胃癌单抗-人血清白蛋白-丝裂霉素C结合物的制备及其细胞毒特征

<正> 丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)为一抗生素类抗癌药物,多用于粒细胞性白血病及胃癌、结肠癌等实体瘤的治疗。由于其细胞毒作用选择性不强,常出现骨髓抑制及胃肠道反应等现象。克服这一严重缺点的方法是将它与针对肿瘤组织的单克隆抗体相连接以对肿瘤组织实行导向治疗。我们选     

肝癌单抗—蓖麻毒素A链结合物的制备及其细胞毒性质

本文应用异型双功能基化合物SPDP与单克隆抗体反应,产生单克隆抗体-PDP,然后再与暴露巯基的RTA结合,制备肝癌单抗-RTA结合物。ELISA及毒素重组试验鉴定表明:结合物在10~(-9)mol/L浓度时与靶细胞仍有较好的结合能力,结合物中RTA保持良好活力。体外细胞毒结果表明:结合物对靶细胞具有良好的导向杀伤作用,在10~(-9)mol/L浓度时对人肝癌细胞株BEL7404的杀伤率为41.2％,对正常细胞SL_7的杀伤力很弱。     

胃癌单克隆抗体-柔红霉素结合物的制备及其细胞毒作用

柔红霉素(Daunomycin,DNR)是一广谱抗癌药物,由于其对心肌、骨髓等正常组织有毒性作用而常常发生严重的毒副反应,致使临床应用受到很大的限制。本文用葡聚糖作为中间载体,将DNR和胃癌单克隆抗体MG_7联接制备成一种免疫抗癌药,发现其中的单抗MG_7对胃癌细胞具有选择性作用,结合物中的DNR也具有抗肿瘤效应。 一、单克隆抗体的纯化 将含有抗胃癌单克隆抗体MG_7的BALB/c小鼠腹水用50％硫酸铵沉淀、再经DEAE-52离子交换层析、提取物在SDS-PAGE上显示单带,免疫组化证实其     

肝癌组合单抗─阿霉素结合物的体外细胞毒实验

本文为探索克服肿瘤抗原表达异质性对肝癌导向治疗效果影响的可能途径，将本室制备的两种特异性高、亲和力强，针对肝癌细胞膜不同抗原决定簇的单克隆抗体ＨＡｂ１８和ＨＡｂ２５以葡聚糖（Ｄｅｘ）作为连接臂与阿霉素（ＡＤＲ）偶合，制备出ＨＡｂ１８－ＡＤＲ和ＨＡｂ２５－ＡＤＲ结合物，并将二者组合起来联合应用进行体外细胞毒实验，其对靶肿瘤细胞人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的杀伤效应显著强于单用其中任何一种抗体与ＡＤＲ的结合物（Ｐ＜０．０１）．说明组合单抗联合应用是克服肿瘤细胞抗原表达异质性对导向治疗的影响，增加免疫结合物与肿瘤细胞结合位点，提高导向治疗效果的一种有效途径．     

应用新型交联技术制备胃癌单抗—丝裂霉素C结合物

建立一种新型交联方法，使抗癌药物丝裂霉素Ｃ通过中介体定量地、选择性地引入胃癌单抗Ｆｃ段。首先制备丝裂霉素Ｃ活性酯，后者与引入了碘乙酰基团葡聚糖胺反应，得到碘乙酰葡聚糖胺－药物。继而用此物与在Ｆｃ段引入了－ＳＨ的胃癌单抗ＭＧｂ２作用将药物引入抗体Ｆｃ段。获得的免疫结合物抗体结合活性保存９０％以上，在体外对肿瘤靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。在体内，免疫结合物能显著抑制人胃癌移植癌的生长，以ＭＧｂ２（     

应用新型交联技术制备胃癌单抗－丝裂霉素C结合物

建立一种新型交联方法，使抗癌药物丝裂霉素Ｃ通过中介体定量地、选择性地引入胃癌单抗Ｆｃ段。首先制备丝裂霉素Ｃ活性酯，后者与引入了碘乙酰基团葡聚糖胺反应，得到碘乙酰葡聚糖胺－药物。继而用此物与在Ｆｃ段引入了－ＳＨ的胃癌单抗ＭＧｂ２作用将药物引入抗体Ｆｃ段。获得的免疫结合物抗体结合活性保存９０％以上，在体外对肿瘤靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。在体内，免疫结合物能显著抑制人胃癌移植瘤的生长，以ＭＧｂ２（Ｆｃ）－Ｓ－葡聚糖胺－丝裂霉素Ｃ为例，在１ｍｇ／ｋｇ剂量水平，对裸小鼠双侧肾包膜下接种人胃癌移植瘤（ＳＧＣ－７９０１）生长抑制率达７５．８５％，明显强于游离丝裂霉素Ｃ，优于既往报道的结果。     

