Effect of Rat Schwann Cell Secretion on Proliferation and Differentiation of Human Neural Stem Cells

Objective:To investigate the effect of rat Schwann cell secretion on the proliferation and differentiation of human embryonic neural stem cells(NSCs).Methods:The samples were divided into three groups.In Group One,NSCs were cultured in DMED/F 12 in which Schwann cells had grown for one day.In Group Two,NSCs and Schwann cells were co-cultured.In Group Three,NSCs were cultured in DMEM/F12.The morphology of NSCs was checked and β-tubulin,GalC,hoechst 33343 and GFAP labellings were detected.Results:In Group One,all neural spheres were attached to the bottom and differentiated.The majority of them were β-tubulin positive while a few of cells were GFAP or GalC positive.In Group Two,neural Spheres remained undifferentiatied and their proliferation was inhibited in places where Schwann cells were robust.In places where there were few Schwann cells,NSCs performed in a similar manner as in Group One.In group Three,the cell growth state deteriorated day after day,On the 7th day,most NSCs died.Conclusion:The secretion of rat Schwann cells has a growth supportive and differentiation-inducing effect on human NSCs.     

神经干细胞移植对大鼠脑自由落体撞击伤的治疗作用

目的通过神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑自由落体撞击伤,探讨NSCs对脑外伤功能恢复的影响。方法体外培养NSCs并用5-2溴脱氧尿嘧啶(B rdU)标记。自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区以制作脑外伤模型,脑外伤后24h内移植NSCs,分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、4周时行神经运动行为学评分(NMFE)和免疫组织化学染色检测B rdU、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷酯(GalC)蛋白表达。结果大鼠自由落体撞击伤后,右下肢神经运动功能障碍明显。神经运动行为学评分在第1周时,实验组与对照组无明显差异,而在第2、4周时,实验组的评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。第2、4周时实验组NSE、GFAP和GalC染色阳性细胞数多于对照组,nestin染色在第1周时表达最高,以后逐渐下降。B rdU阳性细胞在损伤灶中心区最高多,在损伤灶的远隔部位也有少许发现。结论NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复。移植的NSCs可以在损伤部位存活并增殖分化与迁移。     

脑络欣通对神经干细胞增殖分化及β-tubulinⅢ/GFAP的影响

目的观察脑络欣通对β-tubulinⅢ/GFAP及神经干细胞（NSCs）增殖分化的影响。方法将NSCs细胞株分为空白模型 （MC）组、10%脑络欣通含药血清（NLXT组）、10%脑络欣通含药血清+抑制剂Y27632组（Y-27632组）。采用MTT法检测NSCs 细胞活性,Transwell小室观察NSCs迁移,免疫印迹法观察β-TubulinⅢ、GFAP、MAP-2蛋白表达。免疫荧光标记DCX、NEUN、 β-TubulinⅢ表达。结果与MC组比较,1 d和3 d NLXT组、Y-27632组迁移细胞数增多（P<0.05）;7 d后NLXT组、Y-27632组细 胞存活率及迁移细胞数显著增多（P<0.01）。与MC组比较,第3 天、第7 天NLXT组和Y-27632组β-tubulinⅢ、MAP2、GFAP蛋 白表达显著升高（P<0.01或P<0.05）。NLXT组、Y-27632组脑组织β-tubulinⅢ/GFAP、BrdU/DCX、BrdU/NEUN标记细胞数目较 MC组明显增多。结论脑络欣通通过调节β-tubulinⅢ/GFAP促进NSCs增殖、分化。     

Differentiation of rat embryonic neural stem cells promoted by co-cultured Schwann cells

Objective To explore the factors which induce differentiation of embryonic neural stem cells. Methods Rat embryonic neural stem cells were co-cultured with newborn rat Schwann cells in serum-free medium. The phenotype and specific-markers including tubulin-β, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and galactorcerebroside (GalC), were domonstrated by phase contrast microscopy and double immunofluorescence staining. Results Overall, 80%±5% of neural stem cells protruded several elongated processes and expressed tubulin-β antigen at high levels, while 20±3% of them protruded several short processes and were GalC or GFAP positive. Conclusion The factors secreted by Schwann cells could induce rat embryonic neural stem cell to differentiate.     

