检测γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型在肝癌早期诊断中的临床价值

背景及目的：与正常肝脏相比,肝癌细胞表达的γ－谷氨酰转移酶（GGT）有一独特的碳水化合物结构,这种GGT可作为肝癌诊断的重要指标。但是,在癌变过程中GGT基因的改变机制尚不清楚,本研究探讨GGTmRNA亚型的转化与原发性肝癌（HCC）发生的关系,寻找肝癌早期诊断的新方法。方法：以RT－PCR方法检测正常对照组,非癌肝病组,肝癌组及肝转移癌肝组织及外周血的三种GTTmRNA亚型（F,H,P亚型）。结果：正常肝组织,非癌肝组织及肝转移癌癌周组织主要的GGTmRNA类型为F亚型,肝癌组织,癌旁组织,及远离组织GGTmRNA-H亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝病肝组织（P＜0．05）,肝癌组织GGTmRNA-F亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组（P＜0．05）。在26例HCC眙有12例外周血中检出GGTmRNA-H亚型,AFP阴性的10例HCC中有5例检出GGTmRNA－H亚型。结论：GGTmRNA亚型转化与肝癌发生有密切关系,分析GGT基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。     

HBV DNA阳性肝癌患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系

目的:研究HBV DNA阳性肝癌(HCC)患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系.方法: HBV DNA阳性HCC肝切除术患者60例,HBV DNA阴性HCC肝切除术患者60例.60例HBV DNA阳性HCC患者中依据肿瘤病灶局限、肉眼以及镜下均无肝内播散和门静脉浸润的低侵袭组,共28例;肿瘤组织伴有多发性肝内播散和(或)门静脉主肝癌栓者为高侵袭组,共32例.检测患者术前及术后1周血清HBV DNA水平,观察肝功能变化并检测血清HBeAg水平.结果:HBV DNA阳性组与HBV DNA阴性组比较,60例HBV DNA阳性HCC患者中HBeAg阳性患者为48例,阳性率为80%,60例HBV DNA阴性HCC患者中HBeAg阳性患者为12例,阳性率为20%,(P<0.05).不同侵袭组HBeAg表达比较: 32例高侵袭组中29例HBeAg检测阳性,阳性率为90.62% ,28例低侵袭组中19例HBeAg检测阳性, 阳性率为67.86%,(P<0.05).结论:早期肝癌患者血清HBV DNA和HBeAg可作为肝细胞癌复发转移监测指标.     

肝细胞癌高表达中期因子与肝癌细胞血行播散的关系

目的:探讨肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)中期因子(Midkine,MK)蛋白高表达与肝癌细胞血行播散的可能关系.方法:应用RT-PCR和免疫组织化学染色方法分别检测AFP阳性HCC患者术前外周血AFP mRNA和手术切除肝癌组织MK蛋白,了解肝癌细胞血行播散和MK表达的情况,分析两者之间的相关性.结果:在41例HCC患者中,18例术前外周血可检出AFP mRNA,检出率为43.9%.在对应的肝癌组织中,29例高表达MK,表达率为70.7%.在29例高表达MK的HCC患者中,18例术前外周血AFP mRNA阳性,阳性率为62.1%:而在12例MK低表达的HCC患者中,仅3例术前外周血AFP mRNA阳性,阳性率为25.0%.两组之间差异有显著性(R＜0.05).结论:肝癌组织异常表达MK与外周血循环中存在肿瘤细胞有关,可能是肝癌细胞转移潜能的一个指标.     

应用巢式RT-PCR检测原发性肝细胞癌患者外周血中的微转移

目的　以AFPmRNA为标志基因 ,检测原发性肝细胞癌患者外周血中微转移情况。方法　应用巢式RT PCR方法 ,检测 71例肝细胞癌、2 1例肝硬化患者、2 8例健康对照、4例转移性肝癌、4例肝脓肿、4例肝血管瘤及 5例其它恶性肿瘤患者外周血中AFPmRNA的表达。结果　 71例肝癌患者中 ,AFPmRNA阳性 3 9例 ,阳性率为 5 4.9% ,其中 8例有远处转移的全部阳性 ( 10 0 % ) ,未发现远处转移者阳性 3 1例 ,阳性率为 49.2 %。 2 1例肝硬化患者中仅 2例阳性 ,而转移性肝癌、肝血管瘤、肝脓肿、其它恶性肿瘤、健康对照均为阴性。结论　检测肝细胞癌患者外周血中的AFPmRNA ,是一种早期发现肝细胞癌血道播散的灵敏方法。     

