白藜芦醇对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用和机制研究

目的探讨白藜芦醇对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及作用机制。方法将45只C57BL/6雄性健康小鼠随机分成3组：假手术组（Sham组）、脓毒症模型组[盲肠结扎穿孔（CLP）组]和白藜芦醇实验组（CLP+白藜芦醇组）,每组15只,采用CLP术构建脓毒症小鼠模型,术后72h每组选取存活的5只小鼠处死并取材,检测血肌酐、尿素氮、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、肾损伤标志物-1（KIM-1）、沉默信息调节相关酶1（SIRT1）表达情况;观察小鼠肾脏结构、肾细胞凋亡情况,计算生存率,检测肾脏组织Caspase-3的表达。结果与Sham组相比,CLP组小鼠肾小球毛细胞血管扩张、充血,肾小管上皮细胞水肿、颗粒性变样,管腔缩小,大量炎症细胞浸润,血肌酐、尿素氮水平均升高（均P＜0.05）,血清NGAL、KIM-1水平均升高（均P＜0.05）;可见大量肾小管上皮细胞凋亡,SIRT1mRNA、蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,Caspase3蛋白表达上调（P＜0.05）;小鼠7d成活率为0%。与CLP组相比,CLP+白藜芦醇组小鼠肾小球毛细血管扩张不明显,炎症细胞浸润有所减轻,血肌酐、尿素氮水平均降低（均P＜0.05）,血清NGAL、KIM-1水平均降低（均P＜0.05）;且肾小管上皮细胞凋亡明显减少,SIRT1mRNA、蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）,Caspase3蛋白表达下调（P＜0.05）,小鼠7d成活率为30%（P＜0.05）。结论白藜芦醇可能通过激活SIRT1信号抑制凋亡通路抑制肾小管上皮细胞凋亡,减轻脓毒症相关性急性肾损伤程度。     

灯盏花素对脓毒症性急性肾损伤保护作用的实验研究

目的观察灯盏花素对脓毒血症模型大鼠急性肾损伤的保护作用。方法清洁级Wistar雄性大鼠60只,随机分为假手术组、脓毒血症模型组和灯盏花素大、中、小剂量组,每组12只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制大鼠脓毒血症模型。灯盏花大、中、小剂量组在造模后立即分别给予灯盏花素5、10、20mg/kg尾静脉注射。术后24h处死大鼠,下腔静脉取血测定肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平,采用酶联免疫法（ELISA）测定血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、肾损伤分子1（KIM-1）的水平;摘取肾组织标本进行病理组织学观察,免疫印迹法检测肾脏NGAL和KIM-1蛋白含量。结果与脓毒血症组比较,灯盏花素大、中剂量组大鼠血清Scr、BUN、NGAL和KIM-1水平及肾组织NGAL和KIM-1蛋白表达水平均显著降低（P均〈0.05）;肾脏病理改变好转。灯盏花素小剂量组肾脏病理改变未见好转（P〉0.05）。结论灯盏花素可以显著改善脓毒血症模型大鼠肾组织损伤,降低血清NGAL和KIM-1水平及肾组织NGAL和KIM-1蛋白表达量,对脓毒血症所致急性肾损伤具有保护作用。     

异甘草素通过Smad3/Arid2-IR/NF-κB轴改善顺铂诱导的急性肾损伤小鼠炎症反应

目的研究异甘草素(ISO)对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠的作用并探讨潜在调控机制。方法 30只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组(NC组),模型组(AKI组),异甘草素药物低剂量(ISO-L)和高剂量(ISO-H)处理组,厄贝沙坦阳性对照组(Irb组)。通过单次腹腔注射顺铂(20 mg/kg)建立AKI模型。在干预过程中,NC组和AKI组予以生理盐水,而ISO-L组和ISO-H组分别予以异甘草素7. 5 mg/kg、30 mg/kg,Irb组予以20 mg/kg厄贝沙坦,药物灌胃3 d后处死小鼠,收集血清检测肌酐、尿素氮,HE和PAS染色检测肾病理改变,免疫组化和免疫印迹法检测炎症关键因子(IL-6、IL-1β)和Smad3、NF-κB等关键蛋白活性,Real-time PCR检测炎症因子和长链非编码Arid2-IR改变情况。结果与AKI组比,异甘草素干预能明显改善小鼠肌酐和尿素氮(P 0. 05),且呈浓度依赖性调节;病理染色结果显示药物干预后肾炎性细胞浸润减少,肾损伤明显改善;而炎症因子、Smad3、NF-κB活性和长链非编码Arid2-IR等表达均出现显著下调(P 0. 05),表明异甘草素可以抑制Smad3/Arid2-IR/NF-κB轴的活化。结论异甘草素可有效减轻AKI小鼠肾炎症反应,其机制可能与调节Smad3/Arid2-IR/NF-κB轴有关。     

