞DNA复制情况;Annexin V/7-AAD双染法分析细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期的变化;免疫印迹法检测Cyclin D1、p21、p27、BAX、BCL-2及p-Akt蛋白的表达。结果:氟伐他汀、辛伐他汀均可抑制Jurkat及CCRF-CEM细胞增殖,且抑制效应呈一定的剂量依赖性。氟伐他汀浓度为0.2 mmol/L时,Jurkat和CCRF-CEM细胞抑制率分别达41.14%和57.08%;而辛伐他汀浓度为0.2 mmol/L时,Jurkat和CCRF-CEM细胞抑制率分别达68.42%和77.10%,均接近或超过半数抑制,与溶剂对照组比较有显著差异(P0.05)。不同浓度的氟伐他汀及辛伐他汀分别作用于Jurkat和CCRF-CEM细胞24 h,其早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例均升高,且于0.2 mmol/L和0.3 mmol/L药物浓度时,其总凋亡比例显著升高,与溶剂对照组相比有显著差异(P0.05)。细胞周期检测结果显示,氟伐他汀及辛伐他汀诱导Jurkat和CCRF-CEM细胞G_1期阻滞。Western blot检测结果显示,Jurkat和CCRF-CEM细胞经氟伐他汀或辛伐他汀处理后,BAX、p21和p27表达量逐渐升高,Cyclin D1、BCL-2和p-Akt表达量逐渐减低。结论:他汀类药物可通过抑制Akt信号通路抑制T-ALL细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

Ⅱ型遗传性出血性毛细血管扩张症血管生长发育相关蛋白质分析及意义

目的分析和检测1个Ⅱ型遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT-2)家系成员血浆及外周血白细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2、血管内皮生长因子(VFGF)、血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)等蛋白质浓度,探讨这些血管生长发育相关蛋白在 HHT 发病机制中的变化及意义。方法根据鼻出血、毛细血管扩张及家族史进行 HHT 的临床诊断,并经基因筛查,以证实 HHT 的诊断。对该家系中5例新成员进行 HHT 的诊断和排除诊断。用 ELSA 方法检测该家系成员血浆 TGF-β1、TGF-β2及 VEGF 浓度;用流式细胞术结合直接按或间接免疫荧比技术分析该家系成员外周血白细胞TGF-β1、VEGF、及 PDGFRα蛋白表达。结果基因筛查的5例新家系成员 ALK1基因8号外显子不存在 C1231T 突变。该家系成员中3例 HHT 患者血浆 TGF-β1和 TGF-β2浓度分别为(16 954±3 709)ng/L和(11 548±2 611)ng/L;与正常对照相比差异无统计学意义(P>0.05);3例 HHT 患者、6名未受累家系成员、6名正常对照血浆 VEGF 浓度值分别为(179.2±22.0)μg/L,(149.8±22.7)μg/L,(132.9±21.0)μg/L;HHT 患告血浆 VEGF 浓度明显高于正常对照组(P<0.05)。HHT 家系成员外周血白细胞 PDGFRα和 VEGF 蛋白表达均上调(P 值均<0.05);TGF-β1蛋白表达与正常对照比较差异无统计学意义。结论 HHT-2患者血浆 TGF-β1浓度、单核细胞及粒细胞 TGF-β1蛋白表达与正常对照比较差异无统计学意义;而血浆 VEGF 浓度及外周血白细胞 VEGF 表达均明显高于正常对照;HHT-2患者外周血白细胞存在 PDGFRα高表达,提示存在血管生长发育相关蛋白的代偿机制。     

