SS-GAG对高糖状态下血管内皮细胞NO释放及ET-1分泌的影响

目的观察高糖状态下扇贝裙边糖胺聚糖(scallop skirt glycosaminogly can, SS-GAG)对体外培养的血管内皮细胞(ECV-304)一氧化氮(NO)释放及内皮素-1(ET-1)分泌的影响。方法在体外培养生长良好的ECV-304分别加入不同浓度葡萄糖,建立高糖损伤细胞模型,选择葡萄糖终浓度为55.5mmoL/L的培养液作为高糖环境,加入不同浓度SS-GAG继续培养至12、24、36、48h,倒置显微镜下观察细胞生长状态,特异性硝酸还原酶法检测细胞内NO,放射免疫法测定ET-1。结果① 高糖能抑制ECV-304细胞生长,细胞形态发生改变。 SS-GAG减轻高糖对ECV-304损伤,SS-GAG保护组细胞形态基本完好;② 高浓度葡萄糖促进ET-1的分泌,与正常对照比较差异有统计学意义（P＜0．01)。而NO含量则随作用时间的延长表现出先升高后下降的动态变化过程,与正常对照比较差异有统计学意义（P＜0．01)。SS-GAG对高糖状态下ECV-304细胞分泌ET 1、NO具有调节作用,使其趋于正常,与正常对照比较差异无统计学意义（P＞0．05),与高糖比较差异有统计学意义（P＜0．01)。结论高浓度葡萄糖对ECV-304具有明显的损伤作用,可直接导致ECV-304形态和功能异常,引起ET-1分泌增多以及损伤内皮NO系统使NO分泌失调。SS-GAG可减轻高糖对ECV-304细胞的损伤,通过调节 ET和NO平衡,起到保护ECV-304作用。     

不同浓度葡萄糖和氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞生长的影响

目的：通过对动脉内皮细胞的培养,研究高浓度氧化低密度脂蛋白（ox-LDL)和葡萄糖在糖尿病（DM）大血管并发症发生中的作用。方法：采用^3H-TdR标记法,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（MTT）法和锥虫蓝染色法。结果：（1）高浓度ox-LDL和高浓度葡萄糖抑制内皮细胞的增殖、促进内皮细胞死亡,并且呈浓度依赖性,并且呈浓度依赖性;（2）高浓度葡萄糖增强ox-LDL对内皮细胞的增殖抑制及促进其死亡的作用。结论：在高浓度葡萄糖情况下ox-LDL致血管内皮细胞损伤的作用加强,提示DM高血糖促进了脂质异常对血管内皮的损伤,促进DM大血管病变的发生、发展。     

阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白所致的内皮细胞释放NO的影响

目的：分析阿魏酸钠的抗动脉粥样硬化作用机制，为临床治疗提供理论依据。方法：首先在体外进行低密度脂蛋白的氧化，然后分别与加有不同浓度的阿魏酸钠的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，测定培养基上清液中NO的含量，从而观察阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白所致HUVEC释放NO的影响。结果：阿魏酸钠能明显抑制UVEC所致的NO下降作用，这种抑制作用无剂量依赖性。结论：阿魏酸钠的抗动脉粥样硬化作用机制可能通过NO发挥作用。     

氧化修饰型低密度脂蛋白与高糖对血管内皮细胞TGF—β1生成的影响及意义探讨

目的：通过用不同浓度的葡萄糖及氧化修饰型低密度脂蛋白（ox-LDL)刺激血管内皮细胞,测定其TGF－β的含量,探讨在高糖,高脂诱导下动脉粥样硬化形成中TGF－β1的分泌变化及其意义,方法：用酶消化法体外养血管内皮细胞,分别用LDL50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml和D－葡萄糖5mmol/L,25mmol/L,50mmol/L刺激内此细胞,24小时后收集培养上清,ELISA法测定培养上清内TGF－β1的含量,结果：ox-LDL能明显促进内皮细胞分泌TGF－β1（P＜0．01）,且有剂量效应,D－葡萄糖在5mmol/L的浓度下,与对照组比无明显差异（P＞0．05）,在25mmol/L的浓度下内皮细胞的分泌明显增加（P＜0．01）,在50mmol/L时,TGF－β1含量无明显增加（P＞0．05）,结论：ox-LDL和高糖能明显诱导内皮细胞分泌TGF－β1,提示其在动脉粥样硬化的病理过程中起着重要作用。     

