温针灸对膝骨关节炎兔膝关节软骨转化生长因子β1和胰岛素生长因子Ⅰ水平的影响

目的:观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)家兔膝关节软骨转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法:30只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、温针灸组,采用膝关节机械制动法制备KOA模型。温针灸组取患侧内外"膝眼""阳陵泉""血海",温针灸刺激干预4周,每天1次,每次30min。4周后,采用放射免疫分析法测定各组家兔膝关节软骨TGF-β1和IGF-Ⅰ水平,HE染色后光镜下观察膝关节软骨病理形态学变化。结果:模型组兔膝关节软骨细胞TGF-β1、IGF-Ⅰ明显高于正常组(均P0.05);温针灸组膝关节软骨TGF-β1、IGF-Ⅰ表达水平较模型组显著降低(均P0.05)。HE染色结果显示,温针灸组关节软骨中软骨细胞表面较模型组光整,无簇集。结论:温针灸能通过调节KOA膝关节软骨TGF-β1和IGF-Ⅰ的水平,促进关节软骨的修复,缓解并改善膝关节局部炎性症状,起到治疗KOA的作用。     

温针灸对膝骨关节炎SD大鼠软骨中TNF-α和MMP-3的影响

目的观察温针灸对膝骨关节炎SD大鼠行为学以及软骨中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的影响。方法选取SD大鼠90只,随机分为正常组、模型组和针灸组各30只,模型组和针灸组采用关节腔注射木瓜蛋白酶的方法复制右膝关节炎模型。造模成功后,针灸组给予温针灸干预2周,其余2组均不给予干预。干预前及干预2周后对3组大鼠进行Lequesne MG量表评分评估大鼠行为学表现,实验结束时处死所有大鼠,取右膝关节软骨组织,切片染色后观察,并采用放射免疫法检测软骨中TNF-α和MMP-3含量。结果干预2周后,模型组和针灸组大鼠Lequesne MG量表评分均显著低于干预前(P均0.05),且针灸组明显低于模型组(P0.05);针灸组膝关节病理改变明显轻于模型组,软骨中TNF-α和MMP-3含量明显低于模型组(P0.05)。结论温针灸可以改善膝骨关节炎SD大鼠软骨形态,具有改善软骨退变和保护软骨的作用,可能与降低软骨细胞中TNF-α和MMP-3含量有关。     

针刀干预对膝骨关节炎模型兔膝关节软骨应力变化的影响

目的：观察针刀对膝骨关节炎（KOA）兔膝关节软骨退变、膝关节整体应力、关节软骨应力变化以及肿瘤坏死因子-ɑ（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法：将28只兔随机分为空白组、模型组、电针组、针刀组,每组7只。除空白组均进行6周兔左后肢制动,建立兔KOA模型,电针组、针刀组均干预3周。采用苏木精-伊红（HE）法光镜下观察兔软骨病理改变,并评价软骨退变程度;运用有限元技术模拟KOA模型兔膝关节屈曲60°进行检测,观察膝关节整体应力及关节软骨最大应力变化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测滑液中TNF-α、IL-1β表达水平。结果：与空白组比较,模型组Mankin评分升高(P<0.05）,膝关节整体应力、关节软骨最大应力显著降低（P<0.01）,TNF-α、IL-1β水平均显著升高（P<0.01）;干预后,与模型组比较,电针组、针刀组Mankin评分均显著降低(P<0.05),膝关节整体应力、关节软骨最大应力均升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β水平均明显降低(P<0.01）;与电针组比较,针刀组Mankin评分降低(P<0.05),膝关节整体应力和关节软骨最大应力较电针组升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β水平较电针组显著降低(P<0.01）。结论：针刀干预能够调节膝关节整体应力及关节软骨的最大应力,进而恢复膝关节应力环境、抑制炎症介质释放,从而改善关节软骨退变,达到治疗KOA的目的。     

