DPP4 抑制剂西格列汀对ApoE基因敲除小鼠肾脏Egr-1 及FN表达的影响

目的 观察DPP4抑制剂西格列汀对ApoE基因敲除小鼠肾脏组织中早期生长反应因子-1(Egr-1)及纤连蛋白(FN)表达的影响.方法 8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为西格列汀干预组(sig+apoE-/-组)和实验组(apoE-/-组),每组6只,另取C57BL小鼠6只作为正常对照组(control组).高脂饮食结合药物饲养16周后,行腹腔耐量实验,观察血糖水平,后收集24 h尿标本,用ELISA法检测24 h尿蛋白,随后取血并处死各组小鼠,血清学检测血脂变化,取肾组织行实时荧光定量PCR及免疫印迹(Western blotting),检测肾组织中Egr-1及FN的mRNA和蛋白表达水平.结果 血脂检测显示,实验组和西格列汀干预组小鼠甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白均显著高于正常对照组(P＜0.05),实验组和西格列汀干预组间上述指标无统计学差异(P＞0.05),而高密度脂蛋白在西格列汀干预组显著高于实验组(P＜0.001)和正常对照组(P＜0.001).IPGTT结果显示,apoE-/-组、sig+apoE-/-组和对照组3组间空腹血糖水平均没有显著差异(P＞0.05).24 h尿液检测结果显示:apoE-/-组24 h尿白蛋白排泄量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P ＜0.01);西格列汀治疗后,sig+apoE-/-组小鼠24 h尿白蛋白较apoE-/-组显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.01).Real-time PCR和Western blotting检测显示:实验组肾皮质中,Egr-1及FN的mRNA水平和蛋白水平均高于正常对照组,而与实验组相比,西格列汀能显著降低Egr-1及FN的mRNA和蛋白水平.结论西格列汀可能通过调控Egr-1的表达从而下调FN,从而达到肾脏保护作用.     

Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响

目的：Fmr1基因敲除对小鼠生长发育的影响.方法：挑选10周龄FVB小鼠和Fmr1基因敲除小鼠各20只（雌、雄各半）,采取1∶1同居,全同胞兄妹近交繁殖,测定子代生长发育指标,进行统计分析.结果：Fmr1基因敲除小鼠体质量与体长分别为：0 d,（1.25.4±0.21）g,（38.99±1.74）mm;21 d,（8.17±2.26）g,（122.81±11.42）mm;60 d,（22.93±2.93）g,（180.19±7.46）mm;FVB小鼠体质量与体长分别为：0 d,（1.33±0.23）g,（40.53±3.05）mm;21 d,（7.75±1.56）g,（118.73±7.85）mm;60 d,（21.11±1.99）g,（176.43±5.73）mm.两个品系的小鼠体质量与体长的增长差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：Fmr1基因敲除不影响小鼠正常的生长发育.     

缺氧诱导因子2α基因敲除对小鼠动脉粥样硬化发生的影响

目的 明确缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor, HIF）-2α 对动脉粥样硬化病变的影响。方法 引进获得HIF-2α 基因LoxP 标记小鼠和Mx-Cre 转基因小鼠,利用Cre/LoxP 系统建立条件性HIF-2α 基因敲除的小鼠模型,同时以Mx-Cre 阴性的野生型小鼠和ApoE 基因缺陷小鼠为对照,高脂饲料喂养8 周后对小鼠主动脉进行HE 染色,观察动脉粥样硬化病变形成情况。结果 HIF-2α-LoxP 标记小鼠和Mx-Cre 转基因小鼠交配后,经过两次传代和基因型鉴定筛选,获得Mx-Cre阳性且HIF-2α 纯合LoxP 标记小鼠,采用聚肌胞腹腔注射后可成功建立HIF-2α 基因敲除小鼠模型。高脂喂养8 周后,ApoE 基因缺陷小鼠主动脉呈动脉粥样硬化样改变,野生型小鼠可见轻度内膜增生,而HIF-2α 基因敲除小鼠主动脉内膜未见增生。结论 HIF-2α 基因敲除可抑制小鼠动脉粥样硬化病变的形成,提示针对HIF-2α 的基因治疗可能是动脉粥样硬化防治策略的新方向。     

早期生长反应基因-1与大鼠急性胰腺炎合并肺损伤

目的通过观察早期生长反应基因-1(EGR-1)在AP大鼠肺组织和原代培养肺泡巨噬细胞(AM)中的表达及与TNF-αI、L-1β水平的关系,探讨EGR-1在AP肺损伤中的作用。方法将24只大鼠随机均分为4组,分别于胆管内逆行注入生理盐水或不同浓度的牛磺胆酸钠溶液。检测血清TNF-αI、L-1β水平,胰腺组织病理评分,肺组织湿重/干重比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色。另将原代培养AM分成4组,分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α、IL-β浓度。结果①肺组织免疫组化染色显示,EGR-1表达随AP病情加重而增强,并与反映AP病情及肺损伤各指标均呈显著正相关。②AM表达EGR-1程度与培养液TNF-αI、L-1β水平呈显著正相关,EGR-1在AM中的表达有ERK1/2信号途径的参与。结论EGR-1可能在AP并发肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关。     

