腺相关病毒载体和中枢神经系统疾病的基因治疗

中枢神经系统疾病分子改变的深入研究和基因治疗技术的不断发展为临床治疗这些疾病带来了希望.但基因治疗临床应用的最大障碍之一便是转基因技术中载体系统的选择.理想的体内基因转移载体应具有较好的细胞靶向性,目的基因表达的可控性以及转移方法的简单易行.自七十年代末病毒载体的概念提出以来,用于基因治疗研究的缺陷性病毒载体种类日渐增加,应用也愈加广泛.其中,腺相关病毒(AAV)载体是目前病毒类转基因系统中较新的成员.由于该系统最大的优点之一是它的安全性较好,并且最有可能发展成为将外源基因整合入宿主细胞染色体的非病毒载体系统,因此倍受关注,并已开始应用于临床试验[1].     

基因治疗载体研究进展

高效、安全、靶向表达的载体是基因治疗的核心。基因治疗的载体分为生物载体和非生物载体。生物载体的安全性使它的广泛运用受到极大限制,并相应促使了大量非生物载体的研究。这两种载体各有其优缺点,虽然它们都不能很好满足基因治疗的要求,但随着研究的深入,对现有载体做进一步的改进,相信能促进基因治疗的发展。     

基因治疗载体的研究进展

基因治疗中的目的基因转移的主要方法就是载体导入法,通过载体将外源性目的基因导入受体细胞。该文就基因治疗的载体系统的研究进展进行综述。     

树状高分子载体在前列腺癌基因治疗中的应用

<正>作为一种新型高分子聚合物,树状高分子具有分子量和大小确定、分子间缠结少、黏度低、可运载大量功能性基团等作用,在生物医学领域拥有广泛的应用前景,特别是在肿瘤的靶向基因治疗中,树状高分子具有良好的基因转运作用。本文通过查阅、分析文献的方式,对近年国内外树状高分子载体在前列腺癌基因治疗中的研究进展进行综述。1基因治疗概述基因治疗是通过基因载体将治疗性特定基因递送至肿瘤靶细胞,使肿瘤细胞特异性死亡,不波及肿瘤周围的正常组织~([1]),是一种具有广阔前景的治疗     

重组腺相关病毒载体与血友病A基因治疗

基于腺相关病毒(AAV)独特的生物学特性,重组腺相关病毒载体(rAAV)是目前最具希望的基因治疗载体之一。在一些目的基因需长期、稳定表达的疾病的基因治疗中,愈来愈受到青睐。本文就AAV的基因结构和生物学特性、rAAV载体、载体改造及在血友病A基因治疗中的应用作一综述。     

超声联合微泡造影剂介导基因治疗的研究进展

基因治疗将是人类攻克许多难治性疾病的有效方法,超声微泡作为一种新型的基因载体,可以安全、简便、靶向性地将基因转移入特定的组织、细胞。本文阐述了超声联合微泡介导基因治疗的研究进展以及未来的应用前景。     

靶向造血干细胞的基因治疗

造血干细胞以其自我复制和分化潜能的特点,成为基因治疗最理想的靶细胞之一。尽管仍然存在着诸如理想载体的选择、转染效率、生物安全性、转基因的高效表达等难题,不同程度地制约着靶向造血干细胞基因治疗的发展,但仍提供了一种全新的、有应用前景的疾病治疗手段。本文就相关的造血干细胞生物学特性、载体系统及临床应用方面作一综述。     

超声微泡介导基因治疗在骨科领域的应用进展

基因治疗为骨科疾病的防治工作开辟了一个新途径,成功的基因治疗关键在于安全高效易用的基因载体和转基因技术,这也是传统基因治疗方法一直未予解决的难题。靶向超声微泡是一种很有潜力的基因递送治疗方法,目前已经运用于缺血性心肌病、抗肿瘤、抗血栓、促骨折愈合等领域。文章主要对超声微泡介导的基因治疗在骨科领域的应用进展作简要综述。     

