基于膜片钳技术的丹红注射液对人诱导多能干细胞衍生心肌细胞电生理的影响研究

目的 通过全细胞膜片钳实验,从心肌电生理层面探索丹红注射液(DHI)治疗乌头碱诱导心律失常的可能机制。方法 基于人诱导多能干细胞衍生心肌细胞(hiPSC-CMs)膜片钳技术,即时给药并观察乌头碱不同浓度(3、9、27 μmol·L^-1)对钠通道、hERG钾通道的抑制效果,进行造模条件的筛选;设置对照组、模型组(乌头碱1 μmol·L^-1长时间造模)、DHI (3、9、27 μL·mL^-1)组,乌头碱与DHI同时加药,记录动作电位幅度(APA)、放电频率、动作电位幅度下降50 %时的时程(APD₅₀)和动作电位幅度下降90 %时的时程(APD₉₀),并以对照组为标准,计算相对值;设置对照组、模型组、DHI (3 μL·mL^-1)组,乌头碱与DHI同时加药,观察3~5 min,记录钠离子、hERG钾离子、钙离子电流密度。结果 给予即时药物处理,3、9、27 μmol·L^-1的乌头碱对钠电流的抑制率分别为17.94 %、31.07 %、60.67 %,对hERG通道的抑制率分别为5.02 %、10.59 %、28.59 %;在短期内给乌头碱对hERG通道的抑制效果较为有限,而实际实验中,长时间的高浓度乌头碱孵育使钠电流被完全抑制,导致离子通道功能受损,因此选择乌头碱1 μmol·L^-1长时间给药制备模型。与对照组比较,模型组hiPSC-CMs相对APA、相对APD₅₀和相对APD₉₀显著下降(P<0.01、0.001),相对放电频率显著升高(P<0.001);钠电流在一定时间内减小,抑制率为30.18 %;hERG钾电流明显减小,抑制率为72.33 %;钙电流明显增大,电流增大191.35 %。与模型组比较,DHI 3、9、27 μL·mL^-1组相对放电频率显著降低(P<0.05、0.001)、相对APD₉₀显著升高(P<0.05、0.01),3 μL·mL^-1组相对APD₅₀显著升高(P<0.001);DHI组钠电流、hERG钾电流的减小及钙电流的增大均有一定缓解。结论 DHI可能可以通过影响钠、钾、钙通道来缓解乌头碱导致的心律失常现象。     

用人类诱导多能干细胞来源的心肌细胞快速检测中药毒性的方法

目的建立一种利用人类诱导多能干细胞来源的心肌细胞(hi PSC-CM)快速并且有效筛选中药复方毒性的方法。方法用hi PSC-CM检测了29种市场上常用的中药复方,通过细胞的形态和心肌跳动速度的变化,检测中药复方的毒性。结果实验发现包括云南白药胶囊等在内的19种中药复方对hi PSC-CM的跳动有明显影响,而包括痰咳净片等在内的10种中药复方对hi PSC-CM无明显影响。结论药物效果与已报道的药物不良反应一致,利用hi PSC-CM是一种快速且有效筛选中药复方毒性的方法。     

胚胎干细胞/诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的研究进展

胚胎干细胞(ESCs)/诱导多能干细胞(iPSCs)因其有潜在成瘤性,制约了它的临床应用.间充质干细胞(MSCs)具有多向分化能力、免疫调节功能以及低免疫原性,且仍未发现它有成瘤性,因而成为干细胞治疗颇具临床应用价值的种子细胞.近年来研究发现应用合适的诱导方案可以从ESCs/iPSCs获取MSCs,结合ESCs/iPSCs的无限自我更新能力,ESCs/iPSCs向MSCs转化将可能是获取MSCs的一种数量充足且稳定的新来源.本文将对目前ESCs/iPSCs向MSCs转化的方法 、机制以及新衍生的MSCs的免疫调节功能、干性特征做一综述.     