新生大鼠大脑皮质神经干细胞的分离培养与胆碱能神经元的鉴定

目的:体外分离和培养新生大鼠大脑皮质神经干细胞并进行鉴定,为用于脑梗死动物模型梗死区移植细胞作准备.方法:分离新生大鼠皮质神经干细胞,进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的特性进行鉴定,并对细胞的胆碱能特征进行鉴定.结果:获得了Nestin阳性的神经干细胞,其分化后可获得MAP-2、GFAP和 CNPase阳性的神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞;通过胆碱能鉴定发现大脑皮质干细胞可分化为胆碱能神经元. 结论:体外分离和培养的大脑皮质神经干细胞具有增殖分化的能力,并可以分化为胆碱能神经元,有望应用于皮质损伤后认知障碍及运动障碍的细胞移植治疗.     

条件培养基对神经干细胞增殖与分化作用的影响

目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）条件培养基对体外培养神经干细胞（NSCs）增殖与分化作用的影响。方法用 BMSCs 条件培养基分别在增殖与分化条件下培养 NSCs,观察 NSCs 形态变化。用 MTT 法及 NSCs 球数目和直径的统计分析了解 NSCs 增殖情况,同时行免疫荧光及 Western blot 法鉴定其分化情况。结果原代培养获得大量未分化且悬浮生长的 NSCs 球,并能分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞。BMSCs 条件培养基组能够促进 NSCs 球的吸附贴壁,但与对照组相比光密度（OD）值差异无统计学意义,NSCs 球数目和直径差异亦无统计学意义。另外,BMSCs 条件培养基组少突胶质细胞特异性蛋白MBP 表达量高于对照组（P <0.05）,星形胶质细胞特异性蛋白 GFAP 表达量低于对照组（P <0.05）,而神经元特异性蛋白 MAP-2表达量未见明显异常。结论大鼠 BMSCs 条件培养基促进 NSCs 向少突胶质细胞方向分化,但不抑制其增殖作用。     

心脉隆注射液对新生SD大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

目的初步探讨心脉隆注射液对新生SD大鼠海马神经干细胞增殖分化作用的影响。方法分离新生SD大鼠海马组织,采用无血清及单克隆培养方式获得大量神经干细胞,将不同浓度心脉隆注射液加入第3代神经干细胞单细胞悬液中有血清贴壁培养并分实验组和对照组,应用免疫荧光及细胞化学染色检测Nestin、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算MAP-2阳性细胞百分率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察心脉隆注射液对神经干细胞增殖能力的影响。结果海马NSCs在分化后,各心脉隆注射液干预组MAP-2阳性细胞比例均较空白对照组增高(P<0.05),MTT结果显示培养5 d后各药物组NSCs增殖能力均较对照组增强(P<0.05)。结论心脉隆注射液具有促进神经干细胞增殖并向神经元方向分化的作用。     

胎牛血清对胎鼠神经干细胞分化的影响

目的探讨胎牛血清对神经干细胞（neural stem cells,NSCs）分化结果的影响．方法通过无血清培养的方法,将胎鼠大脑皮质进行原代培养所获得的神经干细胞克隆传代纯化后,分别接种在加入DMEM／F12＋B27和DMEM／F12＋B27＋5％FCS两种不同培养基的培养皿中诱导分化,9d后行免疫荧光细胞化学染色,用抗体β—Tubulin Ⅲ、GFAP、GalC鉴定分化细胞,并观察其形态特点．结果成功分离获得NSCs,并具有分化为神经元和胶质细胞的能力;在相同时间内含血清培养基中的细胞球分化快而充分,且分化结果不同．结论血清可促进NSCs分化并影响分化结果．     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定研究

