洛伐他汀对 HL-60、 KG-1、 K562白血病细胞体外作用的研究

目的：观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀（lovatatin,LOV)对HL－60、KG－1、K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法：首先利用MTT法、台盼蓝拒染法观察LOV对HL－60、KG－1、K562细胞增殖及活力的影响。再通过细胞形态观察，DNA凝胶电泳，流式细胞术分析，RT－PCR半定量测定bcl-2mRNA水平等技术，系统观察LOV对HL－60、KG－1、K562体外诱导凋亡的情况。结果：（1）LOV抑制HL－60、KG－1、K562细胞增殖，IC50分别为17．16、51．65、58．95μmol/L；(2)LOV诱导HL－60、KG－1、K562细胞凋亡，影响细胞周期进程，细胞阻滞于G1／S期；LOV在诱导HL－60细胞凋亡过程中随作用时间延长，bcl-2表达水平逐渐下降。结论：LOV抑制HL－60、KG－1、K562细胞增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G1／S期；bcl-2参与了LOV诱导凋亡的基因调控。     

姜黄素对白血病细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系

目的研究姜黄素（Cur）对K562细胞和HL-60细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系。方法用流式细胞光度术对K562细胞和HL-60细胞进行细胞周期检测，用蛋白免疫印迹检测细胞周期蛋白水平。结果姜黄素0—10mg／L作用24h可将K562细胞和HL-60细胞阻滞于G0／G1期，该期细胞比例增加；阻断细胞从S期向G2／M期转化，G2／M期细胞比例减少；姜黄素作用24h减少K562细胞和HL-60细胞Cyclin D1、Cyclin B1的蛋白水平，但几乎不影响K562细胞和HL-60细胞Cyclin A的蛋白水平。结论姜黄素扰乱K562细胞和HL-60细胞的细胞周期进程与Cyclin D1和Cyclin B1的蛋白水平减少有一定关系。     

NF-κB信号通路的激活对白血病细胞K562／A02多药耐药的影响

 目的　研究K562细胞株及其耐药细胞株K562／A02 NF-κB活性的差异性表达,探讨白血病多药耐药（MDR）发病机制。方法　用MTT法检测K562／A02的耐药倍数,观察细胞生长的形态学变化,PI单染法检测K562／S、K562／A02细胞周期分布,并用RT-PCR 方法检测mRNA的表达、流式细胞仪检测P糖蛋白（P-gp）表达及其功能,Western blotting方法检测细胞核NF-κB p65表达,比较K562与K562／A02白血病耐药细胞株之间的差异性。结果　与K562细胞不同,耐药细胞株K562／A02细胞生长特性发生改变,呈半贴壁生长,与K562／S细胞相比,K562／A02细胞的 G0／G1期、S期比例增高,G2／M期细胞比例减低,差异有统计学意义（P＜0.05）,凋亡细胞比例差异无统计学意义（P＞0.05）,且检测到mdr1 mRNA及细胞膜P-gp表达增高以及细胞核内NF-κB p65表达明显增加。结论　NF-κB信号通路的激活即NF-κB p65细胞核内转位可能参与了白血病MDR的形成。     

BPI-1095 对人结肠癌HCT-8 细胞增殖及细胞周期的影响

 目的 探讨NO-ASA体外对结肠癌细胞增殖、细胞周期的影响。方法 采用MTT法检测NO-ASA对体外培养的结肠癌细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测细胞周期分布。结果 NO-ASA对结肠癌细胞增殖有明显的抑制作用,呈量效和时效依赖关系;对细胞周期也有明显影响,表现为S期细胞比例和G2/M期细胞比例下降,G1期细胞比例升高。结论 体外NO-ASA对结肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,对细胞周期也有明显影响。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

过表达SHP-1对人慢性髓系白血病急变细胞系K562生物学特征的影响

目的 探讨SHP-1基因对K562细胞系增殖、凋亡、细胞周期分布和集落形成的影响。方法 将携带SHP-1基因和绿色荧光蛋白（EGFP）基因的慢病毒表达载体转染K562细胞,SYBR Green荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞SHP-1 mRNA和蛋白的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光学显微镜和电子显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量和大小。结果 培养第3天,K562SHP-1细胞的OD值为（0.35±0.02）,K562EGFP细胞的OD值为（0.47±0.05）,两者差异有统计学意义（P=0.011）。随着培养天数的延长,与K562EGFP细胞相比K562SHP-1细胞出现G0/G1期细胞比例增加和G2/M+S期细胞比例降低及凋亡增加,培养第5天K562SHP-1细胞G0/G1期比例为（56.37±2.27）、凋亡率为（26.13±1.16）,K562EGFP细胞G0/G1期比例为（31.67±3.21）,凋亡率为（9.00±1.22）,两者比较差有统计学意义（P=0.000）。K562SHP-1细胞集落形成能力（26.3±5.2）较K562EGFP细胞（54.7±8.6）有所降低（P=0.000）;K562SHP-1细胞BCR-ABL1蛋白的表达水平（0.78±0.15）低于K562EGFP细胞（1.27± 0.24）（P=0.040）。结论 过表达SHP-1基因抑制K562细胞增殖和集落形成,促进细胞凋亡,导致细胞周期阻滞在G₀/G₁期,并降低K562细胞中BCR-ABL1蛋白水平。     

