基于“TF-miRNA”反馈环探讨活血荣络方对脑梗死大鼠的保护作用及机制

目的基于活血荣络方对"转录因子(TF)-微小RNA(miRNA)"反馈环的影响,研究其对脑梗死大鼠的保护作用。方法通过GEO、TargetScans、starBase、TransmiR v2.0数据库,采用R语言构建"TF-miRNA"反馈环。将大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组及丁苯酞组,建立MCAO/R模型,灌胃给药7 d;采用mNSS(改良神经功能缺损评分)、HE(苏木素-伊红染色)、Nissl(尼氏染色)分别评价各组大鼠神经功能、病理及尼氏小体情况;RT-PCR法检测"TF-miRNA"反馈环中KLF4、KLF5、miR-206、miR-429及反馈环反向VEGF mRNA表达。结果生物信息学构建出"KLF4-miR-206""KLF4-miR-544""KLF4-miR-429""KLF5-miR-429""EBF1-miR-429"5个"TF-miRNA"反馈环。与假手术组比较,模型组mNSS,KLF4、KLF5、VEGF mRNA与miR-206、miR-429表达升高(P0.01);与模型组比较,活血荣络方组与丁苯酞组mNSS 1 d无明显变化(P0.05),3、7 d mNSS降低(P0.01),KLF4表达升高,miR-206、miR-429表达降低(P0.01);活血荣络方组KLF5、VEGF表达升高(P0.05);丁苯酞组KLF5、VEGF表达升高(P0.01);且药物均能改善脑梗死大鼠的病理损伤。结论活血荣络方能上调TFs(KLF4、KLF5)、下调miRNAs(miR-206、miR-429)的表达,打破脑梗死大鼠中存在的"TF-miRNA"反馈环,可能通过介导VEGF的表达促脑梗死后血管新生,起到神经保护作用。     

活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响

目的观察活血荣络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响,从线粒体自噬角度探讨其干预CIRI的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方(HXRLF)组和自噬激活剂(RAP)组,采用线栓法建立CIRI大鼠模型。HXRLF组于造模前36 h开始灌胃活血通络方药液11.7 g/kg,每24 h灌胃1次,共3次;RAP组于再灌注同时腹腔注射雷帕霉素1.5 mg/kg。再灌注24 h后,对大鼠神经功能进行评分,尼氏染色检测大鼠皮质区完整神经元数目,JC-1荧光探针检测皮质区线粒体膜电位(MMP),透射电镜观察大鼠皮质区超微结构,免疫组化和Western blot检测皮质区p62、LC3B、TOMM20蛋白表达,Western blot和RT-PCR分别检测皮质区PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)蛋白和m RNA水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显升高,神经功能缺损严重;皮质区完整神经元数量明显减少,自噬小体数目增多,MMP降低;皮质区p62、LC3B蛋白表达升高,TOMM20蛋白表达降低,PINK1、Parkin蛋白和m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与模型组比较,HXRLF组和RAP组大鼠神经功能评分明显降低,神经功能缺损改善;皮质区完整神经元数量明显增多,自噬小体数目增多,MMP升高;皮质区p62、TOMM20蛋白表达降低,LC3B蛋白表达升高,PINK1、Parkin蛋白和m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论活血荣络方可能通过激活PINK1/Parkin信号通路上调线粒体自噬,减轻大鼠神经功能损害,从而发挥神经保护作用。     

活血荣络方对大鼠脑缺血再灌注损伤JAK2、STAT3表达的影响

目的观察活血荣络方对大鼠脑缺血再灌注损伤JAK2、STAT3表达的干预作用。方法用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,造模成功后根据评分分为活血荣络方组(模型+活血荣络方)、AG490组(模型+AG490)、模型组,上述组分别再分为再灌注后6h、12h、24h、72h四个亚组。每组予以相应药物治疗。并分别于相应时间点行神经功能缺损评分后处死大鼠,并立即取脑行免疫组化检测。结果 (1)活血荣络方组及AG490组再灌注24h后神经功能缺损评分低于模型组(P0.05);活血荣络方组与AG490组神经功能缺损评分在各个时间点相当(P0.05)。(2)活血荣络方组12h、24h、72h JAK2、STAT3表达明显低于模型组(P0.01);AG490组4个时间点JAK2、STAT3的表达均明显低于模型组(P0.01);活血荣络方组6h的JAK2、STAT3的表达高于AG490组(P0.05),其余时间点与AG490组相当(P0.05)。结论活血荣络方可通过下调JAK2、STAT3的表达,对大鼠脑缺血再灌注损伤起到保护作用。     

