人正常腹膜间皮细胞原代培养方法

目的探讨人正常腹膜间皮细胞原代培养方法。方法以胰酶和乙二胺四乙酸磁性搅拌分离人正常腹膜间皮细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态结构和大体生长过程,Calretinin免疫荧光染色鉴定间皮细胞,初步观察传代细胞的贴壁生长情况。结果培养第4天细胞贴壁良好,第15天呈铺路石状、生长良好,1个月时细胞密集铺满皿壁;腹膜间皮细胞Calretinin表达都呈阳性;传代腹膜间皮细胞数量显著减少。结论磁性搅拌酶分离培养可得到数量多、纯度高的原代人正常腹膜间皮细胞,能够满足一般实验要求。     

腹膜透析液生物相容性与腹膜间皮细胞

腹膜间皮细胞是腹腔最大的细胞群落,有着十分重要的生理功能。腹膜透析液具有生物不相容性,它通过ＰＨ值,缓冲剂、渗透压、葡萄糖及其降解产物等对间皮细胞及腹膜产生损害,从而影响腹腔局部防御功能并导致腹膜结构的改变。了解各种腹膜透析液生物不相容性的机理,对于改善透析液、保护长期透析时间皮细胞及腹膜功能具有十分重要的意义。     

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌离子（Zn）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）凋亡的影响,从而为锌离子在腹透相关腹膜炎中的应用提供理论基础.方法：胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：（1）对照组; （2） LPS组; （3） ZnSO4组; （4） ZnSO4/LPS组.应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测P-Akt,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3（caspase3）,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶8（caspase8）蛋白表达;酶联免疫吸附方法（ELISA）检测上清液TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL的表达.结果：与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（caspase3,caspase8）表达升高.与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（caspase3,caspase8）表达明显降低.LPS组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL浓度显著高于对照组;ZnSO4作用组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和sFasL浓度显著低于LPS组.与LPS组相比,ZnSO4作用组P-Akt的表达明显升高.结论：ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路而发挥作用.     

川芎嗪对慢性腹膜透析大鼠腹膜功能及间皮细胞形态的影响

目的 探讨不同剂量的川芎嗪对高糖透析液作用下慢性大鼠腹膜透析（腹透）模型腹膜间皮细胞的形态和功能的影响及它们之间的关系。方法 ４０只ＳＤ大鼠随机分为４．２５％腹透液（ＨＧ组）、４．２５％腹透液＋４０ｍｇ／Ｌ川芎嗪（ＨＧＬ组）、４．２５％腹透液＋１６０ｍｇ／Ｌ川芎嗪（ＨＧＨ组）、对照组。除对照组外,余３组每天分别腹腔内注入２０ｍｌ含不同剂量川芎嗪的４．２５％透析液［０（ＨＧ）、４０ｍｇ／Ｌ（ＨＧＬ）     

腹膜透析液生物相容性与腹膜间皮细胞

腹膜间皮细胞是腹腔最大的细胞群落 ,有着十分重要的生理功能。腹膜透析液具有生物不相容性 ,它通过pH值、缓冲剂、渗透压、葡萄糖及其降解产物等对间皮细胞及腹膜产生损害 ,从而影响腹腔局部防御功能并导致腹膜结构的改变。了解各种腹膜透析液生物不相容性的机理 ,对于改善透析液、保护长期透析时间皮细胞及腹膜功能具有十分重要的意义。     

参麦注射液对5/6肾切除大鼠腹膜间皮细胞的保护作用研究

目的：探讨参麦注射液对5／6肾切除大鼠腹膜间皮细胞的保护作用。方法：利用5／6肾切除造成大鼠肾衰竭模型，使用光学和电子显微镜观测参麦注射液腹膜透析后腹膜间皮细胞形态结构的变化，同时观测膜透液中C3和IgG含量。结果：参麦注射液具有促进受损的腹膜间皮细胞修复和再生，提高肾衰竭大鼠腹腔免疫功能的作用。结论：参麦注射液具有保护5／6肾切除大鼠腹膜间皮细胞的作用，这种保护作用与增强腹腔局部防御功能有关。     

