纳米粒子包载反义雷帕霉素靶蛋白基因转染对移植静脉内膜增生的影响

目的观察纳米粒子包载的反义雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇（PVA）包载mTOR基因。建立自体静脉移植模型，随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染纳米粒子包载的反义mTOR基因，空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体，对照组不予特殊处理。分别于移植3、7、14、28d取材，常规苏木素．伊红（HE）、Verhoeff染色，检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达的变化，TUNEL法观察血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达明显减少（P〈0．01）；转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少（P〈0．01）；转基因组凋亡细胞明显增多（P〈0．01）。结论纳米粒子可以作为基因载体，反义mTOR基因的表达能够抑制移植静脉内膜的增生，促进VSMC凋亡。     

血管外雷帕霉素缓释涂层抑制移植静脉再狭窄

目的观察血管周围局部应用雷帕霉素对兔自体移植静脉段内膜过度增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法大耳白兔30只,采用自身对照设计建立模型。任取一侧静脉旁路为干预组,外涂含0.3 mg雷帕霉素的Pluronic凝胶;另一侧为对照组,外涂空凝胶。4周后测旁路静脉内膜厚度、细胞的增殖指数及PCNA、P27~(kipl)免疫组化阳性细胞数。并于术后1、2、4、8周检测血管壁中雷帕霉素的含量。结果干预组旁路静脉内膜厚度(63.72±14.00)μm与对照组(77.76±14.90)μm相比,增生明显减少(P<0.05)。增殖指数对照组(29.30±7.15)明显高于干预组(20.10±9.48)(P<0.05)。在干预组和对照组均有阳性PCNA免疫组化染色表达细胞,正常静脉未见阳性表达,对照组较干预组细胞的阳性表达更强(P<0.05)。P27~(kipl)免疫组化染色干预组见阳性表达细胞,对照组表达阴性(P<0.05)。干预组血管壁术后1～8周均可测到雷帕霉素,含量呈逐步递减趋势。结论血管周围局部应用雷帕霉素具有抑制兔移植静脉内膜过度增殖的作用;这种作用和P27~(kipl)的上调表达有关。     

同种异体血管移植内膜形态和功能的研究

采用冷冻，干燥和辐照法，制备犬的股动、静脉段后，作异体相应血管移植。观察３２周，移植段均通畅，静脉和动脉植段的内膜，分别于术后１６周和２４周修复完全，组织增生不明显，吻合口无狭窄，内皮细胞结构正常；静脉和动脉移植内膜前列环素的生成量，亦分别于术后１６周和２４周恢复到正常水平，与内膜修复的时间相一致。     

移植血管内膜增生的临床研究及药物防治

内膜增生是血管移植术后重要的组织细胞学改变。许多临床病例证明内膜增生是导致血管移植晚期失败的主要原因，针对其机制应用各种药物防治之是目前主要措施，但实验与临床应用结果尚有一定差距。     

血管内膜增生的研究

一、血管内膜增生的病理生理学研究1.内皮细胞(EC)损伤是血管内膜增生的病理基础.EC完整性的破坏是早期血栓形成和内膜增生(IH)的重要原因.血管手术后10分钟,EC表面即有血小板、红细胞和纤维蛋白的粘附,EC收缩变形,6小时后有大量中性粒细胞浸润,24小时EC间出现裂隙,胞浆混浊,EC被夹置在中层浸润的中性粒细胞和血管腔内面的血小板之间,5～7天后EC逐渐恢复正常而血管平滑肌细胞(VSMC)开始增生并由中膜向内膜移行.EC通过产生多种血管活性物质作用于VSMC,如前列腺素、内皮源性舒张因子(EDRF)和肝素样物质等.尤其是肝素样物质能有效地抑制VSMC的增生,同时阻断凝血过程.EC和VSMC混合培养24小时后EC减少了VSMC的蛋白合成,并有效地抑制了VSMC的移行.综上可见EC的损伤程度与IH的程度密切相关.EC受损引起血小板粘附和白细胞浸润,失去对VSMC的抑制作用,使VSMC移行并进一步增殖而最终形成IH.因此,可以认为EC的损伤是IH的病理基础.     

