高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量

目的:采用高效液相色谱法测定膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量.方法:依利特Hypersil ODS 2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:A相为乙腈-甲醇(体积分数 9∶1),B相为水,梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;检测波长:260 nm;柱温:室温;进样量:20 μl.黄芪药材以甲醇超声提取2次,每次20 min.结果:毛蕊异黄酮苷和芒柄花素色谱峰的理论塔板数分别为50 134和25 258.回归方程分别为Y=58 924 X-12 352,r=0.999 9和Y=9 237 X-124 447,r=0.999 9,线性范围分别为2.022～101.1 μg/ml和38.04～1 522 μg/ml.方法学考察结果表明,毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的日内和日间RSD均<2.0%,最低检测限分别为0.202 2 μg/ml和1.522 μg/ml,加样回收率结果分别为98.34%,RSD＝1.33%(n=3)和98.84%,RSD＝0.12%(n=3).测定了10批次黄芪药材的毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量.结论:该方法稳定简便,结果可靠,能够用于黄芪药材中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素含量测定的研究.     

黄芪赤风汤指纹图谱建立及主要成分含量测定

目的 建立10批黄芪赤风汤供试品溶液的指纹图谱，以及对方中芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷7种主要成分进行测定。方法 采用Diamonsil C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；使用0.05%甲酸水(B)-5%四氢呋喃95%乙腈(D)为流动相进行梯度洗脱；流量：1 mL/min；柱温：23℃，进样量：10μL。基于HPLC-ELSD法，漂移管温度：60℃，柱温：30℃，进样量：20μL。结果 10批黄芪赤风汤供试品共标出16个共有峰，其相似度均在0.9以上，并对毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芍药苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮、芍药内酯苷分别进行指认；基于HPLC-ELSD法：10批黄芪赤风汤其相似度均在0.903以上。且7种主要成分在各自的加样范围中线性关系良好，各自加样回收率RSD≤3%，含量为：芍药内酯苷(9.58±1.70)mg/g、芍药苷(8.36±0.78)mg/g、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(0.77±0.11)mg/g、芒柄花苷(0.16±0.06)mg/g、毛蕊异黄酮(0.50±0.06)m...     

川产道地药材梭果黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定

目的：建立梭果黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素含量测定方法,为完善梭果黄芪的质量标准提供依据。方法：Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱;以乙腈为流动相A,以水（含0.2%甲酸）为流动相B,梯度洗脱;检测波长260 nm;柱温30℃;流速1.0 mL/min;进样量10μL。结果：毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的线性回归方程分别为Y=30.025 X＋5.1096（r=0.999 7）和Y=58.24 X-94.279（r=0.999 7）;线性范围分别为5.52～110.40μg/mL和5.54～110.72μg/mL;样品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的总量在0.0053%～0.0179%之间。结论：本实验建立的毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定方法简便、准确,可用于梭果黄芪药材中黄酮类成分的质量控制。     

甘肃不同产地野生与栽培红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量比较研究

目的分析比较野生与栽培红芪中2个活性成分含量的差异。方法采用高效液相色谱法对红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素进行含量测定。色谱柱为TC-C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),TC-C18保护柱(4.6 mm×10 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1 m L/min,检测波长为248 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果各产地野生红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量均高于栽培红芪,其中产自武都的栽培和野生样品中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量最高。结论不同产地野生与栽培红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量存在一定的差异,在评价红芪药材质量时应注意生长环境对药材质量的影响。     

山西浑源仿野生栽培蒙古黄芪的质量研究

目的 通过对山西浑源县仿野生栽培和野生蒙古黄芪中皂苷类和黄酮类成分的比较,评价仿野生栽培蒙古黄芪的质量。方法 采集12批野生和19批仿野生栽培蒙古黄芪样品,采用HPLC-DAD法测定毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4种黄酮成分,UPLC-ELSD法测定黄芪皂苷I、II、III、IV 4种皂苷成分。结果 5～6年生的仿野生栽培的蒙古黄芪中的高质量分数成分毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、黄芪皂苷I、II、III的量高于野生黄芪,相应的黄酮总量、皂苷总量高于野生黄芪,而2种低质量分数成分芒柄花素、黄芪皂苷IV的量低于野生黄芪;通过比较仿野生栽培1～6年生黄芪中8种成分的量发现,黄酮类成分随生长年限的增长不断升高,而皂苷类成分则逐渐降低。结论 仿野生栽培的方法可有效地解决优质野生浑源蒙古黄芪资源不足的问题。     