参芎注射液对大鼠腹膜间皮细胞紧密连接的影响

目的:观察高糖腹膜透析液和添加参芎注射液的腹膜透析液对腹膜间皮细胞(PMC)紧密连接形态结构和紧密连接相关蛋白封闭蛋白-1(ZO-1)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组和参芎注射液低剂量、高剂量干预组,4周后检测4组SD大鼠的腹透超滤量、腹膜转运功能。并应用光镜、透射电镜和免疫组织化学染色法观察各组的腹膜厚度,紧密连接结构的改变和ZO-1蛋白水平表达的变化。结果:各组之间比较超滤量、D/Pcr、D4/D0、腹膜厚度及ZO-1表达率差异均有统计学意义(P<0.05),腹透液中添加参芎注射液能改善大鼠的腹透超滤量,减轻腹膜的增厚,改善腹膜的转运功能,且高剂量干预组优于低剂量干预组(P<0.05)。结论:高糖腹膜透析液可引起PMC的损伤,影响紧密连接和ZO-1的表达,参芎对PMC及其紧密连接等结构有一定的保护作用。     

间皮细胞在CAPD患者宿主腹膜防御中的作用

ＣＡＰＤ诱发腹膜炎是临床常见并发症，间皮细胞作为构成腹膜的主要细胞群体，在腹膜炎症时直接与细胞接触。本文针对间皮细胞参与腹膜炎症的活化、直接抗菌防御及通过抗原提呈参与腹膜抗感染免疫等功能作一综述。阐明间皮细胞在ＣＡＰＤ患者宿主腹膜防御中的作用。     

川芎嗪抗腹膜间皮细胞损伤的实验研究

目的：观察含川芎嗪腹透液体外对腹膜间皮细胞活力,细胞增殖的影响。方法：分离,培养大鼠腹膜间皮细胞,用细胞计数法,四唑氨蓝（MTT）法,乳酸脱氢酶（LDH）法检测腹膜间皮细胞活力,细胞增殖能力。结果：培养的腹膜间皮细胞暴露于常规使用的4．25％高糖透析液30min后,间皮细胞数量显降低,MTT法示OD值显低于正常对照组,LDH释放增加,提示间皮细胞活力降低,增殖受到显抑制,加入低剂量川芎嗪后,间皮细胞数,MTTOD值较之单纯高糖透析液组均显增高,LDH显降低,但随着剂量的加大,川芎嗪的上述作用减低乃至消失,结论：适当剂量的川芎嗪能对抗常规腹透液引起的间皮细胞抑制和损伤,从而具有保护间皮细胞的作用。     

肾疏宁对体外培养大鼠腹膜间皮细胞AQP1表达的影响

目的：探讨肾疏宁对体外培养大鼠腹膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响。方法：原代培养大鼠腹膜间皮细胞、鉴定后传至第3代后分为5组：空白血清组、1.5%腹膜透析液组、4.25%腹膜透析液组、1.5%腹膜透析液＋肾疏宁含药血清组、4.25%腹膜透析液＋肾疏宁含药血清组。分别采用ELISA酶联免疫法、荧光定量PCR检测水通道蛋白1的表达。结果：1.5%PDS组、4.25%PDS组、1.5PDS%＋肾疏宁含药血清组、4.25%PDS＋肾疏宁含药血清组各组均与空白血清组比较AQP1表达指数均增高（P〈0.05）。结论：证明肾疏宁含药血清有上调体外培养大鼠腹膜间皮细胞上水通道蛋白1的表达的作用。     

细胞周期抑制蛋白p27在慢性腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞肥大中的作用

目的探讨含糖腹膜透析(腹透)液作用下慢性腹透大鼠模型腹膜间皮细胞的形态与p27表达的关系.方法 30只SD大鼠随机分为4.25%腹透液组(高糖组)、林格氏液组(林格组)和对照组3组8周后进行细胞印片,并用IBAS 2.0图像分析系统进行形态学分析,免疫组织化学方法检测p27表达水平.结果与对照组和林格组相比,高糖组细胞密度显著减少(P＜0.01),表面积明显增大(P＜0.01)与对照组(22 4±0.99)和林格组(2.52±1.25)相比,高糖组间皮细胞p27的表达显著增多(1O.43±3.78,P＜0.01).腹膜间皮细胞p27的表达上调与高糖诱导的间皮细胞的肥大呈显著的正州关(r=0.998,P＜0.O1).结论 D27的表达上调可能是长期腹膜透析高糖诱导间皮细胞肥大的可能机制之一.     

糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞原代培养方法的改良

目的探寻一种简便、高效的糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞体外原代培养的方法,建立长久稳定的体外糖尿病血管平滑肌细胞模型,为研究糖尿病血管慢性病变奠定基础。方法采用链脲佐菌素腹腔注射加高脂高糖饲养自制糖尿病Wister大鼠模型20只,采用改良酶消化法体外培养主动脉平滑肌细胞。结果成功建立糖尿病大鼠模型,用改良酶消化法体外培养的血管平滑肌细胞传代生长快,细胞存活率达96％,能满足进行体外细胞实验要求。结论与传统方法相比,改良酶消化法简单、经济、成活率高。     

高糖对大鼠腹膜间皮细胞中P21WAF1基因表达的影响

目的研究细胞周期调控蛋白p21WAF1在高糖对腹膜间皮细胞增殖抑制中的作用.方法用流式细胞仪技术及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠腹膜间皮细胞细胞周期分布和p21WAF1mRNA表达的影响.结果在高糖的培养条件下,大鼠腹膜间皮细胞出现细胞肥大,胞核增多,细胞分裂停止,且大多数间皮细胞的细胞周期停滞于G1期.在静止期的间皮细胞几乎无p21WAF1mRNA的表达,在高浓度葡萄糖刺激下p21WAF1mRNA明显增加,且随着浓度增高而表达增高,且含糖浓度为3.86%时p21wAF1的表达比含糖为1.38%时明显增高(P＜0.05).在和含糖浓度为3.86%、1.38%组渗透压相同的甘露醇组也几乎无p21wAF1mRNA的表达.结论p21wAF1可能在高糖对间皮细胞的抑制作用及G1期阻滞中起重要的调节作用.     

腹膜透析液对腹膜间皮细胞凋亡与增殖的影响

目的　探讨PD 2腹膜透析液 (腹透液 )在体内对腹膜间皮细胞凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法　在正常二级SD大鼠上建立腹膜透析模型 ,用不同浓度的PD 2腹透液灌注腹腔 ,二次 /天 ,2 0ml/次 ,生理盐水作对照。透析第 8周后杀检 ,取腹膜用LSABkit和TUNELkit作免疫 凋亡双重染色。结果　腹透液显著诱导腹膜间皮细胞凋亡 ,以高渗糖腹透液尤为显著 ,不同浓度腹透液对PCNA影响则不同 ,透析液诱导的凋亡与PCNA表达之间无相关性 ,但与腹透液浓度正相关 ,PCNA表达则与腹透液浓度负相关。结论　腹透液可诱导腹膜间皮细胞凋亡 ,并影响PCNA表达 ,其作用与腹透液浓度不同而异。     

大鼠海马神经元的体外原代培养

细胞镇痛是生物镇痛的主要方法，以前曾将研究主要集中于能分泌镇痛物质的嗜铬细胞，但微囊化的嗜铬细胞仍无法完全避免免疫反应，神经元细胞是大脑中枢的主要细胞之一，其作为镇痛细胞移植人大脑可以减少以往的体细胞移植所带来的免疫反应。本试验旨在探索大鼠海马神经元的培养过程，观察细胞的生长情况，为转基因的时机提供依据。     

人腹膜间皮细胞中UTB表达的研究

目的：研究人腹膜间皮细胞（HPMC）中尿素转运蛋白（UTB）的表达。方法：收集患者腹膜透析液,采用细胞悬液分离HPMC,并进行HPMC原代及传代培养;免疫组化法鉴定体外培养细胞;抽提HPMCRNA,RT-PCR法扩增基因片段,以人肾髓质为对照,对扩增产物进行测序分析。结果：HE染色及免疫组化鉴定细胞角蛋白和波形蛋白染色均为阳性,细胞第Ⅷ因子相关抗原及白细胞CD45抗原染色均呈阴性,证实培养细胞为HPMC,纯度可达96%以上,RT-PCR扩增产物经电泳检测与预期结果相符243bp,扩增产物测序结果与UTB序列比较结果一致。结论：HPMC中存在UTB表达,本研究有助于进一步了解腹膜透析超滤不充分的机制,为其临床防治提供依据。     