低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素的影响

目的探讨低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素(ADM)的影响.方法利用培养的内皮细胞株ECV-304细胞,分别与不同浓度的低密度(50 100mg/L)、氧化低密度脂蛋白(50 100mg/L)及低密度脂蛋白(50 mg/L) 氧化低密度脂蛋白(50 mg/L)进行孵育,24 h后分别收集培养上清及细胞,用放免分析检测上清及细胞内肾上腺髓质素的含量.结果低密度脂蛋白对肾上腺髓质素的分泌无影响,而氧化型低密度脂蛋白能明显刺激ADM的分泌,二者合用的作用接近于100mg/L的OX-LDL.结论OX-LDL可能具有氧化LDL使其成为OX-LDL的作用,ADM的分泌可能是对细胞损伤的一种反应.     

薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导血管内皮细胞(EC)凋亡的保护作用,并探讨其作用机制.方法:实验分5组,对照组、模型组(150μg/mL的Ox-LDL)、薯蓣皂苷低中高剂量组(4.8、12、30μg/mL),用MTT法检测EC存活率;流式细胞术分析测定细胞凋亡率;硝酸还原酶法测定EC的NO浓度;双抗体夹心法检测内皮素(ET)浓度;Western Blot测定内皮细胞eNOS的蛋白表达.结果:与对照组相比,Ox-LDL使EC的凋亡率、ET的浓度显著升高(49.6±10.44vs 30.0±3.27,P＜0.01;25.89±2.07vs16.93±1.64,P＜0.05);使EC的存活率、NO的浓度、eNOS蛋白表达显著降低(64.89±1.02vs 100±0,P＜0.01;27.03±3.12vs59.46±16.19,P＜0.01;P＜0.01).薯蓣皂苷低中高剂量组能明显抑制EC的凋亡率,降低ET的浓度;提高EC的存活率、NO的浓度以及eNOS蛋白表达水平,且在此药物浓度范围内成浓度依赖性.结论:著蓣皂苷可能通过减少ET的合成与分泌,提高eNOS的表达,使NO的合成与释放增加,从而对Ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡起到保护作用.     

血必净注射液对ICU患者血管内皮细胞的保护作用及其对ET-1、NO的影响

目的探讨血必净注射液对于ICU重症患者血管内皮细胞的保护作用及对血浆中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)水平的影响。方法选择近3年入住我院ICU的重症患者80名。分为常规治疗组(对照组)和常规治疗加血必净治疗组(血必净组)各40名患者。常规治疗组患者给予常规西医综合治疗,血必净组在常规西医治疗的同时,在诊断明确后第1天给予血必净注射液100 mL静脉滴注,每天2次,共7 d。对所有患者在治疗前后检测血中循环内皮细胞数(CEC)和ET-1、NO水平,同时对所有患者进行APACHEⅡ评分。结果血必净注射液治疗组更能显著降低患者血中CEC和ET-1、NO水平,对内皮细胞起到较好的保护作用,并降低患者的APACHEⅡ评分。结论血必净注射液可以保护重症患者的内皮细胞,降低循环中ET-1和NO水平,改善重症患者的病情,对ICU重症患者起到积极的治疗作用。     

氧化修饰型低密度脂蛋白与高糖对血管内皮细胞TGF-β_1生成的影响及意义探讨

目的　通过用不同浓度的葡萄糖及氧化修饰型低密度脂蛋白 (ox- L DL)刺激血管内皮细胞 ,测定其分泌TGF-β1 的含量 ,探讨在高糖、高脂诱导下动脉粥样硬化形成中 TGF-β1 的分泌变化及其意义。方法　用酶消化法体外培养血管内皮细胞 ,分别用 L DL 5 0μg/ ml、10 0μg/ ml、2 0 0μg/ ml和 D-葡萄糖 5 mmol/ L、2 5 mmol/ L、5 0 mmol/ L刺激内皮细胞 ,2 4小时后收集培养上清 ,EL ISA法测定培养上清内 TGF- β1 的含量。结果　 ox- L DL 能明显促进内皮细胞分泌 TGF- β1 (P<0 .0 1) ,且有剂量效应 ;D-葡萄糖在 5 mmol/ L 的浓度下 ,与对照组比无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,在 2 5 mmol/ L 的浓度下内皮细胞的分泌明显增加 (P<0 .0 1) ,在 5 0 mmol/ L时 ,TGF-β1 含量无明显增加 (P>0 .0 5 )。结论　 ox- L DL和高糖能明显诱导内皮细胞分泌 TGF-β1 ,提示其在动脉粥样硬化的病理过程中起着重要作用     

