银杏叶提取物对老年大鼠肠系膜微动脉一氧化氮合酶表达和一氧化氮释放的影响

目的 探讨银杏叶提取物( GBE)对老年大鼠肠系膜微动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达和一氧化氮(NO)释放的影响,初步阐明其血管保护作用的机制。方法 (1)细胞学实验：体外培养人脐静脉内皮细胞( HUVEC),分成对照组、eNOS阻断剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)组和GBE组。L-NAME组中加入100 μmol L-NAME孵育48 h;GBE组中先加入100 μmol L-NAME孵育24h,再加入GBE 20 g/L共同孵育24h。观察各组eNOS蛋白的表达。(2)动物实验：取24月龄雄性SD大鼠32只,抽签随机分为健康对照组（8只）和GBE组（分为3组分别给药3、5、7d,每组8只）,并分别测定20、40、60、80、100、120、140 mm Hg(l mm Hg=0.133 kPa)血管内压力下大鼠肠系膜一级微动脉的直径,推算血管的弹性,并检测大鼠肠系膜微动脉在15 dyn/cm2流体切应力刺激下NO的释放量以及eNOS蛋白与基因的表达。结果 (1)细胞学实验：L-NAME组HUVEC eNOS蛋白表达明显低于对照组和GBE组（0.57±0.06比0.96±0.05、0.81±0.09,均P＜0.01）。(2)GBE3、5、7d组大鼠肠系膜微动脉NO释放量(8.01±0.24、12.11 ±0.78、14.72 ±0.70) pmol·mm-2·min-1均显著高于健康对照组[(5.83 ±0.75) pmol·mn-2·min-1,均P ＜0.05],且7d组最高;大鼠肠系膜微动脉eNOS蛋白的表达也明显高于健康对照组（0.59±0.20、0.86±0.02、1.09±0.13比0.41±0.16,均P＜0.05）,且7d组最高;eNOS mRNA的表达也均高于健康对照组(0.79±0.04、0.85±0.07、0.99±0.03比0.58±0.05,均P＜0.05),且7d组最高。结论 GBE可能通过增加微动脉NO的释放量以及eNOS的表达改善血管的弹性,从而发挥保护血管的作用。     

一氧化氮在阿托伐他汀钙抗动脉粥样硬化中的作用

目的：观察一氧化氮（nitric oxide,NO）气体信号通路体系对他汀类降脂药物阿托伐他汀钙的抗动脉粥样硬化作用的影响。方法：雄性SD大鼠60只随机分为：正常对照组（Control组）,高脂饮食组（HF组）,阿托伐他汀钙（atorvastatin,ATV）组（ATV组）,阿托伐他汀钙+ N’-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐（N’-nitro-L-arginie methyl ester,L-NAME）组（ATV+ L-NAME组）。在给予高脂饮食后,继续ATV和ATV联合L-NAME各治疗13～15周。观察主动脉弓的病理变化;测定各组血脂水平;测量NO、总一氧化氮合酶（total-nitric oxide synthase,T-NOS）活力、内皮性一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）以及eNOS的信使核糖核酸（eNOSmRNA）水平。结果：与Control组相比,HF组及ATV+L-NAME组大鼠主动脉弓均出现显著的动脉粥样硬化病理损害,HF组血脂水平变化明显（P<0.05）,血清NO、eNOS水平、T-NOS活力及降主动脉eNOSmRNA表达水平明显下降（P<0.05）。与HF组比较,ATV组主动脉粥样硬化病变较轻,血脂含量明显下降（P<0.05）,血清NO、eNOS水平、T-NOS活力以及降主动脉eNOSmRNA表达水平明显增高（P<0.05）。与对照及ATV组别比较,ATV+L-NAME组大鼠血脂均升高明显（P<0.05）,而血清 NO、eNOS含量及T-NOS活力均明显下降（P<0.05）。结论：ATV提高了大鼠血清NO体系的含量和活性,阻断大鼠NO通路后使ATV的抗动脉粥样硬化作用明显减弱。     