温针灸对兔膝骨性关节炎模型软骨细胞中c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的 观察温针灸治疗兔膝骨性关节炎（KOA）模型软骨中c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路及基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP -13的表达,为温针灸治疗KOA提供现代医学理论支持。方法 40只新西兰大耳兔随机选择30只采用右膝关节伸直位石膏固定制备KOA模型,另10只为正常对照组。固定6周后行X线检查确定造模成功后随机分为温针灸组、双氯芬酸钠组、模型组,每组10只。温针灸组选取足三里、鹤顶、内膝眼穴给予温针灸治疗,每天1次,15 min/次,治疗2周;双氯芬酸钠组按15 mg/kg灌胃,每天1次,治疗2周;模型组及正常对照组不予任何干预,正常饲养。采用免疫组织化学法、RT-PCR、免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测软骨中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达。结果 与正常对照组比较,模型组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）,且温针灸组、双氯芬酸钠组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2 mRNA及蛋白表达较模型组降低（P<0.05）,同时温针灸组MMP-1、MMP-13 mRNA蛋白表达及JNK1、JNK2 mRNA表达较双氯芬酸钠组降低更为明显（P<0.05）。结论 温针灸可抑制KOA软骨细胞中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达,温针灸治疗KOA可能是通过激活JNK信号通路,抑制MMP-1、MMP-13的表达而达到治疗作用。     

艾灸对膝骨关节炎兔软骨Wnt信号通路及血清炎性因子的影响

目的：基于Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路探讨艾灸干预膝骨关节炎（KOA）模型兔的可能作用机制。方法：将24只新西兰兔随机分为正常组、模型组及艾灸组，每组8只。除正常组外，其余2组兔采用右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶水溶液的方法制作KOA模型。造模成功后，艾灸组兔每日予艾条悬灸右膝犊鼻穴20 min，连续治疗21 d ；正常组和模型组正常饲养，不给予任何干预措施。干预结束后次日，各组兔麻醉后心脏采血，采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；取各组兔右膝关节股骨端软骨，采用苏木精-伊红（HE）染色法观察各组兔膝关节软骨的组织形态，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法和实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）法分别测定各组兔膝关节软骨组织中Wnt信号蛋白-3α（Wnt3α）、β-连环蛋白（β-catenin）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）蛋白及mRNA的表达水平，采用免疫组化法检测各组兔膝关节软骨组织中IL-1β、TNF-α的表达，并分析其积分光密度（IOD）。结果：模型组兔血清IL-1β、TNF-α明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组上述指标明显低于模型组（P＜0.05）。与正常组比较，模型组兔膝关节软骨细胞明显变性，软骨组织损伤严重；艾灸组兔膝关节软骨结构较为完整，软骨细胞数目较多且分布较均匀，细胞形态较为正常。模型组兔膝关节软骨组织中Wnt3α、β-catenin、MMP-13蛋白和mRNA相对表达量均明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织中上述指标蛋白和mRNA相对表达量均明显低于模型组（P＜0.05）。模型组兔膝关节软骨组织IL-1β、TNF-α蛋白表达显著高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织上述蛋白表达明显低于模型组（P＜0.05）。结论：艾灸犊鼻穴可下调KOA模型兔血清及软骨组织中炎性因子的表达，有效缓解膝关节软骨组织损伤，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

针刀松解法对膝骨性关节炎兔软骨基质金属蛋白酶-3和Ⅱ型胶原蛋白表达的影响

目的观察针刀松解法对膝骨关节炎(KOA)兔软骨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)的影响,探讨针刀治疗KOA的机制。方法将40只清洁级6月龄健康新西兰兔随机取10只为空白组,剩余30只统一造模,关节制动方法制造KOA模型,造模成功后将30只兔随机分为模型组、针刀组和电针组,每组10只。针刀组以膝关节内外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏、横剥法进行针刀松解,每星期1次,共治疗3次;电针组取阴陵泉、阳陵泉、内膝眼、犊鼻穴,电针频率2~100 Hz,强度为3 m A,每次电针20 min,每星期治疗3次,共治疗3星期。光镜观察软骨形态改变,Western blot法检测膝关节软骨Col-Ⅱ、MMP-3蛋白表达水平。结果 HE染色模型组家兔膝关节滑膜存在不同程度增生、水肿,光镜下见模型组关节软骨呈明显退行性变。电针组和针刀组软骨组织损伤减轻,且有修复趋势。针刀组兔膝关节软骨破坏程度明显减轻。针刀组Col-Ⅱ蛋白表达较模型组明显升高(P0.01);针刀组Col-Ⅱ蛋白表达与电针组比较,差异具有统计学意义(P0.05);模型组Col-Ⅱ蛋白表达水平降低,与其他各组比较差异均有统计学意义(P0.05)。模型组MMP-3蛋白表达较空白组明显升高(P0.01);针刀组MMP-3蛋白表达较空白组降低,但无统计学意义(P0.05);针刀组MMP-3蛋白表达与模型组和电针组比较,差异均具有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论针刀松解治疗KOA兔,能够使软骨MMP-3水平下降,Col-Ⅱ表达水平升高,从而阻抑软骨退变,起到治疗作用。     

