夜香树花甾体皂苷抑制K562细胞增殖及对PI3K／AKt信号通路的调控

目的探讨夜香树花甾体皂苷（SSFCN）抑制K562细胞增殖及作用机制。方法夜香树花用有机溶剂提取、分离并鉴定SSFCN,体外培养K562细胞,采用MTT比色法测定抑制率;流式细胞仪分析细胞周期、琼脂糖凝胶电泳检测DNA图谱的变化,Western blot法检测用SSFCN处理的K562细胞AKt磷酸化水平的变化。结果SSFCN能显著抑制人白血病细胞K562的生长,作用后细胞生长有明显凋亡特征性改变,凋亡率呈时间和剂量依赖性。60mg／L的SSF—CN作用K562细胞24h后,流式细胞仪检测出现亚G,峰及DNA电泳呈梯形条带。Western blot结果表明,SSFCN处理K562细胞72h后,K562细胞P—AKt磷酸化水平明显下调。结论SSFCN具有抑制K562细胞增殖和促进凋亡的作用,SSFCN通过抑制K562细胞PI3K／AKt信号通路,从而抑制K562细胞增殖。     

硫酸右旋糖酐对卵巢癌细胞A2780增殖和迁移及侵袭机制研究

目的 观察硫酸右旋糖酐(DS)对人卵巢癌细胞A2780生物学行为的影响及可能的分子机制.方法 体外培养人浆液性卵巢癌细胞A2780,将其分为空白对照组、不同浓度(质量分数分别为0.1％、0.3％、0.6％和1％)DS处理组及1％DS+AKT激动剂组.通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测A27...     

胃癌细胞SGC7901凋亡的PI3K/Akt通路介导作用及雷帕霉素的作用机制分析

目的：分析雷帕霉素对胃癌细胞中PI3K/Akt蛋白表达的影响作用,以为临床治疗提供参考。方法将生长状态良好的胃癌细胞SGC7901随机分为4组：对照组,雷帕霉素低剂量组、中剂量、高剂量组（n=8）。采用DAPI染色法分析各组细胞的凋亡情况;采用免疫印迹法和Real-time PCR检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达。结果雷帕霉素低、中、高剂量组均可抑制细胞的增殖,差异具有统计学意义（P﹤0.05）;雷帕霉素下调了胃癌细胞中PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达,且与对照组比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论雷帕霉素主要通过抑制PI3K、AKT及mTOR的过表达发挥肿瘤抑制作用。     

吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法选取对数生长期的肺癌NCI-H292细胞随机分为吉西他滨组、阿霉素组和对照组,分别采用7μmol/L的吉西他滨、阿霉素与生理盐水处理,采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭,Annexin V-PI双标记法检测细胞凋亡,Western blot实验检测PI3K和AKT蛋白表达。结果细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞增殖指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞迁移与侵袭指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞凋亡指数均高于对照组,吉西他滨组高于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组PI3K和AKT蛋白表达水平均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论吉西他滨可促进肺癌...     

同步新辅助放化疗联合全直肠系膜切除术治疗中低位局部进展期直肠癌的临床研究

目的:探讨同步新辅助放化疗联合全直肠系膜切除术(total mesorectal excision,TME)治疗中低位局部进展期直肠癌的疗效及安全性。方法:2009年9月-2011年2月30例中低位局部进展期直肠癌患者[Ⅱ期(T3-4N0M0)14例,Ⅲ期(T1-4N1-2M0)16例]接受了术前同步新辅助放化疗(术前放疗总剂量为45～50Gy,1.8Gy/次;化疗方案为FOLFOX4,化疗2个周期)。同步新辅助放化疗结束后4～6周行手术治疗,遵循TME原则。结果:全部患者均完成同步新辅助放化疗,CR5例、PR18例、SD7例,有23例(76.7%)患者的临床TNM分期下降。同步新辅助放化疗结束后4～6周,除1例CR患者拒绝手术外,29例患者均行手术治疗,其中23例行低位或超低位前切除术(Dixon术),6例行腹会阴联合切除术(Miles术),保肛率为80.0%(24/30)。无一例发生围手术期死亡,术后并发症的总发生率为20.7%(6/29)。结论:同步新辅助放化疗联合TME治疗中低位局部进展期直肠癌安全而有效,可以降低肿瘤分期、提高肿瘤切除率和保肛率,改善患者的生活质量。     

