人组织型纤溶蛋白酶原激活剂基因的克隆与鉴定

目的获得编码人组织型纤溶蛋白酶原激活剂(humantissueplasminogenactivator,ht-PA)的基因。方法从Bowesmelanoma细胞株中提取总RNA,然后通过,RT-TouchdownPCR(RT-TDPCR)法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pSP72连接,酶切鉴定并测序。结果酶切图谱与预期的一致,测序结果与Genebank上公布的一致。结论ht-PA克隆成功,为对该基因进一步研究和人工修饰奠定了基础。     

组织型纤溶酶原激活物cDNA的克隆

组织型纤溶酶原激活物（t1SSUetypepl。Smlllogen。CtlV“－tor，tPA）是一种丝氨酸蛋白水解酶，在纤维蛋白存在的条件下，可使血浆纤溶酶原转变为纤溶酶，如果没有纤维蛋白的存在，它使纤溶酶原转变为纤溶酶的能力有限．当静脉给予药理剂量的tPA时，它与血栓处的纤维蛋白结合，同时把捕捉的纤溶酶原转变为纤溶酶，使纤维蛋白的溶解在血栓处发生，而并非全身性，这样可以减少全身性出血副作用，这也更是tPA优于尿激酶和链激酶之处．tPAlha床上主要用于治疗血栓性疾病，如急性心肌梗塞、肺栓塞、视网膜动脉栓塞等．而天然来源的tPA非…     

组织型纤溶酶原激活剂的结构与功能

组织型纤溶酶原激活剂是重要的溶血栓药物,还能降低心脏病人的死亡率,因而日益受到人们的重视。近年来,研究者们利用重组DNA技术,构建t-PA突变体,探索它的结构与功能的关系,取得了新的进展。 t-PA是分子量为68000的单链多肽,由527个氨基酸组成。在纤溶酶及胰蛋白酶作用     

猪心组织型纤溶酶原激活剂的提纯和鉴定

取猪心组织用丙酮去脂,pH4.2、0.45mol/L醋酸钾缓冲液抽提组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)。抽提液经硫酸铵分段盐析,然后用纤维蛋白-Sepharose柱吸附t-PA,2mol/L硫氰酸钾洗脱的t-PA溶液经Sephadex G-150凝胶过滤,得到纯的t-PA。其比活性为39038.5 IU/mg,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量为67000。提纯过程中应用了蛋白酶抑制剂(aprotinin)以及6-氨基己酸,以抑制单链t-PA转变为双链t-PA。t-PA活性测定以尿激酶(UK)为参考标准。     

组织型纤溶酶原激活剂研究新进展

组织型纤溶酶原激活剂,又称组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,tPA)或纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator),是体内纤溶系统的生理性激动剂,在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用。由于血栓性疾病的逐年上升,对溶栓药物的需求量逐     

RT-PCR检测胃癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂mRNA水平表达

目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)与胃癌的关系及其在胃癌浸润转移中的作用。方法 用荧光定量RT—PCR方法，分别检测45例胃癌及其癌旁组织中(uPAmMA)水平的表达，并结合患者的临床生物学特征进行分析。结果 45例胃癌组织中，38例为阳性表达，45例癌旁组织中12例表达阳性。在伴有淋巴结转移的胃癌中，uPAmMA阳性例数明显高于无淋巴结转移者，两组例数分别为27和11例。结论 尿激酶型纤溶酶原激活剂uPAmRNA水平在胃癌组织中明显升高，且与胃癌浸润、转移密切相关。     

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性心肌梗塞

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性心肌梗塞浙江医院（杭州：３１００１３）祝世法戴海文严静金宏义重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ－ＰＡ）是纤维蛋白特异性溶栓剂，该剂可降低急性心肌梗塞（ＡＭＩ）的病死率（１）。发病时间６小时内者，静脉溶栓血管再通率为...     