人诱导多能干细胞在药物早期毒性评价中的应用

人诱导多能干细胞与人胚胎干细胞相似,在体外可分化为各种类型的体细胞,其来源充足,可针对个人或某种疾病取材,为药物早期毒性评价体外替代方法提供了一个新的可选细胞模型。目前,利用人诱导多能干细胞获得的心肌细胞用于药物引起的心率改变、QT间期延长和心肌损伤等心脏毒性评价;利用其获得的神经细胞,结合高通量、高内涵技术及电生理学技术,可用于药物引起的神经突出生长异常、电生理改变及神经发育毒性评价;利用人诱导多能干细胞可获得个体特异性的大量肝细胞,具有较高的细胞色素P450酶活性,能够比较真实的反映人肝细胞的代谢特征,用于评价药物肝细胞毒性;人诱导多能干细胞具有多能性,在体外可分化为外、中和内胚层,具有用于发育毒性评价的可能性,对三胚层相应标志分子的检测有助于发育毒性评价终点的确立;人诱导多能干细胞还可用作3D培养的种子细胞,构建三维立体组织和器官模型,用于药物早期毒性评价,进一步缩小细胞水平与体内水平评价结果的差异。     

阿尔茨海默病患者来源的诱导多能干细胞向神经干细胞及神经元的诱导分化

目的将阿尔茨海默病(AD)患者、年轻人和认知正常老年人的血细胞重编程为诱导多能干细胞(i PSC),进一步分化为神经干细胞(NSC)和神经元,观察不同来源i PSC向NSC和神经元分化时细胞表型和功能的变化。方法取年轻人、认知正常老年人和AD患者来源的外周单核巨噬细胞,引入转录因子Oct3/4,Sox2,c-Myc和Klf4重编程为i PSC,进一步诱导为NSC和神经元;应用Incu Cyte ZOOM动态细胞观察系统记录分化过程中细胞生长曲线及神经突生长情况;Ed U增殖试剂盒检测细胞增殖能力;采用NSC标记物Nestin,Sox1,Sox2和Ki67对诱导得到的NSC鉴定,双肾上腺皮质激素(DCX)对诱导得到的新生神经元鉴定;采用全细胞膜片钳记录分化神经元钠电流、钾电流以及诱发动作电位。结果经过7 d诱导,i PSC可分化为NSC,年轻人和认知正常老年人以及AD患者NSC均表达NSCs标记物Nestin,Sox1,Sox2和Ki67。NSC传代过程中,AD患者来源NSC生长曲线低于年轻人和认知正常老年人;Ed U结果显示AD患者来源NSCs中Ed U阳性细胞比例显著少于年轻人和认知正常老年人;AD患者来源NSC传代过程中DCX阳性细胞比例明显高于年轻人和认知正常老年人,且可记录到K+电流、Na+电流以及诱发动作电位;进一步将NSC向神经元定向分化结果显示,AD患者DCX阳性新生神经元比例以及神经突的生长速度明显大于年轻人和认知正常老年人;膜片钳结果显示AD患者来源神经元K+电流和Na+电流明显大于年轻人和认知正常老年人,动作电位频率和幅度也大于年轻人和认知正常老年人。结论年轻人、认知正常老年人和AD患者的i PSC能够诱导分化为NSC和神经元;AD患者来源NSC增殖能力显著低于年轻人和认知正常老年人;且AD患者来源NSC更容易向神经元分化,分化的神经元表现出更强的兴奋性。     

参麦注射液对感染柯萨奇B3病毒心肌细胞的影响

目的在细胞水平探讨参麦注射液（SMI）对实验性病毒性心肌炎的治疗作用。方法采用原代培养的SD大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒（CVB3）造成实验性病毒性心肌炎细胞模型;设立正常对照组、模型组、SMI高剂量（10g／L）组、SMI中剂量（5g／L）组及SMI低剂量（2．5g／L）组,观察心肌细胞感染CVB,后第3天和第5天的搏动频率、细胞病变、细胞超微结构、上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性和CVB,滴度。结果感染CVB,后心肌细胞的搏动频率明显减慢;第5天模型组有半数细胞搏动停止,细胞病变明显,线粒体肿胀且形态不完整,内质网扩张,部分肌原纤维损坏,上清液中LDH的活性显著升高;SMI各剂量组心肌细胞均维持搏动,且高剂量组细胞病变程度、LDH活性和CVB,滴度均明显低于模型组,除部分肌原纤维损坏外,线粒体形态完整,内质网未见扩张。结论SMI对感染CVB,的培养心肌细胞搏动功能具有保护作用,并能降低心肌细胞上清液中CVB3滴度和减轻CVB,对心肌细胞的损伤。     

