Necrostain-1对缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性死亡的保护作用

目的 研究低氧诱导因子(HIF)-1α是否介导缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性细胞死亡,Necrostain-1( Nec-1)能否抑制其表达起到保护作用.方法 (1)原代皮质神经元培养14d,予caspase抑制剂z-VAD.fmk(z-VAD)预保护30 min,同时分别予Nec-1 0.1,1,5,10,25,50 μmol/L,缺糖缺氧(OGD)2h、再灌注12h,通过LDH测细胞死亡情况;(2)予z-VAD作用后30 min后,缺糖缺氧(OGD)2h再灌注0,2,6,12,24,48 h,Westernblot检测HIF-1α蛋白表达情况,RT-PCR测HIF-1αRNA表达;(3)予z-VAD和Nec-125 μmol/L作用30min,OGD2h、再灌注12h后检测HIF-1α蛋白及RNA表达情况.结果 (1)予Nec-1 5μmol/L(6.97±0.06)后与未加Nec-1组(14.23 ±0.08)比较LDH水平明显下降(P＜0.05),Nec-1 25 μmol/L(2.21 ±0.05)时LDH降至正常水平与正常组(1.03±0.03)比较,P＞0.05);(2)缺糖缺氧2h再灌注后HIF-1α蛋白表达增加,再灌注2h后(0.57±0.09)与正常组(0.24±0.01)相比差异有统计学意义(P＜0.05),再灌注12h(0.91 ±0.08)达高峰,HIF-1 αRNA表达无变化(P＞0.05);(3)与未予Nec-1组(0.83±0.03)相比,Nec-1组(0.32±0.04) HIF-1 α蛋白表达明显降低(P＜0.05),HIF-1αRNA表达无变化(P＞0.05).结论 HIF-1α介导了缺氧缺氧诱导的原代皮质神经元caspase非依赖性死亡,Nec-1能够抑制HIF-1α的表达起到保护作用.     

去泛素化酶在皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤后坏死样凋亡中的表达

目的 探讨去泛素化酶(Cylindromatosis,CYLD)在皮质神经元中的定位及缺糖缺氧再灌注损伤后神经元坏死样凋亡中的表达变化.方法 ①皮质神经元培养6d,免疫荧光观察4,6-联脒-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)核染及神经元特异性标志物β3-tubulin表达,验证培养神经元的纯度.②原代皮质神经元细胞培养14 d,通过成熟神经元特异性标志物NeuN鉴定神经元,DAPI染核,同时用免疫荧光共定位观察目的蛋白CYLD在神经元内的定位.③培养14 d的神经元首先被分为正常对照组(Control组),无糖Earle's平衡盐组(EBSS组),Dmso组缺糖缺氧(OGD)复灌不同时间组(0h、2h、6h、8h、12 h)组.预给予广谱抗凋亡抑制剂(zVAD-fmk,zVAD) 20 μmol/L、30 min,缺糖缺氧2h,复灌不同时间点,通过Western、比色法检测神经元CYLD蛋白水平变化、乳酸脱氢酶(LDH)水平.④随后神经元被分为正常对照、OGD组,给予缺糖缺氧2h,复灌8h,通过Western blot观察细胞浆、核内CYLD蛋白表达变化情况.结果 CYLD在神经元中定位于细胞核、胞浆,胞浆CYLD随着缺糖缺氧后复灌时间的延长,8h到达高峰(P＜0.05),与LDH[分别为Control组(1.00±0.00),EBSS组(1.07 ±0.03),DMSO组(1.09±0.03),0h组(1.40±0.12),2h组(1.74±0.08),6h组(2.25±0.12),8h组(2.97±0.15),12 h组(3.01±0.08)]水平变化一致(P＜0.05),随后降低;细胞核内CYLD蛋白在缺糖缺氧2h,复灌8h后无明显变化(P＞0.05).结论 去泛素化酶CYLD在胞浆中参与皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤后的坏死样凋亡,下调其表达可能保护脑缺血再灌注损伤.     