肾母细胞瘤组织中组织蛋白酶D、尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体的表达

目的:探讨肾母细胞瘤组织中Cath D、uPA、uPAR的表达。方法:用免疫组化SABC法检测30例肾母细胞瘤及15例非肿瘤肾组织中Cath D、uPA、uPAR的表达。结果:肾母细胞瘤组织中Cath D、uPA、uPAR的阳性表达率分别为50％,53.3％和56.7％。而在非肿瘤肾组织中不表达,差异有统计学意义(P<0.05),3者的阳性表达率与组织学类型密切相关,FH型均低于UH型(P<0.05)..结论:Cath D、uPA、uPAR在肿瘤的浸润和转移中起重要作用,可作为预后的指标。     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死

目的 观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)治疗急性心肌梗死(AMI)的临床疗效.方法 对所选病例在常规治疗的基础上早期使用rt-PA溶栓治疗.结果 rt-PA治疗急性心肌梗死疗效显著.结论 rt-PA治疗急性心肌梗死可降低患者的年并发症,减少病死率,临床上值得推广.     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性肺栓塞9例

采用重组组织型纤溶酶原激活剂(RT-PA)2h微泵输入治疗肺栓塞9例，总有效率为89％。无严重并发症。提示RT-PA溶栓疗法治疗急性肺栓塞疗效显著，副作用少。可明显降低其病死率及致残率。     

脑栓塞患者的组织纤维蛋白酶原激活因子(t-PA)基因多态性分析

目的研究t-PA基因h(8th)内含子的Alu重复序列插入／缺失(I／D)多态性在脑栓塞患者中的分布。方法提取16例患者口腔黏膜脱落细胞DNA,应用PCR方法扩增t-PA基因h(8th)内含子的ALu重复序列，记录A1u插入／缺失(I／D)结果。结果16例患者中插入纯和6例，缺失纯和6例，插入／缺失4例；插入纯和(I／I)率是缺失纯和(D／D)的1．0倍；(I／I)和(I／D)的几率之和约是(D／D)的1．67倍。结论脑栓塞患者t-PA基因h(8th)内含子的Alu重复序列插入／缺失(I／D)与大样本山东人t-PA-AIu插入／缺失率不同。     

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的 构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法 RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果 显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。     

组织型纤溶酶原激活物cDNA克隆及其真核表达载体的构建

目的：克隆组织型纤溶酶原激活物（t－ＰＡ）cＤＮＡ并构建含t－ＰＡ基因的腺病毒表达 载休划硫氰酸胍；－酚－氢仿一步法从Ｂｏｗｅｓ黑色素瘤细胞中提取总ＲＮＡ，并经反转录ＰＣＲ获得t－ＰＡcＤＮＡ。将质粒pＵＣ１９双酶切并纯化回收大片段，与纯化后的ＰＣＲ产物连接构成pＵＣ１９t－ＰＡ，转化大肠肝菌ＪＭ１０９，挑选白色克隆作酶切鉴定、测序，pＵＣ１９t－ＰＡ及腺病毒载体pＡdＭＶ（６．６７ｋｂ）分别双酶切前者回收１     

Expression of human tissue-type plasminogen activator in cow mammary gland]

OBJECTIVE: To construct an expression vector for highly efficient expression of tissue-type plasminogen activator (t-PA) confined in the mammary gland of cow to develop a cow mammary gland bioreactor. METHODS: RT-Touch down-PCR was employed to amplify human tissue-type plasminogen activator (t-PA) cDNA, which was digested with the restriction enzymes and subsequently cloned into the vector pSP72 for constructing specific fusion gene only expressed in the mammary gland. The fusion gene was then transferred into the mouse zygote and the mammary gland tissue of mice and cows. RESULTS: t-PA was detected in the milks of mice and cows after the transgenic manipulation with microinjection and mammary gland injection of the fusion gene. CONCLUSIONS: The vector we constructed can effectively induce t-PA expression in the mammary gland, which is not influenced by different transgenic methods. The expression level of t-PA, however, is significantly higher in the milk of cows than in the milk of mice, suggesting the species-specific difference in milk protein regulating system possibly is due to different factors and regulatory systems.     

Experimental Study of Tissue-type Plasminogen Activator Gene to Prevent Vein Grafts Stenosis

Autologousveingraftsremainedtheimportantsurgicalalternativeforcoronaryarterialbypassgrafts(CABG),butthevenousgraftsoftenfailedbecauseofthrombosis,intimahyperplasiaandscleratheroma.Recently,theroleoftissue typeplasminogenactivator(t PA)topreventthrombo sisandstenosisofveingraftswaspaiddoublyat tention,buttheadministrationofitislimitedbe causeofitsdosage,introduction.Thisexperimentaimedtoinvestigatetheeffectoflocallyappliedre combinantt PAgeneoninhibitingthrombosisandneotimahyperplasiainveing…     