限制性液体复苏对失血性休克大鼠肝脏一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨限制性液体复苏对失血性休克大鼠肝脏一氧化氮合酶表达的影响。方法60只sD大鼠制成未控制性重度失血性休克模型,随机分成对照组、常规组（常规大量液体复苏组）和限制组（限制性液体复苏组）,检测和比较休克复苏后各组存活大鼠血清NO的含量和肝脏组织eNOS蛋白、iNOS蛋白和eNOSmRNA、iNOSmRNA的表达。结果失血性休克大鼠限制组血清NO含量和肝脏组织eNOS蛋白和eNOSmRNA的表达较常规组显著升高;与对照组比较,常规组血清NO含量和肝脏组织eNOS蛋白和eNOSmRNA的表达升高;常规组肝脏组织iNOS蛋白和iNOStuRNA的表达较对照组低,与常规组、对照组比较,限制组肝脏组织iNOS蛋白和iNOSmRNA的表达显著降低,以上差异均有统计学意义（P均〈0．05）：结论限制性液体复苏可以显著改善失血性休克大鼠肝脏损伤中微循环的紊乱,其机制可能与增强肝脏组织中eNOS表达、提高血清NO含量有关。     

一氧化氮合酶在肝纤维化及肝硬化大鼠肝脏组织中的表达

目的 探讨一氧化氮合酶在肝纤维化及肝硬化大鼠肝脏组织中的表达。方法 将18只Wistar大鼠分为三组：正常对照组（NCG）、复合因素致肝纤维化组（HFG）、肝硬化组（HCG）。观察外周血浆内毒素（ET）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肝组织匀浆NO水平，免疫组化染色分析内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在各组肝组织中的表达。结果 血浆ET和ALT、肝组织匀浆NO在HF组和HC组明显高于NG组。eNOS和iNOS的表达均为HF组和HC组明显高于NC组，HF组的iNOS表达高于eNOS表达而HC组的eNOS表达高于iNOS表达。直线相关分析肝组织匀浆NO和外周血浆盯呈高度正相关。结论 eNOS和iNOS可能都参与了肝纤维化及肝硬化时NO的生成，且肝纤维化时以iNOS生成的NO为主，肝硬化时在NO的生成中eNOS和iNOS都起重要作用，可能与内毒素的诱导有关。     

依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响，探讨其治疗骨质疏松的细胞作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞，取第2代细胞，培养液中分别加入不同浓度的依普拉芬，72h后，测定各组细胞培养液中的NO浓度，RT—PCR方法检测各组细胞中eNOSmRNA的表达。结果与阴性对照组相比，各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞培养液中的NO浓度并促进eNOSmRNA的表达（均P〈0．01）。其中10^-8～10^-5mol／L浓度之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以增加成骨细胞NO合成，但进eNOSmRNA的表达，从而发挥其促进成骨作用。     

电针对脑缺血大鼠缺血皮质区内皮型一氧化氮合酶及血清中一氧化氮含量的影响

目的 观察电针对大脑中动脉缺血大鼠缺血皮质区内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）及一氧化氮（nitric oxide,NO）的调控作用。方法 取SPF级健康雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组14只,利用改良线栓法制备脑缺血大鼠模型,电针组选取“百会”“风府”“内关”“心俞”4个穴位,从第1天术后4 h开始治疗,每日1次,共治疗7 d。干预结束后,比较各组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑缺血皮质区细胞病理表现、缺血皮质区eNOS蛋白的表达、血清NO的含量。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损体征明显（P<0.05）,梗死范围显著,脑缺血皮质区eNOS蛋白表达显著下降（P<0.05）,血清NO含量升高（P<0.05）;与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分降低（P<0.05）,脑梗死体积明显缩小（P<0.05）,脑皮质缺血区eNOS蛋白表达水平显著上升（P<0.05）,血清NO含量升高（P<0.05）。结论 电针可促进局灶性脑缺血大鼠神经功能的恢复并缩小脑梗死体积,其机制可能与调控血管新生相关因子eNOS、NO表达增多有关。     