胃癌单抗与柔红霉素和氨甲喋呤交联物的制备及其细胞毒作用

采用葡聚糖氧化将胃癌单抗(McAb)与抗癌药物柔红霉素(DNR)和氨甲喋呤(MTX)同时交联(McAb-PAD<分别采用噻唑蓝活细胞染色法(MTT 法)及~3H-TR 掺入法检测交联物的细胞毒作用,结果表明两种检测方法敏感性无明显差异,并且证实文联物对肿瘤靶细胞具有较强的选择性杀伤效应。     

肝癌单克隆抗体-柔红霉素结合物的制备及其选择性细胞毒作用的研究

我室研制的HAb18单克隆抗体特异性高,免疫组化肝癌阳性率80％,在荷肝癌裸鼠及肝癌病人体内显像均良好。以HAb18与柔红霉素(DAU)连续制备了HAb18-Dextran-DAU免疫抗癌药物。经检测,H-Ab18-Dex-DAU结合物中抗体仍保持其特异性结合能力,证明制备过程中抗体活性未受到明显损伤;48h细胞毒性试验显示结合     

肝癌单克隆抗体HAb18-氨甲喋呤结合物的制备及其细胞毒作用的研究

本文报道肝癌单抗HAb18与氨甲喋呤结合物的制备方法及其选择性细胞毒作用。结果表明,在交联过程中,抗体与药物活性均较好保存,交联物对人肝癌靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。     

刀豆凝集素单克隆抗体特性分析和初步应用

建立了一株能分泌抗刀豆凝集素(ConA)单克隆抗体(McAb)的细胞株-CA2。ELISA证实所得 CA2 McAb仅与 ConA有反应,而与菜豆凝集素(PHA)、美洲商陆(PWM)、花生凝集素(PNA)、扁豆凝集素(LcA)以及牛血清白蛋白(BSA)都无交叉反应。免疫印迹试验进一步证实该McAb 只能与 ConA 形成免疫沉淀线。该McAb 能抑制 ConA对RLc-802细胞的凝集作用,竞争抑制试验显示α-甲基甘露糖、果糖不能抑制 CA2 McAb与 ConA 的结合,提示它可能是针对 ConA蛋白结合点部位抗原决定簇的 McAb。应用该McAb证实了急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt_4、CEM和B淋巴母细胞CCRF-sb以及转化的扁桃腺淋巴细胞表面膜存在有分子量大小不同的 ConA受体,提示同是ConA受体,可能具有不同的生物学功能。     

抗AFP抗体—蓖麻毒素A链偶联物对靶细胞AH66的体外杀伤效应

本文应用流式细胞仪(FACStar~(PIns))的荧光分析技术,去检测与比较羊抗大鼠甲胎蛋白抗体(αAFP)与蓖麻毒蛋白A链(RTA)偶联物(αAFP-RTA)、RTA及αAFP和BTA的混和物(αAFP+RTA)对大鼠腹水型肝癌细胞AH66的体外杀伤作用。其αAFP-RTA、RTA和αAFP+RTA的剂量均以RTA的克分子浓度计算,致死50％靶细胞的浓度(IC_(50))分别为6×10~(-9.6)mol/L、6×10~(-8.4)mol/L、6×10~(-8.2)mol/L。αAFP-RTA与RTA的IC_(50)之比为1:12,αAFP-RTA与αAFP+RTA的IC_(50)之比为1∶14。相当于αAFP-RTA中抗体量的αAFP对AH66细胞不显示杀伤作用。实验证明,αAFP-RTA有明显的导向杀伤靶细胞的效应。上述实验结果与以台盼蓝除外试验所获得的结果基本一致。     

胃癌单克隆抗体-羟基喜树碱免疫偶合物的制备及其细胞毒特征

采用共价交联法将胃癌单克隆抗体RSF_9与羟基喜树碱进行交联,交联物中每分子抗体可引入13±4.2分子的药物,而抗体活性保持85％以上。体外细胞毒试验显示交联物RSF_9-HCPT对胃癌细胞的杀伤是游离药物的4.7倍,而对非靶细胞的杀伤只有游离药物的1/11,表明交联物对胃癌靶细胞具较强的选择性杀伤作用。     

几株抗血吸虫单克隆抗体细胞株的建立与特性鉴定

为了对血吸虫病的免疫诊断和免疫预防提供有价值的单克隆抗体,通过2次骨髓瘤细胞与感染日本血吸虫的小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立了4株分泌单克隆抗体的细胞株。其中2株的靶抗原为血吸虫成虫肠道;1株为成虫表面膜;另一株为成虫的肌细胞或纤维细胞。免疫球蛋白亚类鉴定表明前3株均为IgG_1。除了SM 48-2对虫卵呈弱反应外,未见对血吸虫虫卵、尾蚴、童虫有阳性反应;亦未见对曼氏血吸虫、肺吸虫、华枝睾吸虫、疟原虫及利什曼原虫有阳性反应。这几株细胞已在体外培养下稳定地分泌特异性抗体达6个月之久。     