L-型钙通道阻滞剂对心肌细胞钙稳态的影响

目的:观察L-型钙通道阻滞对心肌细胞的影响.方法:取SD大鼠颈部脱臼处死后浸人75%乙醇数秒,迅速开胸摘取心脏,置人盛有37℃预热的台氏液100ml的培养皿中.在超净工作台上用台式液清洗并修剪掉结缔组织,迅速行主动脉插管.将心脏悬挂于Langendroff灌流装置上,剪下心室并剪成约1mm3,的组织块,放人37℃预热的含0.2mmol/L Ca2+台氏液20ml的培养皿中,将心室在溶液中轻轻晃动以分散已解离的心室肌细胞.新分离的细胞在常温下放置1-2h后,用加样器取带少许细胞的原液放人试管中,加人指示剂,给予正常细胞外液灌流,测全细胞胞内钙瞬变作为前对照组;给予硝苯地平溶液灌流,测全细胞胞内钙瞬变作为实验组;给予正常细胞外液灌流,测全细胞胞内钙瞬变作为后对照组.结果:不同浓度的硝苯地平对静息状态下心室肌细胞胞内钙信号的影响都不明显,仅10umol/L硝苯地平可能使静息状态下心室肌细胞胞内钙水平轻微降低,更高浓度的硝苯地平的效果反而减弱.不同浓度的硝苯地平都能不同程度降低心室肌细胞胞内钙瞬变的峰值(P<0.05),5umol/L硝苯地平的标准化值最低,降低心室肌细胞胞内钙瞬变峰值的效果比2umol/L硝苯地平明显(P<0.05).但是10umol/L硝苯地平、50umol/L的硝苯地平的降低心室肌细胞胞内钙瞬变峰值的效果反而减弱.结论:硝苯地平可以抑制大鼠心室肌细胞的电流.但是,硝苯地平对于静息状态下的心室肌细胞胞内钙信号的影响不明显,可能与硝苯地平只对去极化过程的I(Ca)2+、Ito和Ik有抑制作用有关.     

L-型钙通道阻滞剂对心肌细胞钙稳态的影响

目的观察L-型钙通道阻滞对心肌细胞的影响。方法取SD大鼠颈部脱臼处死后浸入75%乙醇数秒,迅速开胸摘取心脏,置入盛有37℃预热的台氏液100ml的培养皿中。在超净工作台上用台式液清洗并修剪掉结缔组织,迅速行主动脉插管。将心脏悬挂于Langendroff灌流装置上,剪下心室并剪成约1mm3的组织块,放入37℃预热的含0.2mmol/L Ca2＋台氏液20ml的培养皿中,将心室在溶液中轻轻晃动以分散已解离的心室肌细胞。新分离的细胞在常温下放置1～2h后,用加样器取带少许细胞的原液放入试管中,加入指示剂,给予正常细胞外液灌流,测全细胞胞内钙瞬变作为前对照组;给予硝苯地平溶液灌流,测全细胞胞内钙瞬变作为实验组;给予正常细胞外液灌流,测全细胞胞内钙瞬变作为后对照组。结果不同浓度的硝苯地平对静息状态下心室肌细胞胞内钙信号的影响都不明显,仅10μmol/L硝苯地平可能使静息状态下心室肌细胞胞内钙水平轻微降低,更高浓度的硝苯地平的效果反而减弱。不同浓度的硝苯地平都能不同程度降低心室肌细胞胞内钙瞬变的峰值（P〈0.05）,5μmol/L硝苯地平的标准化值最低,降低心室肌细胞胞内钙瞬变峰值的效果比2μmol/L硝苯地平明显（P〈0.05）。但是10μmol/L硝苯地平、50μmol/L的硝苯地平的降低心室肌细胞胞内钙瞬变峰值的效果反而减弱。结论硝苯地平可以抑制大鼠心室肌细胞的电流。但是,硝苯地平对于静息状态下的心室肌细胞胞内钙信号的影响不明显,可能与硝苯地平只对去极化过程的ICa2＋、Ito和IK有抑制作用有关。     