HBVDNA阳性肝癌患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系

目的：研究HBVDNA阳性肝癌（HCC）患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系。方法：HBVDNA阳性HCC肝切除术患者60例,HBVDNA阴性HCC肝切除术患者60例。60例HBVDNA阳性HCC患者中依据肿瘤病灶局限、肉眼以及镜下均无肝内播散和门静脉浸润的低侵袭组,共28例;肿瘤组织伴有多发性肝内播散和（或）门静脉主肝癌栓者为高侵袭组,共32例。检测患者术前及术后1周血清HBVDNA水平,观察肝功能变化并检测血清HBeAg水平。结果：HBVDNA阳性组与HBVDNA阴性组比较,60例HBVDNA阳性HCC患者中HBeAg阳性患者为48例,阳性率为80％,60例HBVDNA阴性HCC患者中HBeAg阳性患者为12例,阳性率为20％,（P〈0．05）。不同侵袭组HBeAg表达比较：32例高侵袭组中29例HBeAg检测阳性,阳性率为90．62％,28例低侵袭组中19例HBeAg检测阳性,阳性率为67．86％,（P〈0．05）。结论：早期肝癌患者血清HBVDNA和HBeAg可作为肝细胞癌复发转移监测指标。     

原发性肝癌者外周血AFP mRNA的表达及其动态和意义

目的探讨AFP mRNA在原发性肝癌患者外周血的表达及其动态变化和临床意义.方法用巢式逆转录聚合酶链反应检测93例肝癌患者外周血AFP mRNA,并观察其中36例患者血AFP mRNA表达在治疗前后的动态变化.结果血AFP mRNA阳性率为52.7%(49/93),阳性率与肝癌临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、癌灶大小、HBV感染和肝硬化程度密切相关,并和癌组织中AFP mRNA的表达水平密切相关(P＜0.05).随访结果显示,外周血AFP mRNA呈阳性的病例发生肝内外转移率显著高于阴性病例,癌灶缓解期明显短于阴性病例(P均＜0.05).联合全身化疗和免疫治疗可显著降低肝癌患者外周血AFP mRNA的阳性率.结论外周血AFP mRNA阳性表达是预示肝癌发生肝内外转移的重要标志.联合全身化学免疫治疗可显著降低血AFP mRNA阳性率,对预防肝癌细胞的血行播散、降低肝内外转移率和提高患者预后可能有积极作用.     

CK20mRNA和hTERTmRNA表达与胃癌患者外周血微转移的研究

目的:检测胃癌患者外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,探讨其能否作为判断外周血微转移及预后的分子生物学指标.方法:采用RT-PCR技术检测40例胃癌患者、19例胃良性病变患者和20例健康体检者外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA定性和半定量表达.结果:1)CK20mRNA和hTERTmRNA在胃癌患者中阳性率分别为52.50%(21/40)和65.00%(26/40),相对系数分别为0.81±0.17和0.78+0.17;在胃良性病变患者阳性率均为5.26%(1/19),相对系数分别为0.12和0.11;在健康体检者中均为0.胃癌患者与胃良性病变患者、健康体检者相比,两项指标均有统计学差异(P＜0.01).2)CK20mRNA、hTERTmRNA阳性率和相对系数与临床分期、淋巴结转移、远处转移均有关(P＜0.05),阳性者生存率低于阴性者(P＜0.05).3)CK20 mRNA、hTERT mRNA与CEA、CA199表达呈正相关(P＜0.05),其阳性率高于CA199(P＜0.05).结论:胃癌患者外周血中存在CK20mRNA和hTERTmRNA表达,与临床分期及患者生存密切相关,提示两项指标能预测外周血微转移和判断预后,其诊断外周血微转移优于CAl99.     

