罗格列酮与全反式维甲酸对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响

目的 研究PPARγ激动剂罗格列酮（RSG）与全反式维甲酸（ATRA）对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响及其机制的研究.方法 体外培养SGC7901细胞,实验分为空白对照组、10μmol/L ATRA组、12.5 μmol/L RSG、25 μmol/L RSG组,10 μmol/L ATRA和25 μmol/L RSG联合组.MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期,HE染色检测细胞形态,免疫细胞化学检测PPARγ蛋白,RT-PCR检测PPARγmRNA.结果 10 μmol/L ATRA、12.5 mmol/L RSG、25 mmol/L RSG及两药联合时皆可抑制SGC7901细胞的增殖,且存在浓度及时间依赖,两药联合作用72 h时,生长抑制率为（29.73±0.69）%.ATRA、RSG皆可使细胞周期G0/G1期延长,S期下降,两药联合作用时,S%为（12.87±0.35）%,细胞形态向正常方向转化,细胞的PPARγ蛋白核内表达及PPARγmRNA表达上调,两药联合后作用进一步加强,PPARγ/GAPDH的浓度比值高达0.646.结论 ATRA、RSG均可抑制SGC7901细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞分化和上调PPARγ蛋白及PPARγmRNA的核内表达,ATRA和RSG联合较单药作用效果更强.     

miR-218对胃癌细胞增殖及周期影响的研究

目的 探讨miR-218对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将miR-218 mimics转染胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803细胞,以无关序列(Scramble mimics)作为阴性对照.采用qRT-PCR技术验证miR-218 mimics转染细胞中miR-218的表达水平;通过细胞计数法及MTS[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑,内盐]法观察miR-218过表达对胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术观察miR-218过表达对胃癌细胞周期的影响.结果 转染miR-218 mimics胃癌细胞中miR-218的表达量较对照细胞显著升高.过表达miR-218的胃癌癌细胞增殖速度明显减慢(P＜0.05).通过流式细胞术分析细胞周期发现,过表达miR-218的胃癌细胞阻滞于G1期.结论 miR-218能抑制胃癌细胞生长增殖,阻止胃癌细胞周期进程,它可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用.     

罗格列酮对胃癌AGS细胞株生长的影响

目的探讨PPARγ配体罗格列酮对胃癌AGS细胞株增殖、凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTS法测定罗格列酮对胃癌AGS细胞株存活率的影响,流式细胞术检测罗格列酮对AGS细胞凋亡的影响,荧光定量PCR及Western blot法检测罗格列酮对PPARγ、HCaRG及DLK1 mRNA及蛋白的表达。结果不同浓度罗格列酮（1—100μM）处理AGS细胞株24h及48h,细胞的存活率明显降低,其作用呈浓度及时间依赖性,预先加入PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮的作用;不同浓度罗格列酮处理AGS细胞株48h,细胞凋亡百分率明显高于对照组（t≥2．97,P〈0．05）,GW9662不能逆转罗格列酮的作用;罗格列酮诱导AGS细胞株PPARγ、HCaRG及DLK1的表达,并呈剂量依赖,GW9662能阻断罗格列酮诱导DLK1表达的作用,而不能阻断其诱导HCaRG表达的作用。结论罗格列酮通过PPARγ依赖及非依赖两种途径抑制胃癌AGS细胞株生长,诱导DLK1及HCaRG表达可能是罗格列酮抗胃癌作用机制之一。     

Caveolin-1对MGC803细胞增殖的影响及机制

目的研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响及作为基因治疗的候选基因可能性。方法用L ipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系,并将空载体转染MGC803作为对照。采用western b lot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。应用细胞计数、流式细胞术等检测caveolin-1对MGC803细胞生长的影响。结果转染后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显高于未转染细胞;细胞的群体倍增时间明显延长,细胞增殖周期明显延长,且阻滞于G0/G1期。结论Caveolin-1能抑制MGC803细胞的增殖,且将其阻滞于G0/G1期。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