转染人血红素加氧酶-1基因抑制移植静脉血管内膜增生

目的　应用含人血红素加氧酶 - 1基因 (human Heme Oxygenase- 1,h HO- 1)的重组腺病毒 (Adeno- XTMh HO- 1,Ad- h HO- 1)转染静脉移植血管 ,观察 h HO- 1基因预防静脉移植血管内膜增生的作用。　方法　将 2 1只日本大耳白兔分为 3组 ,对照组 ,Ad- null组和 Ad- h HO- 1组 ,每组各 7只。在兔颈外静脉移植于颈总动脉的血管移植术前分别应用肝素生理盐水、Ad- null和 Ad- h HO- 1病毒液常温浸泡静脉移植血管 30 min。术后 2 8d病理切片观察移植血管内膜增生的情况 ,计算机图象分析仪计算新生内膜厚度、中膜厚度及二者比值 ;采用免疫组织化学染色方法 (S- P法 )观察术后 14 d、2 8d移植血管壁 h HO- 1蛋白表达情况。　结果　Ad- h HO- 1组内膜厚度、内膜厚度与中膜厚度比均显著低于Ad- null组和对照组 (P<0 .0 1) ,中膜厚度差别无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 Ad- h HO- 1组静脉血管壁细胞 h HO- 1免疫组化染色阳性。　结论　 Ad- h HO- 1转染兔静脉旁路移植血管能够抑制内膜增生。     

反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察以纳米粒子为载体的反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因,制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率、体外释放情况及粒子大小。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3d、7d、14d、28d取材,常规HE、Verhoeff染色,RT-PCR、Westernblot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生厚度7d、14d、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体,反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。     

同种异体血管移植的临床应用

从１９９１年到１９９２年，我们用底温贮存的同种异体血管修复了６例７条血管。缺损血管平均长４．７５ｃｍ（１．０－１５．０ｃｍ），缺损血管平均外径２．０８ｍｍ（１．０－５．０ｍｍ）。平均随访１９．６个月（１３－３６个月），５例效果良好，１例失败。     

自体血管移植后内膜增生与内皮素-1 mRNA表达的关系

我们采用原位杂交方法探讨内皮素(ＥＴ) 1ｍＲＮＡ与自体血管移植后内膜增生的关系 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.动物分组及模型建立 :16 8只Ｗｉｓｔａｒ大鼠 (由哈尔滨医科大学提供 )随机分成 3组。Ｖ组 (静脉组 )采用质量分数为 1%戊巴比妥钠 30ｍｇ/ｋｇ体重腹腔注射麻醉。颈部旁正中切口 ,游离颈外静脉外侧分支长 1.0ｃｍ切断 ,放入肝素盐水弯盘中备用 (放置时间 15ｍｉｎ)。游离左颈总动脉长约 1.5ｃｍ ,两端分别放置动脉夹 ,切除颈总动脉约 1.0ｃｍ ,将切取的颈外静脉和颈总动脉断端行端端吻合 ,用 11 0无损伤线采用外翻结…     

经外膜缓释雷公藤内酯醇抑制自体移植静脉内膜增生

目的:探讨经外膜缓释雷公藤内酯醇（triptolide）对自体移植静脉内膜增生的抑制作用。方法:健康雄性新西兰大白兔24只，建立颈外静脉-颈总动脉移植模型。随机将动物等分为3组。空白组移植血管不给任何处理， F-127多聚凝胶对照组在移植血管外膜喷洒20 %F-127多聚凝胶0.5 mL，实验组在移植血管外膜喷洒携带雷公藤内酯醇300μg的F-127多聚凝胶0.5 mL。术后2周取标本。用组织形态学方法检测血管内膜增生程度，免疫组化检测标本中bcl-2和Fas的表达，TUNEL法检测标本中血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的水平。结果:静脉移植2周后，与空白组和F-127对照组比较，实验组血管内膜增生明显受抑制（P<0.05），bcl-2的表达［（18.2±8.4） %］显著减少，而Fas的表达［（21.4±8.9） %］显著增加，凋亡细胞［（28.4±7.6） %］也显著增加（P<0.05）。结论:经外膜缓释雷公藤内酯醇可有效抑制移植静脉内膜增生，这一作用可能系通过促进VSMC凋亡而实现的。     

血管腔内平整化治疗对动脉内膜剥脱术后内膜增生的影响及其机制

目的:探讨血管腔内平整化治疗(IPT)对内膜剥脱术后内膜增生的作用及其可能机制,为临床运用提供理论依据。方法:用金钢砂磨针磨除内膜的方法建立颈动脉内膜剥脱模型。用随机数表法将新西兰兔随机分成两组(Ⅰ组比Ⅱ组),每组8只。Ⅰ组为颈动脉内膜剥脱模型对照组;Ⅱ组为采用金刚砂磨针磨除内膜后,行IPT;取对侧颈动脉作为自身对照。...     