罗格列酮对人脐静脉内皮细胞NO和P13K／PKB／eNOS信号通路的影响

目的：观察罗格列酮对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）一氧化氮（nitric oxide，NO）浓度和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，P13K）和蛋白激酶B（protein kinaseB，PKB）表达的影响，探讨罗格列酮改善内皮功能的信号转导机制。方法：首先观察罗格列酮对内皮细胞NO影响的时效和量效关系，然后加用eNOS和PKB信号阻断剂进行干预。用Griess重氮化反应法检测NO浓度，RT-PCR方法检测P13K，PKB及eNOSmRNA的表达，Western免疫印迹方法检测PKB，eNOS总蛋白和PKB丝氨酸473（PKB-Ser473），eNOS丝氨酸1177（eNOS-Ser1177）的磷酸化表达。结果：罗格列酮呈剂量和时间依赖性地升高内皮细胞NO浓度，不同浓度的罗格列酮培养内皮细胞均能升高P13K mRNA表达和PKB-Ser473，eNOS-Ser1177磷酸化，但对PKB和eNOS表达均无影响；eNOS阻断剂L-NAME能完全阻断罗格列酮培养的内皮细胞NO浓度的升高，P13K阻断剂LY294002能阻断罗格列酮诱导的NO产生和PKB，eNOS的磷酸化。结论：罗格列酮能通过激活P13K／PKB／eNOS信号通路而增强内皮细胞NO的浓度，改善内皮功能。     

大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达

目的 研究大鼠脊髓损伤后内皮型一氧化氮合酶（eNOS)mRNA表达的变化规律。方法 建立大鼠脊髓压迫伤模型。用逆转录聚合酶链反应法测定伤段脊髓组织eNOSmRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在eNOSmRNA的表达,脊髓压迫伤后eNOSmRNA表达迅速增强,在伤后6h达到高峰。结论 eNOS可参与脊髓组织正常的生理调节,并可能在继发性脊髓损伤过程中起保护作用。     

ET-1、NO、NOS、ETB受体在大鼠肝肺综合征作用中的初步研究

目的探讨内皮素-1（endothelin-1,ET-1）、内皮素B（endothelin B,ETB）受体、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）、一氧化氮（nitric oxide,NO）在大鼠肝肺综合征作用中的机制。方法雄性Wistar大鼠共33只随机分为3组,正常对照组（Control）、胆总管结扎组（common bileduct ligation,CBDL）和肝前门静脉高压（partial portal vein ligation,PVL）组。分别对对照组和PVL组术后5周以及CBDL组术后2、3和5周进行检测：门静脉压力、血气分析、肝功能以及血清一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、肺组织内ETB受体、一氧化氮合酶诱导型（iNOS）、一氧化氮合酶内皮型（eNOS）蛋白表达水平,肝、肺病理,并使用激光多普勒血流仪检测肝、肺微循环进行检测。结果 CBDL组和对照组相比肝功能检测中白蛋白降低,胆红素、AST均升高;血气分析中PaO2降低,肺泡动脉氧分压差（AaPO2）增大;肝脏毛细血管血流量降低（P〈0.05）;肺脏毛细血管血流量增大（P〈0.05）;血浆内ET-1,NO水平增高;肺脏组织内eNOS,ETB受体蛋白表达增高（P〈0.05）;且病理检查CBDL组大鼠的肝脏组织可见胆汁性纤维化表现,肺组织可见肺毛细血管扩张、充血,证实HPS大鼠模型制成。PVL组大鼠与对照组相比,除门静脉压力和组织内ETB受体蛋白表达增高外（P〈0.05）,其余指标的差异有无统计学意义。肺脏组织内eNOS蛋白表达在三组间的表达无统计学意义。结论在CBDL建立的HPS大鼠模型中,可能是ET-1可被肝脏过量生成,进入血循环,与肺脏血管内皮细胞上的ETB受体结合,增加eNOS的表达和活性,NO产生增多,引起肺内血管扩张,进一步引起肝肺综合征（HPS）。     

大鼠颈动脉外膜炎症对血管内皮功能的影响

目的 探讨动脉外膜炎症对血管内皮功能的影响.方法 大鼠右颈动脉硅胶管包裹制备动脉外膜炎症大鼠模型.外膜炎症组、对照组各10只大鼠.测定各组大鼠包裹段颈动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血清一氧化氮(NO)、血浆内皮素(ET)水平.结果 与对照组相比,外膜炎症组eNOS表达明显增强,血清NO水平明显降低,ET水平明显增高.结论 颈动脉外膜炎症大鼠在动脉内膜形态学改变尚不明显前即可检测到eNOS表达增强、NO的降低及ET的升高,提示血管外膜炎症引起内皮损伤后功能改变早于形态学改变.     