半边旗提取物对HL-60细胞的细胞毒作用及对细胞周期的影响

目的 :研究蕨类植物半边旗提取物对HL 60细胞的体外杀伤作用及对细胞周期的影响。方法 :用噻唑蓝 (MTT)法测定细胞成活率 ;用流式细胞术测定细胞周期时相分布。结果 :半边旗乙醇总提取物PSE及纯化合物 5F、6F及A对HL 60细胞有强烈的杀伤作用 ,具明显的时间和剂量效应 ;PSE、5F、6F及A作用HL 60细胞 2 4h后 ,G0 /G1期细胞比例明显下降 ,S期细胞比例明显升高 ,G2 /M期轻度升高 ( 5F作用组例外 )。结论 :半边旗提取物对HL 60细胞有强烈的杀伤作用 ,明显影响细胞周期时相分布。     

冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控和细胞周期的影响

目的 目的：研究冬凌草甲素(ORI)对K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度ORI对K562细胞增殖的影响：采用端粒重复序列扩增法(TRAP)．酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测了端粒酶活性变化；采用流式细胞仪测定细胞周期各时相百分比。结果 ORI可明显抑制K562细胞增殖；在一定的浓度范围内，ORI可下调K562细胞端粒酶活性。流式细胞仪结果显示，经ORI处理的K562细胞，细胞周期各时相分布发生变化，G2／M期细胞增多，S期细胞减少。结论 ORI可下调K562细胞的端粒酶活性，其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用

 目的　探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用。方法　用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7／IL-24及其选择性剪接体IL-24 delE5的表达。构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞。通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ／PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7／IL-24进行比较。结果　在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达。稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G0／G1期细胞比例由（24.46±3.99）%增至（42.69±3.04）%,细胞周期阻滞于G0／G1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制。与mda-7／IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义。结论　IL-24 delE5与mda-7／IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G0／G1期阻滞有关。     

Inhibition of Glioma Cell Proliferation by Neural Stem Cell Factor

Summary Neural stem cells (NSC) have unique differentiation-, proliferation-, and motility properties. To investigate whether they secrete factors that interfere with the proliferation of glioma cells, we grew glioma cells in conditioned medium (CM) obtained from cultures of neurospheres including neural stem / progenitor cells (NSPC) isolated from embryonic (E14)- or adult mouse brain or fetal human brain. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and BrdU-labeling assays showed that CM from NSPC (NSPC/CM) contained factor(s) that inhibited the proliferation of glioma cells by 28–87%. Filter-fractionation of NSPC/CM revealed that the 50,000–100,000 nominal molecular weight limit (NMWL) fraction contained the inhibitory activity. On the basis of these observations we transplanted 203G glioma cells and/or NSPC into the intrathecal space of the cisterna magna of mice to investigate whether NSPC interfere with the proliferation of glioma cells in vivo. Mice transplanted with both 203G and NSPC survived significantly longer than did mice transplanted only with 203G. We concluded that NSPC secrete factor(s) that may control glioma cell proliferation.     

晚期非小细胞肺癌患者外周血DC亚型与 NK细胞的关系

 目的 探讨非小细胞肺癌患者外周血树突状细胞亚群（DC1/DC2）和机体NK细胞含量之间的关系及其临床意义。方法 采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血DC亚群（CD11c+DC/DC1和 CD123+ DC／DC2）、NK细胞含量及血浆IL 12的浓度， 并以10例健康受试者作为对照。结果 肺癌患者外周血CD11c+DC百分率为（0.66±0.24）％，比对照组（1.38±0.18）％明显降低（P<0.01），CD123+ DC百分率（0.28±0.17）％与对照组（0.27±0.11）％相比， 差异无统计学意义（P＞0.05）；肺癌患者与健康人比较，NK细胞含量及IL 12的浓度均降低（P<0.05）。NSCLC 患者NK细胞的含量与CD11c+百分数及血浆IL 12 浓度均呈正相关（P<0.05），与CD123+百分数呈负相关（P<0.01）。DC各亚型百分率同患者的卡氏评分、化疗史有关联（P<0.01），NK细胞的含量与年龄相关（P<0.05）。结论 非小细胞肺癌患者DC1功能低下，IL 12分泌能力障碍，从而影响了NK细胞的活性。DC亚型与NK细胞含量之间以及它们与临床生物学行为之间都有一定关系。     

