SDF-1/CXCR4在舌癌组织中的表达及对舌癌细胞系Tca8113增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的探讨SDF-1/CXCR4在舌癌组织中的表达及对舌癌细胞系Tca8113增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RTPCR及Western blot检测舌癌组织及癌旁组织中SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达;培养人舌癌细胞系Tca8113,将细胞分为对照组、SDF-1组、SDF-1+AMD3100组、AMD3100组,Western blot检测四组细胞CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达,CCK8试验检测四组细胞增殖,Transwell小室检测四组细胞迁移和侵袭数。结果舌癌组织中SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);SDF-1组CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著高于另外三组(P0.01);SDF-1+AMD3100组CXCR4蛋白表达显著低于对照组和SDF-1组;MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭与对照组差异不显著(P0.05),但均显著低于SDF-1组;CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著高于AMD3100组(P0.01);AMD3100组CXCR4、MMP-2、MMP-9蛋白表达及细胞增殖、迁移、侵袭均显著低于另外三组(P0.01)。结论 SDF-1和CXCR4在舌癌组织高表达,SDF-1可上调CXCR4在人舌癌细胞系Tca8113的表达,其过程能被AMD3100减弱。SDF-1/CXCR4可促进细胞的增殖、侵袭和迁移,此过程可被AMD3100抑制。     

Adv-shRNA抑制CXCR4基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭力的影响

目的 通过特异性抑制前列腺癌细胞株PC-3中趋化因子受体4(CXCR4)基因的表达,检测RNA干扰片段对PC-3细胞增殖及侵袭转移能力的影响.方法 将CXCR4的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至前列腺癌PC-3细胞72 h后荧光显微镜观察转染情况;采用RT-PCR法检测转染后CXCR4基因mRNA表达情况;Western blot检测转染后CXCR4蛋白表达情况;MTT法检测PC-3细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验检测对PC-3细胞侵袭转移能力.结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至前列腺癌细胞PC-3; (2)重组腺病毒转染组CXCR4基因mRNA及蛋白均低于阴性对照组和空白组,差异有统计学意义(P＜0.01),而阴性对照组与空白组之间差异无统计学意义(P＞0.05); (3)阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组之间差异无统计学意义(P＞0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05); (4) CXCR4-shRNA腺病毒载体与空白组及对照组相比能显著抑制PC-3细胞的侵袭力(P＜0.05),抑制率为57.01％,空白组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组腺病毒载体CXCR4-shRNA可有效抑制前列腺癌细胞PC-3中CXCR4基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖及远处侵袭转移,可作为动物实验的理论基础和前期条件.     

SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

siRNA表达载体对大鼠心肌H9c2细胞牛磺酸合成限速酶-CSD基因表达的抑制作用

目的研究siRNA对大鼠心肌半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)的抑制作用。方法根据已克隆的大鼠心肌CSD基因序列(EU786150)设计并构建了4个siRNAs及1个阴性对照siRNA表达质粒,利用脂质体LipofectamineTM2000将构建好的重组质粒siRNA1#、siRNA2#、siRNA3#、siRNA4#及阴性对照质粒分别转染H9c2细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞增殖情况、实时荧光定量PCR和Western-blot检测CSD mRNA和蛋白表达。结果荧光显微镜观察细胞转染效率达70%左右;与阴性对照组、未转染组比较,siRNA1#重组质粒显著抑制了H9c2细胞中CSD mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而siRNA4#质粒对CSD表达无明显抑制效应(P>0.05);MTT检测结果表明转染重组质粒siRNA1#、siRNA2#进入H9c2细胞48 h、72 h后细胞增殖明显受抑制,与阴性对照组、未转染组相比差异均达到显著水平(P<0.05)。结论 siRNA1#重组质粒能有效抑制CSD基因的表达,且显著抑制H9c2细胞增殖,为研究CSD基因及揭示牛磺酸在心肌细胞代谢中的作用奠定基础。[营养学报,2012,34(4):317-321]     

中重度宫腔粘连组织中SDF-1、CXCR4的表达

目的：探究中重度宫腔粘连(IUA)组织中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、趋化因子受体4(CXCR4)表达。方法：选取2019年4月-2022年4月本院确诊IUA中重度并行宫腔镜手术治疗的患者132例为IUA组，其中中度51例、重度81例；经宫腔镜确诊子宫纵隔患者132例为对照组，收集2组一般资料及性激素指标，免疫组化测定组织中SDF-1、CXCR4蛋白表达，Kaplan-Meier分析SDF-1、CXCR4表达与手术预后的关系；多因素Cox回归分析影响预后因素。结果：IUA组妊娠次数、分娩次数及妊娠相关宫腔手术次数均多于对照组，SDF-1阳性率(81.1%)高于对照组(25.0%),CXCR4阳性率(77.3%)高于对照组(20.5%),且重度IUA患者SDF-1阳性率(90.1%)、CXCR4阳性率(87.7%)高于中度IUA患者(66.7%、60.8%)(均P<0.05)。治疗无效者中SDF-1阳性表达患者占比(29.0%)高于阴性表达患者(12.0%),CXCR4阳性表达患者占比(31.4%)高于阴性表达患者(6.7%)(均P<0.001)。Cox回归分析，SDF...     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