miR-7抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖及迁移的研究

目的 探讨上调microRNA-7（miR-7）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖与迁移的作用及可能机制。方法 通过脂质体转染miR-7模拟物（miR-7 mimics）及随机序列（miR-Scramble）,将喉鳞癌Hep-2细胞分成miR-7组、Scramble组和空白对照（Mock）组,实时定量PCR（qPCR）检测转染48 h后各组细胞中miR-7表达,CCK-8法检测转染48 h后的各组细胞的增殖抑制情况,Transwell试验观察转染24 h后细胞迁移能力,qPCR及Western blotting检测PI3K（p110）、AKT及pAKT 的mRNA和蛋白表达情况。结果 miR-7组Hep-2细胞转染miR-7 mimics后miR-7表达水平明显上调,与其余两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;与Scramble组和Mock组相比, miR-7组Hep-2细胞的增殖抑制率升高,迁移能力降低,且PI3K、AKT及pAKT 的mRNA和蛋白水平均降低（P＜0.05）。结论 上调喉鳞癌Hep-2细胞中miR-7表达能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移,其机制可能与抑制PI3K／Akt信号通路有关。     

苦瓜蛋白诱导A549肺癌细胞凋亡及对相关蛋白的影响

[目的]观察苦瓜蛋白对A549非小细胞肺癌细胞凋亡的影响,探讨苦瓜蛋白对PI3K/AKT细胞信号传导通路中相关蛋白分子的作用影响。[方法]以梯度浓度苦瓜蛋白处理A549细胞48h,流式细胞术(TUNEL方法)检测A549细胞凋亡;10μg/ml苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间(0h、6h、12h、24h、48h、72h)后,提取细胞总蛋白,Westernblot检测AKT信号通路中AKT及p-AKT等信号分子表达的变化。[结果]苦瓜蛋白可以明显诱导A549细胞凋亡,以10μg/ml苦瓜蛋白处理组A549细胞凋亡率最高(50.15%)。苦瓜蛋白处理A549细胞12h后,p-AKT及AKT表达明显下调,呈现时间—效应依赖关系。[结论]苦瓜蛋白可以诱导A549细胞发生显著凋亡,其机制可能是部分通过抑制AKT蛋白的表达及其磷酸化,抑制AKT信号传导通路,导致肿瘤细胞凋亡。     

PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的 探讨采用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制药——LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blot检测细胞中PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2、BAX蛋白表达情况.结果 随着小檗碱作用浓度的增加,DU145细胞的增殖率逐渐降低;不同浓度小檗碱与LY294002联合处理对DU145细胞增殖的抑制作用均较相同浓度小檗碱单独处理增强(P﹤0.05).与空白对照组相比,小檗碱组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).与小檗碱组和空白对照组相比,小檗碱+LY294002组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).结论 小檗碱能够抑制DU145细胞增殖,并促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,采用LY294002阻断PI3K/AKT信号通路能够明显增强小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.     

局部进展期中低位直肠癌新辅助放化疗临床疗效及预后影响因素分析

目的 探讨新辅助放化疗对局部进展期中低位直肠癌患者的临床疗效,研究相关临床因素对远期生存的影响。方法 收集我院2010-2014年收治的101例局部进展期中低位直肠癌患者的临床资料,全部患者完成术前调强放疗DT45~50.4 Gy,同步给予奥沙利铂+卡培他滨/氟尿嘧啶或单药卡培他滨化疗,于新辅助治疗后4-13周行全直肠系膜切除术(TME)。评估近期疗效及远期预后,Kaplan-Meier法计算总生存(OS)、无瘤生存(DFS)率,Cox回归模型进行预后因素分析。结果 全组患者总体保肛率53.5%,术后T、N分期及TNM总分期下降率分别为73.26%、67.32%、72.3%,病理完全缓解率16.8%;中位随访41个月,3年OS、DFS、局部复发、远处转移率分别为82.2%、80.7%、7.2%、12.1%。单因素分析显示ypT、ypN分期是影响患者3年OS、DFS、远处转移的相关因素(P均<0.05);多因素分析显示ypT分期是影响患者3年OS因素,ypT、ypN分期是影响患者3年DFS因素(P均<0.05)。结论 新辅助放化疗联合TME治疗局部进展期中低位直肠癌,使部分患者达到术前降期,提高保肛率,且远期预后表现良好,ypT、ypN分期与患者预后相关。     