缺氧/复氧损伤对大鼠海马神经元过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）在神经元缺氧/复氧损伤不同时间的表达,以探讨PPARγ在神经元缺血再灌注损伤过程中的作用。方法：以新生1d的SD大鼠为研究对象,采用海马神经元原代培养技术,给原代培养的神经元缺氧、缺糖15min后再恢复氧和葡萄糖供应,建立体外神经元类缺血再灌注模型,JEM-200EX透射电子显微镜观察缺氧/复氧后不同时间神经元结构变化,采用RT-PCR检测PPARγmRNA表达,Western印迹方法检测PPARγ蛋白表达。结果：神经元缺氧/复氧处理后不同时间,神经元正常结构出现损害。复氧0h,PPARγ表达与对照组相比无明显变化（P〉0.05）;复氧6h,PPARγ表达在mRNA和蛋白水平出现降低,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）,而且随着时间的延长表达逐渐降低,到48h达到最低,不同时间点之间及与对照组之间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：PPARγ参与神经元缺血再灌注损伤的病理过程,有望成为缺血性脑血管病治疗的干预靶点。     

白藜芦醇在缺氧缺糖再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元氧化应激的影响

目的研究白藜芦醇在缺氧缺糖再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元氧化应激的影响。方法大鼠皮质神经元缺氧缺糖处理150min,随即恢复正常培养24h。实验分为6组,即正常组、模型组、白藜芦醇预处理组(在缺氧缺糖前加入白藜芦醇干预24h)、造模时处理组(从缺氧缺糖开始加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)、造模后处理组(从缺氧缺糖后加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)和全程处理组(从缺氧缺糖前24h开始加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)。倒置显微镜下观察细胞形态,用化学比色法测定神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性以及一氧化氮(NO)的含量,免疫荧光检测观察核因子E2相关因子2(Nrf2)的核移位情况,免疫印迹法检测神经元Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)和苯醌氧化还原酶(NQO-1)蛋白表达。结果培养至第6天,神经元立体感及折光性强。与模型组比较,在白藜芦醇全程处理组中,各浓度(10、20、40、60、80μmol/L)白藜芦醇均可升高神经元SOD活性(P<0.05),降低NO含量(P<0.05),其中以40μmol/L白藜芦醇作用最佳;在缺氧缺糖再灌注损伤的不同时间窗内给予白藜芦醇干预,均能减轻缺氧缺糖再灌注导致的细胞损伤,促进Nrf2蛋白从细胞质转移到细胞核,上调Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白的表达,其中全程处理组作用最佳,其次为预处理组。结论白藜芦醇对缺氧缺糖再灌注损伤的神经元有剂量依赖性的抗氧化应激作用,而且全程处理组作用最佳,预处理组次之。其机制可能是通过激活Nrf2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路进而上调抗氧化蛋白的表达而实现。     

沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

目的 利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和磷酸酶并和张力蛋白同源物（PTEN）基因,论证它们在神经元体外氧糖剥夺（OGD）损伤后的功能调控作用。方法 构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体;提取并将原代神经元分为4组：（1）NC组,仅加空载病毒;（2）NC+OGD组,加空载病毒后缺氧;（3）Si-hif-1α+OGD组,加Si-hif-1α病毒后缺氧;（4）Si-pten+OGD组,加Si-pten病毒后缺氧,均在培养第3天感染病毒,第7天OGD损伤模拟细胞缺氧。缺氧后24 h行荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测干扰效率,行乳酸脱氢酶（LDH）检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化,Western blot检测相应蛋白表达变化。结果 慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达;HIF-1α沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡加重,PTEN蛋白的表达升高,p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低（P<0.05）;PTEN沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡有所减轻,p-PTEN、p-AKT表达升高（P<0.05）,HIF-1α、NR2A及VEGFa的表达无显著变化（P>0.05）。结论 慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达,逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制,参与神经元损伤调控。     