参脉注射液对阿霉素所致心肌细胞毒性的影响

目的利用培养的乳鼠心肌细胞观察参麦注射液对阿霉素（DOX）引起的心脏毒性的影响。方法采用原代培养的SD大白鼠乳鼠心肌细胞,以1.0μg/m^l-1阿霉素造成急性心肌细胞中毒模型,测定心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出量、心肌细胞内丙二醛（MDA）含量、心肌细胞搏动频率及MTT法测定心肌细胞活力。结果参麦注射液对DOX引起的心肌细胞损伤可减少LDH漏出量和心肌细胞内MDA含量,并改善心肌细胞活力和搏动频率。结论参麦注射液对DOX引起的心肌细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制与其抑制DOX引起的脂质过氧化损伤有关。     

生脉注射液对离体蟾蜍心脏生理功能的影响

目的:探讨生脉注射液对离体蟾蜍心脏心肌收缩力和心率的影响以及其机制.方法:用斯氏法制备离体蟾蜍心脏标本,用BL-410生物系统记录心脏的收缩力和心率.结果:生脉注射液对离体蟾蜍心脏心率有降低的作用(P＜0.05);而生脉注射液可明显增加心肌收缩力(P＜0.05).生脉注射液可对抗维拉帕米对心肌的负性作用,具有统计学意义(P＜0.05).结论:生脉注射液对离体蟾蜍心脏心率有降低作用,对心肌收缩力有正性作用,其作用可能与促进钙离子内流有关.     

参麦注射液中糖类成分含量测定研究

目的建立测定参麦注射液中4种糖类成分的反相高效液相色谱法。方法采用Prevail Carbohydrate ES色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水(79∶21)为流动相,流速1.0 mL.min-1;ELSD漂移管温度100℃,氮气流速2.8 L.min-1测定果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖含量。结果果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖分别在0.763 2～15.26 40μg、0.626 8～12.536 0μg、0.860 4～17.208 0μg、0.754 4～15.088 0μg范围内呈良好的对数线性关系。平均回收率分别为99.05%、100.38%、98.75%、99.52%,RSD为1.5%、1.3%、1.7%、1.1%。结论该方法简便、准确、重复性好,可作为参麦注射液的质量控制方法。     

参麦注射液对急性心肌梗死患者血液动力学指标的影响

目的评价参麦注射液对急性心肌梗死患者血液动力学指标的影响。方法回顾性分析医院2007年4月到2012年4月的246例急性心肌梗死患者的临床资料。对照组126例给予常规治疗,治疗组120例,在常规治疗的基础上给予参麦注射液静脉滴注治疗,分别于输注前、输注后6,12,18,24 h记录血液动力学指标,两组患者不同时间血液动力学指标的变化比较采用重复测量方差分析。结果两组患者右房压(RAP)、右室压(RVP)、肺动脉压(PAP)、肺毛细血管嵌顿压(PAWP)、全身血管阻力指数(SVRI)、肺血管阻力指数(PVRI)、左心室心搏作功指数(LVSWI)和右心室心搏作功指数(RVSWI)在不同时间比较均无明显差异(P>0.05),参麦注射液输注对这些指标也无明显影响。而参麦注射液注射对每搏输出量(SV)、心脏指数(CI)有明显影响(P<0.05)。结论参麦注射液对急性心肌梗死患者血液动力学指标无不良影响。     

参麦注射液HPLC指纹图谱的研究

目的应用高效液相色谱法建立参麦注射液指纹图谱。方法 AgilentC18(250×4.6mm,5μm)柱;柱温25℃;波长210nm;进样量20μL;流速1mL·min-1;流动相为乙腈-水的梯度洗脱。结果确定了不同批次参麦注射液指纹图谱的共有模式及其相似度。结论本方法稳定可靠,重复性好,可用于参麦注射液的质量控制。     

参麦注射液联合黄芪注射液治疗小儿病毒性心肌炎84例

目的 研究参麦注射液联合黄芪注射液治疗小儿病毒性心肌炎的临床疗效.方法 将160例病毒性心肌炎患儿随机分为治疗组84例和对照组76例,在对照组一般治疗、保护心肌的基础上,治疗组加用参麦注射液、黄芪注射液联合治疗.结果治疗组的总有效率为89.29%,且疗效明显优于对照组(p＜0.05).结论参麦注射液联合黄芪注射液治疗小儿病毒性心肌炎疗效显著,值得临床推广.     

