变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3／pacA和pcDNA3／pacP在哺乳动物细胞中

目的：研究变形链球菌表面蛋白真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ及ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ在哺乳动物细胞中的转录及表达情况。方法：利用脂质体介导的转染技术,将真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ及ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ分别转染ＣＯＳ－７细胞,１ｍｇ．ｍｌ＾－１ Ｇ４１８加压筛选获取稳定转染的ＣＯＳ－７细胞之后,采用ＲＴ－ＰＣＲ法、ＬＳＡＢ法、流式细胞术及Ｗｅｓｔｅｍ印迹法,对真核表达质粒中插入基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ的转录及表达产物进行检测。结果：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ及ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ的插入基因在导入哺乳动物细胞后具有转录和翻译活性,表达的蛋白质产物可位于胞内、胞膜及胞外。结论：构建的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ和ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ能在哺乳动物细胞中表达插入基因所编码的蛋白质,为进一步     

变形链球菌表面蛋白pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP真核表达质粒的构建

目的：构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ,即表面蛋白氨基端与中央区Ｔ、Ｂ细胞表位的两个基因疫苗。方法：通过ＰＣＲ扩增,获得分别编码变形链球菌表面蛋白ＰＡｃ氨基端和中央区Ｔ、Ｂ细胞表位的两个目的基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ。将它们与真核穿梭表达载体ｐｃＤＮＡ３进行体外重组,并转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,采用菌落原位杂交筛选出阳性克隆子后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析和ＤＮＡ序列测定。结果：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ构建正确,目的基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ定向插入至真核表达载体中,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架。结论：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ分别包含了变形链球菌表面蛋白ＰＡ     

小鼠釉原蛋白成熟肽编码区cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠釉原蛋白（ＡＭＧ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠釉原蛋白成熟区的基因片段（约６７０ｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＡＭＧ的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠釉原蛋白成熟肽编码区基因。     

含变链菌PAc蛋白编码基因保守区重组质粒pCIA-P的亚克隆构建

人类致龋菌变形链球菌 (Ｓ .ｍｕｔａｎｓ)的一种表面蛋白ＰＡｃ ,由于参与介导细菌对牙面的粘附而被视作Ｓ .ｍｕｔａｎｓ的重要毒力因子 ,因此成为研制防龋疫苗的主要备选抗原。我们选择ｐａｃ基因中编码ＰＡｃ主要免疫活性区域的ＤＮＡ序列 ,制备出待表达ＤＮＡ片段 ,经亚克隆至ｐＧＥＭ Ｔ质粒后 ,再克隆到高效哺乳动物表达质粒ｐＣＩ中构建成含ｐａｃ基因重要抗原决定簇编码区域的重组质粒 ,从而为防龋ＤＮＡ疫苗的免疫实验研究完成了重要准备。一、材料和方法1.目的片段的体外扩增 :从ｐａｃ基因中选定包含两个主要免疫活性区 (Ａ区及…     

口腔鳞癌nm23-H1基因存在状态及其与转移的关系

ｎｍ2 3是近年发现的一个肿瘤转移抑制基因 ,ｎｍ2 3包括ｎｍ2 3 Ｈ1和ｎｍ2 3 Ｈ2 两个亚型 ,本研究旨在探讨口腔鳞癌ｎｍ2 3 Ｈ1基因的存在状态及其与颈淋巴结转移的关系。一、材料和方法1.研究对象 :30例口腔鳞癌标本及7例正常对照标本均来自湖北医科大学口腔医学院口腔颌面外科手术患者。鳞癌组织学根据Ｂｒｏｄｅｒ分级分为 4级。口腔鳞癌转移癌细胞系ＧＮＭ及舌鳞癌细胞系Ｔｓｃｃａ由湖北医科大学口腔医学院建立。2 .ＰＣＲ扩增ｎｍ2 3 Ｈ1基因 :引物设计 :正义链 5′ＧＧＣＴＣＧＡＡＡＴＧＧＣＣＡＡＣＴ ＧＴＧＡＧＣＧ3′,反义链…     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＤＳＰ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＳＰ成熟肽编码区基因,正在进行该基因的表达和活性鉴定。     

变形链球菌表面蛋白DNA防龋疫苗的构建

旨在构建一种新型的表面蛋白防龋疫苗－ＤＮＡ防龋疫苗。方法从表面蛋白ｐａｃ基因上利用ＢａｍＨＩ和ＳａｃＩ双酶切，获得一个３２８１ｂｐ的片段。将该片段定向插入真核表达载体ｐＳＶＬ，再将连接后新构成的质ｐＳＶＬ／ｐａｃ转入氯化钙法制备的感受态大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α。     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA 隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨睡胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果     

一本值得推荐的口腔颌面外科专著——重建修复前口腔颌面外科学

一本值得推荐的口腔颌面外科专著——重建修复前口腔颌面外科学ＲＥＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＶＥＰＲＥＰＲＯＳＴＨＥＴＩＣＯＲＡＬＡＮＤＭＡＸＩＬＬＯＦＡＣＩＡＬＳＵＲＧＥＲＹＲａｙｍｏｎｄＪ．Ｆｏｎｓｅｃａ，Ｗ．ＨｏｗａｒｄＤａｖｉｓ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉ...     

小鼠牙本质磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质磷蛋白（ＤＰＰ）ｃＤＮＡ。方法：用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用ｏｌｉｇｏ（ｄｔ） 作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ 方法，从ｃＤＮＡ 中扩增出小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ基因片段（ 约１ ．６ｋｂ），将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ 质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１ － Ｂｌｕｅ 后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ 基因片段。     

颌骨中心性血管瘤合并颈动脉瘤误诊1例

颌骨中心性血管瘤合并颈动脉瘤误诊１例ＡＣＡＳＥＲＥＰＯＲＴＯＦＣＥＮＴＲＡＬＨＥＭＡＮＧＩＯＭＡＯＦＪＡＷＳＣＯＭＢＩＮＥＤＷＩＴＨＣＡＲＯＴＩＤＡＮＥＮＲＹＳＭ曾兴业沈月霞颌骨中心性血管瘤较为少见，合并颈动脉瘤者更为罕见；笔者于１９９１年收治１例，...     

颈部巨大组织缺损下部斜方肌皮瓣修复1例

颈部巨大组织缺损下部斜方肌皮瓣修复１例ＲＥＰＡＲＩＮＧＣＥＲＲＩＣＡＬＨＵＧＥＴＩＳＳＵＥＤＥＦＥＣＴＷＩＴＨＴＲＡＰＥＺＩＵＳＭＵＳＣＬＳＦＬＡＰ：ＲＥＰＯＲＴＯＦＡＣＡＳＥ刘伟弘张瑛叶勇毅王善昌作者单位：上海第二医科大学附属新华医院口腔颌面外科；...     

小鼠牙本质涎磷蛋白成熟蛋白编码区cDNA克隆与部分序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰＰ）成熟蛋白编码区基因。方法 用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰＰ成熟区的基因片段（约３ｋｂｐ）,将所５得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ     

头颈部肿瘤累及颈动脉的外科治疗

头颈部肿瘤累及颈动脉的外科治疗ＳＵＲＧＥＲＹＯＦＨＥＡＤＡＮＤＮＥＣＫＴＵＭＯＲＩＮＶＯＬＶＩＮＧＴＯＣＡＲＯＴＩＤＡＲＴＥＲＹ郑家伟综述邱蔚六张志愿审校作者单位：上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科（２０００１１）头颈部恶性肿瘤发展至晚期，...     

口腔颌面部血管外皮肉瘤(附6例报告)

口腔颌面部血管外皮肉瘤（附６例报告）ＨＥＭＡＮＧＩＯＰＥＲＩＣＹＴＩＣＳＡＲＣＯＭＡＯＮＯＲＡＬＡＮＤＭＡＸＩＬＬＯＦＡＣＩＡＬＲＥＧＩＯＮ：ＡＲＥＰＯＲＴＯＦ６ＣＡＳＥＳ杜晓军沈言备黄晓峰血管外皮肉瘤ＨｅｍａｎｇｉｏｐｅｒｉｃｙｔｅＳａｒｃｏ－ｍａ...     