基于CircSERPINE2-miR-1271-5P-ERG轴探讨针刀对膝关节骨关节炎兔膝关节软骨细胞凋亡的影响

目的：基于CircSERPINE2-miR-1271-5P-E26特异性转化相关基因（ERG）轴，观察针刀对膝关节骨关节炎（KOA）兔膝关节软骨细胞凋亡的影响，探讨针刀治疗KOA的作用机制。方法：将36只新西兰大白兔随机分成正常组、模型组、针刀组、假针刀组，每组9只。除正常组外，其余3组采用改良Videman法制备KOA模型。造模成功后，针刀组于患侧膝关节股四头肌肌腱、内外侧副韧带附近条索状粘连、结节行针刀干预，假针刀组于针刀组进针点旁侧仅刺入针刀，不做任何操作。均每周1次，共3次。采用Lequesne MG行为学评分于干预前后评估各组兔膝关节损害程度。干预后，采用HE染色法和透射电镜观察各组兔膝关节软骨组织形态和软骨细胞超微结构；TUNEL法检测各组兔膝关节软骨细胞凋亡水平；实时荧光定量PCR法检测各组兔膝关节软骨组织CircSERPINE2、miR-1271-5P、ERG mRNA表达。结果：干预后，与正常组比较，模型组Lequesne MG行为学评分升高（P<0.01）；与模型组和假针刀组比较，针刀组Lequesne MG行为学评分降低（P<0.01）。模型组、假针刀...     

温针灸对兔制动引起的膝骨关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-1和白细胞介素-1β的影响

目的：探讨温针灸对兔膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)和白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)表达的影响。方法30只雄性成年日本大耳白兔采用随机数字表法分为正常组、模型组、治疗组各10只。除正常组外,其余2组兔通过膝关节强迫伸直位制动6周建立膝骨关节炎模型。模型制备成功后2周,治疗组取“内膝眼”“犊鼻”“足三里”“阳陵泉”行温针灸治疗4周;模型组和正常组不予干预。采用放免法检测膝关节软骨IL-1β、MMP-1水平。结果与正常组比较,模型组膝关节软骨 MMP-1水平[(0.37±0.02)ng/mg 比(0.16±0.02)ng/mg]、IL-1β水平[(0.34±0.02)pg/mg比(0.21±0.01)pg/mg]明显升高(P＜0.05);治疗组膝关节软骨MMP-1[(0.28±0.03)ng/mg比(0.37±0.02)ng/mg,F＝258.251]水平、IL-1β水平[(0.31±0.04)pg/mg比(0.34±0.02)pg/mg,F＝127.112]较模型组显著降低(P＜0.01)。结论温针灸可降低兔制动引起的膝骨关节炎膝关节软骨中 MMP-1、IL-1β水平。     

温针灸对膝骨关节炎SD模型大鼠软骨中TNF-α和MMP-3的影响

目的观察温针灸对膝骨关节炎SD大鼠的治疗作用及可能机制。方法选取SD大鼠90只,适应性喂养一周后,随机分为正常组(30只)、模型组(30只)和治疗组(30只)。模型组和治疗组采用关节腔注射木瓜蛋白酶法复制右膝关节炎模型,造模成功后,治疗组给予温针灸,其余两组不做处理;2周后处死大鼠,对所有大鼠的右膝关节软骨组织进行切片染色,并测定软骨中TNF-α和MMP-3含量。结果采用析因分析后发现,正常组评分无变化,而模型组和治疗组评分显著下降(P0.01),且治疗组下降幅度最为明显(P0.01);通过观察大鼠膝关节软骨组织的染色,发现治疗组膝关节病理改变较模型组显著减轻;治疗组SD大鼠软骨中TNF-α和MMP-3含量较模型组显著降低(P0.01)。结论温针灸可以改善膝骨关节炎SD大鼠软骨形态,具有改善软骨退变和保护软骨的作用,其作用机制可能与降低软骨组织中的TNF-α和MMP-3含量有关。     

