不同人群血清对人SARS冠状病毒和动物SARS样冠状病毒反应性的比较

目的 探讨不同人群血清中人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体所表达的意义及其之间关系。方法 应用人SARS冠状病毒和动物SARS样冠状病毒抗原片进行间接免疫荧光(IFA)定性和半定量试验,检测23份一般人群、25份动物市场从业人员和74份SARS病人的SARS冠状病毒IgG抗体阳性(ELISA法检测)血清样本,并进行比较分析。结果 23份一般人群、25份动物市场从业人员和74份SARS病人的血清样本的IFA阳性率分别为73．91％、68．00％和100．00％,在IFA阳性人群中其血清样本既能对人SARS冠状病毒也能对动物SARS样冠状病毒产生反应的分别占100．00％(17／17)、64．71％(11／17)和94．59％(70／74);70．59％(12／17)一般人群和76．47％(13／17)动物从业人员其血清中的动物SARS样冠状病毒抗体水平高于人SARS冠状病毒;而SARS病人血清中的人SARS冠状病毒与动物SARS样冠状病毒抗体水平以两者相同和前者高于后者为多,分别占56．76％(42／74)和33．78％(25／74)。结论 不同人群血清中的人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体两者之间均存在着一定的交叉反应现象,从血清学上提示了人SARS冠状病毒与动物SARS样冠状病毒之间存在着很高的同源性;人SARS冠状病毒抗体和动物SARS样冠状病毒抗体两者各自表达的意义是有所不同的,通过间接免疫荧光半定量试验可有助于区别感染者所染病毒的倾向性。     

SARS恢复期患者血液与排泄物中SARS-CoV RNA的检测

目的应用巢式逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测严重急性呼吸综合征(SAILS)恢复期患者血液与排泄物中的病毒RNA。方法对连续3次收集的23例确诊SARS恢复期(病程≥21天)患者的血、尿、痰、粪便标本进行核酸提取，设计特异性内外引物，使用巢式RT—PcR的方法进行病毒RNA检测。结果通过巢式RT—PCR，共检测到6份阳性标本，其中粪便标本中检测到4份，检出率为5．8％；痰标本中检测到2份，检出率为2．9％。在尿液和血液标本中未检测到病毒．RNA。结论个别SARS恢复期患者排泄物中有SARS病毒RNA存在，因此对恢复期患者的排泄物应慎重处理，对其引起SARS的再次传播的危险性需要进一步评估。     

SARS冠状病毒基因溯源分子生物信息学分析

目的：对广东省两次流行的SARS冠状病毒（SARS—CoV）进行分子水平的溯源分析，为进一步研究SARS冠状病毒提供分子生物信息学资料。方法：对GenBank登录的SARS冠状病毒和SARS样冠状病毒（SARS—like CoV）核酸序列进行了分析，以Breda病毒为外组，构建了SARS冠状病毒和SARS样冠状病毒系统进化树，并进行单核苷酸变异分析。结果：发现两次SARS自然流行的病毒可分为两个明显不同的聚类；第二次流行时从人类中分离的SARS冠状病毒和从果子狸等动物中分离的SARS样冠状病毒可分为两个基因型，两型的主要鉴别依据是病毒的全基因组变异而非Spike基因序列。结论：前后两次SARS自然流行病毒可能以不同的特性感染人类而不是简单的重复。结合流行病学资料，对第二次流行时的SARS冠状病毒进行分子水平溯源分析的结果表明，分离自前2例指标患者的病毒基因序列与来自果子狸等动物的SARS样冠状病毒的基因序列存在较大的差异。提示第二次流行的SARS冠状病毒由果子狸等动物传染人的论据不足。     