穿心莲内酯通过抑制PI3K/AKT通路对人肝癌HEPG2细胞凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨穿心莲内酯通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（AKT）通路对人肝癌细胞凋亡的影响。［方法］ 将人肝癌细胞株HEPG2分为对照组、低浓度穿心莲内酯组、中浓度穿心莲内酯组、高浓度穿心莲内酯组,低、中、高浓度穿心莲内酯组分别加入培养基稀释的终浓度为10、30、50 μmol/L的穿心莲内酯,对照组加入等剂量的培养基。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组HEPG2细胞增殖率,流式细胞术检测各组HEPG2细胞凋亡率,Western blot法检测各组HEPG2细胞PI3K、p-AKT蛋白表达水平。［结果］低浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较对照组明显下降（Q=2.942、9.836、6.348,P＜0.05）;中浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较低浓度穿心莲内酯组明显下降（Q=2.942、13.832、10.691,P＜0.05）;高浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较中浓度穿心莲内酯组明显下降（Q=13.411、19.058、16.371,P＜0.05）。低浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较对照组明显升高（Q=83.662,P<0.05）;中浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较低浓度穿心莲内酯组明显升高（Q=147.267,P<0.05）;高浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较中浓度穿心莲内酯组明显升高（Q=241.925,P<0.05）。［结论］ 穿心莲内酯可能通过抑制PI3K/AKT通路抑制人肝癌细胞增殖,促进人肝癌细胞凋亡,可为临床治疗肝癌提供新方向。     

PFKFB3通过调控PI3K/AKT信号通路促进骨肉瘤细胞的增殖及转移

目的:探讨6-磷酸果糖2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测骨肉瘤组织及其相...     

PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响研究

目的 探讨PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 选用PI3K/MTOR双重阻断剂NVP-BEZ235体外处理肾癌A498细胞,浓度分别为0、100、250、500 nmol/L.48 h后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肾癌A498细胞中AKT和MTOR蛋白磷酸化情况;MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blot法检测细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达变化.结果 肾癌A498细胞中p-AKT、MTOR、p-MTOR、E-Cadherin、PTEN的表达及细胞增殖率、迁移率、穿膜细胞数量各自在不同NVP-BEZ235浓度下比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01).与0 nmol/L组比较,100、250、500 nmol/L的NVP-BEZ235处理肾癌A498细胞后,细胞中磷酸化蛋白p-AKT和p-MTOR的表达均下调,细胞增殖率下降,细胞迁移率下降,穿膜细胞数量减少,细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 通过阻断PI3K/AKT/MTOR信号通路可以抑制肾癌A498细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与上调细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达有关.     

局部进展期直肠癌术前新辅助放化疗中VMAT的可行性研究

目的 探讨VMAT在局部进展期直肠癌(LARC)新辅助放化疗(NCR)中的可行性。方法 回顾分析2011—2013年本院行术前NCRT+手术±术后化疗的162例LARC患者,男113例、女49例,年龄23~84岁(中位数56岁)。临床分期为Ⅱ_a、Ⅱ_b、Ⅱ_c期分别为22、11、5例,Ⅲ_a、Ⅲ_b、Ⅲ_c期分别为1、58、65例。放疗均使用了单弧VMAT,PTV₁ 50 Gy分25次,PTV₂ 46 Gy分25次。主要化疗方案为Xelox方案(卡培他滨1000 mg/m²+奥沙利铂100 mg/m²或130 mg/m²),均接受诱导及同期化疗(中位数3程)。结果 所有患者均完成放疗计划,仅2例因3级腹泻中断放疗。放化疗期间全组累计3级血液学及非血液学不良反应发生率分别为9.3%与16.0%。患者距放疗结束后34~86 d (中位数53.5 d)手术,术后pCR率30.2%,R₀切除率100%,低位直肠癌保肛率45.9%。术后不良反应累计发生率16.7%,术后30 d内无死亡病例。T、N期及临床分期降期率分别为85.2%、87.1%及88.9%。结论 VMAT用于LARC术前放化疗安全可行,但对长期生存影响尚需进一步观察。     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。     