基于纤溶酶途径介导的软骨细胞外基质损伤机制研究温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理

目的通过观察温针灸干预后膝骨性关节炎(KOA)兔关节软骨尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)因子表达的变化,探索温针灸治疗KOA的作用机制。方法将40只新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、u PA抑制剂组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制备KOA模型,空白组不予处理,模型组每天于兔架上固定15 min,温针灸组予以温针灸治疗,u PA抑制组每两日于关节腔注射u PA抑制剂稀释液1 m L/kg,干预结束后取兔关节软骨行TUNEL、RT-PCR、Western blot检测。结果 TUNEL细胞凋亡检测发现:较空白组,模型组软骨细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组及u PA抑制剂组软骨细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR检测结果发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);Western blot检测发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05) u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);相关性分析显示u PA与MMP-1、MMP-13均由相关关系。结论 (1)温针灸可抑制软骨细胞的过度凋亡;(2)温针灸可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、MMP-13的表达,且可通过抑制u PA的生成进而阻断MMP-1、MMP-13的活化,发挥保护关节软骨最终达到治疗KOA的作用。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子水平及软骨中 Wnt3a.β-catenin 蛋白表达影响的研究

目的:探讨温针灸对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组12只。治疗2周后,比较大鼠滑膜组织TNF-α水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达情况。结果:模型制备前各组大鼠LequesneMG评分差异无统计学意义。模型制备后与正常组比较,模型组、药物组、温针灸组LequesneMG评分均升高(P0.05)。治疗2周后,与正常组比较,模型组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与模型组比较,温针灸组和药物组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与药物组比较,温针灸组LequesneMG评分、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05);滑膜组织TNF-α水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可以降低KOA大鼠滑膜组织TNF-α水平,其机制为抑制软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达,从而达到优于西药的治疗效果,值得在临床上推广应用。     

温针灸对膝骨性关节炎兔软骨及软骨下骨形态学的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨及软骨下骨形态学的影响,探讨温针灸能否减轻关节软骨及软骨下骨的退变从而减缓KOA的发展。方法:40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组及阿仑膦酸钠组,每组10只。采用管型石膏伸直位固定法固定兔右后肢6周制备KOA模型。温针灸组给予"内膝眼""外膝眼"及"鹤顶"温针灸治疗,每次15 min,每日1次,连续4周;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液灌胃(150μg·kg^-1·d^-1),连续4周。治疗结束后对所有新西兰兔膝关节行X线、磁共振成像(MRI)检查。X线结果采用K-L分级法对关节间隙、软骨下骨增生程度进行分级;MRI结果采用Recht分级法对软骨退变程度进行分级,采用WORMS评分法对骨髓水肿程度进行评分;HE染色法观察膝关节软骨组织形态学改变,采用Mankin评分评价软骨退变程度;扫描电镜观察膝关节软骨表面的形态学改变;透射电镜观察膝关节软骨细胞的超微结构。结果:与空白组比较,模型组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显升高(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示模型组软骨缺损严重;透射电镜显示模型组软骨细胞变性肿胀,细胞器减少、形态紊乱,细胞外基质胶原纤维分布混乱。与模型组比较,温针灸组和阿仑膦酸钠组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。扫描电镜显示,温针灸组软骨无明显缺损,软骨表面较平坦;阿仑膦酸钠组软骨有缺损,但再生软骨组织表面平坦。透射电镜显示,温针灸组软骨细胞形态基本正常,细胞器形态明显改善、数量明显增多,胞外基质胶原纤维较丰富,分布较为均匀;阿仑膦酸钠组细胞外形正常,细胞器数量较多,形态紊乱,胞外基质胶原纤维分布较混乱。与阿仑膦酸钠组比较,温针灸组Mankin评分降低(P<0.01)。结论:温针灸治疗可以有效减缓KOA兔软骨及软骨下骨退变,从而起到减缓KOA发展的作用。     