胃肠道癌外周血CEA-mRNA的表达及临床意义

目的　通过检测手术前、后胃肠道癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸 (CEA mRNA)的表达 ,了解胃肠道癌血行播散转移情况及在围手术期综合治疗中的意义。方法　采用巢式逆转录 聚合酶链式反应 (Nest RT PCR)检测 6 2例胃肠道癌患者和 2 2例对照组外周血CEA mRNA的表达状况。结果　 6 2例癌患者样本中 ,术前 2 7例 (43.5 % )外周血CEA mRNA检测阳性 ,术后 2 6例阳性 (41.9% ) ,对照组 10例正常人及 12例良性胃肠病患者CEA mRNA测定均为阴性。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CEA mRNA阳性率依次为 37.5 %、2 7.3%、5 1.9%、80 .0 % ,各期间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Ⅰ +Ⅱ期与Ⅲ +Ⅳ期合并 ,两组患者间CEA mRNA的表达有显著性差异 (P <0 .0 5 )。胃肠道癌的分化程度及癌栓的形成与外周血CEA mRNA的表达无关。 35例伴局部淋巴结转移的患者的外周血CEA mRNA阳性率 (6 2 .9% )与 2 7例无淋巴结转移患者的阳性率 (18.5 % )有显著性差异 (P <0 .0 1)。手术前后外周血CEA mRNA阳性率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　外周血CEA mRNA检测可作为胃肠道癌复发、转移及预后的判断指标 ,对临床正确分期及综合治疗起指导作用。外周血CEA mRNA表达阳性的患者 ,应在围手术期辅以免疫治疗和 /或全身化疗 ,以遏止肿瘤复发、     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性白蛋白mRNA的检测及意义

目的：寻找一敏感的方法以发现循环中的肝癌细胞。方法：巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测外周血有核细胞成分中白蛋白（ＡＬＢ）ｍＲＮＡ。结果：３０例肝癌中１７全检出ＡＬＢｍＲＮＡ,阳性率５６．６％,其中１０例证实有转移的全部阳性。５例急性肝炎中的１例和９例慢性活动性肝炎中的１例可检出ＡＬＢｍＲＮＡ。肝硬化、肝转移癌患者、良性肝肿瘤和健康对照组均为阴性。外周血细胞ＡＬＢｍＲＮＡ的存在与肝癌的远处器官转移密切相关。结论     

肝组织和外周血中AFPmRNA定量分析及临床应用的研究

目的 :通过检测AFPmRNA在肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)患者肝组织和外周血中的基因表达 ,探讨AFPmRNA相对定量值作为HCC微转移指标的可能性 ,建立HCCAFPmRNA相对定量分析法。方法 :建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系 (Nested RT PCR) ,对肝组织和外周血中的AFPmRNA进行相对定量值分析。结果 :在 49例HCC及其癌旁和远癌组织、12例非肝肿瘤组织和 8例正常肝组织中AFPmRNA相对定量值阳性分别为 3 5例 ( 71 4% )、2 0例 ( 4 0 8% )、3例 ( 6 1% )、0例、0例 ;3 5例肝癌患者中有2 3例术前外周血AFPmRNA相对定量值为阳性 ( 65 7% ) ,明显高于肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎患者和正常人外周血 ;HCC患者外周血术后 72hAFPmRNA相对定量值的阳性率 2 2 9% ( 8/3 5 ) ,与术前比较差异有统计学意义 ,P <0 0 1。结论 :肝组织和外周血中AFPmRNA相对定量分析可提高HCC阳性诊断率 ,并可作为HCC微转移的早期检测指标。治疗前后的变化对指导临床治疗及评价HCC治疗效果有重要参考价值     

