胞嘧啶脱氨基酶／5—氟胞嘧啶系统对人胰腺癌细胞恶性增？…

目的 探讨大肠杆菌胞嘧啶脱氨基酶（ＣＤ）／５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）系统对人胰腺癌细胞的体内外生长抑制作用。方法 将含ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体导入人胰腺癌细胞形成转化细胞系、对转化细胞进行体内外药物敏感实验,包括：（１）计算转化细胞在前体药物５－ＦＣ作用下的细胞生长抑制率和克隆形成抑制率;（２）ＭＴＴ法检测旁观者效应;（３）观察５－ＦＣ对转化细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。结果 转化细胞在５－ＦＣ作用     

腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合α-IFN治疗肾癌的实验观察

目的:探讨腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因联合α-IFN对肾癌的治疗作用.方法:含CD基因重组腺病毒感染人肾癌细胞株786-0,用噻唑蓝(MTr)方法观察加用5-氟胞嘧啶(5-Fc)或联用α-IFN后的杀伤效应.建立786-0裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射腺病毒,腹腔注射5-Fc(500me/kg),联合应用α-IFN时行瘤内注射,观察肿瘤生长情况.结果:在对感染腺病毒的786-0细胞的体外杀伤实验中,CD 5-Fc组的细胞存活率为(67.40±1.27)%,α-IFN组的细胞存活率为(68.65±1.45)%,CD 5-Fc α-IFN组细胞存活率为(34.67±2.38)%,(P=0.000),两者之间有协同效应.在786-0裸鼠移植瘤模型中,CD 5-Fc联合α-IFN能够显著抑制肿瘤的生长.结论:腺病毒为载体的自杀基因CD加前体药5-Fc联合α-IFN可以明显增强抗肾癌效果.     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 建立人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,测定荷人肺癌裸鼠移植瘤的大小和重量,应用免疫组化SP法检测移植瘤组织中PCNA、VEGF、CD31的表达.结果 ADFMChR对肺癌移植瘤生长有显著抑制作用(P<0.01),5.0、10.0、20.0 mg/(kg·bw)的ADFMChR对移植瘤的瘤重抑制率分别为42.98%,82.31%和89.91%.免疫组化检测结果表明:ADFMChR具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤细胞PCNA、VEGF及CD31蛋白表达作用.结论 ADFMChR抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长作用与其抑制移植瘤细胞PCNA、VEGF以及CD31的蛋白表达相关.     

TK/GCV、CD/5 Fc双自杀基因系统治疗人结肠癌的动物实验研究

目的：观察胸苷激酶/丙氧鸟苷(thymidine kinase/ganciclovior, TK/GCV)、胞嘧啶脱氨酶/5 氟胞嘧啶（cytosine deaminase/5 fluorocytosine, CD/5 Fc）双自杀基因系统对人结肠癌的治疗效果。方法:采用培养细胞移植法,将人结肠癌细胞系SW480接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型,将32只裸鼠随机分为4组：对照组、TK/GCV组、CD/5 Fc组、TK CD联合治疗组,每组8只,TK CD采用逆转录病毒介导,采用瘤体内直接注射法,同时腹腔注射GCV、5 Fc治疗,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理、生存期等指标,比较观察各治疗组的治疗效果及对荷瘤裸鼠存活的影响。结果:成功构建了SW480皮下移植瘤动物模型。各治疗组裸鼠人结肠癌移植瘤的生长均受到显著抑制,裸鼠存活期显著延长,联合基因治疗组效果更好,TK/GCV与CD/5 Fc有交互协同作用。结论:TK/GCV与CD/5 Fc对人结肠癌SW480细胞有明显抑制作用,TK/GCV、CD/5 Fc双自杀基因系统效果更强。     