独活寄生汤对膝关节骨性关节炎患者关节液细胞因子水平影响的临床研究——附40例临床资料

目的:探讨独活寄生汤对膝关节骨性关节炎(KOA)肝肾两虚、气血不足证患者关节液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平,以及西大略湖和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)评分和膝关节软骨磁共振成像(MRI)T2值的影响。方法:将80例KOA患者按照随机数字表法分为治疗组与对照组,每组40例。2组均予常规治疗,即口服硫酸氨基葡萄糖钾片及塞来昔布胶囊,关节腔内注射玻璃酸钠,治疗组在此基础上予独活寄生汤煎剂口服,2组均连续治疗4周。观察并比较2组患者治疗前后关节液TNF-α、PGE2、MMP-3水平,WOMAC评分及膝关节软骨MRI T2值的变化情况。结果:治疗后2组患者关节液TNF-α、PGE2、MMP-3水平和WOMAC评分、MRIT2值均较治疗前明显降低(P0.05),治疗组改善程度优于对照组(P0.05)。结论:独活寄生汤能够调节KOA患者关节液TNF-α、PGE2、MMP-3水平,改善WOMAC评分,降低膝关节软骨MRIT2值,表明其能抑制KOA炎症反应,延缓软骨的退变和破坏,是治疗KOA肝肾两虚、气血不足证有效安全的方剂之一,值得临床推广应用。     

温针灸结合中药熏洗对膝关节骨性关节炎患者IL-1、TNF-α、MMP-3的影响

目的:观察温针灸结合中药熏洗治疗膝骨性关节的临床疗效并比较治疗前后患者关节滑液白细胞介素IL-1、肿瘤坏死因子TNF-α和基质金属蛋白酶MMP-3的水平,初步探讨温针灸结合中药熏洗治疗膝骨性关节炎的机制。方法:将72例膝关节骨性关节炎(KOA)患者随机分为治疗组和对照组各36例,治疗组采用温针灸加中药熏蒸治疗,对照组给予口服双氯芬酸钠和氨基葡萄糖胶囊,7 d为1个疗程,3个疗程后统计疗效,观察两组治疗前后患者关节滑液IL-1、TNF-α和MMP-3的含量。结果:治疗组总有效率为91.6%,对照组总有效率为83.3%,治疗组与对照组均能减轻KOA患者临床症状,但治疗组效果明显优于对照组(P0.05);治疗后两组患者关节滑液IL-1、TNF-α和MMP-3的含量均有明显下降,且治疗组下降幅度较对照组明显(P0.05)。结论:温针灸结合中药熏洗结合治疗KOA具有较好的临床疗效,其降低关节滑液IL-1、TNF-α和MMP-3的表达可能是其抗炎镇痛的作用机制之一。     

热敷散外敷治疗兔骨性关节炎的机理研究

目的：观察中药热敷散外敷治疗兔骨性关节炎模型的组织病理学变化及关节冲洗液中白介素-β1(IL-β1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化,探讨热敷散对兔骨性关节炎的疗效及其作用机理。方法：采用兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶的方法,建立兔骨性关节炎模型：将30只日本大耳白兔随机分为空白对照组(A组,n=10)、模型对照组(B组,n=10)、热敷散组(C组,n=10)。造模后1周,在3组动物中各随机抽取1只实验动物,空气栓塞法处死后进行患膝关节病理观察,明确造模是否成功。A组每天热水袋热敷膝关节2次;B组造模成功后每天热水袋热敷膝关节2次;C组造模成功后,每天用热敷散热敷治疗2次。在治疗4周后,空气栓塞法处死动物,抽取膝关节液后,切开兔的膝关节,观察膝关节股骨髁关节面大体病理变化及股骨髁关节软骨病理变化,并检测关节冲洗液中IL-β1与TNF-α含量的变化。结果：①在造模成功,给予3组实验动物相应治疗4周后处死实验动物,抽取膝关节液后,做病理观察见A组动物关节及关节软骨正常;B、C组动物关节肿胀,关节软骨面破坏。②B、C组动物关节冲洗液中IL-β1和TNF-α的含量明显高于A组(P＜0.05),同时C组动物关节冲洗液中IL-β1和TNF-α的含量明显低于B组(P＜0.05)。结论：热敷散能通过降低关节液中IL-β1和TNF-α的含量进而起到对骨关节炎的治疗作用。     

