蛇床子-补骨脂在乳腺癌骨转移裸鼠模型中吸收入血特征的研究

目的:以蛇床子素和补骨脂素为靶标成分,从药物吸收入血角度探讨蛇床子-补骨脂配伍后疗效增加的机制。方法:采用左心室注射MDA-MB-231BO细胞法建立裸鼠乳腺癌骨转移模型,给予不同配比的蛇床子-补骨脂药物煎液,采用HPLC-MS法测定裸鼠血浆中蛇床子素和补骨脂素,观察蛇床子-补骨脂配伍后蛇床子素和补骨脂素吸收入血的特征。结果:蛇床子组血浆中可发现蛇床子素离子峰;补骨脂组血浆中可发现补骨脂素分子及其离子峰信号;蛇床子-补骨脂(1:3)组血浆中可发现蛇床子素分子及离子峰信号,未发现补骨脂素分子及离子峰信号,蛇床子-补骨脂(2:2)组可发现蛇床子素和补骨脂素的分子及离子峰信号,蛇床子-补骨脂(3:1)组可发现蛇床子素分子及离子峰信号,未发现补骨脂素分子及离子峰信号。结论:蛇床子素和补骨脂素均可被吸收入血;蛇床子与补骨脂1:1配伍可促进补骨脂中补骨脂素的吸收入血。     

蛇床子-补骨脂配伍引经药对乳腺癌骨转移裸鼠CXCL12-CXCR4轴的影响

目的:观察蛇床子-补骨脂配伍引经药桔梗对裸鼠乳腺癌骨转移趋化因子12-趋化因子受体4(CXCL12-CXCR4)生物轴的影响,并探讨其机制。方法:采用左心室注射乳腺癌MDA-MB-231BO细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型,分别ig"蛇床子(1.28 g)-补骨脂(1.28 g)"煎液、"蛇床子(1.28 g)-补骨脂(1.28 g)-桔梗(0.32 g)"煎液、"蛇床子(1.28 g)-补骨脂(1.28g)-牛膝(0.32 g)"煎液,观察其对裸鼠模型上肢和下肢骨转移损伤、骨转移程度的影响,逆转录-PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测上下肢骨转移灶中CXCL12,CXCR4 mRNA和蛋白的表达。结果:"蛇床子-补骨脂"对裸鼠上肢、下肢骨转移程度、骨损伤程度、骨转移组织中CXCL12和CXCR4 mRNA的表达均有一定的抑制作用(P0.05),上行引经药桔梗可增强"蛇床子-补骨脂"对上肢骨转移程度、骨损伤程度、骨转移组织中CXCL12和CXCR4 mRNA和蛋白表达的抑制作用(P0.05)。下行引经药牛膝对上述指标无明显影响。结论:桔梗可增强"蛇床子-补骨脂"对乳腺癌骨转移裸鼠上肢骨转移的治疗作用,其机制可能与其增强"蛇床子-补骨脂"下调上肢骨转移灶中CXCL12,CXCR4 mRNA和蛋白表达有关。     

从OPG/RANKL/RANK系统阐述补骨脂-蛇床子抑制乳腺癌骨转移的机制

目的 从OPG/RANKL/RANK系统探讨不同比例补骨脂-蛇床子抑制乳腺癌骨转移的机制,发掘补骨脂-蛇床子抑制乳腺癌骨转移最佳配伍比例。     

基于RANK/RANKL/OPG系统探讨阳和汤对阳虚证乳腺癌骨转移裸鼠模型的影响

目的探讨阳和汤对阳虚证乳腺癌骨转移裸鼠模型的影响及其相关机制。方法将70只裸鼠随机分为空白对照组(NS组),阳虚骨转移组(YG组),阳虚骨转移+唑来膦酸组(YGZ组),阳虚骨转移+阳和汤等临床剂量组(YGY组),阳虚骨转移+阳和汤2倍临床剂量组(YG2Y组),骨转移+唑来膦酸组(GZ组),骨转移+阳和汤等临床剂量组(GY组)7组。肌注氢化可的松建立阳虚证裸鼠模型;再将NS组以外的所有裸鼠左心室注射乳腺癌细胞MDA-MB-231悬液建立裸鼠骨转移模型;YGY、YG2Y、GY组造模后第5天开始中药煎剂灌胃干预,YGZ、GZ组于造模后第5、7、9、12、14、16、19天腹腔注射唑来膦酸,YG组造模1周后灌胃蒸馏水。用药20天后对裸鼠进行X线摄像、影像学评分、病理组织观察,取骨转移组织进行RT-PCR和Western-blot检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)的基因及蛋白表达量。结果阳和汤能在一定程度上改善裸鼠模型的生存质量(P0.05),抑制骨转移,治疗骨转移引起的溶骨性骨质破坏(P0.05),并能明显增加裸鼠OPG的表达(P0.01)、抑制RANKL的表达(P0.01)。结论阳和汤等临床剂量能有效治疗阳虚证乳腺癌骨转移,其可能机制是通过增加OPG的表达、抑制RANKL的表达,从而抑制乳腺癌骨转移的发展。     