激活α7烟碱型乙酰胆碱受体减轻大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤

目的 研究激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAchR)对大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的作用及可能机制.方法 取体外培养7d的原代大脑皮质神经元,随机分为3组:对照组、氧糖剥夺组、PNU-282987(α7nAchR激动剂)组.氧糖剥夺组细胞氧糖剥夺12 h;PNU-282987组用PNU-282987预处理细胞24 h,然后氧糖剥夺12h.采用CCK-8测定3组大脑皮质神经元存活率,比色法检测上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenate,LDH)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)产量,蛋白质印迹法检测血红素氧化酶(hemeoxygenase-1,HO-1)、缺氧诱导因子1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达量.结果 与氧糖剥夺组相比,PNU-282987可提高大脑皮质神经元存活率(P＜0.05),降低LDH含量(P＜0.05),抑制细胞凋亡(P＜0.05),降低ROS产量(P＜0.05),同时使HO-1蛋白表达升高、HIF-1α蛋白表达减少(P＜0.05).结论 激活α7nAchR具有抗大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤作用,该作用可能与抗氧化应激有关.     

氨基胍对氧-糖剥夺大鼠皮质神经元一氧化氮及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响研究

目的 探讨氨基胍对氧-糖剥夺大鼠皮质神经元一氧化氮（NO）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）表达的影响。方法 2014年11月-2015年7月选取新生24 h内SD大鼠12只,分离及培养大鼠皮质神经元,取原代培养8 d的皮质神经元,分为3组：正常对照组、氧-糖剥夺组、氨基胍组。正常对照组皮质神经元采用Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养,氧-糖剥夺组皮质神经元缺氧、缺糖处理45 min后,换Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养;氨基胍组皮质神经元缺氧、缺糖处理45 min后,换Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养的同时加入终浓度为10 mmol/L的氨基胍溶液。各组培养2、6、12 h,采用硝酸还原法检测细胞上清液中NO表达水平,采用Western blotting法检测Caspase-3表达水平。结果 各组培养2、6、12 h时细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中氧-糖剥夺组、氨基胍组不同时间点细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平较正常对照组升高（P＜0.05）;氨基胍组不同时间点细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平较氧-糖剥夺组降低（P＜0.05）。结论 氨基胍可抑制氧-糖剥夺大鼠皮质神经元NO及神经元凋亡相关基因Caspase-3表达水平,从而抑制皮质神经元的凋亡,对皮质神经元具有保护作用。     

缺氧/复氧损伤对大鼠海马神经元过氧化物 酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在神经元缺氧/复氧损伤不同时间的表达,以探讨PPARγ在神经元缺血再灌注损伤过程中的作用。方法：以新生1 d的SD大鼠为研究对象,采用海马神经元原代培养技术,给原代培养的神经元缺氧、缺糖15 min后再恢复氧和葡萄糖供应,建立体外神经元类缺血再灌注模型,JEM-200EX透射电子显微镜观察缺氧/复氧后不同时间神经元结构变化,采用RT-PCR检测PPARγ mRNA表达,Western 印迹方法检测PPARγ蛋白表达。结果：神经元缺氧/复氧处理后不同时间,神经元正常结构出现损害。复氧 0 h,PPARγ表达与对照组相比无明显变化（P>0.05）;复氧 6 h,PPARγ表达在mRNA和蛋白水平出现降低,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）,而且随着时间的延长表达逐渐降低,到48 h达到最低,不同时间点之间及与对照组之间差异有统计学意义（P<0.01）。结论：PPARγ参与神经元缺血再灌注损伤的病理过程,有望成为缺血性脑血管病治疗的干预靶点。     

钙离子通道在缺氧缺糖/再灌注诱导培养皮质神经元损伤中的作用

目的 探讨钙离子通道在缺氧缺糖/再灌注诱导皮质神经元损伤中的作用.方法 采用培养的大鼠皮质神经元缺氧缺糖模型,应用DAPI染色方法,以细胞凋亡率为指标,观察缺氧缺糖诱导神经兀损伤及Ca2＋螯合剂EGTA、NMDA受体拮抗剂MK-801、L-型电压门控钙通道（L-VGCC）拮抗剂尼莫地平、蛋白酪氨酸激酶（PTK）抑制剂染料木黄酮、CaMKⅡ抑制剂NK-62对缺氧缺糖/再灌注诱导神经元损伤的作用.结果 缺氧缺糖/再灌注诱导细胞发生凋亡,至再灌注24 h凋亡率达到80%左右;加入EGTA、MK-801及尼莫地平可以抑制细胞凋亡,凋亡率从80%分别降低为33%、35%和38%;加入染料木黄酮和KN-62可以使凋亡率从80%分别降低为43%和42%.结论 减少胞外Ca2＋浓度、阻断NMDA受体和L-VGCC、抑制蛋白酪氨酸激酶和CaMKⅡ可以减少缺氧缺糖/再灌注诱导的神经元损伤.缺氧缺糖/再灌注诱导的神经元损伤可能与胞外ca2＋内流有关,并与NMDA受体和L-VGCC两类钙通道的开放有关.     