Hep-2细胞在严重急性呼吸综合征病原学检测中的应用研究

目的 应用人咽喉上皮癌细胞(Hep-2)对严重急性呼吸综合征(SARS)病例标本进行病原体检测与研究，为该病的预防与控制提供依据。方法 采用Hep-2细胞培养法，对2003年l～2月广东省收集的SARS病例的咽拭子等标本分离致病病原体，并应用电镜形态学、逆转录．多聚酶链反应(RT-PCR)扩增部分基因进行序列分析，并对分离的病原体进行研究。结果 132例SARS病例的3l份咽拭子、100份痰液和l份尸检肺组织标本中有73份标本致单层细胞出现“蚀斑病变”，细胞病变阳性率为55．3％，其中48h阳性率为36．4％。采用巢式PCR(Nested-PCR)对其中25份出现“蚀斑病变”细胞培养物进行检测，能扩增出冠状病毒的特异片段；对中2-18、中2-19等6份Nested-PCR产物进行基因序列分析，结果 显示其核苷酸序列与国内外公布的结果一致，氨基酸序列与已知的人或动物冠状病毒的同源性在58％～76％之间。通过电镜在SARS病例标本(中2-10)病变细胞及l份尸检肺组织标本中观察到衣原体样颗粒和病毒样颗粒。结论 从接种SARS病例标本的Hep-2细胞病变培养物中证实有冠状病毒。     

清远市小学学生SARS冠状病毒抗体血清流行病学研究

目的了解清远市小学学生SARS冠状病毒(简称SARS-CoV)抗体水平。方法分别于2005年10月和2006年4月,采集清远市2所乡镇小学学生及2003年SARS-CoVIgG检测阳性儿童的血液,用酶联免疫法检测血清中SARS-CoV抗体IgG。结果共检测小学学生血清样本449份,SARS-CoV IgG总阳性率为1.78%(8/449),男、女学生之间阳性率差异无统计学意义(P>0.05);其中在9、10、11、12岁年龄组学生中检出SARS-CoV IgG,阳性率分别为2.70%(1/37)、7.58%(5/66)、2.13%(1/80)、0.99%(1/101),4个年龄组阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);8份SARS-CoV IgG阳性血清样本均来自同一学校;对17名2003年SARS-CoV lgG检测阳性的儿童进行追踪重新采血检测,阳性率为11.76%(2/17)。结论该地区小学学生SARS-CoV抗体阳性率较低,存在隐性感染及聚集现象,SARS-CoV抗体IgG水平随时间延长会逐渐下降,甚至消火。     

SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测

目的 确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法 用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本，用RT-PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段，并进行序列测定。结果 在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒，并见衣原体包涵体样结构；用RT-PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段，测序后经相似性(BLAST)比较，其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源；用巢式RT-PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论 在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒，在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段，说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。     

SARS-CoV特异性抗体产生规律的初步研究

目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染后体内病毒特异性抗体产生规律。方法 收集临床确诊为SARS患者的血清和非SARS人群血清标本,用IgM捕获法、间接法和抗原夹心法三种不同方法检测抗SARS病毒特异性IgM、IgG和总抗体。结果 检测146份临床诊断为SARS的患者不同发病时间血清标本,三种抗体阳性率分别为61.64％、53.43％和69.86％;SARS病毒特异性IgM、IgG抗体的最早检出时间分别在发病第7天和第12天,特异性IgM抗体最短在发病后42天消失。三种方法检测70份甲型肝炎患者血清时,均有2份非特异阳性反应,检测127份其他病种血清均阴性,1例密切接触SARS患者的医务人员SARS特异性IgG抗体和总抗体均阳性,三种检测方法均不受类风湿因子影响。结论 与其他病毒感染相比,SARS病毒感染者的特异性IgM抗体检出时间较晚,且持续时间较短;三种检测方法均有较好的特异性和敏感性,可用于SARS的流行病学调查和临床诊断的确认和补充,但不适用于SARS的早期诊断。     