活血益气方及其拆方对大鼠心肌梗死边缘区血管内皮生长因子及其上游调控因子miR-126的影响

目的探讨活血益气方促血管新生的可能作用机制及配伍规律。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血益气方组、益气方组、活血方组,每组6只。除假手术组外其余各组建立心肌梗死模型。造模24 h后活血益气方组、益气方组、活血方组给予浓度分别为3.2 g/ml、2.4 g/ml、0.8 g/ml相应中药溶液0.5 ml/100 g灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水,每日1次。4周后取各组大鼠梗死边缘区心肌组织用实时荧光定量PCR法检测心肌梗死边缘区组织miR-126、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果模型组大鼠梗死边缘区心肌组miR-126的表达低于假手术组(P0.01);活血益气方组、益气方组、活血方组miR-126的均表达低于模型组,活血益气方组、活血方组VEGF mRNA的表达高于模型组(P0.05或P0.01);活血益气方组对miR-126、VEGF mRNA的调节优于益气方组(P0.05或P0.01)。结论活血益气方促血管新生的作用机制可能与上调VEGF及下调其上游调控因子miR-126有关,活血药和益气药具有协同作用。     

活血荣络片对大脑中动脉缺血模型大鼠脑组织微囊蛋白-1表达的影响

目的观察活血荣络片对大脑中动脉缺血(MCAO)模型大鼠脑组织中细胞膜微囊蛋白-1(Caveolin-1)表达的影响,探讨活血荣络片对脑缺血后神经功能修复的作用机制。方法将96只SD大鼠随机分为假手术组(24只)和造模组(72只),造模组采用线栓法制作MCAO模型,造模成功后再随机分为模型组、对照组及实验组,各24只。假手术组及模型组予蒸馏水2 m L灌胃,实验组予活血荣络片药液灌胃,对照组以磷酸吡哆醛丁咯地尔胶囊药液灌胃,均造模6 h后首次给药,然后每日灌胃2次,直至处死为止。每日观察大鼠的一般情况,进行神经功能缺损评分,并分别在造模1、3、5及7 d后各组随机选取6只大鼠处死取材,观察比较各组大鼠脑组织Caveolin-1的表达情况。结果造模1 d后,造模组各组大鼠神经功能缺损评分比较差异无统计学意义(P0.05);造模3、5及7 d后对照组及实验组大鼠神经功能缺损评分与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),均高于模型组,且对照组与实验组组间比较差异均无统计学意义(P0.05);模型组、对照组及实验组造模1、3、5及7 d后Caveolin-1表达水平与假手术组同期比较差异均有统计学意义(P0.05),均高于假手术组;对照组及实验组造模1、3、5及7 d后Caveolin-1表达水平与模型组同期比较差异均有统计学意义(P0.05),均高于模型组;实验组在造模1、3及5 d后时Caveolin-1表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),在造模7 d后时Caveolin-1表达水平明显高于对照组,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论活血荣络片可明显增加Caveolin-1在梗死周围脑组织中的表达,促进脑血管新生,从而改善脑缺血后神经功能缺损。     

电针对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织中p-4E-BP1及VEGF蛋白表达的影响*

目的：观察电针对颅脑损伤(TBI)大鼠神经功能、脑组织中真核起始因子4E结合蛋白1和血管内皮生长因子(p-4E-BP1/VEGF)蛋白表达的影响,探讨电针在TBI治疗中的可能机制。方法：SPF级SD大鼠70只,随机分为假手术组与空白组各8只、模型组与电针组各27只。模型组与电针组使用Feeney自由落体颅脑打击装置制备TBI大鼠模型;假手术组只开颅不打击,空白组不做处理。分别于造模后24h、3d、7d、14d再次进行mNSS评分以评价各组大鼠神经功能缺损程度。电针组于模型制备后24h电针针刺患侧“足三里”、患侧“内关”、“百会”、“水沟”,采用断续波,2Hz,1次/d,15min/次,连续治疗14d。在造模后的3d、7d、14d分批次对模型组、电针组大鼠脑组织取材,空白组和假手术组在造模后14d一并取材。采用免疫组化法和免疫印迹法观察大鼠脑组织中p-4E-BP1及VEGF的蛋白表达情况。结果：造模后3d、7d、14d 电针组、模型组mNSS评分呈下降趋势,同时间点电针组mNSS评分下降幅度较模型组大(P＜0.01)。p-4E-BP1及VEGF蛋白在空白组和假手术组大鼠脑组织中均有少量表达,两组差异无统计学意义(P >0.05);经电针干预后,各时间点电针组大鼠脑组织中p-4E-BP1和VEGF蛋白表达量均高于模型组(P <0.05);同时间点模型组、电针组大鼠与空白组、假手术组大鼠相比差异具有统计学意义(P <0.05)。结论：电针能促进TBI大鼠脑组织中p-4E-BP1及VEGF蛋白的表达,改善TBI大鼠神经功能缺损症状,这可能是电针保护脑神经功能、减轻脑细胞自噬并的部分机制之一。     