药对“附子-白术”对裸鼠乳腺癌骨转移NF-κB通路的影响

目的:观察附子-白术药对抑制裸鼠乳腺癌骨转移骨损伤作用,并探讨其作用机理。方法:左心室注射MDA-MB-231BO细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型;分别采用生理盐水、附子-白术药对、唑来膦酸进行干预;观察裸鼠模型的骨转移组织病理变化,TRACP染色进行破骨细胞计数,ELISA法测定骨转移组织中细胞因子TNF-α、IL6、IL-8和IL-4含量,Western-blot检测骨转移组织中NF-κB p65蛋白的表达。结果:附子-白术药对组、唑来膦酸组骨转移组织病理损伤较模型组减轻;与模型组比较,附子-白术药对组裸鼠骨转移灶中TRACP(+)细胞数量明显减少(P<0.01),骨转移组织中TNF-α、IL6和IL-8均显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-4含量显著升高(P<0.05),NF-κB p65表达均显著降低(P<0.01)。结论:附子-白术药对抑制了乳腺癌骨转移裸鼠模型骨损伤,其机理可能与其抑制NF-κB通路活化,进而减少促炎因子TNF-α、IL6和IL-8等的分泌,并上调抑炎因子IL-4有关。     

补骨脂对乳腺癌骨痛大鼠痛行为及肿瘤生长的影响

目的 研究补骨脂对大鼠乳腺癌骨痛模型痛行为、骨破坏及肿瘤生长情况的影响.方法 将大鼠乳腺癌细胞MRMT-1株接种在雌性SD大鼠左侧胫骨骨髓腔内制成乳腺癌骨痛模型,观察补骨脂(水煎剂,造模次日开始给药,剂量为生药0.5g·100g体重-1·d-1)的作用,以唑来膦酸作为阳性对照药.造模20d后观察Von Frey纤维刺激的50%缩足阈(50%PWT)、双足负重差异;第21日取材,测定子宫系数和肿瘤体积;用左胫骨放射评分、骨密度(BMD)和骨矿物质含量(BMC)评价骨破坏程度.结果 补骨脂可使乳腺癌骨转移大鼠50%PWT提高,双足负重差异下降,肿瘤体积减小,放射评分减低,BMD和BMC升高.结论 补肾壮骨中药补骨脂在大鼠乳腺癌骨痛模型上能减轻癌性疼痛,其机制可能与抑制肿瘤生长、减轻骨破坏有关.     

独活寄生汤对乳腺癌骨转移患者骨相关事件及OPG和RANKL表达的影响

目的:评价独活寄生汤对乳腺癌骨转移的疗效,并观察其对患者外周血OPG和RANKL表达的影响。方法:选取2012年1月至2015年1月广东省中西医结合医院收治的乳腺癌骨转移患者50例纳入研究,随机分为对照组和观察组,每组25例。对照组接受吉西他滨联合唑来膦酸治疗,观察组在对照组治疗基础上加用独活寄生汤,1剂/d。2组均进行3周期治疗,疗程结束后比较2组生命质量评分、血清肿瘤标志物浓度、骨相关事件发生率、外周血OPG和RANKL浓度变化。结果:1)2组患者SF-36评分均较治疗前有所提升(P<0.05),观察组优于对照组(P<0.05);2)治疗后2组患者CA153、CA125、CEA、FER浓度均较治疗前有所下降(P<0.05),观察组下降较对照组明显(P<0.05);3)治疗过程中2组均有SREs发生,观察组发生SREs明显低于对照组(P<0.05);4)经过干预后OPG表达上调,RANKL浓度下降,其中观察组改变的幅度较对照组明显(P<0.05)。结论:独活寄生汤可明显降低乳腺癌骨转移骨相关事件发生的风险,提升患者的生命质量,其作用机制可能与调节OPG-RANKL系统平衡有关。     