广东省不同人群SARS病毒抗体水平调查

目的对不同人群进行SARS-IgG抗体水平检测，分析SARS流行规模和特征，评价暴露的危险性，了解人数中是否存在SARS病毒隐性感染，为寻找SARS病毒传染源提供线索。方法抽取7708份不同人群标本，按临床症状和暴露因素分为临床确诊SARS病人、病人或污染物的接触者、普通健康人群和动物销售人员4类，采用酶联免疫方法(ELISA)进行SARS-IgG抗体检测，用免疫荧光法(IFA)复核，并结合流行病学资料进行分析。结果127例临床确诊SARS病人抗体阳性率为66．9％；密切接触者中女性发病率高于男性；SARS病人或其污染物的密切接触者抗体阳性率为0．88％；动物销售人员为13．4％；野生哺乳动物销售者的抗体阳性率显著高于其他动物销售者，普通健康人群未检出抗体阳性。低年龄健康人群ELISA检测阳性率为2．06％，高于总体水平。结论人群总体抗体水平很低，普通健康人群无SARS冠状病毒抗体，但可能存在某种可与SARS冠状病毒起交叉反应的抗体；有无接触史是影响抗体阳性率的重要因素；密切接触者可能存在隐性感染；野生动物可能是本次SARS的传染源。     

江苏省传染性非典型肺炎病原学检测研究

目的:建立传染性非典型肺炎(SARS)实验室检测方法,为SARS病例诊断和现场防治提供依据。方法:用逆转录套式PCR、实时荧光定量PCR检测SARS病毒核酸;酶联免疫法检测血清标本SARS病毒IgM抗体;部分PCR检测阳性或SARS病毒IgM抗体阳性病例的标本进行直接电镜观察;简并引物PCR检测冠状病毒属病毒核酸;鉴别诊断IFA检测血清中肺炎支原体等9种常见呼吸道感染病原IgM抗体,PCR检测军团菌以及甲、乙型流感病毒核酸。结果:检测各类临床标本506份。2003年全省报告临床诊断病例7例,5例检测结果阳性;逆转录套式PCR检测各类标本132份,阳性8份;对其中4份PCR扩增产物(108bp)进行了序列分析,与SARS病毒序列100%同源;实时荧光定量PCR检测各类标本30份,阳性3份;酶联免疫法检测血清标本101份,SARS病毒IgM抗体阳性4份;3个诊断病例的各类标本电镜检查发现冠状病毒样颗粒;IFA检测血清标本75份,嗜肺军团菌IgM抗体阳性9份,乙型流感IgM抗体阳性11份,两者同时阳性3份,其他病原体IgM抗体均为阴性。不明发热病例的标本21份简并引物PCR检测冠状病毒,2份咽拭子标本阳性;漱口液、尿液标本各15份PCR检测军团菌、漱口液25份PCR检测甲、乙型流感病毒结果均为阴性。结论:本研究建立的检测方法与临床诊断有比较好的符合性,对于临床诊断和防治工作具有重要的参考价值。PCR检测SARS-CoV特异性较好,而敏感性有待提高。     

间接免疫荧光法在检测SARS冠状病毒特异性抗体中的应用

目的 利用间接免疫荧光技术(IFA)建立SARS冠状病毒(SARS—CoV)特异性抗体血清学诊断方法。方法 采用组织培养技术，用SARS病人的咽漱液样本，在Vero—E6细胞中培养，分离SARS冠状病毒；用已制备的SARS病毒抗原片与临床确诊为SARS的病人双相血清和正常人对照血清作用，再用荧光标记羊抗人IgM/IgG抗体与之结合，在荧光显微镜下观察荧光图像。结果 通过建立检测SARS冠状病毒特异性抗体的间接免疫荧光方法，在44份SARS临床病例标本中，检出IgG抗体阳性3l份，与临床诊断符合率为70．45％。31份IgG阳性者的急性期血清中IgM检出率为38．70％，IgM最早产生于发病第3天，发病7d以上的6例的IgM抗体均为阳性，滴度在发病12～15d达到高峰(1：80)；恢复期血清中IgG抗体最早产生于发病第8天，滴度在发病15～20d达到高峰(1：320～1：640)。97份正常人的血清标本中IgG抗体阳性率为3．09％，IgM抗体为阴性。结论 利用此方法，证实被SARS冠状病毒感染后，在机体中产生有特异性的IgM／IgG抗体；本方法检测结果与临床诊断符合率较高，可以用于早期临床诊断SARS病毒感染和辅助临床做出鉴别诊断。     