靶向非病毒载体的构建及介导外源基因转导卵巢癌细胞的效率的研究

目的 探索靶向非病毒载体（GE7）系统在人卵巢癌细胞的转导效率。方法 组建由表皮生长因子受体（EGF．R）介导的靶向非病毒载体（GE7）系统，分别与标志基因β-半乳糖苷酶（β-gal）和治疗基因I型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（HSV1-TK）构成载体复合物，体外转导卵巢癌细胞CaOV3，通过X-gal染色、Northernblot分析，观察了GE7系统对外源基因的转导效率。结果 X-gal染色显示，外源基因的导入效率可达80％，呈瞬时表达；Northern杂交结果表示转导了HSV1-TK基因的卵巢癌细胞提取的RNA有阳性条带的显示。结论 GE7载体系统能高效靶向安全地将外源基因导入卵巢癌细胞。     

腺相关病毒载体与中枢神经系统疾病的基因治疗

中枢神经系统疾病分子改变的深入研究和基因治疗技术的不断发展为临床治疗这些疾病带来了希望.但基因治疗临床应用的最大障碍之一便是转基因技术中载体系统的选择.理想的体内基因转移载体应具有较好的细胞靶向性,目的基因表达的可控性以及转移方法的简单易行.自七十年代末病毒载体的概念提出以来,用于基因治疗研究的缺陷性病毒载体种类日渐增加,应用也愈加广泛.其中,腺相关病毒(AAV)载体是目前病毒类转基因系统中较新的成员.由于该系统最大的优点之一是它的安全性较好,并且最有可能发展成为将外源基因整合入宿主细胞染色体的非病毒载体系统,因此倍受关注,并已开始应用于临床试验[1].     

基因治疗脊髓损伤的前瞻性探讨

基因治疗是近年来生物医学发展较快的领域，其基础研究和临床试验都表现出巨大的前景。基因治疗脊髓损伤既不存在胎儿神经组织移植的组织来源问题，又比外周神经组织移植引起的排异性低，是目前脊髓损伤治疗中最有前途的方法，但在中枢神经系统损伤的研究还处于实验阶段。基因治疗基本原理是利用转基因技术(物理、化学或生物)，将某种特定的目的基因(重组DNA)转移到体内，使其在体内表达的基因产物发挥生物学活性。现在目的基因的选择和构建，表达载体，转基因受体细胞、动物模型等方面已取得了一系列令人振奋的研究成果。基因治疗的转基因方式有两种：一是将目的基因直接导入体内靶细胞令其表达；二是将基因在体外导入适当的细胞内，并筛选出高效表达的移植细胞作为转基因中介移植到体内靶组织。不论采取何种方式。将基因导入细胞又可用多种手段实现：如微注射、脂质体等物理或化学手段；利用缺陷病毒作为载体感染细胞的生物手段。在此实验探索阶段对当前国际上基因治疗脊髓损伤存在的问题和前景作了分析和展望。     

基因治疗的安全性、有效性和稳定性原则

以病毒和非病毒为载体的体细胞基因治疗是一种富有前景的治疗人类疾病的方法。它已从初步的动物实验发展至临床试验。基因治疗应用的载体和靶基因主要集中于非病毒载体、病毒载体和单个靶基因或单基因。每个载体系统有其优点和缺陷。然而，当前人类疾病基因治疗应用的限制主要是转基因方法的潜在风险、相对低效率和靶基因的胞内稳定性。因此，安全性、有效性和稳定性是人们常常遇到的基因治疗的三个问题．也是人们应遵守的基因治疗的三个原则。     

共聚物的应用和研究进展

随着分子生物学的飞速发展,基因治疗的研究备受人们关注,如何将目的基因安全、高效、靶向性地导入人体特定器官组织并在相应的靶细胞内稳定表达,是目前的研究热点之一.近年来,一些研究表明,共聚物可作为携带基因的载体,提高局部组织、细胞的基因转染和表达,在基因治疗上显示出诱人的前景.     

基因治疗中慢病毒载体的最新进展

基因治疗有望成为治疗遗传病、感染性疾病及肿瘤的有效手段.高效的基因转移方法为基因治疗的关键,目前应用最广的是来源于致瘤型逆转录病毒为代表的简单的逆转录病毒载体,但该类载体不能有效地转染非分裂细胞如造血干细胞及终末分化的神经细胞等.以人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-Ⅰ)为代表的慢病毒为复杂的逆转录病毒.慢病毒载体具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为当前基因治疗中载体研究的热点.近年来对其基本生物学特性、载体改造及其应用研究均取得了较大进展.     