妊高征患者血清对内皮细胞分泌NO与ET-1的影响

妊娠高血压综合征 (简称妊高征 ,ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｉｎｄｕｃｅｄｈｙｐｅｒ ｔｅｎｓｉｏｎ ,ＰＩＨ)是产科严重而常见的并发症。近年来 ,血管内皮功能失调学说越来越受到广泛关注[1] 。一氧化氮 (ＮＯ)和内皮素 (ＥＴ 1)都是来源于血管内皮细胞的生物活性因子 ,分别为扩张血管物质和收缩血管物质 ,可作为反映血管内皮细胞功能的指标。一些动物实验和临床研究发现 ,血管内皮ＮＯ合成减少、而ＥＴ 1合成增加 ,可能是妊高征的病理生理变化的关键因素。但目前尚不能确定内皮细胞 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＥＣ)功能失调的原因。有人认为[2 ] ,在妊高征患者血清中存在某种或某些因素引起的ＥＣ     

升降散对内毒素刺激血管内皮细胞ET-1和NO表达的影响

目的:探讨升降散对内毒素(LPS)刺激下血管内皮细胞ET-1和NO表达的影响。方法:将内皮细胞传代培养后分为空白组、对照组(空白细胞+LPS 0.50 mg/ml)、低剂量升降散组(升降散5 mg/ml+LPS 0.50 mg/ml)、中剂量升降散组(升降散10 mg/ml+LPS 0.50 mg/ml)和高剂量升降散组(升降散30 mg/ml+LPS 0.50 mg/ml),观察各组ET-1和NO水平变化。结果:升降散作用细胞48 h后,内皮细胞在5～30 mg/ml范围内对内皮细胞贴壁无明显影响。LPS作用内皮细胞48 h后,NOi、NOS、NOS水平明显升高,与空白组比较有显著性差异(P<0.01);升降散作用细胞后ET-1、NOi、NOS、NOS水平有不同程度降低,与对照组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01),且中、高剂量升降散组诸指标的降低幅度较低剂量升降散组明显(P<0.05,P<0.01)。结论:升降散能抑制LPS诱导的VECs活性物质生成和释放,从而减轻对组织细胞的损伤,以中高剂量升降散效果更显著。     

氧化低密度脂蛋白与血管内皮细胞损伤

<正>动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)以血管内皮细胞(Vascular endothelia cell,VEC)受损、功能障碍为起始,继而血浆脂质侵入内皮下,引起单核/巨噬细胞浸润及血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMC)迁移至内膜下增     

甘糖酯对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的作用

①目的　探讨甘糖酯对氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)损伤的血管内皮细胞的作用。②方法　将VEC 30 4内皮细胞株培养后 ,分为两组 :治疗组先给予oxLDL ,再加入不同浓度的甘糖酯 (2 5、5 0、10 0mg/L) ;保护组先给予不同浓度 (2 5、5 0、10 0mg/L)甘糖酯 ,再与oxLDL作用。培养一定时间后 ,取上清液测定丙二醛 (MDA)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量。③结果　治疗组 3种浓度甘糖酯均可以降低oxLDL造成的MDA升高 ,而且随着浓度的增高其作用也有增加的趋势 (F =6 6 .12 ,q =6 .5～ 18.3,P <0 .0 5 ) ;浓度较高 (10 0mg/L)甘糖酯可降低oxLDL造成的LDH升高 (F =15 .99,q=8.9,P <0 .0 5 )。保护组 3种浓度甘糖酯均可使MDA含量降低 ,与对照组比较差异有显著性 (F =5 6 .98,q=16 .7～ 5 5 .2 ,P <0 .0 5 ) ;且不同浓度组间差异有显著性 (q =18.9～ 38.6 ,P <0 .0 5 ) ;较大浓度(10 0mg/L)甘糖酯可使LDH含量降低 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (F =19.13,q =9.8,P <0 .0 5 )。 ④结论　甘糖酯对oxLDL造成的血管内皮细胞的过氧化损伤有修复和保护作用     

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化砸低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒（CMV）感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代，CMV感染3-6代细胞，不同时间提取细胞总RNA，采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达。结果病毒感染6h凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达与对照组相似，病毒感染12、24h与对照组比较明显增强。结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达，可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一。     