RIP3在necroptosis信号通路中的胞内定位

目的 研究necroptosis信号通路中受体相互作用蛋白3（RIP3）的胞内定位.方法 SD大鼠原代皮质神经元细胞培养12天,zVAD 20 μmol/L预处理30 min,TNFα 30 ng/ml处理不同时间,Western blot检测胞质、胞核中RIP3蛋白水平,结合免疫荧光观察RIP3的胞内定位.结果 随着TNFα作用时间的延长,胞质、胞核中RIP3蛋白水平均呈上升趋势,胞质中RIP3蛋白水平在8 h达高峰,随后下降,胞核中RIP3蛋白水平在12 h达高峰,即在12 h出现核转位的高峰（P＜0.05）.结论 正常细胞中RIP3存在于胞质,necroptosis时发生核转位.     

血晶素促进缺血缺氧大鼠脑组织诱导型血红素氧合酶基因的表达

目的研究血晶素对全脑缺血再灌注Wistar大鼠脑保护作用及机制.方法成功建立成年Wistar大鼠全脑缺血再灌注模型后,于全脑缺血10 min再灌注24、48、72 h 3个时相点观察缺血再灌注对大鼠脑组织血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达及皮质神经元的作用及变化规律;并于模型成功建立后5 min,1、2 d侧脑室内注射25mg/kg的血晶素,观察血晶素对缺血再灌注大鼠脑HO-1蛋白表达及皮质神经元的影响.结果大鼠脑组织HO-1蛋白表达在全脑缺血10 min再灌注48 h达高峰(P＜0.05);血晶素可促进脑HO-1蛋白表达(P＜0.05),并减轻了全脑缺血再灌注所导致的皮质损害.结论血晶素对缺血再灌注大鼠脑缺血有保护作用,其可能的机制是通过上调脑HO-1蛋白表达,启动一系列的内源性的神经保护机制来发挥脑保护作用.     

实验性脑缺血原癌基因表达与神经元凋亡/坏死关系的研究

目的 研究局灶脑缺血／再灌注Wistar大鼠原癌基因c-fos、c-jun表达在缺血性脑损害中可能的作用机制。方法 采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血／再灌注模型，于缺血1.5h再灌注4h、24h、72h观察c-fos、c-jun表达及神经元坏死、调亡的变化规律。结果 再灌注4h c-fos、 c-jun及神经元调亡明显升高（P＜0.01），c-fos和c-jun阳性蛋白表达在4h达高峰（P＜0.01），随后在再灌注各时相点无显著性差异（P＞0.05）。结论 c-fos和c-jun异常表达与神经元坏死、凋亡密切相关。     

局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织HIF-1α表达的观察

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor—1α,HIF—1α）的表达及意义。方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,动物分为缺血2h再灌注6h、1、2、3、4d及假手术对照组。应用免疫组化法检测HIF-1α蛋白、原位杂交及RT—PCR法检测HIF-1α mRNA的表达变化。结果免疫组化及原位杂交法检测显示：大鼠缺血再灌注6h,缺血侧脑组织梗死灶周边HIF-1α及HIF-1α mRNA阳性反应已出现,随再灌注时间的延长阳性表达增强,一直持续到第3天,第4天显著下降;RT—PCR检测HIF-1α mRNA在6h后已有表达,随再灌注时间的延长,HIF-1α mRNA的表达呈上升的趋势,在第3天达高峰,第4天显著下降。结论脑缺血再灌注损伤可以诱导HIF-1α表达增强,提示HIF-1α对缺血性脑损伤有保护作用。     