转染组织型纤溶酶原激活物基因质粒预防狗冠脉搭桥术吻合口再狭窄

目的探讨应用组织型纤溶酶原激活物（tPA）基因质粒预防冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。方法建立狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄模型,构建tPA基因质粒并制备tPA基因缝线,在冠状动脉搭桥术同时以超声波辅助转染心肌细胞和吻合口血管平滑肌细胞,采用常规病理、免疫组织化学、原位杂交以及形态测量方法观察对吻合口局部血栓形成、血管内膜细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和PDGF-BmRNA表达以及内膜增生的影响。结果成功转染tPA基因并显著抑制血管内膜细胞表达PCNA和PDGF-BmRNA,抑制率分别为75.16%和87.01%;显著减少局部血管内膜厚度、内膜面积和吻合口血栓形成,使吻合口狭窄率显著减少70.30%。结论转染tPA表达质粒在可抑制猪实验性冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄,这为冠状动脉搭桥术后再狭窄的防治提供实验基础。     

Effects of simvastatin on cigarette smoke extract induced tissue-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 expression in human umbilical vein endothelial cells

Background Cigarette smoking has an influence on both arterial-type and venous-type thrombosis. However, little is known about the direct effect of cigarette smoke extract （CSE） on fibrinolytic activity of human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）. Most recently, simvastatin has been marked in its effect on endothelial cells protection and anticoagulation. In this study, the effect of CSE on the expression of tissue-type plasminogen activator （t-PA） and plasminogen activator inhibitor-l（PAl-1） in HUVECs was addressed. The role of simvastatin in CSE-induced fibrinolytic activity changes was investigated as well. Methods The fourth to fifth generation of HUVECs were incubated respectively with 0, 5%, 10% and 20% CSE for 6 hours or exposed to 5% CSE for 0, 4, 6, 8, 12, 24 hours to determine the expression changes of t-PA and PAl-1 protein. Meanwhile, cells were also accordingly exposed either to 5% CSE alone or simvastatin pre-treated and 5% CSE for 24 hours to assess the role of simvastatin in CSE-induced t-PA and PAl-1 protein and mRNA expression in HUVECs. RT-PCR and ELISA techniques were used for detecting the t-PA or PAl-1 mRNA and protein. Results After 6-hour exposure to CSE, the expression levels of t-PA protein in 10% and 20% CSE-treated groups reduced significantly （（0.0365±0.0083） ng/ml, （0.0255±0.0087） ng/ml） when compared with that of control group （（0.0660±0.0120） ng/ml） （P 〈0.05）. In contrast, the levels of PAl-1 protein in 5%, 10% and 20% CSE-treated groups increased remarkably （（13.3225±0.5680） ng/ml, （14.2675±1.5380） ng/ml, （14.4292±1.6230） ng/ml） when compared with that of control group （（8.5193_±0.7537）ng/ml） （P〈0.05）. After stimulation with 5% CSE for 0, 4, 6, 8, 12, 24 hours, the levels of PAl-1 protein increased over time and reached the peak at 24 hours （（14.6400±1.0651） ng/ml）, which was significantly higher than that of control group （（12.0656±0.6148） ng/ml） （P 〈0.05）. Additionally, CSE could up-regulate PAl-1 expression at both the mRNA and the protein levels. The levels of PAl-1 mRNA and protein increased significantly in 5% CSE-treated group （（8.8030±0.4745） ng/ml, （1.8155±0.0412） ng/ml） compared with those of control groups （（5.0588±0.2315） ng/ml, （1.3030±0.0647） ng/ml） （P 〈0.01）, and decreased after 2-hour simvastatin pre-treatment （（5.4875±0.3166） ng/ml, （1.3975-±0.0297） ng/ml） （P 〈0.01）. No significant difference was found at the levels of t-PA protein and mRNA （P 〉0.05）. Conclusions CSE inhibits the fibrinolytic activity of HUVECs in vitro. Simvastatin plays a protective role in CSE-induced fibrinolytic malfunction.     

组织型纤溶酶原激活剂在人胚胎表皮角质形成细胞分化中的作用

目的 探讨组织型纤溶酶原激活剂（tPA)参与人表皮角质形成细胞（KC）分化调控的作用。方法 采用免疫细胞化学（ICC）及原位杂交（ISH）技术定性、定量检测早、中、晚期人胚胎表皮KC中tPA蛋白及mRNA的表达。结果 （1）tPA在人胚胎期表皮KC中表达量明显高于出生后期。胚胎期的表达高峰在胚胎中期。胚胎晚期其蛋白水平开始降低。而tPAmRNA表达则维持在相对较高水平。（2）tPA在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层KC内。（3）tPA聚集于KC胞膜下方。结论 tPA参与表皮KC分化的调控。