氧化低密度脂蛋白对体外血管内皮细胞损伤的剂量反应关系

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)造成的损伤效应。方法:分别用不同浓度的ox-LDL作用于对数生长期的HUVEC细胞24 h,进行细胞形态学观察比较,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,计算细胞生长抑制率,并测定细胞中丙二醛(MDA)含量。结果:随着ox-LDL浓度的增加,细胞形态发生明显变化,变得结构松散,ox-LDL高浓度时甚至出现细胞破碎、死亡。MTT实验的吸光度值(OD)在ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度干预24 h后细胞中MDA含量与MTT实验结果一致。当ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,细胞抑制率分别达到23.2%、45.2%、62.0%。结论:当HUVEC细胞暴露于ox-LDL 24 h后,干预浓度越大细胞活力越低,细胞生长抑制率越大,细胞中MDA含量增加。ox-LDL浓度为200μg/m L以内时,ox-LDL对HUVEC细胞可造成较明显的氧化损伤且呈现剂量效应关系。     

拉米普利酸对氧化型低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

体外培养人脐静脉内皮细胞，观察拉米普利酸对由Ｃｕ＾２＿，内皮细胞氧化修复的ＬＤＬ损伤内皮细胞的保护作用及与ＮＯ、ｃＧＭＰ的关系，结果发现：（）ＯＬＤＬ损伤内皮细胞，使ＭＤＡ升高，ＮＯ，ＣＧＭＰ下降。拉米普利酸能有效对抗ＯＬＤＬ损伤内皮细胞的作用，降低ＭＤＡ，升高ＮＯ、ＣＧＭＰ，一氧化氮合成酶拮抗剂硝基左旋精氨酸和加强的损伤效应，且能部分拮抗拉米普利酸的保护作用，结果提示：拉米普利酸对ＯＬＤＬ损伤血     

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达的影响.方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代,CMV感染3～6代细胞,不同时间提取细胞总RNA,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达.结果病毒感染6h凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达与对照组相似,病毒感染12、24h与对照组比较明显增强.结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 mRNA表达,可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一.     

高胰岛素对人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

目的：了解高胰岛素对人内皮细胞分泌前列环素（PGI2）和内皮素-1（ET-1）的影响.方法：采用酶消化法收集人脐静脉内皮细胞,经原代培养后随机分为4组：正常对照组,高胰岛素组,正常＋谷胱甘肽组,高胰岛素＋谷胱甘肽组;放免法测定4种培养基培养24 h,48 h,72 h时培养基中的PGI2和ET-1含量.结果：①高胰岛素组较正常对照组PGI2显著下降（P＜0.01）,ET-1显著升高（P＜0.01）;②高胰岛素＋谷胱甘肽组较高胰岛素组PGI2显著升高（P＜0.05）和ET-1显著下降（P＜0.05）.结论：高胰岛素对血管内皮细胞有损伤作用,还原型谷胱甘肽可减轻这种损伤.     

槲皮素对培养入脐静脉内皮细胞在缺氧条件下ET-1和NO水平的影响

目的研究槲皮素在缺氧条件下对血管内皮细胞的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，缺氧造成内皮细胞损伤，通过放免法和比色法测定培养上清中ET-1、NO的水平。结果HUVEC缺氧48h后，NO含量下降，而ET-1含量明显增加，如在缺氧前用不同浓度槲皮素(10、20、40、80μmol／L)与HUVEC预孵48h，则可对抗缺氧引起的ET-1和NO水平的改变。结论槲皮素能分别提高和降低血管内皮细胞在缺氧时ET-1和NO的水平，可能因此而产生保护作用。     

体外培养的新生小牛冠状动脉内皮细胞释放NO、ET-1和PGI2的实验研究

目的：建立新生小牛冠状动脉内皮细胞体外培养模型，并观测其对NO、ET－1和PGI2的分泌。方法：采用机械分离方法，通过内皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色和其在倒置相差显微镜下的形态进行鉴别。用放免法和比色法测定培养液中ET－1、PGI2、NO浓度。结果：新生小牛冠状动脉内皮细胞在体外生长曲线呈“S”形，并能分泌ET－1、PGI2和NO。结论：新生小牛冠状动脉内皮细胞能够进行体外培养，并能分泌ET－1、PGI2和NO。