目的探讨大鼠胚胎神经干细胞（NSCs）的分离、培养、分化及鉴定的条件与方法。方法分离孕14～16dSD大鼠胚胎脑皮质及皮质下区域NSCs,无血清培养基（DMEM／F12,含bFGF、EGF、B27等）条件下培养,通过有限稀释法克隆、传代,含血清培养基诱导分化,免疫组织化学法鉴定NSCs及诱导分化后的细胞。结果体外培养的NSCs能稳定增殖成神经干细胞球并传代（nestin染色阳性）,经诱导可分化为神经元细胞（NSE染色阳性）、星形胶质细胞（GFAP染色阳性）和少突胶质细胞（CNP染色阳性）。结论采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可在体外大量培养出稳定增殖并具有多向分化潜能的大鼠胚胎NSCs,为进一步研究NSCs的生物特性及应用奠定了基础。     

不同生长因子对神经干细胞定向分化的影响

目的 研究神经干细胞（NSCs）分化为神经元和胶质细胞的影响因素,探讨各种生长因子对小鼠NSCs定向分化的影响。方法 以无血清培养法从E13-14d的昆明小鼠大脑皮质分离培养获得NSCs后,分别加入50 mg/L EGF、bFGF、IGF-1、NGF和PDGF处理,分析不同生长因子对NSCs定向分化的影响。结果 分离得到的细胞表现出NSCs的特性,能无限增殖,神经元微管相关蛋白和胶原纤维酸性蛋白均呈阳性表达。与空白对照组相比,各生长因子均可显著诱导NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,其中NGF的诱导NSCs分化为神经元的作用最强;IGF-1、NGF、PDGF均能明显诱导NSCs分化为星形胶质细胞。结论 几种生长因子均能促进NSCs分化,其中NGF诱导NSCs向神经元方向作用最强;而IGF-1、NGF和PDGF促进NSCs向星形胶质细胞分化的作用均较强。     

黄芪皂甙诱导小鼠神经干细胞向神经元分化

目的：观察黄芪皂甙对体外培养的小鼠神经干细胞（NSCs）向神经元分化的影响.方法：采用机械分离、无血清传代培养法从胚胎（E14.5）小鼠室管膜前下区获得NSCs,观察不同浓度（20,40,60mg/L）黄芪皂甙在干预后不同时段（3,7d）的分化情况,通过免疫荧光检测神经元（β-Tubulin）,星形胶质细胞（GFAP）及少突胶质细胞（CC-1）的比例,并采用银杏内酯B（40mg/L）作为阳性对照,正常组为阴性对照,观察黄芪皂甙对小鼠NSCs分化的影响.结果：加入黄芪皂甙培养3,7d后,黄芪皂甙40mg/L及60mg/L组、银杏内酯B组分化为β-Tubulin（＋）神经元比例均显著高于正常对照组,黄芪皂甙两种浓度组间无统计学差异;银杏内酯B组分化为GFAP（＋）星形胶质细胞比例显著高于正常对照组,而黄芪皂甙对星形胶质细胞的分化比例无明显影响.结论：黄芪皂甙能促进NSCs定向分化为神经元,而银杏内酯B促进NSCs向神经元和星形胶质细胞分化.     

β-淀粉样蛋白脑室注射对大鼠海马星型胶质细胞活化和细胞增殖的作用

目的 通过观察大鼠侧脑室注射β-淀粉蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)后海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibril-lary acidic protein,GFAP)的表达,探讨Aβ对海马局部星型胶质细胞活化增生的作用及对海马神经发生的可能影响.方法 40只SD大鼠分为对照组(n=10)和实验组(n=30),将Aβ1-42注射入大鼠侧脑室,分别于术后3、7、14、30 d处死动物,应用免疫组化方法观察GFAP的表达,并用免疫荧光双标标记BrdU、GFAP以判断增殖细胞的种类.结果 实验组大鼠海马GFAP阳性细胞明显增加,到7 d达到高峰,14 d后逐渐下降,较对照组差异显著(P<0.01),实验组各时相点Br-dU、GFAP双标结果显示有部分BrdU阳性细胞GFAP为阳性,对照组双标阳性细胞很少.结论 β-淀粉蛋白脑室注射后大鼠海马星型胶质细胞活化增生,部分增生的星型胶质细胞可能来源于神经干细胞.     