动物水平的绿原酸通过Notch1信号通路调控非小细胞肺癌凋亡及机制研究

背景与目的 绿原酸类物质可通过调节细胞周期、诱导凋亡、抑制细胞生长等途径产生抗癌作用,Notch信号通路与人类许多肿瘤都存在密切的关系,本研究旨在探讨绿原酸通过Notch1信号通路控制非小细胞肺癌细胞凋亡的作用机制,为临床应用以及Notch1靶向药物的研究提供依据.方法 MTT法检测不同浓度的绿原酸对非小细胞肺癌细胞系A549细胞形态和细胞增殖的影响;流式细胞仪检测绿原酸对A549细胞的凋亡和细胞周期的影响;建立A549细胞的裸鼠荷瘤模型;测量肿瘤大小和重量;实时荧光定量PCR法检测Notch信号通路相关因子的mRNA表达水平;免疫印迹法检测Notch信号通路相关因子的蛋白表达水平.结果 绿原酸抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,增加细胞G2期/M期细胞百分比增加(P<0.05),并且呈现剂量依赖趋势.在A549细胞的裸鼠荷瘤模型中,实验组肿瘤大小和体积明显小于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01).试验组Notch1、VEGF、Delta4、HES1、HEY1 mRNA表达量较对照组明显减少(P<0.05).实验组Notch1蛋白明显减少,PTEN、p-PTEN、p-AKT明显增加(P<0.05).结论 在动物水平,绿原酸可能通过Notch1信号通路调控非小细胞肺癌的凋亡,可能是通过减少VEGF的表达,下调Delta 4水平,从而抑制Notch1信号通路的活化.Notch1信号通路可能通过PTEN与PI3K/AKT通路存在交叉调控作用.     

淫羊藿苷促进白血病K562细胞凋亡的研究

目的：探讨淫羊藿苷对人慢性粒细胞白血病K562细胞的作用及其机制。方法将对数生长期K562细胞分成对照组和淫羊藿苷处理组。对照组细胞常规培养,淫羊藿苷处理组加入8μmol／L淫羊藿苷培养。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测K562细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞p85、Akt mRNA的表达,Western blot检测p85、Akt、p-p85、p-Akt、cleavage-caspase-3、caspase-3蛋白表达的变化。结果与对照组比较,淫羊藿苷处理组K562细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,K562细胞凋亡率和p85、Akt、cleavage-caspase-3蛋白表达均明显升高（均P＜0.05）, p85 mRNA、Akt mRNA、caspase-3蛋白表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论淫羊藿苷能抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号转导通路实现的。     

三阴性乳腺癌中PI3K/AKT/mTOR信号通路的突变及相关靶向治疗的研究进展

三阴性乳腺癌（TNBC）是最具侵袭性的乳腺癌亚型,PI3K/AKT/mTOR信号通路失调是TNBC最常见的致癌突变之一,靶向PI3K/AKT/mTOR信号通路是治疗TNBC的重要方向。本文着重介绍了PI3K/AKT/mTOR信号通路的机制,TNBC中出现的PIK3CA、AKT1或mTOR的突变,以及失活张力PTEN、PIK3R1或INPP4B的突变或丢失,也展现了布帕尼西、帕他色替、依维莫司等PI3K/AKT/mTOR信号通路靶向药物在治疗TNBC中单独、联合应用和与化疗或免疫疗法联用的疗效,同时论述了目前正在进行的各类临床试验及其未来的前景。     

新辅助同步放化疗联合全系膜切除对局部进展期中低位直肠癌的治疗价值

目的探讨新辅助同步放化疗联合直肠全系膜切除术(total mesorectal excision,TME)用于局部进展期中低位直肠癌治疗的可行性与临床价值。方法111例局部进展期(T3～4 N0～2 M0)中低位直肠癌术前接受同步放化疗,放疗剂量50 Gy,化疗包括奥沙利铂+卡培他滨的联合化疗方案及不含铂类药物的单药化疗方案。共105例患者同步放化疗结束后2～10周内完成了肿瘤根治性(R0)手术,可进行疗效的病理学评价。结果105例患者获得根治性切除,切缘均阴性,42例(37.8%,42/111)患者成功实施保肛手术;18例临床-影像分期为T4期患者中,15例(83.3%)新辅助放化疗后获得根治性切除(R0)。所有患者手术及术后恢复顺利,无严重手术并发症;术后病理示肿瘤完全消退15例(14.3%),重度消退26例(24.8%),中度消退40例(38.1%),轻度及无消退24 例(22.8%)。结论新辅助同步放化疗联合TME手术安全可行,可提高局部进展期中低位直肠癌的根治性切除率与保肛率,不增加手术并发症,是局部进展期中低位直肠癌的优选治疗模式。