辛伐他汀对人脐静脉内细胞CD40/CD40L表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响。方法:实验于2004-03/06在中南大学湘雅二医院实验室完成。实验所用脐带于无菌条件下取自本院产房健康新生儿,产妇知情同意,实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准。辛伐他汀原粉由杭州默沙东制药公司提供。原代培养人脐静脉内皮细胞,实验在第4代有70%细胞汇合的情况下进行。低密度脂蛋白快速分离后加入含10μmol/L硫酸铜的磷酸盐缓冲液氧化修饰24h,在准备后15d内用于实验。采用流式细胞技术检测CD40/CD40L在细胞上的表达,采用逆转录多聚酶链式反应检测NF-κBP65mRNA,同时行细胞免疫化学染色检测细胞NF-κBP65的表达。观察辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40/CD40L分子和NF-κBP65mRNA的影响实验中,共分5组:①空白对照组,给予磷酸盐缓冲液。②氧化低密度脂蛋白刺激组,80mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。③低浓度辛伐他汀组,先予1μmol/L辛伐他汀干预1h,再予80mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。④高浓度辛伐他汀组,先予10μmol/L辛伐他汀干预1h,再予80mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。⑤单纯辛伐他汀组,10μmol/L辛伐他汀干预25h。免疫化学检测人脐静脉内皮细胞NF-κBP65分子表达的实验中,共分3组:①空白对照组,给予磷酸盐缓冲液。②氧化低密度脂蛋白刺激组,80mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。③辛伐他汀组,10μmol/L辛伐他汀干预1h,再予80mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。结果:①氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞后CD40/CD40L的表达情况:20～80mg/L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h后,CD40/CD40L的表达以浓度依赖和时间依赖的方式增加。②辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响:预先给予辛伐他汀(1μmol/L和10μmol/L)干预1h明显降低氧化低密度脂蛋白所致的CD40/CD40L表达,与单纯氧化低密度脂蛋白刺激组比较,差异显著(P均<0.05);10μmol/L的高浓度辛伐他汀较1μmol/L的低浓度辛伐他汀作用更明显(P<0.05);而单纯给予10μmol/L的辛伐他汀干预不影响人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达。③辛伐他汀对NF-κBP65mRNA在人脐静脉内皮细胞表达的影响:人脐静脉内皮细胞中加入80mg/L氧化低密度脂蛋白培养24h后NF-κBmRNA的表达明显高于空白对照组(0.53±0.06,0.08±0.01,P<0.01)。而预先给予1μmol/L辛伐他汀孵育1h显著降低氧化低密度脂蛋白刺激升高的NF-κBP65mRNA,明显低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组(0.31±0.04,0.53±0.06,P<0.01)。高浓度组(10μmol/L)作用更显著,显著低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组(0.14±0.04,0.53±0.06,P<0.01),而单纯给予辛伐他汀(10μmol/L)不影响人脐静脉内皮细胞NF-κBP65mRNA的表达。结论:氧化低密度脂蛋白以浓度和时间依赖的方式刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40/CD40L,而辛伐他汀以剂量依赖的方式减轻氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达,可能与其抑制人脐静脉内皮细胞的NF-κBP65的表达有关。提示辛伐他汀可通过抑制高脂血症患者炎症信号通路而到达抗动脉硬化的作用。     

流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群培养方案的研究

目的改进流式细胞仪三色法检测外周血T h细胞亚群的刺激培养方案。方法外周全血经RPM I1640培养液和终浓度为25μg/L的PM A、1 m g/L的Ionom yc in、20μg/L的M onens in培养2 h后,用流式细胞仪分别检测CD 4、CD 69阳性细胞及CD 3阳性细胞表达IFN-γ和IL-4的比例。同时检测培养前CD 4阳性细胞及培养4 h后CD 3阳性细胞表达IFN-γ和IL-4的比例。结果淋巴细胞门中CD 4 细胞与CD 4-细胞能明显区分,培养前与培养2 h后CD 4 细胞比例差异无显著性(P>0.05);T淋巴细胞中90%以上表达CD 69;刺激培养2 h和4 h后CD 3 细胞表达IFN-γ和IL-4的比例差异无显著性(P>0.05)。结论该实验确定的培养方案能满足流式细胞术CD 4、IFNγ-、IL-4三色法检测T h细胞亚群的培养要求。     

非小细胞肺癌围手术期患者外周血T细胞PD-L1/PD-1的检测及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者围手术期外周血T细胞程序性死亡分子1/配体(PD-L1/PD-1)的表达水平及其临床意义。方法收集60例NSCLC患者手术前后及60例健康体检者外周血标本,流式细胞仪检测外周血T细胞CD4+PDL1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+的百分比。结果 NSCLC患者术前与健康对照组CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+T细胞的百分比(%)分别为(7.14±1.69 vs 4.99±1.14)、(4.56±0.40 vs 1.48±1.08)、(17.21±2.70 vs 14.30±2.92)、(13.31±3.16 vs 8.38±2.11),差异均有统计学意义(P均0.05)。术后外周血NSCLC患者CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD4+PD-1+、CD8+PD-1+T细胞的百分比(%)依次为(5.86±1.54)、(3.58±0.52)、(13.38±2.17)、(11.48±2.61),与术前比较均降低,差异均有统计学意义(P均0.05);且CD4+PD-L1+、CD8+PD-L1+、CD8+PD-1高于健康对照组(P均0.05)。结论外周血T细胞中PD-L1/PD-1百分比与NSCLC进展有关,检测PD-L1/PD-1对NSCLC的诊疗和预后监测有一定的帮助。     

PD-1及其配体在原发性干燥综合征患者唇腺中的表达及临床意义

目的:观察干燥综合征(Sjogren's syndrome,SS)患者唇腺活检组织中程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)、程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)、程序性死亡配体-2(programmed death ligand-2,PD-L2)的表达,以及其与临床病理特征的相关性。方法:对所有患者和正常对照组的唇腺活检标本进行HE染色观察淋巴细胞浸润程度,免疫组织化学观察PD-1,PD-L1和PD-L2的表达。结果:SS患者唇腺活检组织中PD-1,PD-L1和PD-L2的表达较正常对照组明显增强。SS患者唇腺活检标本淋巴细胞的浸润程度与PD-1和PD-L2的表达强度无明显相关性,与PD-L1的表达强度呈正相关。SS患者疾病活动度评分与PD-1,PD-L1及PD-L2的表达强度均无明显相关性。SS患者疾病损害评分与PD-1的表达强度无明显相关性,与PD-L1和PD-L2的表达强度呈负相关。结论:PD-1,PD-L1及PD-L2在SS患者唇腺活检组织中的表达明显增强,PD-1/PD-L信号通路可能在SS的免疫病理损害中起重要作用。