不同生长年限黄芪中总皂苷、黄芪甲苷、总黄酮及多糖含量比较

[目的]比较不同生长年限黄芪中总皂苷、黄芪甲苷、总黄酮及多糖的含量.[方法]采用比色法测定黄芪中总皂苷、总黄酮及多糖的含量,采用薄层扫描法测定黄芪中黄芪甲苷的含量.[结果]1,2,3年生黄芪中总皂苷的含量分别为0.793,0.803,0.991mg/g,黄芪甲苷分别为0.163,0.170,0.203mg/g,总黄酮分别为0.303,0.353,0.527mg/g,多糖分别为32.12,23.42,16.68mg/g.[结论]不同生长年限黄芪中主要成分含量差异较大,随着生长年限的增加,黄芪中的总皂苷、总黄酮及黄芪甲苷含量均增高,而多糖含量则降低.     

浑源黄芪地上部分与地下部分中黄酮类成分比较

目的:通过对山西道地药材浑源黄芪地上与地下部分黄酮类成分比较,为黄芪药材地上部分合理应用提供依据。方法:采取HPLC梯度洗脱技术,对黄芪中6种黄酮类成分同时进行分离、定量分析。结果:浑源黄芪地上部分与地下部分均含有6种黄酮类成分,只是含量上略有差异。地上部分总黄酮含量为0.745 0 mg/g,地下部分为0.885 9 mg/g,其中7,2′-二羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷在地上部分含量高于地下部分。结论:该结果为黄芪地上部分资源的开发利用提供参考依据。     

不同炮制方法对中药黄芪化学成分的影响

目的探讨不同炮制方法对中药黄芪化学成分的影响。方法采用炒黄芪、酒黄芪、生黄芪三种不同的炮制方法,炮制完后,提取不同炮制方法下黄芪黄酮类、糖类成分,比较炒黄芪、酒黄芪、生黄芪三种炮制方法的黄酮类、糖类成分含量的差异。结果酒黄芪毛蕊异黄酮含量显著高于生黄芪、炒黄芪(P<0.05),酒黄芪、生黄芪芒柄花素含量均显著高于炒黄芪(P<0.05)。酒黄芪毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷含量显著高于生黄芪、炒黄芪(P<0.05),酒黄芪、生黄芪芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量均显著高于炒黄芪(P<0.05)。炒黄芪、酒黄芪水溶性糖含量均显著高于生黄芪(P<0.05),炒黄芪还原性糖含量显著高于酒黄芪、生黄芪(P<0.05),炒黄芪、酒黄芪多糖含量均显著高于生黄芪(P<0.05)。结论不同炮制方法对中药黄芪的黄酮类及糖类成分产生较大的影响,其中酒黄芪的黄酮类成分含量较高,炒黄芪的糖类成分含量较高,因此,须根据具体的需求选择合适的炮制方法。     

四种黄芪黄酮类化合物单体对血管内皮细胞功能的保护作用

目的 观察从甘肃陇西产黄芪中提取的黄酮类化合物芒柄花素、毛蕊异黄酮-7-o-β-D-吡喃葡萄糖(CG)、毛蕊异黄酮和2’-OH-3’,4’-二甲氧基异黄烷-7-o-β-D-吡喃葡萄糖(DG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法 将芒柄花素、CG、毛蕊异黄酮和DG分别与1 μm...     

外源钾对红芪药材性状及异黄酮类成分的影响

目的 研究喷施不同浓度钾对红芪药材性状及异黄酮类成分的影响.方法 设置高、中、低3个浓度钾盐水平,观察采收期红芪药材的外观性状,采用空气-乙炔火焰原子吸收法测定样品中K、Ca、Mg、Zn、Fe、Cu、Co等7种无机元素的含量,采用高效液相色谱(HPLC)法测定毛蕊异黄酮苷、芒柄花素苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素等4种异黄酮类...     