miR-200b通过调控KLF4作用于p21及Cyclin-D1对子宫内膜癌细胞周期的影响

目的:探讨miR-200b通过调控Krüppel样因子4(KLF4)作用于p21及Cyclin-D1对子宫内膜癌细胞周期的影响。方法:体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株,实验分为三组:(1)对照组:不做任何处理;(2)miR-200b组:转染miR-200b mimics;(3)KLF4组:同时转染miR-200b mimics和KLF4过表达质粒。检测细胞miR-200b、KLF4、p21和Cyclin-D1基因和蛋白的表达,检测细胞增殖和细胞周期。结果:与对照组比较,miR-200b组和KLF4组细胞miR-200b表达显著增加,组间比较,差异具有统计学意义(P0.05);miR-200b组细胞KLF4和p21基因和蛋白表达显著降低,Cyclin-D1基因和蛋白表达显著增加,差异具有统计学意义(P0.05);KLF组细胞KLF4和p21基因和蛋白表达显著增加,Cyclin-D1基因和蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P0.05);miR-200b组第24、36、48和72 h的A(OD)值显著增大,KLF4组A(OD)值显著减小,差异均具有统计学意义(P0.05);miR-200b组G1期细胞比例(40.3%)显著减少,KLF4组G1期细胞比例(68.5%)显著增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-200b很可能是通过调控KLF4及其下游p21和Cyclin-D1表达从而影响子宫内膜癌细胞的增殖和细胞周期。     

活血荣络片对AD模型小鼠AchE和ChAT表达的影响

目的观察活血荣络片对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织乙酰胆碱酯酶(Ach E)和乙酰胆碱转移酶(Ch AT)表达的影响。方法将50只APP/PS1双转基因AD模型小鼠随机分为模型组、低剂量活血荣络片组、中剂量活血荣络片组、高剂量活血荣络片组、多奈哌齐组,每组10只。同期将同月龄的10只KM小鼠作为正常组。每天灌胃1次,连续治疗2个月。治疗结束后,取各组小鼠脑组织,采用Western Blot检测Ach E和Ch AT蛋白含量。结果与正常组相比,AD模型组小鼠脑组织Ach E蛋白表达提高、Ch AT蛋白表达降低(P0.01);与模型组相比,低中高剂量活血荣络片组、多奈哌齐组脑组织Ach E蛋白表达降低、Ch AT蛋白表达增高(P0.01);与多奈哌齐组比较,中、高剂量活血荣络片组降低Ach E蛋白表达的变化无统计学意义(P0.05),而高剂量活血荣络片组提高Ch AT蛋白的表达(P0.05)。结论活血荣络片可一定程度上抑制AD模型小鼠脑组织Ach E蛋白的表达并促进Ch AT蛋白的表达。     

荣络健脑饮对脑缺血再灌注大鼠NGF、BDNF、bFGF表达的影响

目的通过观察荣络健脑饮对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分的影响及其对神经营养因子的生成作用,研究荣络健脑饮的神经保护机制。方法采用改良Longa法建立大鼠脑缺血再灌注模型,与补阳还五汤作对照,观察荣络健脑饮对大鼠神经功能缺损程度评分的影响,及大鼠脑组织神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)的表达。结果荣络健脑饮能明显改善脑缺血再灌注大鼠神经缺损症状,促进大鼠脑组织NGF、BDNF、bFGF的表达,与补阳还五汤比较有显著差异。结论荣络健脑饮可通过促进大鼠脑组织神经营养因子的表达,减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。     

温阳复元方联合miR-137模拟剂调控线粒体铁死亡对脑缺血再灌注损伤大鼠的作用机制

目的:阐明大鼠脑缺血再灌注(I/R)后miR-137对转铁蛋白受体(TFR)和胸腺癌抵抗蛋白(BCRP)表达的调控作用及温阳复元方的干预效应。方法:75只SD大鼠分为五组，假手术组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃，余组予温阳复元方灌胃，miR-137模拟组和miR-137模拟对照组大鼠使用脑立体定位法分别将miR-137模拟剂和miR-137空载体注射到缺血侧MCA区，成模后再灌注24 h、7 d、14 d大鼠取材；评价各组大鼠的神经功能缺损评分以及TTC染色；分别通过RT-qPCR、Western blot检测各组大鼠脑组织中相关蛋白和mRNA的表达情况。结果:与假手术组相比，模型组大鼠神经功能缺陷评分较高(P<0.01);成模后大鼠脑组织出现明显的白色梗死灶。与模型组比较，温阳复元方组、miR-137模拟组和miR-137模拟对照组大鼠脑组织中miR-137以及TFR mRNA和蛋白表达量均明显降低，其中miR-137模拟组降低最为显著(P<0.01);同时，大鼠脑组织中BCRP mRNA和蛋白表达均明显升高，其中miR-137模拟组升高最为明显(P<0.01)。...     