连续肾脏替代与间歇性血液透析治疗脓毒血症致急性肾损伤的临床研究

目的 探究连续肾脏替代与间歇性血液透析治疗脓毒血症致急性肾损伤的效果.方法 选取2017年1月至2019年1月本院收治的100例脓毒血症致急性肾损伤患者作为研究对象,根据治疗方法不同分为A组(n=53)与B组(n=47).A组采用间歇性血液透析疗法,B组采用连续肾脏替代疗法.比较两组肾功能指标[血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血白蛋白(ALB)]、C-反应蛋白(CRP)水平及感染相关器官功能衰竭(SOFA)评分、存活率.结果 治疗前,两组肾功能指标比较差异无统计学意义;治疗后,B组SCr、BUN水平均明显低于A组(P<0.05).治疗前,两组CRP水平、SOFA评分比较差异无统计学意义;治疗后,B组CRP水平、SOFA评分均明显低于A组(P<0.05).B组存活率明显高于A组(P<0.05).结论 连续肾脏替代疗法治疗脓毒血症致急性肾损伤效果显著,可有效改善患者肾功能,降低炎症水平,避免相关器官功能进一步衰竭,提高生存率.     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症小鼠模型,分别于术后6、12和24 h取回肠组织,HE染色,免疫组织化学方法检测小鼠肠粘膜组织NF-κB的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠肠粘膜TNF-α和IL-6蛋白表达水平。结果模型组NF-κB表达水平较假手术组显著上升;TSP-2治疗组NF-κB表达水平较模型组显著下调;模型组各时间点TNF-α和IL-6水平均高于假手术组(P<0.05);TSP-2治疗组与模型组相比,TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA水平也低于模型组(P<0.05)。正常兔IgG治疗组与模型组比较,结果无统计学意义(P>0.05)。结论抗体TSP-2能抑制脓毒症小鼠肠道NF-κB的活化,并下调致炎细胞因子TNF-α和IL-6水平,对脓毒血症引起的肠道炎症起到一定的控制作用,并延缓脓毒血症的病情发展。     

右美托咪定对脓毒血症大鼠肾功能及紧密连接蛋白表达的影响

目的探讨右美托咪定对脓毒血症大鼠肾功能及紧密连接蛋白表达的影响。方法 SD大鼠30只,随机分为右美托咪定处理组(Dex组)、脓毒血症模型组(M组)、生理盐水对照组(C组),每组10只。Dex组大鼠静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,之后泵注Dex 7μg/kg,15 min后调整剂量为5μg/kg·h,持续泵注30 min;模型组按同样方法给予LPS后泵注生理盐水;C组始终采用上述方法给予生理盐水。24 h后取血液分离血浆,多功能生化仪检测肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;ELISA检测IL-1β和TNF-α含量;Western blot检测肾组织中紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达变化。结果与C组相比,模型组损伤较重,可见大量炎性细胞浸润,有肾小球肾炎表现,而Dex组未见明显的炎症细胞,细胞异常较少,与模型组相比,损伤减轻。肾功能及炎性因子检测结果显示,与C组比较,各组血浆中Scr、BUN、IL-1β和TNF-α含量均显著升高(P0.05),ZO-1和occludin蛋白表达水平均下降(P0.05);与模型组比较,Dex组各项指标均明显降低(P0.05),ZO-1和occludin蛋白表达水平均升高(P0.05)。结论右美托咪定可改善脓毒血症所致的急性肾损伤的肾功能,抑制炎症反应,提升紧密连接蛋白,对肾脏有一定的保护作用。     