血管移植物置换犬颈总动脉的研究

目的 观察以猪血纤维蛋白/微孔聚氨酯弹性膜为管形支架内皮化构建的小口径血管移植物在体内血流动力条件下血管壁重塑过程.方法 用体外培养的小口径血管移植物置换6条犬双侧颈总动脉,于术后1 d、1周、2周、4周行影像学检查,并于术后5 d、2周、4周取材行组织学、免疫组织化学和扫描电镜检查以评价移植血管在体内重塑.结果 10根血管移植物中有8根仍保持通畅(通畅率80%);8根通畅的血管在术后至4周的不同时点取出发现其内表面菲薄、光滑,被覆盖一连续、鹅卵石样单层细胞,Ⅷ因子相关抗原抗体染色阳性.术后4周时新生动脉壁厚900μm,并于血管壁中层可见较多平滑肌细胞,而且最早于术后4周时在血管壁中层就可见弹力纤维.结论 猪血纤维蛋白/微孔聚氨酯弹性膜管形支架内皮化体外构建的小口径血管移植物在体内重塑后,可形成具有类似自体动脉壁结构.     

联合转染血管内皮生长因子165和组织纤溶酶原激活物基因抑制兔血管损伤后内膜增生的研究

目的观察血管局部联合转染血管内皮生长因子165(VEGF165)和组织纤溶酶原激活物(tPA)基因对损伤动脉内膜增生的影响并探讨可能机制。方法采用显微外科手术方法建立兔动脉损伤模型;用微注射装置将基因转染液注入损伤血管壁,按实验终点(术后2d、1周、2周、4周和8周)分为5个亚组(每个亚组8只兔);术后各实验终点取损伤段血管用于病理学检测、电镜观察、RTPCR和免疫组织化学检查。结果术后各时间点基因转染组血管壁的VEGF165基因的mRNA表达量和tPA阳性细胞数明显高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,术后各时间点基因转染组血管内膜面积和狭窄率均显著减小(P<0.01),术后8周时基因转染组管腔狭窄率比对照组降低了59.0%。结论局部联合转染VEGF165和tPA基因可抑制血管新生内膜增生及血管再狭窄。     

吡格列酮对静脉旁路血管内膜增生的影响

目的 探讨吡格列酮(PIO)对静脉旁路血管内膜增生的影响及可能机制.方法 将32只SD大鼠随机分为2组,分别予(3mg·kg-1·d-1)的PIO或盐水灌胃,1周后行自体右颈外静脉-颈总动脉移植术,术后持续给药2、4周后取静脉旁路血管.应用图像分析软件计算内膜增厚情况,westernbolt检测ERK1/2激活情况.体外培养人大隐静脉平滑肌细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 与同期对照组相比,PIO明显减少术后2周[(8.56±1.64)μm对(25.44±0.89) μm,P＜0.01]和4周[(10.51 ±1.47) μm对(35.69±1.07) μm,P＜0.01]静脉旁路血管内膜厚度,抑制ERK1/2活性.PIO显著抑制PDGF-BB诱导的细胞增殖并促进细胞凋亡.结论 PIO能有效抑制静脉旁路血管术后内膜增生,可能与其下调ERK1/2活性,抑制血管平滑肌细胞增殖并促进凋亡密切相关.     