抗人纤维蛋白原单克隆抗体生物特性研究的初步报告

扰人纤维蛋白原单克隆抗体是研究血栓形成、纤维蛋白溶解、以及纤维蛋白原结构和功能关系的有用工具。近年来,国外已制备了有关的单克隆抗体,并开展了研究工作。我们于1985年开展了抗体纤维蛋白原单克隆抗体的研制工作,现已成功地得到了一组抗人纤维蛋白原单克隆抗体(命名为HIF)。本文仅就HIF的特异性及其对血液凝固功能的影响作一初步报告。     

抗人B细胞MAb-737与蓖麻毒蛋白偶联物对肿瘤细胞选择性杀伤

具有针对B细胞类Ia抗原特异反应性MAb-737与蓖麻毒蛋白通过二硫键连接成免疫毒素ricin-737。体外0.1M乳糖存在时,此免疫毒素对含B细胞抗原的Burkitt氏淋巴瘤细胞系Raji细胞表现出选择性地强力杀伤,半数杀伤浓度(IC_(50))为5×10~(-11)M。同样条件,对不含靶抗原的对照细胞K_(562)没有显著杀伤,IC_(50)为10~(-3)M,毒性比前者低500倍。游离毒蛋白IC_(50)为5×10~(-3)M,比免疫毒素毒性低1000倍。动力学研究表明,免疫毒素作用1小时就可抑制靶细胞的增殖,并随处理时间延长,杀伤更趋显著。结果提示,免疫毒素ricin-737具有强烈地选择性杀伤靶细胞能力,可成为肿瘤治疗的候选药物。     

胃癌RUNX3表达对凋亡与增殖细胞转换的影响及其预后价值

目的探讨胃癌RUNX3基因表达对细胞凋亡与增殖细胞转换[凋亡率与增殖率之比值(AI/PI)]的影响及其与胃癌预后的关系。方法应用免疫组织化学分析RUNX3基因的表达;应用流式细胞术分析胃癌细胞的凋亡率和增殖率;采用Kaplan-Meier限乘法计算生存率。结果在60例胃癌中RUNX3基因的阳性表达率为46.7%。胃癌细胞RUNX3基因表达与淋巴转移和远处转移有关(P<0.05)。胃癌细胞的AI/PI经频数分布表分析和检验均服从正态分布。胃癌细胞AI/PI范围显示为0.05~0.46,胃癌细胞AI/PI与淋巴转移和远处转移有关(P<0.05)。胃癌细胞中RUNX3和AI/PI的表达之间存在明显相关关系(r=0.39,P<0.05)。用Kaplan-Meier生存曲线经Logr-ank检验发现,RUNX3的阳性表达与生存相关(P<0.05)。结论RUNX3基因可能通过影响凋亡与增殖细胞转换而影响胃癌的发生发展;RUNX3基因检测可作为胃癌临床病理学特点和预后的指标。     

依赖于环腺苷酸蛋白激酶的单克隆抗体制备及其在正常和恶性细胞内的免疫细胞化学定位观察

用依赖于环腺苷酸(cAMP)的蛋白激酶(蛋白激酶A,PKA)免疫LOU/C大鼠,分离出脾细胞与大鼠骨髓瘤细胞系IR 983 F融合,经HAT培养液筛选和ELISA检测,获得1株分泌抗PKA单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系B5 A8。免疫扩散实验表明,该单克隆抗体亚类为IgG_1。免疫印迹实验显示,此单克隆抗体可识别蛋白激酶A的52～56 kd多肽。利用经亲和层析法纯化的单克隆抗体,采用免疫荧光细胞化学方法检测人正常成纤维细胞、人胃癌细胞系和小鼠艾氏腹水癌细胞内的蛋白激酶A定位,结果显示蛋白激酶A主要定位于细胞质,与细胞骨架的分布一致。同步化的胃癌细胞系蟹白激酶A在G_2期进入胞核,经外源性cAMP处理后的胃癌细胞蛋白激酶A向核周围积聚。本文对蛋白激酶A在细胞内分布的变化进行了讨论。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体重链可变区DNA的克隆及序列分析

作者从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单抗的杂交瘤细胞１Ａ１２／４Ｄ５中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ。用合成的寡核苷酸引物从中扩增了抗体的重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑取两个阳性克隆进行核苷酸序列分析，见所克隆基因确可编码小鼠抗体的重链可变区。     

人胃癌细胞系和成纤维细胞的COn A受体分布的变异

本文采用 Con A-过氧化物酶光镜和电镜细胞化学方法观察了体外培养的人胃癌细胞(MGC80-3)和成纤维细胞质膜的 Con A 受体分布特点,未经固定的 MGC80-3细胞,Con A 受体复合物呈斑块样不规则分布,而成纤维细胞呈均匀弥散分布。本文还观察了细胞不同的周期时相和生长状态,以及不同的外界因素影响下 Con A 受体复合物的分布变异特点,并对 Con A 受体复合物在胃癌细胞质膜上不规则分布的原因进行了讨论。