艾叶提取物对万古霉素诱导急性肾损伤的保护作用及其机制

考察艾叶乙醇提取物对万古霉素（VAN）诱导的急性肾损伤（AKI）的保护作用及其机制。采用小鼠腹腔注射VAN建立药物性AKI模型,30只实验小鼠分成空白组、模型组、高、中、低3个给药剂量组,并采用灌胃方式给药（ig）。检测小鼠血清中肾功能指标小鼠胱抑素C(Cys C)、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的含量水平,氧化应激指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽过氧化物酶活性（GSH-Px）的含量水平,以及炎症指标肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、超敏C-反应蛋白（hs-CRP）含量水平;此外,观察染色肾脏病理情况,并检测肾组织匀浆中细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3的含量水平。结果表明,艾叶乙醇提取物对VAN诱导的AKI具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激、抑制炎症与细胞凋亡等有关。     

槲皮素通过抑制TLR4/NF-κB通路缓解脂多糖诱导的急性肾损伤

目的分析槲皮素对脂多糖诱导小鼠急性肾损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法将40 只BALB/c小鼠随机分 为4 组：对照组（无脂多糖及槲皮素）,脂多糖组（15 mg/kg 脂多糖）,低剂量组（25 mg/kg 槲皮素+15 mg/kg 脂多糖）,高剂量组 （50 mg/kg槲皮素+15 mg/kg脂多糖）。槲皮素予以胃灌注预处理,1次/d,连续3 d,对照组同时予以相同体积的生理盐水。最后 1次灌胃后1 h予以腹腔注射15 mg/kg的脂多糖,脂多糖干预24 h后结束实验,处死小鼠。观察小鼠肾脏组织病理变化和血肌 酐、尿素氮评估肾脏损伤情况,ELISA 法检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6 的表达情况,Western blot 检测肾脏胞浆中TLR-4、 MyD88、TRAF-6以及核内NF-κB p65蛋白的表达。结果槲皮素可以降低脂多糖诱导的急性肾损伤的肌酐、尿素氮水平以及肾 脏损伤的评分（P<0.05）,降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达（P<0.05）,槲皮素抑制肾脏组织中TLR4、MyD88、TRAF-6及核 内NF-κB p65蛋白的表达（P<0.05）。结论槲皮素预处理可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤。     

抑制p38MAPK信号通路对尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨抑制p38MAPK信号通路对尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 将60只新西兰兔按随机数字表法分为4组:假手术组(sham)、模型组(Model)、p38MAPK抑制剂SB203580组(SB203580)、SB203580 +p53激活剂Nutlin-3组(SB203580+ Nutlin-3),每组15只.采用输尿管近端注入大肠埃希菌菌液法制作尿源性脓毒血症模型,术前30 min静脉注射30 μg/kg SB203580或腹腔注射128 mg/kg Nutlin-3进行干预,1次/d,共3d.记录术后24、48、72 h时各组兔肛温、呼吸频率和心率;全自动分析仪检测白细胞计数以及血清肌酐、尿素氮含量;ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;qRT-PCR法检测肾组织MDM2和p53 mRNA表达水平;Western blot法检测肾组织Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-p38MAPK、MDM2、p53和PUMA等蛋白表达水平.结果 与Model组比较,SB203580组兔肛温、呼吸频率、心率、白细胞计数、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及血清肌酐和尿素氮含量降低(P＜0.05),同时肾组织细胞凋亡率、p53 mRNA以及p53、Cleaved caspase-3、Bax、PUMA、p-p38 MAPK等蛋白水平降低(P＜0.05),而MDM2 mRNA以及MDM2、Bcl-2等蛋白水平增加(P＜0.05).与SB203580组比较,SB203580+ Nutlin-3组兔肛温、呼吸频率、心率、白细胞计数、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及血清肌酐和尿素氮含量升高(P＜0.05),同时肾组织细胞凋亡率、p53 mR-NA以及p53、Cleaved caspase-3、Bax、PUMA等蛋白水平增加(P＜0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P＜0.05),而MDM2 mR-NA以及MDM2、p-p38MAPK等蛋白水平无显著变化(P＞0.05).结论 抑制p38 MAPK信号通路通过促进MDM2表达而抑制p53介导的细胞凋亡途径,从而减少尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡.     