基因洽疗中慢病毒载体的最新进展

基因治疗有望成为治疗遗传病、感染性疾病及肿瘤的有效手段。高效的基因转移方法为基因治疗的关键,目前应用最广的是来源于致瘤型逆转录病毒为代表的简单的逆转录病毒载体,但该类载体不能有效地转染非分裂细胞如造血干细胞及终末分化的神经细胞等。以人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-Ⅰ)为代表的慢病毒为复杂的逆转录病毒。慢病毒载体具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为当前基因治疗中载体研究的热点。近年来对其基本生物学特性、载体改造及其应用研究均取得了较大进展。     

应用Gateway技术构建pLenti6-Akt shRNA真核表达载体

目的 应用Gateway技术构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体,转染肝癌细胞株HepG2,验证该载体能否下调Akt基因的mRNA水平.方法 以Akt基因为靶点设计两条具有短发卡结构的shRNA序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6入门表达载体(pENTR/U6-Akt1,pENTR/U6-Akt2);转化E.coli TOP10菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR和测序鉴定;利用Gateway技术进行LR位点特异性重组,将shRNA导入目的 表达载体pLenti6/Block-it DEST Vector,再行测序鉴定(pLenti6-Akt1,pLenti6-Akt2);将重组质粒转染肝癌细胞株HepG2,提取RNA,RT-PCR检测重组质粒对mRNA水平的抑制效果.结果 经菌落PCR和DNA测序鉴定:pENTR/U6-Akts入门载体和pLenti6-Akts目的 表达载体中插入片段的序列正确,RT-PCR结果表明将shRNA分别转染HepG2细胞后,Akt的mRNA表达受到明显抑制,其中1shRNA比2#shRNA抑制效果明显.结论 利用Gateway技术成功构建了靶向人Akt基因的shRNA表达载体,为以Akt基因为靶点的肝癌基因治疗方案奠定了实验基础.     

重组腺相关病毒载体与血友病A基因治疗

基于腺相关病毒(AAV）独特的生物学特性，重组腺相关病毒载体（rAAV)是目前最具希望的因治疗载体之一。在一些目的基因需长期、稳定表达的疾病的基因治疗中，愈来愈受到青睐。本文就AAV的基因结构和生物学特性、rAAV载体、载体改造及在血友病A基因治疗中的应用作一综述。     

慢病毒载体用于转基因技术的研究进展

慢病毒载体作为目前研究最多的外源性转基因载体之一,已成为一种高效率的转基因和基因治疗工具。该载体最大的优势是能够感染分裂和静止状态下的细胞,并且能够高效、稳定地整合于宿主细胞内。目前研究该载体在多种动物转基因技术方面的应用,有助于我们利用除了大鼠和小鼠以外的多种实验动物来研究基因的功能,并实现通过调节基因表达治疗人类疾病的目的。     

重组杆状病毒载体在基因治疗中的应用

重组杆状病毒作为安全、可靠的基因治疗载体,在神经性疾病、心血管疾病以及恶性肿瘤的基因治疗中具有重要的应用价值。随着分子生物学技术日趋成熟,杆状病毒表达系统的研究使得该载体能够成功规避机体血液中补体系统的清除。另外,具有组织特异性的启动子也为实现各类重组病毒载体的靶向治疗发挥了重要的作用。该文对重组杆状病毒基因治疗载体的研究进行总结和阐述,以期对构建p53基因重组杆状病毒基因治疗载体提供文献依据,实现更安全、可靠、精准的基因治疗策略。     

水流动力学注射——一种新型的体内基因转移技术

基因治疗是向靶细胞或靶组织中导入外源基因，以纠正或补偿基因的缺陷，关闭或抑制异常表达的基因，从而达到治疗的目的。其中基因转移技术是基因治疗成败的关键。用于基因转移的载体主要有病毒和非病毒两类。病毒载体转导基因进入目的细胞的效率很高，但是往往要求复杂的实验室制备和纯化过程，而且其引起的免疫反应和副作用也是不容忽视的。