Detection of SARS coronavirus in patients with suspected SARS

Cases of severe acute respiratory syndrome (SARS) were investigated for SARS coronavirus (SARS-CoV) through RNA tests, serologic response, and viral culture. Of 537 specimens from patients in whom SARS was clinically diagnosed, 332 (60%) had SARS-CoV RNA in one or more clinical specimens, compared with 1 (0.3%) of 332 samples from controls. Of 417 patients with clinical SARS from whom paired serum samples were available, 92% had an antibody response. Rates of viral RNA positivity increased progressively and peaked at day 11 after onset of illness. Although viral RNA remained detectable in respiratory secretions and stool and urine specimens for >30 days in some patients, virus could not be cultured after week 3 of illness. Nasopharyngeal aspirates, throat swabs, or sputum samples were the most useful clinical specimens in the first 5 days of illness, but later in the illness viral RNA could be detected more readily in stool specimens.     

检测SARS冠状病毒的套式RT-PCR方法的建立与初步应用

[目的]建立套式RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法。[方法]从广东地区SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及本实验室分离的SARS冠状病毒（SAPS—CoV）组织培养上清中提取RNA，利用针对SARS冠状病毒多聚酶基因的特异性引物，进行逆转录及套式PCR扩增。扩增出的阳性片段连接入pGEM—T载体中，测序后比较其与其他已知SARS冠状病毒的同源性。[结果]从SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及SARS冠状病毒组织培养上清中均可扩增出阳性片段，经测序后证实是SARS冠状病毒特有序列。[结论]针对SARS冠状病毒多泵酶基因所建立的套式RT—PCR方法适用于临床标本及组织培养标本中SARS冠状病毒的检测。     

医院污水中SARS冠状病毒核酸的检验

目的　了解收治SARS病人的定点医院污水中是否含有病毒和病毒核酸。方法　采用载阳电荷滤材吸附浓集污水中的SARS冠状病毒 ,消毒前浓集污水 2 5L ,消毒后 2 5～ 5 0L ;采用VERO细胞培养及RT -PCR技术检测SARS冠状病毒。结果　建立的阳电荷浓集方法对污水中加标f2 噬菌体回收率平均 12 7% ,而SARS冠状病毒回收率只有 1 0 2 %。消毒前在 30 9医院和小汤山医院污水的6d监测中均检测出SARS冠状病毒核酸 ;消毒后 ,在 30 9医院只有 3d监测出病毒核酸 ,其余样品均未检出病毒核酸 ;两医院所有的污水回收液中均未检出活病毒或具有感染性的病毒。结论收治SARS病人医院污水中含有SARS冠状病毒核酸 ,但没有检出活病毒或具有感染性的病毒 ,因此 ,在当时条件下 ,医院污水 ,尤其是消毒后污水传播SARS冠状病毒可能性较小。     

101例严重急性呼吸综合征患者粪便中SARS冠状病毒RNA的检测

目的　研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者粪便中排出SARS冠状病毒 (SARS CoV)RNA的情况。方法　采用荧光定量聚合酶链反应法 (FQ PCR)检测 10 1例病程为 10～ 5 5d的SARS患者、2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群粪便中SARS CoVRNA。结果　 10 1例SARS患者的粪便标本中 5 8例 (5 7 4 % )SARS CoVRNA阳性 ;2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群的粪便标本均为阴性。SARS患者发病后 10～ 19、2 0～ 2 9、30～ 39和 4 0～ 5 5d ,粪便中SARS CoVRNA阳性率分别为 10 0 % (8/ 8)、6 7 7% (2 1/ 31)、4 7 4 % (2 7/ 5 7)和 4 0 0 % (2 / 5 )。粪便中SARS CoVRNA载量对数值分别为 6 0 6± 2 0 5、4 5 1± 1 2 3、3 82± 1 4 4和 3 5 7± 1 2 5。结论　SARS患者急性期粪便中SARS CoVRNA阳性率和载量对数值最高 ,且随病程延长而下降     