参麦注射液临床用药分析

目的通过本研究了解参麦注射液的临床使用情况及探析合理用药情况与影响不良反应发生的相关因素.方法采用调查研究的方法,对四川五家医院336例使用参麦注射液的患者进行调查研究.结果临床上存在不合理用药现象,主要表现为超适应证使用、浓度过大、溶媒使用不当及滴速过快等,不良反应发生与不合理用药之间存在关联.结论医生在使用该药时要符合中医药理论,避免不合理用药,以减少不良反应的发生.     

参麦注射液热原检查的适用性研究

目的对热原检查标准制订时开展适用性研究的必要性进行探讨。方法选用参麦注射液按《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧB＂中药注射剂安全性检查法应用指导原则＂进行热原检查适用性研究。结果参麦注射液热原检查不干扰给药剂量为3mL/kg;参麦注射液给药剂量为5mL/kg时,对细菌内毒素致家兔体温升高有干扰。结论中药注射剂的热原检查有必要进行适用性研究。     

参脉注射液与输液剂配伍后不溶性微粒的变化

目的观察过滤前后参脉注射液加入不同输液中的微粒变化情况。方法利用微粒分析仪测定参脉注射液经过滤、不过滤分别加入0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液中混合后的微粒。结果参脉注射液中含有大量的微粒,使各混合输液中微粒显著增长,且增长数目因输液种类及药液加入方法不同,差异较大。过滤后加入输液中的微粒较不过滤的明显降低。结论临床应用时,应将参脉注射液过滤后加入输液中,输液配伍的操作环境及注射器具等应按要求执行。     

参麦注射液联合长春西汀治疗突发性耳聋的疗效观察

目的探讨参麦注射液联合长春西汀注射液治疗突发性耳聋的临床疗效。方法选取2016年8月—2018年1月延安大学咸阳医院收治的突发性耳聋患者96例为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,每组各48例。对照组静脉滴注长春西汀注射液,20 mg加入到生理盐水250 m L中,1次/d。治疗组在对照组治疗基础上静脉滴注参麦注射液,20 m L加入到5%葡萄糖溶液250 m L,1次/d。两组患者均连续治疗14 d。观察两组的临床疗效,比较两组的听力和血液流变学。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为77.08%、91.67%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组低频区听阀、高频区听阀、平均纯音听阀均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组听力指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组全血黏度、血浆比黏度、血沉方程K值、红细胞电泳指数、纤维蛋白原均明显降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组血液流变学指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)结论参麦注射液联合长春西汀注射液治疗突发性耳聋具有较好的临床疗效,可改善听力功能,调节血液流变学指标,安全性较好,具有一定的临床推广应用价值。     

参麦注射液与氨茶碱对膈肌细胞Ca2+浓度的影响

目的 :探讨参麦注射液与氨茶碱对膈肌细胞内游离Ca2 浓度的影响。方法 :体外培养大鼠膈肌细胞 ,荧光光度法测定参麦注射液与氨茶碱处理前后细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :氨茶碱可使膈肌细胞内的Ca2 浓度明显升高(P<0.01) ,维拉帕米或预先去除培养液中Ca2 可消除该作用。参麦注射液对膈肌细胞内Ca2 浓度无明显影响(P>0.05)。缺氧24h即可致膈肌细胞内Ca2 浓度明显升高(P<0.01) ,参麦注射液对缺氧24h所致的膈肌细胞内Ca2 浓度升高有抑制作用。结论 :细胞外Ca2 是氨茶碱导致细胞内Ca2 升高的关键因素 ,氨茶碱可通过促进细胞外Ca2 内流导致细胞内Ca2 升高。参麦注射液可抑制缺氧所致的膈肌细胞内Ca2 超载 ,对细胞有一定的保护作用。以上作用分别参与了二者抗膈肌疲劳的机制