温针灸对兔膝骨关节炎模型基质金属蛋白酶及组织形态学影响的实验研究

目的:观察温针灸对膝骨关节炎模型血清基质金属蛋白酶及软骨组织形态学的影响,探讨温针灸治疗膝骨关节炎在软骨代谢方面的作用机制。方法:将新西兰兔随机均分为空白组、模型组、温针灸组。采用膝关节前交叉韧带切断术制备膝骨关节炎模型,造模1周后温针灸患侧膝关节"犊鼻"、"后三里"穴2个疗程,采用ELISA法测定各组血清中MMP-1、MMP-3、TIMP-1的浓度,股骨内髁行HE染色。结果:模型组MMP-1浓度、MMP-1/TIMP-1比值均高于空白组(P﹤0.05),MMP-3浓度低于空白组(P﹤0.05),TIMP-1变化不明显(P﹥0.05),HE染色示明显的病理损伤;与模型组比较温针灸降低了MMP-1的浓度与MMP-1/TIMP-1之比值,升高MMP-3的浓度,差异有统计学意义(P﹤0.05);且改善了软骨病理损伤。结论:温针灸能够提高膝骨关节炎软骨的自身修复能力,其软骨保护作用可能是通过调节异常的MMP-1、MMP-3与MMP-1/TIMP-1比值而实现的。     

温针灸对不同时间点KOA模型兔关节软骨中MMP-1、MMP-13表达的影响

目的:观察温针灸(warming moxibustion)对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞中基质金属蛋白-1、13(matrix metalloproteinase-1、13,MMP-1、MMP-13)表达的影响,明确温针灸治疗KOA的作用机制。方法:选取70只新西兰大耳兔,其中10只作为空白对照组,剩余随机分为模型2周组、模型4周组、模型6周组、温针灸2周组、温针灸4周组、温针灸6周组。采用右后肢伸直位石膏固定制备KOA兔模型,模型2、4、6周组不予处理,温针灸2、4、6周组分别给予温针灸治疗2周,治疗结束后取材。采用免疫组化及RT-PCR检测各组治疗前后关节软骨中MMP-1、MMP-13蛋白及mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型2周组、模型4周组、模型6周组软骨中MMP-1、MMP-13表达明显升高(P0.05),且各组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。与相应模型组比较,温针灸治疗后,MMP-1、MMP-13的表达降低(P0.05),且各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可降低KOA兔软骨中MMP-1、MMP-13的表达,说明温针灸治疗KOA可能与其抑制MMP-1、MMP-13的表达有关。     

火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎鼠关节形态及软骨LOXL2的影响

目的:探讨火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)大鼠行为学、关节形态及软骨中赖氨酰氧化酶相关蛋白2(LOXL2)影响性。方法:选择30只健康雄性大鼠,10只作为对照不作任何处理。20只大鼠建立KOA模型,成模后随机分成2组,分别予普通针刺和火针膝周密刺,1次/3 d,连续6次。观察各组大鼠Leauesne MG评分、关节软骨细胞情况,外周血及关节软骨转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、LOXL2水平变化。结果:治疗后火针组Leauesne MG评分中的局部疼痛刺激反应、步态、关节活动范围、关节肿胀度较对照组、模型组差异有统计学意义(P<0.05)。血清及关节软骨MMP-3、TGF-β1、TNF-α含量水平显著低于模型组(P<0.05),LOXL2显著高于模型组(P<0.05)。火针组电镜下软骨细胞形状规则、细胞核完整且饱满,微绒毛少量存在,内质网丰富,有散在的染色质。结论:火针膝周密刺能减轻K0A关节软骨损伤,降低炎性反应,改善软骨LOXL2水平,这可能是火针治疗KOA一个作用机制。     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

针刀干预对KOA兔关节软骨病理学及股四头肌收缩性能的影响

目的:通过观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔HE染色及Mankin评分、股四头肌收缩性能的影响,探讨针刀治疗KOA的作用机制。方法:28只清洁级新西兰雄兔,随机分成正常组、模型组、电针组和针刀组。采用改良Videman左后肢伸直位固定制动法复制KOA模型,针刀组、电针组分别采用针刀和电针疗法治疗4周。采用光镜、电生理的方法对软骨形态学情况、股四头肌收缩性能进行检测。结果:造模后,模型组兔膝关节软骨HE染色显示软骨结构紊乱、破坏,Mankin评分较正常组明显升高(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较正常均显著降低(P 0. 05或P 0. 01)。电针、针刀干预后,电针组兔膝关节软骨HE染色较模型组有所改善,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组无显著差异(P 0. 05);针刀组兔膝关节软骨HE染色较模型组改善明显,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组显著升高(P 0. 05或P 0. 01),且与电针组相比Mankin评分显著降低(P 0. 05),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较电针组显著升高(P 0. 05)。结论:针刀干预能改善关节软骨退变,促进关节软骨修复,并能提高股四头肌的收缩性能。提高股四头肌的收缩性能是针刀干预KOA的重要机制。