胃癌Egr-1基因表达水平与临床病理的关系

目的研究胃癌组织中Egr—1基因表达水平与临床病理的关系。方法采用RT—PCR法检测胃癌、正常切缘胃组织中Egr-1mRNA的表达水平。免疫组化法检测胃癌组织、正常切缘胃组织中Egr—1mRNA相应蛋白表达水平。病理检查确定胃癌组织病理类型、分化程度及淋巴结转移情况。结果胃癌组织中Egr-1mRNA及Egr-1蛋白表达水平明高于正常胃组织（P〈0．01）;低分化胃癌中表达水平高于高分化胃癌（P〈0．01）;有淋巴结转移组表达水平高于无淋巴结转移组（P〈0．01）。结论Egr—1基因表达与胃癌发生发展及转移发生机制密切相关,对胃癌预后判定有重要意义。     

Egr-1与TNF-α在口腔扁平苔藓病损中表达的研究

目的:研究早期生长反应基因-1(Early growth response gene-1,Egr-1)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)在口腔扁平苔藓(Oral lichen planus,OLP)组织中的表达及其是否存在相关性。方法:采用免疫组织化学法和Westernblot技术检测30例正常口腔黏膜(Normal oral mucosa,NOM)组织与30例OLP组织中Egr-1和TNF-α的表达情况。结果:(1)上皮层中Egr-1、TNF-α在NOM组和OLP组均有表达,两组比较Egr-1表达无统计学意义(P>0.05),TNF-α表达为OLP组高于NOM组(P<0.05);在固有层中Egr-1、TNF-α的表达均为OLP组高于NOM组(P<0.05)。(2)Egr-1与TNF-α的表达量均为OLP组高于NOM组(P<0.05)。(3)在OLP组中Egr-1、TNF-α表达呈正相关(r=0.447,P<0.05)。结论:Egr-1和TNF-α是OLP发病的重要因素之一,Egr-1可能调控TNF-α的过量释放引起OLP的发病;两者的作用机制有待于进一步研究。     

大鼠Egr-1探针的制备及应用

目的：制备大鼠早期生长反应基因（Egr）-1分子探针,为进一步应用其研究Egr-1在病变组织的表达奠定基础。方法：提取大鼠心肌组织总RNA,PCR扩增基因片段,克隆入pGEM-T Easy载体,行酶切和基因测序。用随机引物DNA标记法制备α-32P标记的Egr-1和β-actin探针。Northern blot和Western blot法分析验证探针的信号强度及特异性。结果：PCR扩增所得目的基因片段大小与理论预期一致,测序证实获得基因序列与实验设计吻合。Northern blot显示该探针可检测心肌组织中目标mRNA水平,Western blot法检测到大鼠心肌组织中Egr-1蛋白的存在。结论：本研究成功制备大鼠Egr-1 cDNA探针,可用于进一步研究Egr-1与相关心血管疾病病理机制的关系。     

凝血因子IX基因剔除小鼠的培育历史与建系方法

目的　培育凝血因子IX基因剔除小鼠近交系。方法　采用全同胞兄妹对交配 ,每代选用第一胎小鼠留种 ,记录繁殖性能 ;第 8代开始筛选纯合子。结果　凝血因子IX基因剔除小鼠已近交培育到第 12代 ,交配年龄 70 - 90d ,平均每窝产仔数 5只以上 ,离乳数 3只以上。结论　纯合子FIX剔除基因小鼠在子代鼠中能稳定遗传     

ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).     

早期生长反应因子-1和组织因子在大鼠胰腺炎组织中的表达

目的 观察早期生长反应因子-1(Egr-1)和组织因子(TF)在实验性大鼠急性胰腺炎组织中的表达。方法 以大剂量雨蛙素(每小时腹腔注射20 μg/kg·b.w.,连续4 h)诱导建立大鼠急性实验性胰腺炎模型。观察刺激后30 min至4 h时急性胰腺炎组织Egr-1 mRNA和蛋白的表达以及TF mRNA的表达,并进行免疫组织化学检测。结果 大剂量雨蛙素刺激后,大鼠胰腺呈典型的胰腺炎改变。刺激后30 min胰腺组织Egr-1 mRNA表达达到高峰,然后逐渐下降。但Egr-1蛋白水平在刺激后2 h达到高峰。组织学观察发现,刺激后2 h,几乎每个胰腺腺泡细胞均表达Egr-1蛋白,并大多集中在细胞核。TF mRNA的表达在刺激后1 h出现,并在4 h内逐渐增高。大剂量的蛙皮素刺激胰腺组织仅引起少量的Egr-1 mRNA的表达。结论 Egr-1作为一种前炎性转录因子在急性胰腺炎的发生中可能起着重要的作用,这一作用在一定程度上可能是通过调节TF的表达而实现的。     