SARS患者某定点收治医院空气样本中SARS-CoV及其RNA的检测

目的 了解SARS某定点收治医院空气中的SARS病毒污染情况及SARS病毒在空气中的分布和传播特性。方法 采用FA-2型空气微生物采样器在病房区及病房阳台连续采样。将采集到的空气样本洗脱后分别采用细胞分离和逆转录-聚合酶链反应分析,并对细胞分离阳性者作进一步的系列分析鉴定。结果 SARS患者某定点收治医院病房区及阳台空气样本中均有部分PCR结果阳性,SARS阳性率病房区为29％,阳台为20％;其中一份样品中分离出活性病原体,并稳定传代;经免疫荧光染色鉴定阳性,RT-PCR扩增产物的测序结果显示该病原体与已知SARS-CoV的同源性在98％以上。结论 SARS急性期后期与恢复期早期的患者仍然从呼吸道排毒,病毒在距传染源周围1m之内的空气中具有感染活性,在此范围之内存在气溶胶传播的潜在威胁。     

Severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus infection

Whether severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus (SARS-CoV) infection can be asymptomatic is unclear. We examined the seroprevalence of SARS-CoV among 674 healthcare workers from a hospital in which a SARS outbreak had occurred. A total of 353 (52%) experienced mild self-limiting illnesses, and 321 (48%) were asymptomatic throughout the course of these observations. None of these healthcare workers had antibody to SARS CoV, indicating that subclinical or mild infection attributable to SARS-CoV in adults is rare.     

SARS患者7年随访血清抗体变化规律及胃肠道免疫组化研究

目的 连续7年随访严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度变化,应用胃肠镜观察胃肠道的病理改变并进行免疫组织化学研究.方法 应用免疫荧光(IFA)和双抗原夹心ELISA方法,对SARS患者发病1年后采用每隔1年检测一次血清SARS病毒(SARS-CoV)特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度;用抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体对SARS恢复期患者胃肠道组织进行免疫组化研究.结果 14例SARS患者特异性IgG抗体1年后平均滴度为1/71(95%CI:1/58～1/85),连续追踪7年呈下降趋势,7年后大部分患者IgG抗体滴度消失,特异性IgM抗体1年后消失,N蛋白抗体1年后平均滴度为1/146(95%CI:1/122～1/171),与IgG抗体变化同时呈下降趋势.7年后其中9例患者检测N蛋白抗体全部为阴性,另5例临床症状较重的患者,N蛋白抗体仍检测阳性,其中3例N蛋白抗体滴度维持在1/156～1/210之间,2例N蛋白抗体滴度接近正常.该5例患者行胃肠镜检测和细胞免疫组化试验,血中N蛋白抗体检测阳性的3例患者胃组织黏液腺上皮细胞免疫组化呈阳性表达,大部呈胞浆着色.其中1例患者在肠组织浆液柱状上皮及间质细胞亦有表达,另2例血清N蛋白抗体检测接近正常的患者,细胞免疫组化为阴性.5例患者病理活检:1例明确诊断为"胃印戒细胞癌并直肠多发转移"、1例"胃息肉"、1例"浅表性胃窦炎",其余2例正常.结论 SARS患者血清特异性IgM、IgG、N蛋白抗体在恢复期呈下降趋势,7年后大部分消失;N蛋白抗体变化规律与病情轻重程度有关.