卵巢癌细胞系COC1紫杉醇体外化疗后survivin mRNA及蛋白表达差异的研究

目的:探讨卵巢癌细胞系COC1紫杉醇体外化疗后survivin mRNA及蛋白表达的变化,进而探讨survivin表达与肿瘤细胞耐药的关系。方法:应用细胞培养技术及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度紫杉醇(0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25μg/ml)对COC1细胞体外生长的抑制作用。应用RT-PCR技术检测5μg/ml紫杉醇分别处理COC1细胞24、48、72h和20μg/ml处理细胞24h后存活的卵巢癌细胞中survivin mRNA的表达水平。Western blot检测5μg/ml紫杉醇处理不同时间后COC1细胞survivin蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制卵巢癌细胞生长,不同浓度紫杉醇作用COC1细胞72h后的抑制率分别为13.21%、24.76%、35.78%、44.23%、57.23%、73.36%、89.56%,随着药物浓度的增加,细胞受抑制程度明显升高(P<0.05)。5μg/ml紫杉醇处理COC1细胞48h和72h后存活的卵巢癌细胞中survivin mRNA表达量增加,明显高于对照组。Western blot检测survinvin蛋白表达,结果表明与mRNA水平的表达一致。结论:抗凋亡蛋白survivin在卵巢癌细胞系COC1中高表达,survivin基因在卵巢癌细胞系COC1体外化疗中起抑制作用。     

白藜芦醇通过下调survivin蛋白表达促进人卵巢癌A2780细胞失巢凋亡的研究

目的:初步探讨人卵巢癌A2780细胞抗失巢凋亡的特性及白藜芦醇(RES)对人卵巢癌A2780细胞失巢凋亡的作用及相关机制。方法:利用悬浮培养模型体外模拟人卵巢癌A2780细胞失巢培养,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫印迹实验(Western blot)检测生存素(survivin)蛋白表达的情况。结果:悬浮培养A2780细胞凋亡率与正常贴壁培养细胞凋亡率相比[(3.19±1.63)%vs(3.51±1.33)%],差异无统计学意义(P>0.05);而悬浮培养组细胞survivin蛋白表达明显增高。RES处理后呈时间、剂量依赖性抑制悬浮培养A2780细胞增殖。RES处理组细胞凋亡率(58.71±6.78)%明显高于悬浮培养组细胞凋亡率(3.19±1.63)%(P<0.01),且RES处理组细胞survivin蛋白水平明显下降。结论:人卵巢癌A2780细胞具有抗失巢凋亡的特性。RES能诱导人卵巢癌A2780细胞失巢凋亡,其效应与survivin蛋白表达下调有关。     

Apatinib对卵巢癌细胞A2780增殖及紫杉醇敏感性的影响

目的:研究阿帕替尼(apatinib)对卵巢癌细胞A2780增殖及紫杉醇敏感性的影响,并探讨其相关机制。方法:CCK-8法检测apatinib对A2780细胞增殖的影响,克隆形成实验检测apatinib对A2780细胞增殖能力的作用,流式细胞术检测apatinib对A2780细胞凋亡和细胞周期分布的影响,Western blot法检测apatinib靶蛋白。结果:与对照组比较,apatinib明显抑制卵巢癌A2780细胞的增殖及克隆形成(P0.01)。Apatinib作用24h后,A2780细胞凋亡率明显增加(P0.01),呈浓度依赖性的细胞周期阻滞。Apatinib诱导A2780细胞中CDK2表达下降和p21表达上升。小剂量apatinib显著提高A2780细胞对紫杉醇的敏感性。结论:Apatinib可显著抑制卵巢癌细胞的增殖并增强其对紫杉醇的敏感性。     

艾迪注射液及联合应用化疗药物抑制人卵巢癌细胞株A2780增殖的研究

目的 :探讨艾迪注射液对人卵巢癌细胞株A2 780增殖的影响及与多种化疗药物的协同作用。方法 :采用MTT法测定艾迪注射液与 4种化疗药物单独及联用对A2 780细胞的增殖抑制作用 ,运用流式细胞仪测定艾迪注射液对A2 780细胞周期的影响及凋亡率。结果 :艾迪注射液可抑制A2 780细胞增殖 ,其抑制作用呈剂量和时间依赖性 ,并可诱导细胞凋亡。低浓度的艾迪注射液与化疗药物联用 ,可产生较强的抑制细胞增殖的作用。结论 :艾迪注射液具有直接抗肿瘤作用 ,对化疗药物协同作用的机制可能与其诱导细胞凋亡有关。     

NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。     

Survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC_1/DDP凋亡的实验研究

目的 :探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡的作用。方法 :将脂质体介导的survivin反义寡核苷酸 (survivin ASONs)作用于COC1/DDP细胞 ,采用一步法RT PCR检测survivin、bcl 2mRNA的表达 ,并进行细胞核DNA梯形电泳 ,检测caspase 3活性 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 :经survivin ASONs作用后COC1/DDP细胞中survivin等抗凋亡基因的表达下降 ,细胞核DNA电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ,caspase 3活性增加且呈时间依赖性 ,细胞凋亡率达33.18% ,细胞周期G2 /M及S期明显下降而多阻滞于G0 /G1期 ,与对照组差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论 :survivin ASONs反义寡核苷酸能诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞凋亡 ,且效果显著     

姜黄素对卵巢癌耐药细胞A2780/taxol凋亡诱导作用及其机制探讨

目的探究姜黄素对卵巢癌耐药细胞A2780/taxol凋亡诱导作用及其机制。方法体外培养卵巢癌耐药细胞A2780/taxol细胞株,实验分为:A组(紫杉醇100μg/ml)、B组(紫杉醇100μg/ml+姜黄素10μmol)、C组(紫杉醇100μg/ml+姜黄素20μmol)、D组(紫杉醇100μg/ml+姜黄素40μmol)、E组(紫杉醇100μg/ml+姜黄素80μmol)。导致显微镜下观察姜黄素作用A2780/taxol细胞后细胞形态;MTT法检测细胞增殖的影响,Western Blot检测P-糖蛋白(P-gp)、蛋白激酶C-α(PKC-α)表达情况,用流式细胞仪检测A2780/taxol细胞凋亡情况。结果紫杉醇与不同浓度姜黄素作用A2780/taxol细胞,较A组能够明显抑制细胞生长(P<0.05);Western Blot检测姜黄素干预组P-gp、PKC-α蛋白表达水平低于对照组(P<0.05);姜黄素组A2780/taxol细胞凋亡率高于常规培养组(P<0.05);姜黄素联合紫杉醇组A2780/taxol细胞凋亡率高于单独使用紫杉醇组(P<0.05)。结论姜黄素可通过抑制P-gp、PKC-α蛋白表达,提高紫杉醇对A2780/taxol细胞毒性,进而降低细胞耐药性,另外姜黄素可促进A2780/taxol细胞凋亡。     

Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及意义

目的:检测Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达,探讨其在卵巢癌发生和发展中的作用及意义。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞系(OVCAR8,OVCAR5,OVCAR4,OVCAR3,SKOV3,OV2008,C13,A2780S和A2780CP)中Dyrk1B蛋白表达,以及Dyrk1B抑制剂AZ191对卵巢癌细胞Dyrk1B蛋白表达的影响。MTT比色法和流式细胞术检测AZ191对卵巢癌细胞增殖能力和细胞凋亡的影响。选取我院近7年收治的上皮性卵巢癌患者119例,免疫组化SP法检测Dyrk1B蛋白在卵巢癌组织中的表达。结果:Dyrk1B蛋白在多种卵巢癌细胞系中普遍表达,AZ191可明显降低其在卵巢癌细胞中的表达;AZ191对各种卵巢癌细胞系的增殖能力均产生浓度依赖性的抑制作用(P0.05),并可诱发细胞凋亡,其凋亡率均随抑制剂浓度的增加而增高;Dyrk1B在卵巢癌组织中亦呈高表达,表达率为90.8%。结论:Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中均有表达,Dyrk1B抑制剂AZ191下调卵巢癌细胞Dyrk1B蛋白表达的同时,明显抑制细胞的增殖和诱发细胞凋亡。提示Dyrk1B可能在卵巢癌的发生和发展中起关键作用,有望成为临床分子靶向治疗卵巢癌的新靶点。     

MDR1及MDR3基因沉默对紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol凋亡能力的影响

目的:探讨采用RNA干扰技术沉默多药耐药基因MDR1及MDR3后对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol凋亡能力的影响.方法:将MDR1和MDR3的siRNA重组质粒转染A2780/Taxol,通过MTT法、流式细胞术、免疫荧光法及Western blot方法分别检测细胞对紫杉醇的敏感性、细胞周期和凋亡率、细胞中caspase-3的活性及MDR编码的P-gp蛋白的表达的变化.结果:转染SiRNAs重组质粒后,A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的相对逆转率分别为64.3%及53.9%,细胞凋亡率由1.59%分别增加到9.43%和8.66%,细胞中caspase-3活性增强,P-gp蛋白含量明显减少,与对照组比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MDR1和MDR3的siRNA质粒可通过诱导卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol凋亡,恢复其对紫杉醇的敏感性.     

卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivin mRNA表达的变化

目的　探讨卵巢癌细胞系CAOV3体外化疗后survivinmRNA表达的变化。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂对CAOV3细胞体外生长的抑制作用。应用RT PCR技术检测高浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0 0、5 0 0mg/L)处理 1d ,低浓度紫杉醇或卡铂 (分别为 2 0、5 0mg/L)处理 1、3、5d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达水平 ,同时利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果　不同浓度 (分别为 2 0 0 0、2 0 0、2 0、2、0 2mg/L)紫杉醇或卡铂作用后CAOV3细胞的抑制率分别为 94 %、88%、34%、2 2 %、13%或 97%、4 6 %、14 %、9%、7% ,随着药物浓度的下降 ,细胞受抑制程度明显减弱 (P <0 0 5 )。低浓度紫杉醇处理1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 15 %、2 3%和 2 9% ;高浓度紫杉醇处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 4 3%。低浓度卡铂处理 1、3、5d后CAOV3细胞的凋亡率分别为 14 %、2 2 %和 2 6 % ;高浓度卡铂处理 1d后CAOV3细胞的凋亡率为 19%。紫杉醇或卡铂低浓度处理 3d及高浓度处理 1d后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量均明显高于未加药的对照 (P <0 0 1) ,尤其是紫杉醇处理后存活的卵巢癌细胞中survivinmRNA的表达量增加更为明显     

短发夹状RNA对卵巢癌细胞survivin mRNA表达及紫杉醇药物敏感性的影响

目的观察表达短发夹状RNA(shRNA)的mU6/survivin质粒转染卵巢癌细胞株OVCAR3细胞后,对OVCAR3细胞survivin mRNA表达的抑制作用,以及对OVCAR3细胞紫杉醇药物敏感性的影响。方法将表达绿色荧光蛋白的pEGFPC2质粒与脂质体按不同比例转染OVCAR3细胞,流式细胞仪检测其转染效率。根据转染效率最高时pEGFPC2质粒与脂质体的比例,将mU6/survivin质粒转染入OVCAR3细胞。实验分为3组未转染组、脂质体组、转染组,RT-PCR技术检测3组OVCAR3细胞中survivin mRNA的表达,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组OVCAR3细胞对紫杉醇的50%抑制浓度(IC50)。结果pEGFPC2质粒与脂质体按1∶2比例转染OVCAR3细胞时其转染效率最高,达23.6%。将mU6/survivin质粒与脂质体也按1∶2比例转染OVCAR3细胞24h后,未转染组、脂质体组、转染组细胞survivin mRNA的相对含量分别为0.81±0.05、0.79±0.12、0.26±0.04,转染组survivin mRNA相对含量下降至未转染组的32%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。转染组转染24h后,细胞凋亡率为(31.9±1.2)%,明显高于未转染组的(4.9±0.7)%和脂质体组的(5.6±0.5)%(P=0.000);转染组细胞周期被阻滞于G0/G1期,G2/M期减少,分别与未转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。MTT比色法检测结果显示,未转染组、脂质体组、转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50分别为(0.305±0.032)、(0.157±0.031)、(0.019±0.001)μmol/L,转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50降低为未转染组的1/16,两组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论shRNA可有效抑制卵巢癌细胞survivinmRNA的表达,并显著提高了卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

Fn14活化凋亡增强人上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感度的研究

目的：探讨成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）对人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞的顺铂（DDP）敏感度的影响及其可能机制。方法：蛋白质印迹（Western blotting）法检测EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中Fn14蛋白的表达情况,选择低表达Fn14蛋白的细胞株转染Fn14过表达质粒后,观察转染后细胞株的Fn14蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况。CCK-8法检测细胞增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）。流式细胞学检测细胞凋亡。结果：人EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中,A2780/DDP细胞株Fn14蛋白表达水平最低。Fn14过表达质粒转染A2780/DDP细胞后,细胞内Fn14表达水平上调（P＜0.05）;细胞的增殖能力无变化,但细胞DDP的IC50显著降低（P＜0.05）。流式细胞学检测结果进一步显示Fn14可以增加DDP诱导的A2780/DDP凋亡细胞数目。同时,Western blotting结果显示促凋亡蛋白caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降（P＜0.05）。结论：Fn14可能活化凋亡通路进而提高A2780/DDP细胞对DDP的敏感度。     

抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性影响的研究

目的:研究抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性的影响。方法:用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;Stem-loop real-time PCR技术检测A2780/Taxol及亲本细胞A2780中hsa-miR-27a表达水平;利用脂质体Lipofectamine2000将化学合成的miR-27a抑制物及阴性对照(Negative Control,NC)转染A2780/Taxol细胞;分别用Real-time PCR和蛋白印迹法技术检测MDR1mRNA和P-glyco-protein(P-gp)蛋白表达;MTT检测A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的变化;流式细胞术检测细胞内P-gp荧光底物罗丹明123(Rh-123)的荧光强度。结果:(1)成功建立了卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;(2)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比,表达增高2.2倍。(3)P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中高表达,在A2780细胞中未检测出其表达;(4)转染miR-27a抑制物后,A2780/Taxol细胞的MDR1mRNA和P-gp表达下降,与转染NC组相比,P-gp表达降低36%;对紫杉醇的敏感性增加,IC50为0.53μmol/L,与转染NC组IC506.8μmol/L相比,有明显差异;(5)流式细胞仪结果显示,细胞内Rh-123荧光强度在转染抑制物的A2780/Taxol细胞为5.10±0.35,与A2780/Taxol细胞的2.95±0.39和转染NC的A2780/Taxol细胞的3.30±0.45相比,差异均有统计学意义。结论:hsa-miR-27a在卵巢癌耐紫杉醇A2780/Taxol细胞中高表达,可能通过间接调节P-gp的表达和功能,参与耐药。抑制miR-27a表达后,可以增加A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性,部分逆转耐药。     

卵巢癌拓扑替康耐药细胞株的建立及其生物学特性

目的 :建立卵巢癌拓扑替康 (TPT)耐药细胞株 ,研究其生物学特性。方法 :用浓度梯度递增法建立卵巢癌TPT耐药细胞株。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测此耐药株对多种化疗药物的耐药指数 ;用细胞计数法描绘两株细胞的生长曲线并计算群体倍增时间 ;用流式细胞仪检测两株细胞的凋亡率及周期分布 ;荧光显微镜及透射电镜下观察亲本细胞、敏感细胞及耐药细胞的超微结构。结果 :历时 6个月建立了卵巢癌TPT耐药细胞株A2 780 /TPT。此细胞株对TPT及米托蒽醌 (MX)耐药 ,耐药指数分别为 2 5及 19,对喜树碱 (CPT)轻微耐药 ,耐药指数为 3,对其他多种化疗药物不交叉耐药。耐药细胞的生长速度比亲本细胞慢 (P <0 .0 5 ) ,且细胞凋亡率及G2 M期细胞比例较亲本细胞高 (P <0 .0 5 )。敏感细胞呈典型的凋亡形态特征 ,而耐药细胞凋亡核的数量明显减少 ,凋亡程度明显减轻 ,且仍有较多的细胞核形态正常。结论 :所建立的卵巢癌TPT耐药株具有耐药细胞的基本生物学特征 ,且该耐药模型稳定。     

APE1 siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究

目的:本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref-1)小分子干扰核糖核酸(siRNA)对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响,探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。方法:应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达,并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1 siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。结果:MTT药物敏感试验表明,20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31.62μmol/L分别降低为13.38μmol/L和3.48μmol/L,有统计学差异(P<0.01)。20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39.73μmol/L和12.43μmol/L,较对照组(64.20μmol/L)分别下降了38.12%和80.64%,有统计学差异(P<0.01)。TUNEL凋亡原位检测表明,40MOI APE1 siRNA处理后,A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为(42.16±3.61)%和(46.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、4.94倍,有统计学差异(P<0.01)。结论:抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。     

The role of topotecan for extending the platinum-free interval in recurrent ovarian cancer: an in vitro model