Local application of rapamycin inhibits neointimal hyperplasia in experimental vein grafts

BACKGROUND: Rapamycin is an immunosuppressive agent which also exhibits marked antiproliferative properties. Rapamycin coated stents have been demonstrated to suppress restenosis in experimental and clinical studies of percutaneous coronary catheter intervention. We investigated whether rapamycin can reduce neointima formation in a mouse model of vein graft disease. METHODS: C57BL6J mice underwent interposition of the inferior vena cava from isogenic donor mice into the common carotid artery using a previously described cuff technique. In the treatment group, 100 microg or 200 microg of rapamycin was applied locally in pluronic gel. The control group did not receive local treatment. Grafts were harvested at 1, 2, 4, and 6 weeks and underwent morphometric analysis as well as immunohistochemical analysis. RESULTS: In grafted veins without treatment (controls), median intimal thickness was 9.6 (6.4 to 29)microm, 11.9 (7.9 to 39.9)microm, 46.6 (12.4 to 57.7)microm, and 57.5 (32.5 to 71.1)microm after 1, 2, 4, and 6 weeks, respectively. Treatment with 100 microg or 200 microg rapamycin showed a dose dependent reduction of intimal thickness. In the 200 microg rapamycin treatment group the intimal thickness was 4.3 (3.4 to 5.6)microm, 3.8 (3.2 to 6.3)microm, 17.1 (4.8 to 63)microm, and 33.9 (11.3 to 80.3)microm after 1, 2, 4, and 6 weeks, respectively. This difference of intimal thickness of 200 microg treated animals compared with controls was statistically significant at 1 and 2 weeks. Immunohistochemically the reduction of intimal thickness was associated with a decreased amount of infiltration of CD-8 positive cells and a decreased amount of metallothionein positive cells in the rapamycin treated grafts. CONCLUSIONS: We conclude that perivascular application of rapamycin inhibits neointimal hyperplasia of vein grafts in a mouse model. These results suggest that rapamycin may have a therapeutic potential for the treatment of vein graft disease.     

反义c-myc寡核苷酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的 研究反义ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法 移植静脉外周涂以加有反义ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸的Ｆ１２７凝胶,于术后１、２周测量静脉内膜平均厚度及观察血管内膜内ｃ－ｍｙｃ蛋白表达情况。结果 手术后１、２周,移植静脉内膜的平均厚度、内膜中ｃ－ｍｙｃ蛋白表达在反义ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸组均减少,并存在量效关系（Ｐ〈０．０１）。而只用Ｆ１２７胶组及正义寡聚脱氧     

The effect of bacterial contamination on neointimal hyperplasia in vascular grafts

Neointimal hyperplasia (NH) is the most significant contributing factor to long-term vascular graft failure. Inflammation is known to be important in its development; however, the role of bacterial infection is unclear. We examined the effect of contamination with common organisms on the development of NH in expanded polytetrafluoroethylene grafts. Thirty adult pigs were randomized into one of four groups: no infection, contamination with Staphylococcus aureus, mucin-producing Staphylococcus epidermidis, or Pseudomonas aeruginosa. An expanded polytetrafluoroethylene graft (6 mm x 3 cm) was placed as a common iliac artery interposition graft and was inoculated with 1-2 x 10(8) of the selected organism before closure. Grafts were explanted 6 weeks postoperatively. Microbiologic, histological, and morphometric evaluations were performed. All grafts were patent at the time of euthanasia. The mean areas of NH were 5.45 mm(2) in sterile grafts, 8.36 mm(2) in S. aureus, 7.63 mm(2) in S. epidermidis, and 11.52 mm(2) in P. aeruginosa grafts. Comparison of means via analysis of variance showed that P. aeruginosa grafts had significantly higher formation of NH than sterile grafts (P = 0.025). NH production in infected grafts appears to be organism specific and is significantly higher with P. aeruginosa than common Gram-positive organisms. Increased NH from subclinical infection may be a significant factor contributing to late graft failures.     

bcl-2基因短发夹RNA对自体移植静脉内膜增生的影响

目的探讨针对bcl-2基因短发夹RNA对兔自体移植静脉内膜增生的影响。方法18只新西兰白兔,取颈外静脉,用含pshRNA-bcl-2质粒(基因组)或pH1质粒(空载体组)的阳离子脂质体溶液浸泡,空白对照组无特殊处理,间置于同侧颈总动脉。术后4周采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测bcl-2基因的表达,病理形态学观察血管新内膜增生改变。结果基因组移植静脉内膜的bcl-2的mRNA和蛋白均明显受到抑制。组织学检查显示,基因组新内膜厚度为(85．78±5．47)μm,空载体组为(175．2±10．90)μm,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论bcl-2基因的短发夹RNA可能通过降低血管bcl-2蛋白的表达抑制移植静脉内膜增生。