抑癌基因p53基因克隆和表达

目的；本研究对抑癌基因ｐ５３进行基因克隆和表达以获得ｐ５３基因产物，方法：采用基因克隆重组技术将ｐ５３ｃＤＮＡ编码区重组到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中，用免疫斑点杂交技术检测ｐ５３融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结果：我们获得了ｐ５３基因融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－ｐ５３并在大肠杆菌中获得了表达。结论：ｐＧＥＸ－２Ｔ是一个有效的融合基因表达载体，适合于ｐ５３基因的表达，用ｐＧＥＸ－ｐ５３可以很方便地     

原发性下颌骨中心性鳞状细胞癌(附10例报告)

原发性下颌骨中心性鳞状细胞癌（附１０例报告）ＡＲＥＰＯＲＴＯＦ１０ＣＡＳＥＳＭＡＮＤＩＢＵＬＡＲＣＥＮＴＲＥＳＱＵＡＭＯＵＳＣＥＬＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡ杨建平胡勤刚原发性颌骨中心性鳞状细胞癌（简称鳞癌）（ｐｒｉｍａｒｙｃｅｎｔｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅ...     

涎腺腺样囊性癌细胞生物学特性的探讨

一、材料和方法1.材料 :将正常涎腺 2 3例和腺样囊性癌 (ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＡＣＣ) 2 6例常规 10 %甲醛固定 ,石蜡包埋并切成4μｍ厚 切片以备ＨＥ染色和免疫组化染色。单克隆和多克隆抗体Ｓ 10 0Ａ1、Ｓ 10 0Ａ2、Ｓ 10 0Ａ4、Ｓ 10 0Ａ6和Ｓ 10 0Ｂ均由瑞士的Ｚｕｒｉｃｈ大学的ＣＷＨｅｉｚｍａｎｎ教授馈赠。其余的抗体来源如下 :ＧＦＡＰ6Ｆ 2 (ＭｏＡｂ) ,ＧＦＡＰ(ＰｏＡｂ ) ,ＮＳＥ(ＭｏＡｂ) ,ｖｉｍｅｎｔｉｎ(ＭｏＡｂ) ,ＥＭＡ (ＭｏＡｂ)和ＣＥＡ (ＰｏＡｂ)购自Ｄａｋｏ,Ｄｅｎｍａｒｋ。ＧＦＡ…     

先天性唇腭裂伴全内脏转位先心1例

先天性唇腭裂伴全内脏转位先心１例ＣＯＮＧＥＮＩＴＡＬＣＬＥＦＴＬＩＰＡＮＤＰＡＬＡＴＥＡＮＤＩＮＶＥＲＳＩＯＮＯＦＡＬＬＶＩＳＣＥＲＡ：ＲＥＰＯＲＴＯＦＡＣＡＳＥ周永海作者单位：龙泉市人民医院口腔科（３２３７００）先天性唇腭裂常伴有全身其他脏器的畸形...     

Smad2基因MH2结构域表达载体的构建和其在大肠杆菌中的表达

目的：构建Ｓｍａｄ２基因ＭＨ２结构域原核融合表达载体,在大肠杆菌中表达ＭＨ２结构域,为制备抗ＭＨ２抗体,研究Ｓｍａｄ２基因和ＭＨ２结构域的功能奠定基础。方法：用ｐＧＥＸ－４Ｔ－２表达载体构建ｐＧＥＸ－４Ｔ－２／Ｓ２ＭＨ２原核融合表达载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ＭＨ２融合蛋白,１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物。结果：重组载体转化ＤＨ５α,经ＩＰＴＧ诱导４ｈ后,在１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白条带,相对分子质量（Ｍｒ）约为４９×１０３。结论：构建成功ｐＧＥＸ－４Ｔ－２／Ｓ２ＭＨ２融合表达载体,在大肠杆菌ＤＨ５α内表达获得ＧＳＴ－ＭＨ２融合蛋白。