肝癌患者外周血AFP mRNA检测的临床追踪观察

采用逆转录及巢式聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法对肝癌患者的早期血行微转移灶进行检测并做临床随访观察。１０例原发性肝癌患者（ＨＣＣ），经手术切除的癌组织，检测ＡＦＰｍＲＮＡ均为阳性。３９例ＨＣＣ患者中有２４例外周血检测为阳性，阳性率６１．５％。１ａ时间随访到２８例患者，９例阴性结果的病人，１例死亡，死亡率为１１．０％。３例临床证实有转移灶。１９例阳性结果的病人，９例死亡，死亡率为４７．３％，４例临床证实有转移灶。ＲＴＰＣＲ结果不同的两组经卡方检验，Ｐ＜０．０１，患者预后也有明显的差异。检测ＨＣＣ患者外周血中癌细胞是阳性结果，可以说明癌细胞已进入血循环。随访结果显示ＨＣＣ患者外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ检测呈阳性则同患者出现血行微转移灶及预后有一定的相关性，可以给临床提供一个肿瘤有远处转移的参考指标。     

肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白mRNA的检测及意义

目的：探讨肝细胞癌患者外周血中微小转移及其临床意义。方法：用巢式逆转录聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测６５例肝细胞癌、２１例非肝癌的恶性肿瘤、２２例慢性乙型肝炎或肝硬化患者及２１例健康志愿者外周静脉血中的甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍＲＮＡ。结果： ＡＦＰ－ｍＲＮＡ在健康志愿者、非肝癌恶性肿瘤患者外周血中均为阴性;在肝细胞癌组外周血中ＡＦＰ－ｍＲＮＡ的检出率（６７．７％,４４／６５）明显高于慢性乙型肝炎或肝硬化组（９．１％,２／２２,Ｐ＜０．０１）。ＡＦＰ－ｍＲＮＡ检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移显著相关。经１年的随访发现治疗后外周血ＡＦＰ－ｍＲＮＡ阳性与肝癌患者预后有显著相关。在１２例血清ＡＦＰ＜２５μｇ／Ｌ的肝癌病人血中,７例（５８． ３％）可检出ＡＦＰ－ｍＲＮＡ。结论： ＡＦＰ－ｍＲＮＡ可作为血循环中有肝癌细胞或肝细胞的标志物,在肝癌患者,阳性预示有血源性转移的可能,可作为预测肝癌复发、转移的参考指标;并且ＡＦＰ－ｍＲＮＡ对血清ＡＦＰ阴性或低值的肝癌患者能起到补充诊断作用。     

人乳腺癌外周血中hMAM mRNA表达及临床意义

目的：研究人乳腺癌外周血珠蛋白（hMAM）mRNA表达及临床意义。方法：应用nested-RT-PCR技术检测50例乳腺癌外周血hMAM mRNA的表达和化疗前后外周血hMAM mRNA的变化,并取20例乳腺纤维腺瘤、10例健康志愿者作阴性对照。结果：50例乳腺癌外周血hMAM mRNA的阳性表达率为34.0%;20例乳腺纤维腺瘤及10例健康志愿者外周血中均未检出hMAM mRNA的表达。hMAM mRNA的阳性与淋巴结转移状况、肿瘤TNM分期之间差异有统计学意义;50例乳腺癌化疗前检测17例hMAM mRNA阳性,化疗2～3周期后13例hMAM mRNA转为阴性,转阴率76.5%（13/17）,化疗前后差异非常显著（P=0.001）。结论：乳腺癌外周血中hMAM mRNA表达可以反映术后化疗对乳腺癌血液微转移的影响,有望成为乳腺癌血道微转移标志物和一个重要的预后指标。     

组织hTERT基因及GGTmRNA-H亚型与血清AFP对小肝癌早期诊断意义的比较

目的 :研究小肝癌组织中端粒酶逆转录酶hTERT基因及谷氨酰转移酶GGTmRNA H亚型表达 ,通过与小肝癌血清AFP的比较 ,探讨其在小肝癌早期诊断中的意义。方法 :应用RT PCR法检测 65例原发性肝癌患者癌组织hTERT与GGTmRNA H亚型的表达 ,同时通过放免法检测血清AFP阳性表达情况。结果 :在 65例原发性肝癌中 ,癌组织hTERT基因的阳性例数 5 6例 ( 86 2 % ) ,GGTmRNA H亚型的阳性例数为 61例 ( 93 8% ) ,肝组织血清AFP阳性 40例 ( 61 5 % ) ,P <0 0 5 ;hTERT基因在2 0例小肝癌癌组织阳性表达例数为 16例 ,阳性率为 80 0 % ;GGTmRNA H亚型阳性表达例数为 18例 ,阳性率为 90 0 % ;与血清AFP组比较 ,差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :肝癌组织中hTERT基因、GGTmRNA H亚型联合检测可弥补AFP测定的不足 ,对提高肝癌早期诊断具有重要意义。hTERT基因及GGTmRNA H亚型的检测比AFP更敏感、特异性更高 ,有望成为小肝癌早期诊断的理想指标     