重组血管基膜衍生多功能肽抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长和血管生成

目的:研究重组血管基膜衍生多功能肽rVBMDMP对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长和血管生成的抑制作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞和人胚肝L-02细胞,MTT法测定不同浓度的rVBMDMP对HepG2细胞的选择性抑制增殖作用;人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型治疗实验评价rVBMDMP体内抗人肝癌作用;CD31免疫组化方法分析rVBMDMP处理的HepG2裸鼠移植瘤组织微血管面积(MVA)的比例。结果:rVBMDMP具有选择性抑制体外培养人肝癌HepG2细胞增殖作用,呈剂量依赖性,而对L-02细胞的增殖活性无明显的影响。rVBMDMP对HepG2裸鼠移植瘤生长具有显著抑制作用,呈剂量依赖性。1.0 mg/kg、3.0 mg/kg和10.0 mg/kg的rVBMDMP的肿瘤生长抑制率分别为:12.4%,55.8%和79.7%。其中10.0 mg/kg的rVBMDMP的肿瘤生长抑制率近似于20.0 mg/kg的5-氟尿嘧啶(5-FU,80.1%)。rVBMDMP处理的人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织的CD31染色阳性区域面积百分比随着rVBMDMP浓度的增加明显降低。结论:rVBMDMP对人肝癌HepG2细胞增殖...     

生长抑制因子5抑制肺癌细胞增殖作用的研究

目的探讨生长抑制因子5(ING5)抑制肺癌细胞增殖的作用。方法采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞ING5高表达细胞系A549-ING5-OE和A549细胞空质粒对照细胞系A549-control。采用细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;采用皮下接种方法建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察ING5对裸鼠皮下成瘤能力及肿瘤体积大小的影响。结果本实验成功构建了肺癌A549-ING5过表达细胞系,与A549-control比较,细胞系A549-ING5-OE中ING5表达显著增高;增殖实验结果显示ING5高表达显著抑制了肺癌细胞的增殖能力;克隆形成实验结果显示细胞系A549-ING5-OE中ING5高表达的肺癌细胞克隆形成能力明显低于A549-control肺癌细胞(P<0.01);裸鼠在体水平研究结果显示ING5高表达可以抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长。结论 ING5可以抑制肺癌细胞的增殖,为临床治疗肺癌提供新的治疗靶点。     

血管基膜衍生多功能肽抗人结肠癌作用研究

目的:研究重组血管基膜衍生多功能肽VBMDMP的抗人结肠癌作用。方法:体外培养人结肠癌细胞系(SW480)细胞和中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)细胞,采用MTT比色法检测重组VBMDMP对SW480细胞选择性抑制增殖作用;胎盼蓝染色细胞计数法检测重组VBMDMP对SW480细胞和CHO-K1细胞生长曲线的影响;人结肠癌(SW480)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验观测重组VBMDMP体内抗人结肠癌作用。结果:重组血管基膜衍生多功能肽具有选择性抑制体外培养人结肠癌细胞系SW480细胞增殖和生长作用,呈剂量依赖性。而对CHO-K1细胞的增殖活性影响小。重组血管基膜衍生多功能肽对SW480细胞裸鼠异种移植瘤生长具有显著抑制作用,呈剂量依赖性。1 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率分别为:63%,79%和83%;瘤重抑制率分别为:62%,66%和75%。其中10 mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率和瘤重抑制率均接近100 mg/kg环磷酰胺(CTX),高于20 mg/kg血管生成抑制剂烟曲霉素衍生物TNP-470。结论:重组血管基膜衍生多功能肽对人结肠癌细胞增殖和生长具有显著抑制作用。     