黄芪及其蜜炙品的UPLC/Q-TOF-MS分析

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)进行黄芪及其蜜炙品的成分分析,并比较蜜炙前后主要成分的变化。方法采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以0.1%(体积分数)甲酸-乙腈-异丙醇体系梯度洗脱,使用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据。应用Markerlynx软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA),比较药材炮制前后成分变化。结果通过PCA分析,可以很好地区分蜜炙前后的黄芪药材,并鉴定了包括毛蕊异黄酮、芒柄花素、汉黄芪素、3,9-二-O-甲基尼森香豌豆紫檀酚在内的8种蜜炙前后质量分数变化较大的化合物。结论借助UPLC的快速分离和Q-TOF-MS测定的精确分子量信息,结合PCA模式识别方法可以有效地对黄芪药材蜜炙前后化学成分变化进行分析鉴定。     

黄芪注射液及其有效成分对乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响

目的：观察黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素对basal-like乳腺癌细胞株MDA—MB-468和MDA—MB-231增殖和磷酸化Akt（phospho-Akt,p-Akt）蛋白表达的影响。方法：用不同浓度的黄芪注射液、黄芪甲苷和芒柄花素对乳腺癌细胞株MDA—MB-468和MDA-MB-231进行干预,以不加药物干预的细胞作为空白对照。用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法观察药物对细胞增殖的作用。再选取药物抑制细胞增殖的最佳浓度,用细胞内蛋、白质印迹法观察对p-Akt（Thr308）和p-Akt（Ser473）蛋白表达水平的影响。结果：根据MTT比色法实验结果确定黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素和黄芪甲苷配伍芒柄花素的最佳浓度,黄芪注射液终浓度为生药含量1g／mL,黄芪甲苷终浓度为80μg／mL,芒柄花素终浓度为40μg／mL,黄芪甲苷：芒柄花素为1：4。干预MDA—MB-468细胞1d后,各用药组p-Akt（Thr308）和p—Akt（Ser473）蛋白表达水平下调,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;药物干预2d后,各用药组p-Akt（Thr308）水平显著下调（P〈0．05）,其中以芒柄花素组、黄芪甲苷＋芒柄花素组下调最为明显;芒柄花素和黄芪甲苷＋芒柄花素明显下调P—Akt（Ser473）蛋白表达。干预MDA—MB-231细胞1d后,与阴性对照组比较,芒柄花素组和黄芪甲苷＋芒柄花素组p-Akt（Thr308）蛋白水平有明显的下调;在药物干预2d后,黄芪注射液、芒柄花素和黄芪甲苷＋芒柄花素组p-Akt（Thr308）蛋白水平都有明显下调。备用药组p—Akt（Ser473）蛋白水平与阴性对照组比较,差异无统计学意义。结论：黄芪注射液、黄芪甲苷、芒柄花素对乳腺癌细胞株MDA—MB-468和MDA—MB-231均有抑制增殖的作用,但抑制作用程度及其浓度存在差异,其抑制细胞增殖的机制可能与下调Akt的磷酸化有关。     

Protection of PC12 Cells against Superoxide-induced Damage by Isoflavonoids from Astragalus mongholicus

Objective To further investigate the neuroprotective effects of five isoflavonoids from Astragalus mongholicus on xanthine （XA）/xanthine oxidase （XO）-induced injury to PC12 cells. Methods PC12 cells were damaged by XA/XO. The activities of antioxidant enzymes, MTT, LDH, and GSH assays were used to evaluate the protection of these five isofavonoids. Contents of Bcl-2 family proteins were determined with flow cytometry. Results Among the five isoflavonoids including formononetin, ononin, 9, 10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glucoside, calycosin and calycosin-7-O-glucoside, calycosin and calycosin-7-O-glucoside were found to inhibit XA/XO-induced injury to PC12 cells. Their ECs0values of formononetin and calycosin were 0.05 μg/mL. Moreover, treatment with these three isoflavonoids prevented a decrease in the activities of antioxidant enzymes, superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px）, while formononetin and calycosin could prevent a significant deletion of GSH. In addition, only calycosin and calycosin-7-O-glucoside were shown to inhibit XO activity in cell-free system, with an approximate IC50 value of 10 μg/mL and 50 μg/mL. Formononetin and calycosin had no significant infuence on Bcl-2 or Bax protein contents. Conclusion Neuroprotection of formononetin, calycosin and calycosin-7-O-glucoside may be mediated by increasing endogenous antioxidants, rather by inhibiting XO activities or by scavenging free radicals.     