附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠生存时间及血清中TGF-β1、PTHrP的影响

目的观察附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠的保护作用,并探讨其抑制骨转移的作用机制。方法采用左心室注射乳腺癌细胞MDA-MB-231BO法建立骨转移模型;裸鼠随机分为A大组和B大组;A大组分为模型组、唑来膦酸组、附子-白术药对组;B大组分为:假手术组、模型组、唑来膦酸组、附子-白术药对组;并进行相应干预。观察A大组裸鼠生存时间及体质量变化情况;观察B组裸鼠骨转移程度,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)观察骨转移灶中破骨细胞数量,ELISA法法检测血清中转化生长因子(TGF-β1)、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)的含有量。结果与模型组比较,药对组生存时间明显延长(P0.05),造模后6周时体质量下降率减小(P0.05),骨转移程度明显降低(P0.01)、TRAP(+)细胞数量均明显减少(P0.05),血清中TGF-β1和PHTrP的表达均显著降低(P0.05)。结论附子-白术药对可改善乳腺癌骨转移裸鼠体质量下降,延长生存时间,减轻骨转移溶骨性损伤,其机理可能与其调控TGFβ信号通路,减少PTHrP的表达相关。     

补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移模型骨痛及骨质破坏的影响

目的:研究淫羊藿、补骨脂和骨碎补3种补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移模型骨痛和骨质破坏的影响。方法:使用雌性SD大鼠进行实验,将48只大鼠随机分为6组,即假手术组、模型对照组、淫羊藿组、补骨脂组、骨碎补组和唑来膦酸组,其中后5组为手术组,在左侧胫骨髓腔内注射MRMT-1大鼠乳腺癌细胞建立大鼠乳腺癌骨转移模型,分别给予对应药物。在造模后第20天观察Von Frey纤维刺激的50%缩足阈(50%PWT)及双足负重差异以显示疼痛行为。第21天取材,测定肿瘤体积、左胫骨影像评分、骨矿物质含量(BMC)和骨密度(BMD)。结果:3种补肾壮骨中药均可使乳腺癌骨转移大鼠50%PWT提高(P0.05或P0.01),补骨脂可使双足负重差异减小(P0.01),淫羊藿可使BMC和BMD升高(P0.05和P0.01)。此外,3种中药均有抑制肿瘤生长和减低骨破坏影像评分的趋势,但未见统计学差异。结论:淫羊藿等补肾壮骨中药在大鼠乳腺癌骨转移模型上具有减轻癌性骨痛和骨质破坏的作用。     

白术附子汤对乳腺癌骨转移裸鼠生存时间及骨转移灶中破骨细胞的影响

目的 探讨白术附子汤抑制乳腺癌骨转移裸鼠模型骨损伤的作用机理。方法 建立乳腺癌骨转移裸鼠模型,用白术附子汤组、附子-白术药对进行干预,观察裸鼠模型的生存时间,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色进行破骨细胞计数,RT-PCR法检测乳腺癌骨转移组织中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)基因的表达,Western blot检测骨转移组织中M-CSF、PTHrP蛋白的表达。结果 与模型组比较,附子-白术药对组、白术附子汤组生存时间显著延长(P ＜ 0.01);附子-白术药对组、白术附子汤组裸鼠骨转移灶中TRACP阳性细胞数量明显减少(P < 0.01);附子-白术药对组、白术附子汤组M-CSF mRNA、PTHrP mRNA的相对表达量显著降低(P < 0.01);附子-白术药对组、白术附子汤组M-CSF、PTHrP蛋白相对表达量显著降低(P < 0.01);白术附子汤组M-CSF、PTHrP蛋白相对表达量有低于附子-白术药对组的趋势。结论 白术附子汤抑制乳腺癌骨转移裸鼠模型骨损伤的作用与其下调乳腺癌骨转移组织中骨破坏因子M-CSF、PTHrP基因和蛋白的表达有关;附子-白术药对与白术附子汤功效相近,可能是白术附子汤的核心药物。     