缺血后处理对肾缺血/再灌注损伤后内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察缺血后处理对大鼠急性肾缺血/再灌注损伤的保护作用及缺血后处理对内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响.方法 将2012年9月购自武汉大学动物实验中心的38只8周龄雄性Wistar大鼠依据随机数字表法分为4组：假手术组（8只）、缺血/再灌注组（10只）、缺血后处理组（10只）、缺血预处理组（10只）.建立原位大鼠单侧肾缺血/再灌注动物模型,摘除右肾后对左肾行缺血后处理,10 s再灌注,10 s缺血,6次循环后再灌注24 h.采用全自动生化分析仪检测血尿素氮、肌酐,比色法测定血浆一氧化氮.免疫组织化学法和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测eNOS表达.蛋白免疫印迹法（Western blot）检测胞质eNOS水平.结果 肾缺血/再灌注24 h后,缺血/再灌注组中血尿素氮、肌酐、一氧化氮较假手术组显著增高（P＜0.05）,组织中eNOS表达较假手术组升高（P＜0.05）,缺血后处理组和缺血预处理组中的血尿素氮、肌酐较缺血/再灌注组降低（P＜0.05）,血清一氧化氮和组织中eNOS较缺血/再灌注组中升高更显著（P＜0.05）.结论 缺血后处理对大鼠肾缺血/再灌注损伤有保护作用,具有临床应用价值.其保护机制可能与缺血后处理诱导eNOS的合成增多有关.     

内皮型一氧化氮合酶活性和基因表达异常与动脉粥样硬化

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)产生的一氧化氮(NO)减少将导致内皮细胞功能异常,最终可能导致动脉粥样硬化的产生。eNOS表达降低和酶活性的降低均可以导致NO生成减少。而eNOS活性受eNOS与某些蛋白质相互作用和本身磷酸化的影响。本文主要对eNOS基因表达异常和eNOS活性异常与动脉粥样硬化的关系予以综述。     

糖尿病大鼠后肢缺血与内皮型一氧化氮合酶解耦联的关系

目的 探讨糖尿病大鼠后肢缺血损伤的血管内皮功能障碍与内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）解耦联的关系.方法 15只SD大鼠随机分为正常组（5只）、糖尿病组（5只）及糖尿病后肢缺血组（5只）,建立糖尿病模型及糖尿病后肢缺血模型.建模2周后,用酶联免疫法检测各组股动脉一氧化氮（NO）的表达;用二氢乙锭（dihydroethidium,DHE）荧光探针法检测各组股动脉冰冻切片中超氧阴离子（O2-）的表达;Western blot检测各组股动脉1型三磷酸鸟苷环化水解酶（GPT cy-clohydrolase 1,GTPCH-1）的表达.结果 ①与正常组比较,糖尿病组股动脉NO表达降低,糖尿病后肢缺血组降低更为显著,3组间比较差异具有统计学意义（P=0.000,P=0.000,P=0.001）.②与正常组比较,糖尿病组O2-的表达明显增加,但不及糖尿病后肢缺血组.③与正常组比较,糖尿病组股动脉GTPCH-1的表达降低,糖尿病后肢缺血组降低更为显著,3组间比较差异具有统计学意义（P =0.001,P=0.000,P=0.012）.结论 在糖尿病大鼠后肢缺血血管损伤中存在eNOS解耦联.     

芝麻素对自发性高血压大鼠的降压作用及机制

目的:观察芝麻素(Ses)对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用,并探讨其可能机制。方法:SHR 35只,随机分为SHR模型组、Ses160、80、40 mg/(kg·d)、卡托普利(Cap)30 mg/(kg·d),另设WKY正常对照组,于给药16周后,颈总动脉插管测收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及平均血压(MBP),Griess Reagent法测主动脉中一氧化氮(NO)含量,化学比色法测主动脉中过氧化氢(H2O2)含量,RT-PCR观察主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p22phox及p47phoxmRNA表达。结果:与SHR组相比,Ses160、80 mg/kg组SBP、DBP、MAP均显著降低(P<0.01,P<0.05),主动脉中NO含量显著提高(P<0.01),eNOS mRNA表达显著增加(P<0.01,P<0.05),p22phox、p47phoxmRNA表达显著减少(P<0.01,P<0.05)。Ses各剂量组H2O2含量显著降低(P<0.01)。结论:芝麻素通过上调SHR主动脉中eNOS mRNA的表达,使内皮细胞合成和释放NO增多;下调主动脉NADPH氧化酶p22phox和p47phoxmRNA的表达,使NO活性恢复,发挥降血压的作用。     