外周血AFP mRNA表达与原发性肝癌转移的关系

目的 通过检测手术或介入治疗前后的肝癌患者外周血甲胎蛋白信使核糖核酸（ＡＦＰ ｍＲＮＡ）的表达,了解原发生性肝癌的血行播散情况及肝癌综合治疗的病理生理基础。方法 采用巢式逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测技术,对５４例原发性吕患者外周血样本ＡＦＰｍＲＮＡ的表达进行了研究。结果 ５４例样本中,２６例（４８．１％）ＡＦＰ ｍＲＮＡ阳性,２０例正常人及１０例良性肝病患者分别只有１例阳性。１６例伴     

Hematogenous spreading of hepatocellular carcinoma cells: Possible predictor of recurrence or metastasis

Hepatocellularcarcinoma(HCC)isacommoncancerinChina.AlthoughsomeadvanceshavebeenachievedforthediagnosisandtreatmentofHCCinrecentyears,thelong-termoutcomeforpatientswithHCCremainsverypoor.ThemajorobstacletotheimprovemelltofprognosisforHCCisthehighincidenceofrecurrenceormetastasisafterroutinesurgicaltreatmentorthanscatheterarterialchemoembolization(TACE).Therefore,thepresentstudywasdesignedtoinvestigatethevalueofAFPmRNAasapredictorfortheriskoftumorrecurrenceormetastasis.Inaddition,theef…     

Real-time monitoring of rare circulating hepatocellular carcinoma cells in an orthotopic model by in vivo flow cytometry assesses resection on metastasis

The fate of circulating tumor cells (CTC) is an important determinant of metastasis and recurrence, which leads to most deaths in hepatocellular carcinoma (HCC). Therefore, quantification of CTCs proves to be an emerging tool for diagnosing, stratifying, and monitoring patients with metastatic diseases. In vivo flow cytometry has the capability to monitor the dynamics of fluorescently labeled CTCs continuously and noninvasively. Here, we combine in vivo flow cytometry technique and a GFP-transfected HCC orthotopic metastatic tumor model to monitor CTC dynamics. Our in vivo flow cytometry has approximately 1.8-fold higher sensitivity than whole blood analysis by conventional flow cytometry. We found a significant difference in CTC dynamics between orthotopic and subcutaneous tumor models. We also investigated whether liver resection promotes or restricts hematogenous metastasis in advanced HCC. Our results show that the number of CTCs and early metastases decreases significantly after the resection. The resection prominently restricts hematogenous metastasis and distant metastases. CTC dynamics is correlated with tumor growth in our orthotopic tumor model. The number and size of distant metastases correspond to CTC dynamics. The novel in vivo flow cytometry technique combined with orthotopic tumor models might provide insights to tumor hematogenous metastasis and guidance to cancer therapy.     

肝癌患者外周血中白蛋白mRNA检测及其临床意义

目的 以白蛋白（Ａｌｂ）ｍＲＮＡ作为肝细胞在外周血中的标志物,从而早期出血中的微量肝癌细胞。方法 用ＲＴＰＣＲ方法检测２０例正常人,１０例急、慢性肝炎,１０例肝硬化患者及３９例原发性肝癌（ＨＣＣ）患者外周血中的白蛋白ｍＲＮＡ。结果 ３９例原发性肝癌（ＨＣＣ）患者中有１２例呈阳性,其中８例经临床证实为有转移的患者中,６例Ａｌｂ ｍＲＮＡ为阳性,阳性率为７５．０％,其它３１例临床上没有明显转移的患者中