HIF-1α介导上调BNIP3在蛛网膜下腔出血后早期皮层神经元凋亡中的作用机制

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1琢）、BNIP3在蛛网膜下腔出血（SAH）后早期皮层神经元凋亡中的作用机制。方法采用颈内动脉穿刺法建立SAH大鼠模型,设SAH组、2-甲氧雌二醇（2ME2）组和假手术（sham）组,每组10只。造模后24h对SAH大鼠神经功能进行评价;取大鼠脑组织,采用TUNEL法检测凋亡指数,免疫荧光染色检测HIF-1琢的组织细胞定位,Westernblot检测HIF-1α、BNIP3蛋白表达水平。结果与sham组比较,造模后24hSAH组大鼠脑组织中HIF-1琢、BNIP3蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）,凋亡指数明显增高（P＜0.05）,神经功能评分明显降低（P＜0.05）。与SAH组比较,2ME2组大鼠脑组织中HIF-1琢、BNIP3蛋白表达水平均明显下降（均P＜0.05）,凋亡指数明显下降（P＜0.05）,神经功能评分明显升高（P＜0.05）。HIF-1琢主要定位表达于神经元。结论HIF-1琢介导上调BNIP3并参与了SAH后早期皮层神经元凋亡过程。     

氧化槐定碱对氧糖剥夺再灌注损伤后大鼠海马神经元Glu含量及NMDA受体亚单位NR1表达的影响

目的研究氧化槐定碱（OSR）对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后Glu含量与NR1表达的影响。方法以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象,建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。采用化学比色法测定神经细胞培养液中谷氨酸（Glu）的含量,Western blot方法和实时荧光定量PCR技术检测大鼠海马神经细胞NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达。结果与氧糖剥夺再灌注损伤组比较,OSR治疗组（20、5、1.25 mg·L-1）可减少神经细胞培养液中Glu的含量（P〈0.05）;OSR治疗组（20μg·L-1）可明显抑制NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达（P〈0.05）。结论 OSR通过降低Glu含量和减少NR1表达,减轻兴奋性氨基酸毒性,对新生大鼠海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用。     

HIF-1α及 VEGF 在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的研究类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞在体外常氧和缺氧培养条件下缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的差异性及意义。方法对RA患者及骨关节炎（OA）患者的关节滑膜细胞在体外常氧和缺氧条件下分别进行培养,根据培养条件分为常氧组、缺氧6h组及缺氧12h组;采用免疫印迹法分别检测各组成纤维样滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达情况。结果与常氧组相比,缺氧6h及12h的RA和OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时RA和OA患者缺氧12h组滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达高于缺氧6h组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。RA和OA患者3组滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均呈正相关（均P＜0.05）。常氧组RA与OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均无统计学差异（均P＞0.05）;而缺氧6h和12h组中RA滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达均高于OA滑膜细胞,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论在缺氧条件下RA患者滑膜细胞HIF-1α及VEGF表达显著升高且密切相关,可能缺氧-HIF-1α-VEGF这一信号途径在RA的发生、发展中起着重要作用。     

培高利特对脑缺血/再灌注损伤海马神经元HIF-1α表达的影响

目的研究培高利特（pergolide）对沙土鼠前脑脑缺血/再灌注（I/R）损伤海马CA1区神经元低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）表达的影响。方法采用沙土鼠5 min I/R损伤模型。54只雄性沙土鼠随机分为3组：假手术组、I/R组、培高利特组。分别于再灌注第1、3、7天行免疫组织化学染色法,检测海马CA1区神经元HIF-1α的表达。结果假手术组沙土鼠海马CA1区HIF-1α有较弱的表达。与假手术组相比,I/R组海马CA1区再灌注1天HIF-1α的表达无明显改变（P〉0.05）;至再灌注3天及7天HIF-1α表达消失（P〈0.01或P〈0.05）。培高利特可显著诱导海马CA1区神经元中HIF-1α的表达,以再灌注1天表达最多（P〈0.01）,随再灌注时间的延长表达缓慢减少,至第7天仍有较高水平的表达（P〈0.01）。结论培高利特可显著诱导脑I/R损伤后海马CA1区神经元HIF-1α的表达,可能是其脑保护作用的机制之一。     