胃癌癌周淋巴结网膜及腹膜中T淋巴细胞亚群和NK细胞分布的研究

目的:通过检测胃癌、癌周正常胃粘膜、胃周淋巴结、大网膜、小网膜、腹膜及外周血中T淋巴细胞亚群和NK细胞数以探讨胃癌局部及全身的免疫状况.方法:利用流式细胞术测定40例胃癌患者的癌组织、癌周正常胃粘膜、胃周淋巴结、大网膜、小网膜、腹膜及外周血的CD4 、CD8 及NK细胞的含量.取22例良性疾病患者的胃粘膜和外周血做对照.结果:CD4 、CD8 、NK细胞计数在胃癌组织和胃周淋巴结中最高,均高于癌周正常胃粘膜、大网膜、小网膜、腹膜及外周血(P＜0.05),但癌组织的CD4 /CD8 比值低于淋巴结和大网膜(P＜0.05);良性疾病对照组的胃粘膜、外周血CD4 、CD8 、NK细胞计数和CD4 /CD8 比值均高于胃癌患者(P＜0.01).结论:胃癌患者局部及全身的免疫功能均低于对照组;胃癌组织内CD4 、CD8 、NK细胞较癌周正常胃粘膜、大网膜、小网膜、腹膜高聚集,但免疫功能呈现低下和抑制状态.     

长春新碱对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响

[目的]探讨长春新碱(VCR)对鼻咽癌CNE鄄2Z细胞增殖和周期的影响。[方法]MTT法检测增殖抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期。[结果]不同浓度的VCR分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(2.01±0.26)、(1.59±0.23)、(0.92±0.11)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mlVCR分别处理细胞6h、12h、24h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P<0.01)。[结论]VCR对CNE鄄2Z细胞具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,此阻滞作用具有时间依赖性;一定剂量的VCR可能通过阻滞CNE鄄2Z于G2/M期而抑制其增殖。     

Cell Size Following Irradiation in Relation to Cell Cycle

The cell volume of Ehrlich ascites tumour cells was studied following a radiation dose of 5.0 Gy. The cell volume increased 12 to 30 hours after irradiation by about 20 per cent, was normal at about 50 hours, and increased again at 72 hours. In order to explain these changes the composition of the cells in cell cycle was studied. In addition, the cell volume of irradiated cells from the various parts of the cell cycle, separated by centrifugal elutriation, was measured. The changes in the mean cell volume of unseparated cells could be explained by variations in the cell cycle composition of the cell population. Irradiated cells from the various parts of the cell cycle did not deviate from the volume of non-irradiated cells. The cell volume doubled during the cell cycle. This increase was, however, not linear.     

细胞分裂与癌发生机制研究进展

基于肿瘤病理及流行病学的长期观察,结合细胞生物学新成就,发现常见肿瘤发生与细胞分裂潜能关系密切。细胞分裂是个体生长发育及组织损伤后再生修复时必不可少的生物学行为,由于细胞分裂潜能是有限的,频繁分裂将使局部细胞的分裂潜能提前耗竭,籍此发生的细胞重新选择为细胞永生化、恶性变创造了条件。     

细胞分裂与癌发生机制研究进展

基于肿瘤病理及流行病学的长期观察,结合细胞生物学新成就,发现常见肿瘤发生与细胞分裂潜能关系密切。细胞分裂是个体生长发育及组织损伤后再生修复时必不可少的生物学行为,由于细胞分裂潜能是有限的,频繁分裂将使局部细胞的分裂潜能提前耗竭,籍此发生的细胞重新选择为细胞永生化、恶性变创造了条件。     

CD248在肾透明细胞癌中的表达及临床意义CSCD

目的探讨内皮唾酸蛋白(CD248)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达及临床意义。方法收集115例ccRCC组织及对应癌旁组织的石蜡标本,同时收集其中17例ccRCC组织及对应癌旁组织的新鲜标本。qRT-PCR检测17例ccRCC组织及对应癌旁组织中CD248 mRNA的表达;免疫组织化学法检测115例ccRCC患者石蜡标本的CD248蛋白水平,分析CD248表达与ccRCC临床病理指标及预后的相关性。结果ccRCC组织中的CD248阳性表达免疫组织化学反应强度显著强于癌旁组织,差异有统计学意义(P=0.0061),且CD248蛋白阳性信号定位于细胞核及细胞质。CD248 mRNA在癌旁组织中的表达水平明显低于ccRCC组织(P=0.0026)。CD248高表达组组间总生存率明显低于CD248低表达组(44.4 vs.57.2月,P=0.017)。结论CD248的表达可能参与ccRCC的发生发展。与癌旁组织比较,CD248在ccRCC组织中高表达;CD248高表达的ccRCC患者术后生存时间较短。