RNA干扰对卵巢癌细胞mTOR表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人卵巢癌细胞SKOV3中mTOR的表达及对细胞增殖与凋亡的影响。方法:培养SKOV3细胞系,设计合成mTOR siRNA实验分4组:正常培养组:未转染的正常培养SKOV3细胞;空白对照组:转染空脂质体的SKOV3细胞;转染组:转染mTOR siRNA的SKOV3细胞;无义对照组:转染无义siRNA的SKOV3细胞。采用Western blot法检测各组细胞中的mTOR蛋白表达水平;应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:mTOR siRNA转染组SK-OV3细胞mTOR蛋白的表达显著低于各对照组(P<0.05);mTOR siRNA转染组SKOV3细胞增殖低于各对照组(P<0.05);mTOR siRNA转染组细胞凋亡率高于各对照组(P<0.05)。结论:mTOR siRNA对SKOV3细胞中mTOR蛋白的表达有明显的抑制作用,特异性阻断mTOR基因表达可显著抑制SKOV3细胞的增殖并促进其凋亡。     

姜黄素介导MAPK信号通路对非小细胞肺癌细胞Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的影响

目的 研究姜黄素介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对非小细胞肺癌细胞Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的影响。方法 对非小细胞肺癌A549细胞实施体外培养、分组,并用10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素处理24 h后,借助显微镜对A549细胞形态结构进行观察;通过MTT法、流式细胞仪对A549细胞增殖抑制率、凋亡率进行测定,经免疫细胞化学法测定MAPK的阳性表达,免疫印迹法测定Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白表达。结果 姜黄素组的非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制率高于对照组(P <0.05);姜黄素组的非小细胞肺癌A549细胞凋亡率高于对照组(P <0.05);姜黄素组的非小细胞肺癌A549细胞内MAPK阳性表达率低于对照组(P <0.05)。姜黄素组A549细胞内Bcl-2、Bcl-xl蛋白浓度低于对照组,Bax蛋白浓度高于对照组(P <0.05)。结论 姜黄素能介导MAPK信号通路,通过下调Bcl-2、Bcl-xl,上调Bax蛋白表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡。     

CXCR7在骨肉瘤组织、细胞的表达及其意义

目的 研究CXCR7在骨肉瘤组织和骨肉瘤周围正常组织的表达差异,并构建CXCR7腺病毒表达载体,转染骨肉瘤细胞株MG63,观察CXCR7对MG63细胞增殖、炎症因子PGE2分泌的影响.方法 RT-qPCR检测CXCR7在骨肉瘤组织、细胞和骨肉瘤周围正常组织的表达差异;构建CXCR7腺病毒表达载体,感染MG63细胞后,采用RT-qPCR、MTT、ELISA分别检测其对MG63细胞CXCR7 mRNA表达、细胞增殖和PGE2分泌的影响.结果 （1）RT-qPCR结果显示,在骨肉瘤组织CXCR7 mRNA表达率93.80%和表达量（2.221±0.112）均显著高于骨肉瘤周围正常组织45.71%、（0.3448±0.098）;MG63细胞低表达CXCR7 mRNA.（2）CXCR7腺病毒表达载体转染MG63细胞48、72、96 h后,显著促进MG63细胞增殖（P〈0.05）和PGE2分泌（P〈0.05）.结论 骨肉瘤组织CX-CR7mRNA和蛋白表达显著高于骨肉瘤周围正常组织;CXCR7表达增高可以促进骨肉瘤细胞增值,促进炎症因子PGE2分泌,对骨肉瘤的进展将产生不利的影响.     

VEGF对乳腺癌CXCR4表达及细胞增殖的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)对乳腺癌细胞CXCR4蛋白表达及癌细胞增殖的影响。方法:选用高表达CXCR4的乳腺癌细胞系MDA-MB-231作为研究对象。将该细胞系分为4组培养:阴性对照组、siRNA-CXCR4组、VEGF组和siRNA-CXCR4同时加入VEGF组。Western-blot方法检测各组CXCR4蛋白水平表达,并用体外增殖实验检测各组乳腺癌细胞增殖情况。结果:Western-blot结果显示,siRNA-CXCR4组CXCR4表达量较阴性对照组低;VEGF组CXCR4表达量较阴性对照组高;且siRNA-CXCR4同时加入VEGF组CXCR4表达量较siRNA-CXCR4组增加。体外细胞增殖实验显示,不同时间点各实验组细胞增殖速度与阴性对照组相比,siRNA-CXCR4组显著减低(P<0.05),VEGF组显著提高(P<0.05);并且siRNA-CXCR4同时加入VEGF组与siRNA-CXCR4组相比细胞增殖速度增加(P<0.05)。结论:siRNA沉默CXCR4基因可下调乳腺癌细胞CXCR4表达且体外细胞实验显示可有效抑制细胞增殖,提示CXCR4可能有促进乳腺癌细胞增殖的作用。在VEGF刺激下,乳腺癌细胞CXCR4表达增加,且癌细胞增殖速度明显增快,即使在沉默CXCR4条件下,VEGF仍能上调CXCR4表达,从而促进乳腺癌细胞增殖。因此说明在乳腺癌细胞增殖过程中VEGF和CXCR4有协同作用,针对CXCR4的单一靶点治疗可能难以有效抑制肿瘤生长,而作用于二者的联合用药也许能获得更佳的疗效,该结论尚需在临床实践中进一步验证。