甘肃不同产地黄芪芒柄花素的含量测定

目的测定甘肃渭源、漳县、岷县、宕昌4个不同产地黄芪药材中芒柄花素的含量,借此评价不同产地黄芪药材质量,为筛选优质、合格的原料提供参考。方法采用甲醇溶剂超声提取,以芒柄花素为对照品,通过HPLC．DAD法测定不同产地黄芪药材中芒柄花素的含量。结果渭源、漳县、岷县、宕昌4个产地黄芪芒柄花素含量分别为0．3096,0．1114,0．1333,0．0633mg／g。4个不同产地黄芪芒柄花素含量有一定差异,渭源产黄芪芒柄花素含量显著高于其他3个地区。结论该方法能用于不同产地黄芪的真伪和优劣的鉴别,为以后黄芪活性化合物的定性、定量关系研究及质量控制提供基础,为建立黄芪的质量控制及评价提供依据。     

高效液相色谱法测定成都市售蔬菜黄酮含量

目的建立黄酮含量测定的高效液相色谱法,并测定成都市售8种蔬菜中黄酮含量。方法采用高效液相色谱法,色谱条件：色谱柱Allsphere ODS-2Su C18柱,流动相乙腈和水（60：40）,流速1ml/min,柱温为25℃,进样量10μl,检测波长320nm。结果黄酮含量在0.02～0.2mg/ml范围内呈良好的线性关系（r2=0.999）,平均回收率99.3%（RSD=1.22%）。成都市售8种蔬菜中均含有黄酮类物质,芹菜和韭菜中黄酮类物质含量较高。结论建立的高效液相色谱法操作简便,分离度和灵敏度高,可适用于蔬菜中黄酮的测定。测定结果为合理的膳食指导提供了基础数据。     

HPLC-ELSD法测定双氯芬酸钠自乳化缓释片中双氯芬酸钠的含量

目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定双氯芬酸钠自乳化缓释片中双氯芬酸钠的含量.方法 采用HPLC-ELSD法.色谱柱:Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱;流动相:甲醇-0.12％(体积分数)冰醋酸(体积比20∶80);流速:1.0 mL· min-1;漂移管温度:40℃,气体...     

新疆光果甘草黄酮对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制活性研究

目的探讨新疆光果甘草（Glycyrrhiza glabraL）总黄酮及单体成分光甘草定（glabridin,Gb）对人肝癌Bel一7402细胞增殖的抑制活性。方法采用乙醇提取法从光果甘草制备总黄酮提取物（G卜A）;经聚酰胺富集法精制而制备黄酮含量高于50％的标准化提取物（GF—B）;从GF-B中纯化制备单体成分光甘草定（Gb）;以人肝癌Bel-7402细胞株作为体外模型,用MTT法测定各样品对肝癌细胞增殖的抑制活性。结果制备和鉴定3种提取物：GF—A（总黄酮含量31．18％）、GF—B（含量52．5％）和Glabridin单体;3种物质对人肝癌Bel-7402细胞的增殖显示明显的抑制活性,其浓度在25～250btg／mL范围内对肿瘤细胞的最高抑制率分别达67．92％、84．28％和90．11％。结论人肝癌Bel-7402细胞对光果甘草总黄酮的抗癌活性具有一定的敏感性;单体Gtabridin可能是光果甘草总黄酮中抗癌活性较高的有效成分之一。     

影响山西恒山野生蒙古黄芪质量的环境因素研究

目的 通过相关性分析和逐步回归分析方法分析海拔、经度、纬度、坡向、坡度生态环境因素对恒山产野生蒙古黄芪黄酮类和皂苷类成分的影响,筛选出影响黄芪质量的主要环境因素。方法 采用HPLC-DAD法测定了毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4种黄酮成分;UPLC-ELSD法测定了黄芪皂苷I、黄芪皂苷II、黄芪皂苷III、黄芪甲苷4种皂苷成分。采用SPSS17.0软件对黄芪各成分进行相关性分析,并以逐步回归分析法分析各生态因素对各成分量的影响。结果 建立逐步回归方程,毛蕊异黄酮苷的量与黄酮总量相关系数为0.958,黄芪皂苷I的量与皂苷总量相关系数为0.969,毛蕊异黄酮的量与芒柄花素的量相关系数为0.896,呈极显著的正相关;皂苷总量与黄酮总量相关系数为?0.505,呈显著的负相关。随着海拔和纬度的升高,黄芪中毛蕊异黄酮和黄酮总量升高;芒柄花素的量随经度的增加而增加;种植在阴坡的黄芪中黄芪皂苷I和皂苷总量的量高,且随坡度增大而升高;黄芪皂苷II的量主要受坡度的影响。结论 影响恒山野生蒙古黄芪药材黄酮成分量的主要因素是海拔和纬度,经度也有一定的影响;坡向和坡度对黄芪的皂苷成分的量有显著的影响,纬度、海拔也有一定的影响。