对《伤寒论》与《温疫论》的再思考

通过分析伤寒与温疫的证治特点、《伤寒论》与《温疫论》的篇章结构、张仲景与吴又可所处的时代背景,以及现代医学对出血热与鼠疫的认识,梳理热病证治的发展历史与脉络。     

浅议影响小儿头皮静脉穿刺的因素

头皮静脉穿刺是儿科护士必备的技术，其成功率的高低直接危机患儿的痛苦乃至生命，掌握这门过硬的技术，尽量做到一针见血，是儿科护士的天职，也是衡量合格护士的标准之一。本人从事儿科护理工作已多年，现将这方面的体会做一报告。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之二)

从中华人民共和国建立到文化大革命爆发的近20年间,是新时期仲景学说研究队伍的形成———发展期。在这一时期,对《伤寒论》原著的注释和校正工作,揭开了新中国教材编写的序幕;对《伤寒论》中一些有代表性问题或关键性字词的考订,是一个特点;对《伤寒杂病论》方法论的研究,也是这一时期出现的新特点。此外,这一时期,对六经的研究逐渐深入;对方证的研究仍是热门话题;对伤寒方中用药规律的研究出现热潮;对张仲景治疗方法原理的研究开始活跃;比较性研究热度不减;专题性研究渐成趋势。     

中药蛇床子的研究进展

概述近年来有关蛇床子的化学成分、药理作用和临床应用和研究进展。     

基于效应的针刺穴位组学研究思考

根据“穴位组学概念”的提出,针对针刺机理进行深入研究。目的在于揭示针刺的生物学基础,阐明针刺的科学性,并对相关针刺处方进行优化,围绕临床针刺治疗手段中的关键技术进行标准化与规范化研究,实现针刺科学机理转化为实际应用,从而更好的服务于临床。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之一)

近百年来,公开发表的研究《伤寒论》的学术论文约3万篇,内容涉及张仲景生平事迹、《伤寒论》版本传承、《伤寒论》学术思想和临床应用研究等多个方面。民国时期是近代仲景学术研究的萌芽——发动期,这一时期的文章具有以下时代特点:①期刊和作者群有明显的地域和社团性;②体现了中西医结合的研究方向;③研究空间不断扩大;④学术争鸣空前活跃。     

腧穴热敏化艾灸疗法治疗压疮的疗效观察

目的:观察腧穴热敏化艾灸对压疮患者的治疗护理效果。方法:对Ⅰ、Ⅱ期压疮患者治疗组采用腧穴热敏化艾灸治疗,每次灸至感传现象消失,每日1次。对照组不避热敏化穴,在患者压疮部位附近穴区采用红外线照射40min后,将百多邦软膏敷于压疮疮面,以无菌纱布覆盖,每日1次。两组同时加强专科护理措施,并在疗程(包括不足7d痊愈者)结束后统计疗效。结果:治疗组和对照组有效率分别为100%、72.4%。二者有显著差异(P<0.05)。结论:腧穴热敏化艾灸疗法对压疮患者疗效明显,值得推广应用。     

辨证施护喘证

喘证的一般护理注意调整病室环境、体位与休息、严密观察生命体征、饮食护理、情志护理;根据中医辨病与辨证相结合的方法,同病异护、异病同护,实施具有针对性、个性化的护理措施,保障治疗措施的实施,促进疾病康复。     

蛇床子素抗凝血作用

目的:研究蛇床子素的抗凝血作用。方法:通过测定小鼠凝血时间(CT)、大鼠的凝血酶原时间(PT)和优球蛋白溶解时间(ELT),观测蛇床子素的抗凝作用。结果:蛇床子素能显著处长CT、PT,缩短ELT。结论:蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

七情学说实验研究相关问题探讨

对近年来有关中医七情学说的实验研究现状进行了简要评述。指出实验研究对七情学说的创新和发展具有重要的意义，并着重对今后开展七情学说实验研究所要解决的关键问题以及七情学说实验研究所涉及的动物模型等问题进行了初步探讨。