2型糖尿病大鼠血管内皮功能改变及机制

目的探讨2型糖尿病大鼠胸主动脉内皮依赖血管舒张功能的改变及其机制。方法高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,分组处理4周后,观察糖尿病（DM）组、正常（NC）组、糖基化终末产物抑制剂（AG）组血管舒张功能,eNOSmRNA表达及血清NO浓度。结果①DM组血糖、血清胰岛素、甘油三酯较NC组显著升高（P〈0．05）。②最大内皮依赖血管舒张功能（EDVRmax）,DM组低于AG组（P〈0．05）,AG组低于NC组（P〈0．05）。③eNOSmRNA表达,AG组高于DM组（P〈0．05）,DM组高于NC组（P〈0．05）。④血清NO浓度AG组高于NC组（P〈0．05）,NC组高于DM组（P〈0．05）。结论高级糖基化终末产物（AGEs）通过NO途径介导糖尿病内皮功能损伤,糖基化终末产物抑制剂（AG）可改善内皮依赖血管舒张功能。     

丹参酮对高血压大鼠心脏保护作用

目的：通过建立肾性高血压大鼠模型,观察高血压大鼠心脏形态及NOS活性和NO产量变化,来探讨丹参酮ⅡA （Tanshinone ⅡA,TSN）对心脏的保护机制。方法：应用经典的双肾双狭复制肾血管性高血压大鼠模型（two～kidney, two～clip re-novascular hypertension model ,2K2C RH model）,设立假手术组、高血压组、丹参酮治疗组。采用鼠尾测压法测定大鼠血压;分别应用化学比色法法和硝酸还原酶法测定心肌组织 NOS活性测定及一氧化氮（ NO）的浓度;结果：丹参酮可促进心肌组织NOS活性及NO产量增加,并可明显改善RH大鼠心肌肥大和间质纤维化。结论：丹参酮可明显改善RH大鼠心肌肥大和心肌间质纤维化,此作用可能与TSN促进心肌组织eNOS蛋白表达、上调NOS活性和NO产量有关。     

基于网络药理学、分子对接及实验探讨茵陈蒿汤调节阻塞性黄疸氧化应激的作用机制

目的:运用网络药理学探讨茵陈蒿汤调节阻塞性黄疸氧化应激的作用机制,并用分子对接及免疫组化进行验证。方法:首先利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）和UniProt数据库检索并筛选茵陈蒿汤有效成分及作用靶点;通过Gene Cards数据库检索阻塞性黄疸的作用靶点;利用R语言将疾病与药物的有效靶点进行分析,确定交集靶点;通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络;利用R语言进行基因本体论（GO）生物学过程富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;利用Autodock_vina软件对内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和茵陈蒿汤主要化学成分进行分子对接验证;最后通过免疫组织化学方法（IHC）验证茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肝组织中eNOS和iNOS的影响。结果:研究共筛选获得茵陈蒿汤中29个有效成分及177个作用靶点,阻塞性黄疸的2 183个疾病靶点,茵陈蒿汤和阻塞性黄疸的交集靶点123个;经GO和KEGG富集分析得到133个GO生物过程和127个相关信号通路,主要涉及Hepatitis B、流体剪应力与动脉粥样硬化、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）、肝细胞癌、低氧诱导因子（HIF）-1等信号通路;拓扑属性分析发现槲皮素、山奈酚、异鼠李素等主要成分和Akt1、TP53、白细胞介素（IL）6、血管内皮生长因子（VEGF）A、eNOS和iNOS等关键靶点。分子对接验证表明,eNOS和iNOS蛋白与槲皮素、山奈酚、异鼠李素有较好的亲和能力;IHC实验证明与假手术组相比,模型组肝组织中eNOS表达水平降低,而iNOS表达水平升高（P＜0.05）;与模型组相比,茵陈蒿汤组肝组织中eNOS表达水平升高,iNOS表达水平降低（P＜0.01）。结论:茵陈蒿汤对阻塞性黄疸的作用具有多成分、多靶点、多通路的特点,茵陈蒿汤对阻塞性黄疸氧化应激的调节可能与改变eNOS、iNOS蛋白的表达有关。