异丙酚对原代培养大鼠心肌细胞的毒性作用

异丙酚对在体心血管系统有一定的抑制作用 ,本研究采用原代培养大鼠心肌细胞模型 ,以观察其对离体大鼠心肌细胞的毒性作用。材料与方法心肌细胞的制备与培养[1] 取 2～ 3日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,雌雄兼用 ,断颈法处死后无菌条件下摘取心室 ,剪成 1ｍｍ3左右碎块。依次用 0 1%、0 2 %胰蛋白酶磷酸盐缓冲液和 0 0 1%胶原酶磷酸盐缓冲液消化分散细胞 ,弃去前两次细胞悬液 ,将后 5次细胞悬液离心后弃去上清液 ,将沉淀物合并混悬于 10ｍｌＥａｇｌｅＭＥＭ培养基中 ,以每孔 1× 10 6细胞的密度接种于含 10 %小牛血清及青霉素 10 0ｕ/ｍｌ的Ｅａ…     

高糖对人腹膜间皮细胞整合素表达的影响

目的:研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)整合素表达的影响,探讨腹膜透析中腹膜间皮细胞层完整性损伤的机制.方法:采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为研究对象.观察高浓度葡萄糖对HPMC细胞膜表面整合素表达及基质黏附性的改变,并采用免疫荧光技术观察高糖对细胞Actin微丝骨架的影响.结果:(1)高糖致细胞脱落呈时间依赖效应;(2)高糖引起细胞膜上β1整合素的表达明显减低;(3)高糖使Actin微丝骨架解体;(4)高渗透压组未见上述效应.结论:高糖使β1整合素表达下降,微丝骨架解体,从而损害细胞-基质间黏附的形成,造成腹膜间皮完整性的损害.     

生脉液拮抗乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞的损伤

目的研究生脉液对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响.方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并建立体外人腹膜间皮细胞(HPMC)培养模型.以四甲基偶氮多胍(MTT)法测定HPMC增殖程度,采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平示细胞损伤程度.以不同内容的培养液及不同时间进行观察,分为单纯培养液对照、不同浓度葡萄糖L-PDS、不同浓度生脉液加L-PDS.结果与单纯培养液对照组相比,L-PDS致HPMC培养液中LDH水平明显增高,并显著降低MTT渗入量(P＜0.01);而3种浓度(1.5%、2.5%和4.25%)葡萄糖腹膜透析液(腹透液)间差异无显著性意义.在与2.5%L-PDS作用45 min后,1 mg/ml浓度的生脉液能显著降低LDH水平[(7.21±1.32)U/L对(15.87±4.16)U/L,P＜0.05],提高MTI渗入量(吸光度A值0.201±0.053对0.123±0.036,P＜0.01);而100μg/ml浓度生脉液只能显著降低LDH水平[(8.16±2.05)U/L对(15.87±4.16)U/L,P＜0.001],对MTT渗入量无明显改变.上述作用240 min后,两种浓度生脉液引起LDH水平及MTI渗入量的变化差异均无显著性意义.结论生脉液能拮抗乳酸盐腹透液对HPMC的损伤及抑制作用.     

神经酰胺在葡萄糖腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞凋亡中的作用

目的 观察葡萄糖腹膜透析液(PDS)对人腹膜间皮细胞(PMC)凋亡的影响和细胞内神经酰胺在PMC凋亡中的作用,初步探讨神经酰胺信号通路是否参与高浓度PDS诱导的PMC凋亡.方法 PMC分别在正常对照、1.5％ PDS、4.25％ PDS条件下培养,以4.25％甘露醇作为高渗对照.高压液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)检测细胞内神经酰胺的变化.Annexin - FITC- PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.Western印迹法检测bax、p53、bcl-2蛋白表达.结果 (1)PDS可上调PMC细胞内神经酰胺表达,正常对照组、高渗对照组对细胞内神经酰胺均无明显影响.酸性鞘磷脂酶抑制剂地昔帕明可显著抑制高浓度PDS诱导的神经酰胺生成[(56.08±12.24)μg/L比(91.25±15.89) μg/L,P＜0.01].(2)与1.5％ PDS组相比,4.25％PDS可显著诱导PMC细胞凋亡[(26.65±6.21)％比(4.04±1.86)％,P＜0.01],上调bax、p53蛋白表达(P＜0.01),下调bcl-2蛋白表达(P＜0.05).地昔帕明可明显抑制高浓度PDS诱导的PMC细胞凋亡,bax、p53上调以及bcl-2下调(均P＜0.05),外源性神经酰胺则可明显逆转地昔帕明的此类作用(P＜0.05).正常对照组、高渗对照组对细胞内神经酰胺表达及细胞凋亡均无明显影响.结论 细胞内神经酰胺增加可能参与了高浓度PDS诱导的PMC凋亡.