HIF-1α表达在新生大鼠缺氧/缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用

目的 探讨缺氧缺血性脑损伤时缺氧诱导因子la(HIF-1a)表达及其与神经元凋亡的关系.推测HIF-1α在神经元凋亡中所起的作用.方法 10日龄SD大鼠分为假手术组、单纯缺氧组和缺氧缺血组,在缺氧后4、8和24 h处死取脑.免疫组织化学方法检测HIF-1α、凋亡标志蛋白activated caspase-3的表达,TUNEL法检测凋亡细胞,HE染色观察脑组织病理改变.结果 单纯缺氧组和缺氧缺血组HIF-1α的表达趋势相似,予缺氧后4 h升高,8 h达到高峰,24 h后下降.Activated caspase-3在两组中的表达趋势也相似,于缺氧后4 h、8 h有少量表达,24 h明显升高,TUNEL染色显示缺氧后随着时间的延长凋亡细胞数逐渐增多,24 h时明显增高.HE染色显示单纯缺氧和缺氧缺血组神经细胞有不同程度的损伤,24 h时细胞损伤程度重,细胞溶解缺失明显.对同一时间点的上述指标进行比较,单纯缺氧组HIF-1α表达高于缺氧缺血组(P<0.05),activated caspase-3表达、TUNEL阳性细胞及细胞损伤程度则低于缺氧缺血组(P<0.05).结论 缺氧缺血脑损伤时,HIF.1α表达与activated caspase.3表达趋势相反,HIF-1α表达量与损伤程度呈反相关关系.推测HIF-1α可能对神经元有保护作用.     

低氧预适应大鼠皮层缺氧诱导因子-1α的表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的探讨低氧预适应对大鼠局灶脑缺血再灌注的脑保护作用及缺氧诱导因子（hypoxic inducible fac-tor,HIF-1）表达对神经细胞凋亡的影响。方法36只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注（I/R）组、低氧预适应（HP＋I/R）组。用线栓法建立大鼠局灶脑缺血-再灌注模型,脑缺血前12h将HP＋I/R组大鼠放在8%低氧舱中完成低氧预适应。分别用免疫组化、原位末端标记法检测HIF-1α的表达和神经元凋亡。结果与假手术组比较,低氧预适应组和缺血再灌注组的HIF-1α表达水平和凋亡细胞阳性数显著升高（P〈0.01,P〈0.01）;低氧预适应组与缺血再灌注组比较,HIF-1α表达水平明显升高（P〈0.01）,细胞凋亡阳性细胞降低（P〈0.01）。结论低氧预适应可能通过显著增加神经元中HIF-1α表达而抑制神经细胞的凋亡,从而发挥脑保护作用。     

全脑缺血大鼠脑组织MiR210和stat3的表达与HIF-1α的相关性

目的：研究全脑缺血再灌注损伤大鼠海马信号转导和转录激活因子3（stat3）及大脑皮层MiR210的表达变化,探讨MiR210及stat3与缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）之间的相关性及调节机制。方法将66只SD大鼠随机分为假手术组、全脑缺血组（GI组）及stattic＋全脑缺血组（stattic＋GI组）。采用改良四血管阻断法制备大鼠全脑缺血模型,免疫印迹法检测海马 stat3、p-stat3及 HIF-1α蛋白的表达,实时定量 PCR 法检测大脑皮层 MiR210及HIF-1αmRNA的变化。结果与假手术组相比,GI组海马 stat3、p-stat3及 HIF-1α蛋白表达均明显增加（P＜0．05）,大脑皮层MiR210及HIF-1αmRNA表达亦明显增加（P＜0．05）;与GI组相比,stattic＋GI组海马p-stat3及HIF-1α蛋白表达均明显减少（P＜0．05）,而stat3蛋白变化不明显（P＞0．05）;大脑皮层HIF-1αmRNA水平明显减少（P＜0．05）。结论全脑缺血再灌注损伤后,MiR210及stat3表达发生明显变化,且两者与HIF-1α之间可能存在调控关系。