OBJECTIVE: Topotecan, a novel topoisomerase-I inhibitor, is an active agent of second-line chemotherapy for extending the platinum-free interval (PFI) and improving the chances of a response to platinum in recurrent ovarian cancer patients. The aim of this study was to understand the molecular mechanism of topotecan-based second-line chemotherapy through an in vitro cell culture model and to gain clinical insight into sequencing issues for second-line treatment with novel agents versus retreatment with platinum. STUDY DESIGN: The human ovarian cancer cell line A2780 and the cisplatin resistance cell line A2780-CR were separately seeded in 6-well cell culture plates and then exposed to multiple concentrations of cisplatin plus paclitaxel or topotecan for 7 days. Surviving cells were recovered and cultured in drug-free media for 3 weeks and then replated in a 96-well microtiter plate. The LD(50) for these cells was determined by a cytotoxic MTT assay after exposure to multiple clinically relevant concentrations of cisplatin or topotecan. Surviving cells were cultured in drug-free media for an additional 4 weeks at which time the LD(50) was reassessed for each cell population by a second MTT assay. Using RT-PCR and Northern blot hybridization to measure mRNA expression, the molecular profile of these cells in terms of resistance was evaluated for the multidrug-resistant gene (MDR-1), multidrug-resistant protein (MRP), Topoisomerase-I, and beta-Actin. RESULTS: The LD(50) to cisplatin was unchanged in A2780-CR cells treated by topotecan. Those A2780-CR cells originally exposed to higher concentrations of cisplatin became more resistant to cisplatin in the MTT assays, while those A2780-CR cell lines treated with a combination of lower cisplatin concentrations and paclitaxel became more sensitive to cisplatin in the MTT assay (P < 0.01). The second MTT assay demonstrated that the LD(50) for cisplatin in every cell line decreased significantly after a 4-week drug-free interval (P < 0.01). There was no difference in the mRNA expression for MRP or topoisomerase-I regardless of cell line, or type or concentration of chemotherapeutic exposure. The mRNA for MDR-1 was uniquely overexpressed in the cisplatin-resistant cell line A2780-CR9 initially treated with low doses of cisplatin and paclitaxel, but was not amplified in A2780 (P < 0.01). CONCLUSIONS: The acquired resistance to cisplatin in A2780 is potentially due to P-glycoprotein-mediated multidrug resistance. This acquired resistance to cisplatin is an unstable phenotype in that some cell populations become sensitive after a drug-free interval and topotecan treatment. This reversal of resistance, however, does not appear to be simply due to loss of MDR-1 expression. While in vivo confirmation is required, agents with novel mechanisms of action offer a strategy to extend the platinum-free interval and thereby improve survival in patients with recurrent ovarian cancer.     

肝素结合表皮生长因子在顺铂耐药卵巢癌中的表达及相关性研究

目的检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在顺铂耐药卵巢癌中的表达水平并探讨HB-EGF与卵巢癌对顺铂耐药性的关系。方法①体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌亲本细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中HB-EGF蛋白的表达。分别予以HB-EGF抑制剂CRM197治疗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖能力,酶标仪检测加药前后caspase-3蛋白的活性;②体内实验：建立A2780组和A2780/CDDP组卵巢癌裸鼠移植瘤模型,免疫组化法检测2组移植瘤中HB-EGF蛋白的表达。分别予以CRM197治疗观察移植瘤的生长情况并计算CRM197抑瘤率。结果体内外实验结果表明,与A2780组相比,HB-EGF在A2780/CDDP组中高表达。CRM197可有效地降低A2780/CDDP细胞的增殖能力和caspase-3的表达,抑制A2780/CDDP组裸鼠移植瘤的生长（P〈0.001）。结论 HB-EGF在顺铂耐药卵巢癌中高表达,并与卵巢癌对顺铂的耐药性相关。     

RNA干扰技术沉默survivin基因逆转卵巢癌细胞株SKOV3/ADM耐药性的研究

目的检测survivin基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞株SKOV3/ADM及其亲本细胞株SKOV3中的表达水平,探讨以survivin基因为靶向的RNA干扰(RNA i)能否有效沉默survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达,并能否有效逆转SKOV3/ADM细胞对化疗药物的耐药性。方法半定量RT-PCR、免疫荧光法检测survivin mRNA、蛋白在SKOV3/ADM及SKOV3细胞中的表达。以survivin基因为靶向的重组质粒pshRNA-survivin及紫杉醇作用于SKOV3/ADM细胞,将SKOV3/ADM细胞分为4组,即对照组、RNA i组、紫杉醇组、RNA i+紫杉醇组,RT-PCR技术检测各组细胞的survivinmRNA表达水平,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡情况。结果survivin mRNA在SKOV3/ADM、SKOV3细胞中的表达水平分别为99.1%、75.3%,SKOV3/ADM、SKOV3细胞的荧光细胞数分别为(59±5)、(42±3)个,两种细胞间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RNA i后SKOV3/ADM细胞中mRNA的表达水平由99.1%降低至7.9%。AO/EB荧光染色法、TUNEL法检测各组细胞凋亡数,紫杉醇组为(10.2±1.0)、(9.8±0.8)个,RNA i组为(48.5±4.9)、(49.5±4.3)个,RNA i+紫杉醇组为(71.5±6.8)、(68.3±5.7)个,RNA i+紫杉醇组与RNA i组比较,差异有统计学意义(P<0.05),RNA i+紫杉醇组与紫杉醇组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达显著高于SKOV3细胞。以survivin基因为靶向的RNA i可有效抑制SKOV3/ADM细胞中survivin基因的表达,有效增加了SKOV3/ADM细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,显著上调了SKOV3/ADM细胞的凋亡活性。