姜黄素对人胃癌BGC-823细胞增殖及MMP-9、COX-2mRNA表达的影响

目的 研究姜黄素在体外对人胃癌细胞BGC-823生长增殖的影响及其抗肿瘤的相关分子机制.方法 体外培养人胃癌BGC-823,MTT法检测姜黄素在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算IC50值;RT-PCR法检测其对COX-2、MMP-9 mRNA表达的影响.结果 MTF结果显示:相同干预浓度姜黄素抑制人胃癌细胞增殖,其24、48、72 h的IC50分别为:(62.192±7.802) μmol/L、(46.365±8.991) μmol/L和(45.503±9.126) μmol/L; RT-PCR结果显示:正常对照组及姜黄素干预组的人胃癌细胞BGC-823MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.704±0.045,0.147 ±0.052(P＜0.05);COX-2 mRNA灰度值分别为:0.721 ±0.060,0.190±0.027(P＜0.05).结论 姜黄素抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9 mRNA的表达来抑制胃癌细胞增殖.     

CTGF单克隆抗体对胃腺癌细胞BGC823生物学行为的影响

[目的]观察结缔组织生长因子(CTGF)单克隆抗体对人胃癌细胞BGC823生物学行为的影响。[方法]体外培养BGC823胃癌细胞,分别经不同浓度的CTGF单抗作用不同时间后,用MTT法测定细胞活力;通过黏附实验观察CTGF单抗对胃癌细胞黏附能力的影响;Boyden小室法观察BGC823细胞侵袭、迁移能力的改变。[结果]CTGF单抗抑制胃癌细胞的增殖,CTGF单抗处理组细胞的黏附、迁移和侵袭能力明显低于对照组(P﹤0.05)。[结论]抗体中和CTGF抑制胃癌细胞的增殖、明显减弱细胞的粘附、迁移和侵袭能力。     

三氧化二砷及联合紫杉醇对胃癌MGC 803细胞的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)及联合紫杉醇用药对人体外胃癌细胞株MGC803的生长抑制作用和形态变化。方法胃癌MGC803细胞进行体外培养后,在不同时间段内,MTT法观察不同浓度As2O3以及As2O3和紫杉醇联合用药对人体外胃癌细胞株MGC803的生长抑制情况和集落形成情况;电镜下观察药物作用后的MGC803细胞超微结构变化。结果 MTT显示随着As2O3或联合紫杉醇作用时间的延长,对肿瘤细胞的抑制率逐渐增强,其中单独三氧化二砷对肿瘤细胞d 3抑制最强,d 4有所下降;除0.5μmol/L As2O3作用下,d 3抑制率(29.50±0.41)%,与对照组(19.17±0.63)%比较没有统计学差异外(P0.05),其余各组随药物浓度的升高,其抑制率就越高,与对照组(19.17±0.63)%比较差异有统计学意义(P0.05),且同一As2O3浓度下联合用药对肿瘤细胞的抑制作用均强于单一用药,两者比较P0.05;集落形成实验表明随着As2O3及联合药物浓度的增加,胃癌细胞的集落形成率逐渐下降,与对照组(90.34±0.57)%比较P0.05;电镜下,肿瘤细胞出现不同程度的凋亡改变,伴有细胞的坏死。结论 As2O3对人胃癌MGC803细胞具有明显的抑制作用,其d 3抑制作用最强,并且联合紫杉醇用药可以增强其疗效,延缓耐药性的发生,提高化疗的疗效,适合在临床上短期小剂量应用化疗。     

沉默VEGF对胃癌细胞侵袭的影响

目的用RNA干扰技术抑制VEGF基因表达,探讨RNA干扰对胃癌细胞的侵袭的影响。方法设计合成VEGF shRNA,体外脂质体介导转染胃癌细胞株BGC-823,EL1SA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达,体外侵袭实验比较细胞侵袭能力变化。结果 VEGF shRNA明显下调VEGF基因的表达,VEGF表达下调后,胃癌细胞体外侵袭能力显著降低。结论VEGF shRNA显著抑制了VEGF的表达和胃癌细胞侵袭。     

Rapamycin抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MGC-803细胞影响

目的探讨rapamycin作用于胃癌细胞株MGC-803后对细胞生长影响及其作用机制。方法体外培养胃癌细胞株MGC-803,使用不同浓度rapamycin干预MGC-803细胞。采用MTT法检测细胞增殖变化;实时荧光定量PCR(QPCR)检测关键基因的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。结果与对照组相比,rapamycin对胃癌MGC-803细胞的增殖活性有明显的抑制作用,呈现出剂量依赖性(P0.05)。Rapamycin显著抑制PI3K、AKT、m TOR、4EBP、P70S6K基因的m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05);Rapamycin能抑制p-m TOR、p-P70S6K蛋白的表达;Rapamycin将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P0.05)。结论靶向m TOR抑制剂rapamycin可通过调控PI3K/AKT/m TOR信号通路进而调控胃癌细胞的生长。     

茶氨酸体外对人胃癌细胞MGC803增殖的作用及与阿霉素的联合作用

目的研究茶氨酸(theanine)对人胃腺癌细胞株MGC803增殖的影响及其与阿霉素(doxorubicin,DOX)的联合作用。方法采用MTT法结合形态学观察,研究茶氨酸单独或与DOX联合作用对MGC803增殖活性的影响;采用荧光分光光度法检测茶氨酸对MGC803细胞内DOX药物浓度的影响,探讨茶氨酸对DOX化疗敏感性的影响。结果2.0、4.0μmol/L茶氨酸单独作用于MGC803后其吸光度值与空白对照组相比有统计学差异(P0.01);茶氨酸与DOX联合作用后对MGC803增殖的抑制率明显提高,并观察到典型的凋亡细胞形态学特征;DOX联合茶氨酸作用后,使MGC803细胞内DOX浓度升高1.35倍。结论茶氨酸可能有直接抑制MGC803细胞增殖的作用,并使肿瘤细胞内DOX滞留,提高了肿瘤细胞对DOX的化疗敏感性。     

胃癌中β-catenin和GSK-3β的表达及临床意义

目的探讨β—catenin和糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）在胃癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色检测胃组织芯片（包括48例胃癌和对应正常胃组织及24例癌旁组织）中β-catenin和GSK-3β的表达。结果β-catenin和GSK-3β在胃癌组织中的表达率分别为66．7％、35．4％;β—catenin在癌组织中的阳性表达率明显高于正常组织（χ2=65．455,P〈0．05）;与pTNM分期、分化程度、组织学类型、淋巴结转移和癌侵犯神经有关（χ2=4．713,8．242,13．662,11．658,4．550,P〈0．05或P〈0．01）;GSK-3β在癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织（χ2=26．968,P〈0．05）,并与分化程度、组织学类型和淋巴结转移有关（χ2=3．868,9．665,9．872,P〈0．05或P〈0．01）;β-catenin与GSK-3β表达则呈负相关（r=-0．493,P=0．001）。结论β—eatenin和GSK-3β在胃癌的进展、分化、浸润和转移中起重要作用,是判断胃癌生物学行为的良好指标。     

莱菔硫烷对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及MMP-9活性的影响

目的探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）活性的影响。方法体外培养NCI—H446细胞,用0、25、50、100txmol／LSFN处理24～72h后,MTT法检测细胞的增殖情况;小室侵袭实验分析细胞的侵袭力改变,明胶酶谱实验检测MMP-9的酶活性变化。结果经25、50、100Ixmol／LSFN处理24～72h后,NCI．H446生长均能受到不同程度抑制。其中72h后,25、50、100μmol／LSFN组NCI．H446细胞的抑制率分别为（11．1±2．26）％,（25．2±3．24）％和（44．6±4．2）％,与溶剂对照组相比差异具有统计学意义（t=10．685,8．417,5．264,P〈0．05）。25、50、100μmol／LSFN作用NCI—H446细胞24h后,NCI—H446细胞穿膜数分别为（48．6±1．84）％,（35．4±2．22）％和（27．8±1．36）％,与溶剂对照组[（68．4±2．21）％]相比差异具有统计学意义（t=6．341,5．562,4．925,P〈0．05）。明胶酶谱实验显示,25、50、100ixmol／LSFN处理后,MMP-9活性的灰度值分别为764±18．4,685±14．74和638±21．54,与对照组相比（822±12．53）,差异有统计学意义（t=4．971,7．582,11．235,P〈0．05）。结论SFN对肺癌NCI—H446细胞生长、侵袭力及MMP-9的活性具有抑制作用。     

Artemin及受体GFRα3对MIA PaCa-2人胰腺癌细胞浸润和转移能力的影响

目的 探讨Artemin及其受体GFRα3对MIA PaCa-2人胰腺癌细胞浸润转移能力的影响.方法 以MIA PaCa-2人胰腺癌细胞为研究对象,采用Transwell Chamber分析不同浓度的Artemin及受体GFRα3对胰腺癌细胞浸润转移能力的影响,MIA PaCa-2胰腺癌细胞经Artemin及受体GFRα3刺激后,采用RT-PCR及Western blot方法定量分析MIA PaCa-2细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、上皮钙粘附素（E-cadherin）表达水平的变化.结果 随着Artemin及受体GFRα3作用浓度的增加,MIA PaCa-2胰腺癌细胞浸润转移能力明显增强,均明显高于对照组[150 ng/ml浓度：Artemin组：107.4±11.4;GFRα3组：94.4±9.3;对照组：34.6±7.3,P〈0.01].150 ng/ml为二者的最佳作用浓度.经150 ng/ml Artemin、GFRα3分别作用后,MIA PaCa-2细胞合成MMP-2明显增加[Artemin组：（2.17±0.05）×108;GFRα3组：（2.02±0.03）×108;对照组：（1.02±0.02）×108,t=6.35,7.32],而E-cadherin明显降低[Artemin组：（0.65±0.04）×108;GFRα3组：（0.74±0.01）×108;对照组：（1.36±0.03）×108,t=4.27,5.61],与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）.结论 Artemin及其受体GFRα3可促进胰腺癌细胞的浸润和转移能力,可能与浸润转移相关分子MMP-2表达上调、E-cadherin表达下调有关.     

Escin Suppresses Migration and Invasion Involving the Alteration of CXCL16/CXCR6 Axis in Human Gastric Adenocarcinoma AGS Cells

Escin, a natural mixture of triterpene saponins isolated from horse chestnut, has been reported to possess anticancer activity in many human cancer cells. However, the effect of escin on the metastasis has not been studied. The present study examined the effect of escin on the migration and invasion of AGS human gastric cancer cells. To examine the effects of escin on metastatic capacities of gastric cancer cells, AGS cells were cultured in the presence of 0–4 μmol/L escin. Escin inhibited cell migration and invasion in AGS cells. However, escin did not affect the viability of these cells at these concentrations. The chemokine receptor and its ligands play an important role in cancer metastasis. Escin decreased the production of soluble C-X-C motif chemokine (CXCL)16 but increased the expression of trans-membranous CXCL16. The expression of C-X-C chemokine receptor (CXCR)6 was not affected by escin treatment. Exogenous CXCL16 reversed escin-induced migration inhibition. In addition, escin inhibited the phosphorylation of focal adhesion kinase and Akt. These results demonstrate that escin inhibited the migration and invasion of AGS cells, which is associated with altered CXCL16/CXCR6 axis. These findings suggest that escin has potential as an antimetastatic agent in gastric cancer.     

慢性胃炎与胃癌组织中微血管密度和黏附分子表达的对比研究

目的 探讨慢性胃炎与胃癌组织中微血管密度、黏附分子的表达及对比意义.方法 选取56例慢性浅表性胃炎患者(慢性浅表性胃炎组)、55例胃癌无淋巴结转移患者(胃癌无淋巴结转移组),57例胃癌有淋巴结转移患者(胃癌有淋巴结转移组)的病理组织蜡块,用免疫组织化学Envision法显示微血管密度CD34和细胞黏附分子Syndecan-1的表达情况,112例胃癌患者中高、中分化47例,低分化65例.结果 CD14表达以微血管密度计算:慢性浅表性胃炎组为(13 ± 10)个/高倍镜视野(HP),胃癌无淋巴结转移组为(27 ± 11)个/HP;胃癌有淋巴结转移组为(28 ±10)个/HP.慢性浅表性胃炎组与胃癌无淋巴结转移组及胃癌有淋巴结转移组比较差异有统计学意义(t=7.044、7.908,P＜0.05),胃癌无淋巴结转移组与胃癌有淋巴结转移组比较差异无统计学意义(t=0.506,P＞0.05.慢性浅表性胃炎组、胃癌无淋巴结转移组、胃癌有淋巴结转移组Syndecan-1阳性表达率分别为96.43%(54/56)、45.45%(25/55)、24.56%(14/57),慢性浅表性胃炎组与胃癌无淋巴结转移组及胃癌有淋巴结转移组比较差异有统计学意义(X2=163.560、17.197,P＜0.01).胃癌无淋巴结转移组与胃癌有淋巴结转移组比较差异有统计学意义(x2=5.340,P＜0.05).结论 微血管密度增加与胃癌的发生有关;细胞黏附分子syndecan-1表达下调与胃癌的发生、发展有关,并可能进一步促进胃癌转移,检测微血管密度CD34及细胞黏附分子Syndecan-1的表达变化情况有助于胃癌的诊断及预后判断.