GPIHBP1基因敲除小鼠在严重高三酰甘油血症急性胰腺炎导致肺损伤研究中的应用

目的 旨在通过基因修饰的高三酰甘油血症小鼠建立急性胰腺炎模型,观察胰腺与肺病理改变。方法 采用野生小鼠与糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1（glycosylphosphatidylinositol-anchored high-density lipoprotein binding protein 1,GPIHBP1）基因敲除小鼠,腹腔注射雨蛙素,诱导急性胰腺炎,检测血浆脂质与不同时间下淀粉酶活性,观察胰腺与肺组织病理形态改变。结果 GPIHBP1基因敲除小鼠的血浆三酰甘油极度升高,在诱导急性胰腺炎后,淀粉酶活性明显改变,胰腺病理损伤加重,同时伴有肺损伤病变,肺泡灌洗液细胞数目明显增加。结论 GPIHBP1基因敲除小鼠诱导急性胰腺炎后,胰腺与肺病理损伤明显加重,对进一步探讨高脂血症急性胰腺炎导致肺损伤及远隔器官损伤的发病机制具有一定的意义。     

FOXM1 在SAP/ALI 小鼠肺组织修复 过程中的变化及其意义

目的 探讨重症急性胰腺炎（SAP）急性肺损伤（ALI）修复过程中叉头框蛋白M1（FOXM1） 的表达变化及其意义。方法 将BALB/c 小鼠随机分为假手术组（10 只）和模型组（50 只）,模型组小鼠又 随机分为模型组1、3、7、10 和14 d 5 个亚组,每组10 只。采用雨蛙肽腹腔注射诱导SAP/ALI 模型,观察 肺组织病理变化、肺微血管通透性、肺组织含水量及血清淀粉酶浓度。采用实时荧光定量聚合酶链反应和 Western blot 检测肺损伤修复过程中不同时间点FOXM1 mRNA 和蛋白的表达水平,分析FOXM1 蛋白表达 与肺微血管通透性的相关性。结果 与假手术组比较,模型复制后各时间点肺组织形态发生改变,但随着时 间的推移而不断减轻（P <0.05）。血清淀粉酶、肺微血管通透性及肺组织含水量变化规律与肺组织损伤后病 理学评分改变相似。同时,肺组织FOXM1 mRNA 表达水平有明显的动态演变规律,复制后第1 天表达下调, 第3 天开始逐渐上调,第7 天达高峰,第10 天逐渐恢复,第14 天时基本回到基础水平,且FOXM1 蛋白也有 相似的表达规律。FoxM1 蛋白表达水平与肺微血管通透性呈负相关（P <0.05）。结论 FOXM1 可能在促进 肺气血屏障的修复过程中发挥重要作用。     

Fluid therapy for severe acute pancreatitis in acute response stage

Background Fluid therapy for severe acute pancreatitis （SAP） should not only resolve deficiency of blood volume, but also prevent fluid sequestration in acute response stage. Up to date, there has not a strategy for fluid therapy dedicated to SAP. So, this study was aimed to investigate the effects of fluid therapy treatment on prognosis of SAP. Methods Seventy-six patients were admitted prospectively according to the criteria within 72 hours of SAP onset. They were randomly assigned to a rapid fluid expansion group （Group I, n=36） and a controlled fluid expansion group （Group II n=-40）. Hemodynamic disorders were either quickly （fluid infusion rate was 10-15 ml.kg-1-h-1, Group I） or gradually improved （fluid infusion rate was 5-10 ml-kg1.h-1, Group II） through controlling the rate of fluid infusion. Parameters of fluid expansion, blood lactate concentration were obtained when meeting the criteria for fluid expansion. And APACHE II scores were obtained serially for 72 hours. Rate of mechanical ventilation, incidence of abdominal compartment syndrome （ACS）, sepsis, and survival rate were obtained. Results The two groups had statistically different （P 〈0.05） time intervals to meet fluid expansion criteria （Group I, 13.5±6.6 hours; Group II, （24.0±5.4） hours）. Blood lactate concentrations were both remarkably lower as compared to the level upon admission （P 〈0.05） and reached the normal level in both groups upon treatment. It was only at day 1 that hematocrit was significantly lower in Group I （35.6%±6.8%） than in Group II （38.5%±5.4%） （P〈0.01）. Amount of crystalloid and colloid in group I （（4028±1980）ml and （1336±816）ml） on admission day was more than those of group II （（2472±1871）ml and （970±633）ml）. No significant difference was found in the total amount of fluids within four days of admission between the two groups （P〉0.05）. Total amount of fluid sequestration within 4 days was higher in Group I （（5378±2751）ml） than in Group II （（4215±1998）ml, P 〈0.05）. APACHE II scores were higher in Group I on days 1, 2, and 3 （P〈0.05）. Rate of mechanical ventilation was higher in group I （94.4%） than in group II （65%, P〈0.05）. The incidences of abdominal compartment syndrome （ACS） and sepsis were significantly lower in Group II （P 〈0.05）. Survival rate was remarkably lower in Group I （69.4%） than in Group II （90%, P〈0.05）. Conclusions Controlled fluid resuscitation offers better prognosis in patients with severe volume deficit within 72 hours of SAP onset. Chin Med J 2009; 122（2）： 169-173     