GLP-1受体通过SIRT3减轻脓毒症急性肾损伤炎症反应及细胞凋亡

目的探讨Glucagon like peptide-1 receptor(GLP-1R)对脓毒症急性肾损伤(AKI)炎症反应及细胞凋亡的影响及其可能机制。方法通过盲肠结扎穿孔(CLP)法建立AKI模型。30只小鼠随机分为五组:对照组:小鼠建立假模型后接受溶剂处理;药物对照组:小鼠建立假模型接受GLP-1R激动剂利拉鲁肽(2 mg/kg)处理;模型组:小鼠建立AKI模型接受溶剂处理;治疗组:小鼠建立AKI模型后利拉鲁肽(2 mg/kg)处理;抑制剂组:小鼠建立AKI模型后接受利拉鲁肽(2 mg/kg)及silent mating type information regulation2 homolog-3(SIRT3)抑制剂3-TYP(5 mg/kg)处理。Western blot法检测SIRT3蛋白表达。酶联免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平。自动生化分析仪检测血清肌酐及尿素氮水平。TUNEL染色法检测肾组织细胞凋亡。结果与对照组比较,模型组SIRT3表达及活性分别显著下降为(70.1±4.5)%及(73.7±5.3)%,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、肌酐、尿素氮及肾细胞凋亡分别显著增加为(359.8±36.5)pg/mL、(290.0±26.7)pg/mL、(852.3±41.0)ng/mL、(59.0±8.7)μmol/L、(25.2±7.0)mmol/L、(49.0±9.3)个/视野,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,治疗组SIRT3表达及活性显著增加为(87.0±6.4)%及(85.4±7.3)%,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、肌酐、尿素氮及肾细胞凋亡分别显著下降为(282.7±16.9)pg/mL、(189.0±14.2)pg/mL、(461.2±34.0)ng/mL、(38.7±5.9)μmol/L、(17.7±2.9)mmol/L、(21.0±5.2)个/视野,差异均有统计学意义(P0.05)。与治疗组比较,抑制剂组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、肌酐、尿素氮及肾细胞凋亡分别显著增加为(347.8±30.6)pg/mL、(265.9±28.5)pg/mL、(838.7±34.9)ng/mL、(57.5±7.2)μmol/L、(26.8±4.7)mmol/L、(47.0±12.0)个/视野,差异均有统计学意义(P0.05)。结论激活GLP-1R可以显著抑制脓毒症AKI中炎症反应及细胞凋亡,改善肾功能,其机制与上调SIRT3表达有关。     

ACL的构建及其对结直肠癌HCT116细胞增殖和迁移的作用

目的探讨miR-363-5p靶向三结构域蛋白14(TRIM14)对3种乳腺癌细胞系凋亡的影响。 方法采用实时荧光定量PCR法比较不同化疗药物诱导3种乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-435、MCF-12A)中miR-363-5p和TRIM14 mRNA表达水平,采用免疫组化法检测不同亚型乳腺癌组织TRIM14表达情况。采用Western blotting检测TRIM14蛋白表达。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用生物信息学方法预测miR-363-5p与TRIM14的结合位点,通过干扰miR-363-5p和TRIM14研究miR-363-5p对3种乳腺癌细胞中TRIM14的调控作用。Pearson相关分析各亚型乳腺癌组织中miR-363-5p与TRIM14的相关性。 结果3种化疗药物均能促进细胞凋亡,化疗药物处理3种亚型乳腺癌细胞后miR-363-5p表达上升,TRIM14 mRNA表达下降。荧光素酶报告基因实验发现TRIM14是miR-363-5p的靶基因。过表达miR-363-5p后,3种亚型乳腺癌细胞凋亡率上升,TRIM14蛋白和mRNA下降。敲低TRIM14后3种亚型乳腺癌细胞凋亡率上升,过表达TRIM14后3种亚型乳腺癌细胞凋亡率下降。3种亚型乳腺癌组织miR-363-5p与TRIM14表达呈负相关。 结论化疗药物诱导3种亚型乳腺癌细胞后miR-363-5p表达上升,miR-363-5p靶向抑制TRIM14表达,促进3种乳腺癌细胞系凋亡。     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor）,YWHAQ干扰组（si-YWHAQ）,以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶...     

抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的抑制作用

目的：探讨抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,阐明TRIM24基因在乳腺癌发生发展中的作用。方法：以脂质体法转染TRIM24 siRNA和阴性对照NC-siRNA至MCF-7细胞作为si-TRIM24组和NC-siRNA组,以未转染的MCF-7细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测各组MCF-7细胞增殖能力,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Transwell实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移数。结果：与对照组和NC-siRNA组比较,si-TRIM24组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,MCF-7细胞增殖能力降低（P<0.05）,MCF-7细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,MCF-7细胞侵袭和迁移数明显减少（P<0.05）。结论：抑制TRIM24基因表达能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移,且能够诱导细胞凋亡。     

黄芩苷抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MCF-7,观察黄芩苷对乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的影响及其作用机制.方法 实验分为正常组、模型组、黄芩苷组、miR-126组、LNA组、LNA-126组和LNA-126+黄芩苷组.采用RT-PCR检测miR-126、miR-145、miR-100和let-7c的表达水平,MTT法检测细...     

miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的 研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法 收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用 qRT-PCR 法检测肝癌组织中 miR-424-5p,ATG14 的表达。培养人肝癌细胞系 HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组（n=3）：干扰miR-424-5p表达阴性对照组（in-NC组）,干扰miR-424-5p表达组（in-miR-424-5p组）;HCCLM3细胞实验分组（n=3）：过表达miR-424-5p组（mi-miR-424-5p组）,另设过表达miR-424-5p阴性对照组（mi-NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组（mi-NC+NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组（mi-NC+ ATG14组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14阴性对照组（mi-miR-424-5p+NC组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14组（mi-miR-424-5p +ATG14组）。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果 在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡（P<0.05）;干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡（P<0.05）;miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,降低自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）;过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,提高自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）。结论 miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。     

MiR433 靶向调控Notch1 逆转人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的探讨miR-433在多西他赛对乳腺癌耐药机制中的作用。方法将MCF-7乳腺癌细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他 赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/DOX）,并用miR-433 抑制剂及对照剂转染MCF-7/DOX细胞,采用酶标仪 （BioTek）测量吸光度和FACS流式细胞仪检测来评估miR-433的功能和作用;通过生物信息学分析、荧光素酶报告基因测定法 等技术确定miR-433的下游靶标。结果实时定量PCR结果显示miR-433在MCF-7/DOX细胞中的表达下调;细胞活力测定结 果表明miR-433抑制剂能促进产生多西他赛耐药,并减弱MCF-7细胞的凋亡,而miR-433过表达能增强多西他赛的敏感性并且 诱导MCF-7/DOX细胞凋亡。荧光素酶报告基因测定结果显示在miR-433表达显著下调的MCF-7细胞中,Notch1的mRNA和 蛋白质表达水平明显增强;miR-433mimics转染的MCF-7/DOX细胞与对照组（mimics-Ctrl）相比,Notch1的mRNA和蛋白表达 显着降低。结论miR-433可通过抑制Notch1的表达来逆转乳腺癌对多西他赛的耐药性,继续发挥药物的有效性。     

GP73通过p53信号通路调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡

目的 探讨高尔基蛋白73(GP73)对乳腺癌细胞MCF-7的增殖、凋亡的影响及相关机制.方法 利用干扰及过表达GP73质粒转染乳腺癌细胞MCF-7,并利用CCK-8检测处理后细胞的增殖能力,利用流式细胞术方法检测处理组细胞的凋亡水平,利用qRT-PCR和Western印迹法测定GP73和p53 mRNA和蛋白的表达.采用qRT-PCR测定20例临床乳腺癌和癌旁组织中GP73和p53的mRNA水平,并分析乳腺癌组织中GP73和p53的mRNA水平的相关性.结果 过表达GP73后MCF-7较对照组增殖能力上升(P＜0.05),凋亡水平下降(P＜0.05);干扰GP73后MCF-7增殖能力下降(P＜0.05),凋亡率升高.同时过表达GP73和p53的乳腺癌细胞较单独过表达GP73的MCF-7细胞的增殖能力下降,凋亡水平上升.乳腺癌组织中GP73和p53 mRNA表达也呈负相关(r=-0.528,P＜0.01).结论 GP73可能通过p53信号通路调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡.