卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合征中的应用研究

近年来随着辅助生育技术的不断发展 ,控制性超排卵得到越来越广泛的应用 ,在一个控制性超排卵周期获得较多的成熟卵母细胞有助于提高体外受精 胚胎移植的成功机会。但是控制性超排卵所需昂贵的治疗费用及其可能导致的一系列并发症(如中度或重度卵巢过度刺激综合征等 )也已引起人们越来越多的关注和重视[1] 。获取不成熟卵母细胞在体外成熟 (ｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ,ＩＶＭ) ,然后将成熟卵母细胞进行体外受精和胚胎移植 ,为人们解决上述问题提供了一条可能的途径。本研究从接受小剂量促卵泡生成素 (ｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕ…     

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

<正>1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕,预     

体外成熟培养-胚胎移植技术治疗多囊卵巢综合征11例临床分析

我中心对11例多囊卵巢综合征(polyeystic ovary syndrome,PCOS)患者施行体外成熟培养-胚胎移植技术(in vitro maturation-embryo transfer,IVM-ET),初步探讨IVM的治疗价值和影响凶素,现报告如下.     

人未成熟卵母细胞体外成熟的影响因素

人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术已广泛应用于临床,为多囊卵巢综合征(PCOS)患者开辟了一条有效的治疗途径,成为生殖医学领域日益关注的研究热点.     

未成熟卵体外培养成熟治疗难治性多囊卵巢综合征

目的研究一种未成熟卵母细胞体外培养成熟技术治疗难治性多囊卵巢综合征(PCOS),使其获得妊娠.方法在月经第3～5天给予PCOS患者小剂量促排卵药物,待卵泡直径达10 mm左右,取出未成熟卵子进行体外培养成熟36 h,再行单精子胞浆注射,优质胚胎移植宫腔.结果 17例难治性PCOS患者经此方法治疗4例获得妊娠.结论未成熟卵母细胞体外培养成熟技术是使难治性PCOS患者获得妊娠的可行方法.     

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值.方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者.测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B).未经任何药物刺激,于月经周期的9～12 d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵.体外培养24～48 h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18 h后观察受精情况,继续培养24～48 h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化.结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54).1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47).47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48 h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%.妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P＜0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组[(8.0±1.5)cm vs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cm vs(8.3±1.3)cm,P＜0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异.结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关.     

人类未成熟卵母细胞体外成熟技术的研究进展

随着辅助生殖技术的发展，人类未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation，IVM)技术成为治疗不孕症的新途径．具有广阔的应用前景，是目前生殖医学领域的研究热点。本文就近年来IVM技术的研究进展综述如下.     

卵母细胞体外成熟在体外受精-胚胎移植中的应用

随着辅助生殖技术的发展,体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)已经成为治疗不孕症的常规手段,广泛应用于不孕不育症的临床治疗.但目前IVF-ET的临床妊娠率较低,国外报道为28%[1],国内报道为43.3%[2].     

卵母细胞体外成熟在卵巢低反应患者中的临床应用

目的 探讨体外受精(in vitro fertilization,IVF)周期控制性卵巢刺激(controlled oocyte stimulation,COS)过程中的卵巢低反应(poor ovarian response,POR)患者,及时补救性应用未成熟卵母细胞体外培养技术(in vitro maturation,IVM)的有效性及安全性.方法 对16例卵巢低反应患者补救性应用IVM技术.结果 共取卵子225枚,其中未成熟卵子196枚,体外培养24 h后成熟100枚,受精69枚,卵裂65枚,移植胚胎27枚.同时获取成熟卵子36枚,受精29枚,卵裂26枚,移植胚胎8枚.移植周期14例,放弃周期2例;妊娠7例,其中宫外孕1例,流产1例,分娩5例,出生胎儿7名(2男、5女),均健康.结论 对于POR患者补救性应用IVM技术可以获得较好的临床结局.     

三种不同来源人未成熟卵母细胞的体外成熟

目的：探讨三种不同来源的人未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）的差异。方法：共获得未成熟卵母细胞1055枚,包括卵丘复合物（OCC）613枚和裸卵（DO）442枚。其中OCC分为自然周期组、孕晚期组和IVM纽;DO分为自然周期组、孕晚期组和超促排卵纽。所有未成熟卵母细胞在IVM培养体系体外培养成熟后,卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI）受精序贯培养,除IVM组行第2或第3天胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段。分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率;自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率。结果：OCC：自然周期组、孕晚期组及IVM组的未成熟卵母细胞体外成熟率分别为79．5％、74．3％和82．2％,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;3组成熟卵母细胞受精率、卵裂率及自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率相比无统计学差异,IVM组的移植周期妊娠率为20％。DO：自然周期组、孕晚期组及超促排卵组未成熟卵母细胞体外成熟率超促排卵组最高（86．0％）,明显高于自然周期组（74．5％）和孕晚期组（72．7％）,（P〈0．05和〈0．01）。3组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率、囊胚形成率相比未见统计学差异。结论：孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外同样具有发育潜能;孕晚期的卵母细胞可作为一种供卵来源。     

促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用

目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期), 随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组, 培养24~28 h后成熟卵母细胞进行ICSI授精, 并观察胚胎发育情况, 记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果 对于MⅠ期卵母细胞, 是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。对于GV期卵母细胞, 培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3% vs 4.2%, P<0.05), 但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养, 无论是否添加促性腺激素都可自然成熟, 在GV期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。     

HCG刺激对未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的:探讨获取未成熟卵母细胞之前使用人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,HCG)能否改善未成熟卵母细胞在体外培养条件下成熟的时间、体外受精率、2细胞、4细胞发生率.方法:将HCG刺激后或未刺激所获得的小鼠生殖泡(Germinal reside,GV)期卵丘-卵母细胞复合物在培养...     

多囊卵巢综合征患者卵母细胞超微结构观察

目的 对多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵母细胞的超微结构和线粒体DNA（mtDNA）拷贝数进行分析,探讨PCOS患者卵母细胞质量下降的原因。方法 根据临床指征,选取2017年1～12月于中国科学技术大学附属第一医院生殖医学中心因男方因素行卵胞质内单精子注射技术（ICSI）助孕的患者115例,根据是否患有PCOS分为试验组和对照组,其中试验组为PCOS患者57例,对照组为非PCOS患者58例。所有患者均接受标准长方案控制性促排卵,共收集187枚卵母细胞用于透射电镜（TEM）的超微结构分析和mtDNA拷贝数的荧光实时定量PCR检测。其中试验组52枚用于超微结构观察,另38枚用于mtDNA拷贝数检测;对照组57枚和40枚分别用于超微结构观察和mtDNA拷贝数检测。对比观察试验组与对照组来源的卵母细胞超微结构各指标：透明带、卵周隙、微绒毛、皮质颗粒、高尔基体和内质网的形态和分布、线粒体的结构与数量。结果 与对照组相比,试验组卵母细胞的透明带、卵周隙、微绒毛、皮质颗粒、高尔基体、内质网等细胞结构和细胞器没有变化。但试验组卵母细胞内异常线粒体比例（58.7%高于对照组17.7%（P<0.05）,且线粒体数量试验组（44.3±9.6）个/切片低于对照组（65.4±12.7）个/切片（P<0.05）。同时,试验组卵母细胞所含的mtDNA拷贝数为（54 390±19 139）个,低于对照组的（88 135±44 235）个（P<0.05）。结论 PCOS患者卵母细胞内线粒体结构和数量均出现改变,可能与其卵母细胞质量受损有关。     

孕晚期人未成熟卵母细胞的体外成熟:一种新的卵母细胞来源

目的 探讨来源于孕晚期、自然周期及Gn刺激周期(包括超促排周期及IVM周期)的人未成熟卵母细胞体外成熟的差异及颗粒细胞对孕晚期卵母细胞体外成熟的影响.方法 共获得未成熟卵母细胞1076枚,包括OCC 633枚和DO 453枚.其中OCC分为孕晚期组、自然周期组和IVM周期组;DO分为孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组;孕晚期来源的未成熟卵母细胞分为OCC组和DO组.所有未成熟卵母细胞体外成熟后,ICSI受精序贯培养,除IVM周期组行胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段.分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率和孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组的囊胚形成率,统计IVM周期组的移植周期妊娠率;比较孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率.结果 OCC:孕晚期组、自然周期组及IVM周期组的体外成熟率分别为74.3%、76.9%和82.2%,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;三组受精率、卵裂率相比,孕晚期组和自然周期组囊胚形成率相比均未见统计学差异,IVM周期组移植周期妊娠率为20%.DO:超促排卵周期组体外成熟率最高(86.0%),明显高于自然周期组(72.5%)和孕晚期组(72.7%),P<0.01;孕晚期组受精率、卵裂率、囊胚形成率分别为65.0%、83.3%和38.5%,与其他两组相比均亦未见统计学差异.孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差别.结论 孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外具有同样的发育潜能,孕晚期捐献的卵母细胞可作为一种供卵来源:有无颗粒细胞并不影响孕晚期卵母细胞的发育能力.

Abstract：

Objective To investigate the in vitro maturation of human oocytes (IVM)from pregnant late term,natural cycles and Gn stimulating cycles and the effect of granulose cells on IVM from pregnant late term.Methods A total of 1086 immature oocytes were obtained including 633 oocyte-cumulus complexes(OCCs)and 453 denuded oocytes(DOs).OCCs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and IVM group,and DOs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and controlled ovarian hyperstimulation(COH) group.All the oocytes were matured in IVM culture system and fertilized by ICSI.The embyos were cultured to blastcyst stage except that those in IVM group were transferred into the utems.The main outcomes were assessed including maturation rate(MR), fertilization rate(FR),cleaverage rate(CR),and blastulation rate(BR)(natural cycle group,pregnant late term group and COH group)and pregnancy rate per transfer cycle(PR) of IVM group.ReslIIts MR of OCCs in pregnant late term group,natural cycle group and COH group was 74.3%,76.9%and 82.2%,respectively,showing statistical difference between pregnant late term cycle group and IVM group.No statistical difference was observed in FR,CR or BR between the three groups.For IVM cycle group,clinical pregnancy rate of 20%per aspiration was achieved.For DOs,MR of COH group(86.0%)was significantly higher than that of the natural cycle group(72.5%)and pregnant late term group(72.7%) (P<0.01).FR,CR and BR showed no statistical difference among the 3 groups.No difference was found in MR,FR,CR and BR between OCCs group and DOs group from pregnant late term.Conclusions The oocytes from pregnant late term have the same development potential as those from natural cycles or Gn stimulating cycles in vitro,and provide a new source of donor oocytes.Granulose ceils do not affect the IVM from pregnant late term.     

核抑制剂(Roscovitine)对促排周期人未成熟卵母细胞体外成熟安全性的初步研究

目的 观察核抑制剂(Roscovitine)对人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)安全性的影响.方法 获取促排周期的GV期未成熟卵随机分为两组,实验组(经二步法):未成熟卵母细胞先用含有200 vmol/LRoseovitine的培养液培养6 h,然后转入IVM成熟培养液培养24～36 h;对照组:直接用IVM成熟培养液培养24~36h.观察两组卵母细胞成熟情况并应用激光扫描共聚焦显微镜观察培养成熟后MⅡ期卵母细胞纺锤体和染色体的形态.结果 实验组共获未成熟卵母细胞61个,经体外成熟培养后50个卵成熟,其中39个卵可观察到纺锤体与染色体,纺锤体的形态异常者为15个,染色体异常者11个;对照组共获未成熟卵母细胞60个,经体外成熟培养后43个卵成熟,其中32个卵可观察到染色体与纺锤体,纺锤体形态异常者14个,染色体异常者11个.结论 Roscovitine能可逆性抑制体外培养的人卵母细胞的核成熟,但未对纺锤体及染色体形态产生不良影响.     

冻存人类未成熟卵母细胞的研究进展

冻存人类未成熟卵母细胞体外成熟有广阔的应用前景。经过20多年的探索,研究主要集中在小鼠、牛等哺乳动物的未成熟卵母细胞,冷冻方法也不尽相同,解冻后卵母细胞的存活率及胚胎发育潜力低。虽然经不同冷冻方法保存的人未成熟卵母细胞出生的婴儿国外已有个别报道,但是获得妊娠的机率还非常有限。本文将从人类未成熟卵母细胞的冻存优势、冷冻方法及影响因素等方面综述如下。1 冻存未成熟卵母细胞的研究现状1977年,Whittingham首次冻存小鼠成熟卵母细胞获得成功,揭开了卵母细胞冷冻保存的序幕。1986年Chem采用慢速冷冻-快速复温法首次冻存人成熟卵母细胞成功并获得妊娠26周胎儿。随后对卵母细胞冻存进行大量研究,