胰岛素样生长因子-1在大鼠重症急性胰腺炎中的作用

目的 观察胰岛素样生长因-1(IGF-1)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠中的治疗作用.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、SAP组、高剂量IGF-1组和低剂量IGF-1组,每组6只.采用改良的Aho法制作SAP模型,在造模6 h后处死大鼠,收集胰腺组织、外周血和腹水.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清细胞因子(IL-1β、IL-6)表达.Real-time PCR方法检测胰腺组织(TLR-4、MAPK p38、NF-κB p65)mRNA转录水平及蛋白水平变化.结果 SAP组大鼠腹水量、转氨酶、血清及腹水淀粉酶和炎症细胞因子IL-1β、IL-6较正常对照组及假手术组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);经IGF-1干预后,大鼠腹水量、转氨酶、血清及腹水淀粉酶、IL-1β和IL-6较SAP组明显下降,且随IGF-1剂量的增加,大鼠腹水量、转氨酶、血清及腹水淀粉酶、IL-1β和IL-6下降更加显著,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IGF-1能有效减轻SAP大鼠胰腺炎的病情.     

E2F1基因敲除小鼠骨髓造血干、祖细胞减少

目的了解转录因子E2F1基因敲除对造血干、祖细胞的影响。方法用不同抗体标记E2F1基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞,应用流式细胞仪进行分析,比较两组之间的差异。结果对检测结果进行统计分析发现,与野生型小鼠相比,E2F1基因敲除小鼠的外周血、骨髓细胞均有改变,脾脏细胞未见明显变化,骨髓前体B细胞、髓系祖细胞、造血干细胞等均有显著变化。骨髓造血干、祖细胞减少,G1期造血干细胞减少。结论 E2F1基因敲除可使小鼠造血干、祖细胞减少。     

生豆浆灌胃对急性胰腺炎小鼠胰腺外分泌功能的影响

目的:观察生豆浆对小鼠试验性急性胰腺炎的治疗效果.方法:采用腹腔注射左旋精氨酸法诱导小鼠急性胰腺炎(AP)模型,将造模后的小鼠随机分为4组,即单纯模型组38只,生豆浆组48只,熟豆浆组48只,白开水组48只.分别测定各组血清淀粉酶活性,并计算各组在各个时间点的累积死亡率.结果:生豆浆组的血清淀粉酶明显低于熟豆浆组和白开水组(P﹤0.05).在72 h和7 d的治疗时间内,生豆浆组的小鼠各个时间点的累积死亡率大部分都明显低于其他各组.结论:生豆浆能够明显降低AP小鼠的血清淀粉酶活性及小鼠死亡率.生豆浆对AP有一定的治疗作用,可能与其含有胰蛋白酶抑制物和大豆异黄酮等抗炎因子有关.     

Egr-1通过上调NDRG1诱导骨髓间充质干细胞成骨分化

目的 探究早期生长因子1(Egr-1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响.方法 采集成年男性骨髓组织,分离培养原代BMSCs并在显微镜下观察其形态,流式细胞术鉴定BMSCs表面标志物;pcDNA3.1/Egr-1转染BM-SCs,MTT检测BMSCs的增殖,茜素红钙染色试剂盒检测细胞基质内钙结节的形成,ALP活性测定试剂盒检测细胞内ALP的活性,实时定量qPCR和Western blot分别检测细胞内EgR-1、Runx2、NDRG1 mRNA和蛋白表达;Egr-1 siRNA转染BMSCs,检测细胞内ALP活性、Egr1、Runx2和NDRG1 mRNA及蛋白表达.结果 离体培养的BMSCs高表达CD90和CD29,而CD34和CD45呈阴性表达;pcDNA3.1/Egr-1转染对BMSCs增殖无明显作用,却能促进细胞基质内钙结节的形成,上调ALP活性和Egr-1、Runx2、NDRG1的表达,而Egr-1 siRNA则作用相反.结论 Egr-1通过上调NDRG1诱导BMSCs的成骨分化.