附子白术汤通过调节OPG/RANKL保护乳腺癌骨转移裸鼠骨损伤的研究

目的:从调节护骨素(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)系统探讨附子白术汤抑制乳腺癌骨转移骨损伤的机制.方法:采用左心室注射人乳腺癌骨转移细胞株(M DA-MB-231BO)细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型;随机分为模型组、唑来膦酸组、附子白术汤组、附子-白术药对组,另备止常裸鼠正常组(n=6).造模后第4天开始药物干预:唑来膦酸组sc唑来膦酸0.2 mg·kg-1;模型组、附子白术汤组、附子-白术药对组、正常组,分别ig给予生理盐水20 mL·kg-1、附子白术汤5.6 g·kg-1、附子-白术药对煎液2.4 g·kg-1、生理盐水20 mL·kg-1;每周3次,持续6周.观察各组裸鼠体重、骨转移灶病理和OPG,RANKLmRNA表达变化.结果:①与模型组比较,附子-白术药对组与附子白术汤组骨转移个数、骨转移率及体重下降率均明显下降(P＜0.05),骨转移灶中TRAP(+)细胞数量均减少(P＜0.01),OPG mRNA表达含量上调(P＜0.01),RANKLmRNA表达含量及二者比值降低(P＜0.01);②与附子白术汤组比较,附子-白术药对组骨转移个数、骨转移率、体重下降率、骨转移灶中TRAP细胞数量,OPG mRNA,RANKL mRNA表达含量及其比值均无统计学差异.结论:附子白术汤和附子-白术药对均可通过调节OPG/RANKL系统,减少破骨细胞的数量并抑制其活性,从而减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨性损伤;附子-白术药对与附子白术汤功效相近,可能是附子白术汤的核心药物.     

补肾化痰方对肾虚模型裸鼠乳腺癌骨转移的影响

目的:补肾化痰方对肾虚模型裸鼠乳腺癌骨转移的影响.方法:将30 只雌性裸鼠随机分为对照组、模型组及治疗组[补肾化痰方(3.67 g·kg-1)],每组10 只.模型组及治疗组皮下注射氢化可的松制成肾虚模型.肾虚模型制成3 d后,以左心室注射肿瘤细胞法制成骨转移模型.对比3 组裸鼠体质量变化、瘤体质量、骨转移部位数、骨转...     

健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达的影响

目的:观察健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-x L(B-cell lymphoma/leukemia-x L,Bcl-x L)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响。方法:建立裸鼠肠癌原位瘤模型,分为模型组,健脾益气组(15 g·kg-1),化瘀解毒组(15 g·kg-1),健脾消癌方组(全方组,15 g·kg-1),5-氟尿嘧啶组(5-Fu,20 mg·kg-1),共5组。分别予以相应药物干预4周,观察裸鼠体重、瘤体抑制率、转移率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3,Bcl-x L,Bax蛋白表达。结果:健脾益气组、全方组体重下降低于模型组(P0.05),化瘀解毒组体重下降高于模型组(P0.05);健脾益气组对瘤体的抑制与模型组比较无统计学差异,与空白组比较,化瘀解毒组、全方组对瘤体均有较好抑制作用(P0.05);各组均出现不同程度地转移,其中模型组、健脾益气组总体转移率达90%,化瘀解毒组、全方组转移率分别为70%,60%,低于模型组(P0.05);与模型组比较,化瘀解毒组及全方组能够上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3,Bcl-x L蛋白表达(P0.01)。结论:健脾消癌方中健脾益气组优势在于稳定体重,化瘀解毒组优势在于抑制肿瘤,抑制转移;全方组能够稳定体质量,抑制肿瘤,抑制转移,全方配伍疗效最优,其抗肿瘤机制可能是上调凋亡相关蛋白Bax及下调Caspase-3,Bcl-x L,诱导肿瘤细胞凋亡。     

Th1/Th2细胞漂移与乳腺癌化疗疗效的关系及中医“扶正”法对其影响的研究思路

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势。目前,化疗已成为乳腺癌的常规治疗手段之一。化疗作为杀伤性治疗手段,虽然对恶性肿瘤细胞有杀伤作用,但对高度敏感的淋巴细胞也有杀伤作用,对内环境的免疫平衡有"致虚"作用,这一定程度上降低了化疗疗效,因此,通过改善内环境的免疫平衡提高化疗疗效具有极其重要的意义。中医扶正法能够调节机体免疫功能,提高机体各种抗癌细胞因子活性,通过研究中医扶正法对Th1/Th2漂移的影响,可以探讨中医扶正法通过改善肿瘤生存的内环境,达到"增效"的机制。