胞嘧啶脱氨酶基因联合干扰素-酌基因治疗大肠癌的实验研究

目的:研究胞嘧啶脱氨酶基因(EC鄄CD)联合干扰素-酌(INF鄄酌)基因对大肠癌的治疗作用。方法:以重组腺病毒载体AdCMVCD转导EC鄄CD基因;AdCMVINF鄄γ转导鼠INF鄄γ基因。采用体外培养和小鼠移植瘤实验,研究EC鄄CD基因联合INF鄄γ基因对CT26大肠癌细胞的杀伤作用。结果:AdCMVIFN鄄γ感染对CT26细胞生长有明显的抑制作用。AdCMVCD/5鄄FC联合AdCMVINF鄄γ可以增强对CT26细胞的杀伤作用,IC50明显变小(P<0.01),肿瘤生长明显抑制(P<0.01)。组织学检查显示,EC鄄CD基因与INF鄄γ基因联合治疗后肿瘤内有大量淋巴细胞浸润。结论:EC鄄CD基因联合INF鄄γ基因可以明显增强抗肿瘤效应,局部淋巴细胞浸润增加可能起到一定作用。     

尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁抗肺癌作用研究

目的 探讨尿胰蛋白酶抑制剂(urinary trypsin inhibitor,UTI)对人肺癌细胞系A549细胞体内外抗肿瘤作用.方法 选用尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁(ulinastatin),设置乌司他丁 0、100、200、400 U/mL四个浓度组及CTX3 μg/mL阳性对照组,采用MTT比色法检测乌司他丁对A549细胞增殖抑制作用,采用侵袭小室法检测乌司他丁对A549细胞的侵袭抑制作用.建立人肺腺癌(A549)细胞裸鼠异种抑制瘤模型,设置乌司他丁 0万单位、2.5万单位、5万单位组、10万单位组及CTX 0.1 g阳性对照组,通过绘制移植瘤生长曲线、统计分析瘤重和肺转移灶,检测乌司他丁对裸鼠体内肺腺癌抑制增殖和转移的作用.结果 增殖抑制率分别为0%、17.82%、25.46%、42.73%、57.46%,显示乌司他丁对人肺癌细胞系A549细胞具有增殖抑制作用;侵袭指数分别为16.44%、13.06%、11.73%、7.63%、8.12%,表明乌司他丁能有效抑制人肺癌细胞系A549细胞的侵袭;瘤重抑制率分别为0%、56.19%、61.11%、68.53%、89.17%;抗肺转移率分别为0%、75.36%、85.51%、90.75%、86.94%,显示乌司他丁能有效抑制裸鼠肺癌移植瘤的生长及转移.结论 乌司他丁对人肺癌细胞系A549细胞具有体内外抗肿瘤作用,该作用表现为抑制肿瘤增殖并突出表现于抑制肿瘤转移.     

三氧化二砷抑制食管癌细胞EC-9706体内增殖及机制研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对食管癌细胞系EC-9706的体内增殖抑制作用及可能机制。方法:以不同剂量的As2O3作用于裸鼠移植瘤模型,每周测量裸鼠移植瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线;采用Western blot法检测Pim-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达变化。结果:不同剂量的As2O3均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,以4 mg/kg As2O3组的抑制作用最强,肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为81.13%和81.48%。Pim-3和Bcl-2蛋白的表达受到抑制。结论:As2O3可能通过抑制Pim-3使Bcl-2表达降低,促进肿瘤细胞凋亡。     

胞嘧啶脱氨酸基因治疗人胰腺癌的实验研究

探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因用于人胰腺癌基因疗法的可行性。方法将含癌胚抗原启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌ＳＷ１９９０细胞和Ｃａｐａｎ－２细胞以及人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＤ基因在细胞中的表达,以ＭＴＴ法比较细胞对５－氟胞嘧（５－ＦＣ）的敏感性差异。建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察ＣＤ基因的原位治疗效应及安全性。结果腺病毒介     