Abstract：

Objective To investigate the clinical significance of the expression of microvessel density and adhesion molecules in the tissue of chronic gastritis and gastric cancer. Methods Fifty-six patients with chronic superficial gastritis (chronic superficial gastritis group), 55 cases of gastric cancer without lymph node metastasis (gastric cancer without lymph node metastasis group) and 57 patients with gastric cancer and lymph node metastasis (gastric cancer with lymph node metastasis group) were included in this study. Gastric pathology paraffin blocks was studied using immunohistochemical Envision method. Microvessel density CD34 and cell adhesion molecule Syndecan-1 expression was examined. In 112 gastric cancer patients, 47 patients were highly differentiated, and 65 patients were poorly differentiated. Results Microvessel density CD34 results:in chronic superficial gastritis group was (13 ± 10)/HP,in gastric cancer without lymph node metastasis group was (27 ± 11 VHP, in gastric cancer with lymph node metastasis group was (28 ± 10)/HP. There were significant differences between chronic superficial gastritis group and gastric cancer without lymph node metastasis group,and between chronic superficial gastritis group and gastric cancer with lymph node metastasis group (t = 7.044,7.908, P ＜0.05), but there was no significant difference between gastric cancer without lymph node metastasis group and gastric cancer with lymph node metastasis group (t = 0.506,P ＞ 0.05). In chronic superficial gastritis group, gastric cancer without lymph node metastasis group and gastric cancer with lymph node metastasis group, Syndecan-1 positive expression ratewas 96.43%(54/56),45.45%(25/55),24.56%(14/57),and there was significant difference between chronic superficial gastritis group and gastric cancer without lymph node metastasis group,and between chronic superficial gastritis group and gastric cancer with lymph node metastasis group (x2 = 163.560,17.197,P＜ 0.01). There was significant difference between gastric cancer without lymph node metastasis group and gastric cancer with lymph node metastasis group (x2 = 5.340, P ＜ 0.05). Conclusions Microvessel density is related with the occurrence of gastric cancer;adhesion molecule Syndecan-1 expression reduces the incidence of gastric cancer development, and might further promote the metastasis of gastric cancer. Detecting the expression changes of microvessel density CD34 and cell adhesion molecule Syndecan-1 facilitates the diagnosis and prognosis of gastric cancer.     

过氧化物酶增殖体受体γ在肥胖乳腺癌患者乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨过氧化物酶增殖体受体γ(PPARγ)在肥胖乳腺癌患者乳腺癌组织中的表达及临床意义.方法 采集60例肥胖乳腺癌患者(肥胖组),60例正常体重乳腺癌患者(正常体重组),用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测两组乳腺癌组织PPARγ的mRNA和蛋白表达.结果 肥胖组乳腺癌组织PPARγ的mRNA和蛋白表达分别为0.79±0.06、0.55±0.07,均高于正常体重组的0.42±0.04、0.23±0.03,差异有统计学意义(P＜ 0.05),并且PPARγ mRNA和蛋白表达呈正相关(r=0.81,P＜0.05).肥胖组PPARγ阳性47例患者中,10例(21.3％)发生复发转移;而PPARγ阴性13例患者中,11例(84.6％)发生复发转移,差异有统计学意义(P＜0.05);正常体重组PPARγ阳性19例患者中,4例(21.1％)发生复发转移;而PPARγ阴性41例患者中,10例(24.4％)发生复发转移,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PPARγ在肥胖乳腺癌患者中具有高表达趋势,提示PPARγ可能在绝经后肥胖相关性乳腺癌的发生、演变及预后中起重要作用.