Adenoviral mediated suicide gene transfer in the treatment of pancreatic cancer

Objective To determine the efficacy of adenovirus- mediated suicide gene transduction comb ined with prodrug 5- fluorocytosine (5FC) as a therapeutic protocol for pancreat ic cancer. Methods Cytosine Deaminase(CD) gene was cloned into pAdTrack- CMV- CD, pAdTrack- CMV- CD and pAdEasy- 1 were recombined in bacteria. The newly recombined adenovirus (A d)- CD containing green fluorescent protein (GFP) were packaged and propagated i n 293 cells and purified by cesium chloride gradient centrifugation. Human panc reatic carcinoma cell line- Patu8988 was infected with this virus, then 5FC was added. XTT assay was used to estimate relative numbers of viable cells. In viv o model of pancreatic cancer was established by injecting 1. 0×10[7] Patu8988 c ells subcutaneously in Balb/c nude mice. When tumors were palpable, Ad- CD was injected into each tumor and 5FC was administered. Results Positive clones were selected using endonuclease to digest the recombinants and the concentration of viral liquids containing the CD gene was 2×10[11] pfu /ml. Significant cytotoxic activity as shown for 5FC in the CD gene transduced 8988 cell line, while little effect was found in the nontransduced pancreatic ca rcinoma cells. Antitumor effect was observed in Patu8988 xenograft nude mice wi th in situ CD gene transduction. Conclusions CD gene mediated by adenovirus has high infectivity and may be useful for gene t herapy in pancreatic carcinoma. These data demonstrate the use of an enzyme pro drug strategy in experimental pancreatic cancer.     

甲胎蛋白特异启动元件介导的肝癌靶向性基因治疗的体外实 …

目的 采用体外培养的肿瘤细胞系探讨甲胎蛋白特异启动元件介导的靶向性肝癌基因治疗。方法 将２．２ｋｂ的重组人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因顺式调控元件克隆于胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的上游,构建逆转录病毒载体ＬＸ２．２ＣＤ。再以此载体和另一不含ＡＦＰ基因调控元件的逆转录病毒载体ｐＣＤ２分别转染３种肝癌细胞系和１种肺腺癌细胞系,筛选出整合ＣＤ基因的抗Ｇ４１８克隆,并进行细胞生长抑制实验。     

腺病毒载体介导的CD基因转移联合5-FC对大鼠卵巢癌细胞株的作用研究

目的：研究胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转移及其与5－氟胞嘧啶（5－FC）联合应用对卵巢癌细胞株生长的影响。方法：用复制缺陷型重组腺病毒为载体，将CD基因转染大鼠卵巢癌细胞株NUTU－19细胞，加入含5－FC的培养液培养，MTT法检测培养孔吸光度值，计算细胞存活率。结果：5－FC对转染了CD基因的NUTU－19细胞的生长抑制作用显著增强，并随着腺病毒滴度和5－FC浓度的增加，该作用不断增强。此外，5－FC可通过旁观者效应杀伤CD基因转染细胞周围未转入该基因的NUTU－19细胞。结论：CD基因转移联合5－FC作用对NUTU－19细胞具有显著的杀伤作用。     

腺病毒介导的野生型p53基因表达对入胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨恢复野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）基因表达对胰腺癌细胞生长的影响。方法构建一个Ｅ１区缺失但能表达ｗｔｐ５３基因的５型腺病毒载体Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３，该载体含有人ＣＭＶ启动子、人野生型ｐ５３基因和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号。载体经腺病毒包装细胞２９３细胞包装、扩增后，转染人胰腺癌ＰＣ－２细胞。ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析证实，转染的细胞有外源ｗｔｐ５３基因的表达。结果与对照组相比，转染有Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３的ＰＣ－２细胞生长速度减慢、增殖率降低，软琼脂集落形成能力丧失。结论以腺病毒为载体恢复野生型ｐ５３在胰腺癌细胞的表达，可抑制癌细胞的生长和部分逆转其恶性表型。     

Therapeutic effect of AdCMVCD/5-FC system and metabolism of 5-FC in the trea tment of human tongue squamous cell carcinoma

Ｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ (ＯＳＣＣ)ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｓｔｈｅｍａｊｏｒｉｔｙｏｆｔｈｅｅｓｔｉｍａｔｅｄｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｎｄａｒｄｔｈｅｒａｐｉｅｓｉｎｃｌｕｄｅｄｅｆｏｒｍｉｎｇｒａｄｉｃａｌｓｕｒｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｄｕｒｅ,ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙａｎｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ 5 ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ(5 ＦＵ)ａｌｏｎｅｏｒｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｉｓｐｌａｔｉｎａｒｅｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ…     

CHFR基因在人肝癌HepG2细胞中的表达与作用

目的:研究CHFR基因在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及CHFR基因甲基化对HepG2细胞生长与集落形成的影响。方法:采用去甲基化剂5-氮-2-脱氧胞苷处理人肝癌细胞株HepG2,半定量RT-PCR检测CHFR在HepG2细胞中的表达变化,CCK法和平板集落形成试验分析HepG2细胞生长增殖情况的改变。结果:CHFR在HepG2细胞中表达缺失;经Aza去甲基化处理后,CHFR在HepG2细胞中逐渐恢复表达,肿瘤细胞抑制率和集落形成抑制率都逐渐增高,均存在剂量-反应关系;且CHFR表达水平与HepG2细胞抑制率、集落形成抑制率均呈正相关。结论:CHFR对于肝癌细胞的生长增殖能力发挥负向调控作用。     

MDM2癌基因对野生型p53基因诱发凋亡的抑制作用

目的 　研究 MDM2癌基因与野生型 p5 3基因在细胞凋亡发生中的相互关系。方法　 构建了一个表达人野生型 ( wt) p5 3逆转录病毒载体 ,经 PA31 7细胞包装后转染人胰腺癌细胞 ( PC- 2 ) ,建成 PC- 2 /swtp5 3转化细胞系。再用含 MDM2基因的p CMV- MDM2载体转染 PC- 2 /swtp5 3细胞 ,获得双重转染细胞系 PC- 2 /swtp5 3/p CMV- MDM2。用流式细胞技术 ,原位检测分析和 DNA凝胶电泳分析细胞凋亡。结果　 恢复 wtp5 3表达的胰腺癌细胞系 ( PC- 2 /swtp5 3)细胞凋亡明显增多 ( >1 2 % ) ,而双重转染的细胞系 ( PC- 2 /swtp5 3/p CMV- MDM2 )则凋亡细胞数明显下降 ( 3.2 % )。结论　 MDM2癌基因可抑制由野生型 p5 3基因诱发的细胞凋亡。     

脂质体介导的CD/5-FC自杀基因体系协同干扰素体内抑瘤及旁观者效应的观察

OBJECTIVE: To study the antitumor and distant bystander effects of cationic liposome-mediated cytosine deaminase (CD)/5-fluorocytosine (5-FC) suicide gene system combined with interferon-gamma (IFN-gamma) in vivo. METHODS: Murine hepatoma 22 (H22) cells transfected by CD gene were inoculated subcutaneous in Kunming mice in the left axillary region, and the H22 cells without CD gene transfection were inoculated in the right axillary region. The mice were randomly divided into 4 groups and treated with normal saline , 5-FC, IFN-gamma, and 5-FC+ IFN-gamma on a daily basis. The tumor inhibition and distant bystander effects were observed in the mice. RESULTS: Exposure of CD gene-transfected tumor to 5-Fc resulted in obvious tumor growth inhibition with an inhibition rate of 78.38%, which was significantly increased to 93.21% (P<0.01) with 5-Fc +IFN-gamma treatment. A notable distant bystander effect in the CD/5-FC suicide gene system was observed in vivo, with a tumor inhibition rate of was 54.42%; when combined with IFN-gamma, the inhibition rate increased significantly to 87.57% (P<0.05). CONCLUSION: When combined with IFN-gamma, CD/5-FC suicide system has stronger anti-tumor and distant bystander effects. CD/5-FC suicide gene system combined with IFN-gamma may provide a potential therapy for malignant tumors.