人类神经前体细胞大鼠胎脑内移植研究

目的探讨人类神经前体细胞大鼠胎脑侧脑室内移植后的移行和分布。方法采用机械方法从胎脑中分离神经细胞,应用N2培养基进行培养,细胞用携带LacZ基因的腺病毒或BrdU标记,移植到孕期为16~18d的胎鼠侧脑室内,检查出生后不同时期脑组织中移植细胞的分布和移行。结果成功培养出人类的神经干细胞,细胞聚集形成神经球,呈悬浮状态,大部分细胞表达神经前体细胞的标志物巢蛋白,这种细胞能够分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞在体内和体外可以稳定表达外源性基因,移植到胎鼠脑内,人类胚胎神经前体细胞广泛移行并分布于宿主的脑组织中,结合到大鼠的前脑、中脑和后脑,形成广泛的嵌合现象。结论神经干细胞可以稳定表达外源性基因,移植到发育期的脑内,能够整合到脑组织中,形成广泛的嵌合现象。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及分化研究

目的:研究大鼠胚胎神经干细胞体外分离、培养的条件及增殖、分化特性。方法:取胎龄15~17 d的SD大鼠胎脑海马及室周组织,在含碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF),表皮生长因子(EGF),B27、N2添加剂的无血清培养基中培养,用有限稀释法进行克隆、传代,免疫细胞化学法鉴定神经干细胞克隆球及诱导分化后的细胞。结果:大鼠胎脑能在体外培养获得大量神经干细胞,并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:胚胎脑组织有丰富的神经干细胞,可在体外长期培养并保持干细胞特性,能分化为神经元、胶质细胞等终末细胞。     

神经干细胞在海人酸毁损大鼠海马中的迁移和分化

目的：观察胎鼠神经干细胞移植入海人酸毁损成年大鼠海马中的迁移和分化情况。方法：体外培养胎鼠海马源性神经干细胞。立体定位注射海人酸毁损大鼠海马CA1区锥体细胞。毁损1周后，将Hoechst33342标记的神经干细胞移植毁损区．分别于术后1、2,4、8周取材，利用荧光技术和免疫组织化学方法，追踪移植的神经干细胞在毁损侧海马中的存活、迁移和分化情况。结果：移植的神经干细胞在海马锥体层呈链状迁移，并分化为MAP2阳性细胞和GFAP阳性细胞。结论：移植的神经干细胞在海马锥体层呈链状迁移。大部分分化为胶质细胞。     

Synergistic effect of schwann cells and retinoic acid on differentiation and synaptogenesis of hippocampal neural stem cells in vitro

INTRODUCTION Schwann cells (SCs) secrete growth factors or NGF-like proteins, such as nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), NT-3, basic fibroblast growth factor (bFGF), and glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF)[…     

神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的：探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞（NSCs）体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定。方法：分别取孕14-16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养，用光学显微镜观察NSCs的生长情况，并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达，经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白．2的检测。结果：①培养出来的细胞可以扩增生长；②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性；③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后，免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性。结论：采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术，可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs。     

NGF诱导大鼠胚脑皮层和隔区神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用

目的:探讨大鼠胚脑皮层和隔区神经干细胞在NGF的诱导下分化为神经元和AChE阳性神经元的情况。方法:应用无血清培养技术,分别从SD大鼠胚脑皮层和隔区分离克隆神经干细胞,然后在含或不含NGF的培养液中分化14d。用MAP-2免疫荧光和AChE组化技术检测神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的情况。并对MAP-2阳性神经元的分化率、AChE阳性神经元数及其它们的细胞面积和周长进行图像处理;用STATA7.0统计软件进行方差分析和两两比较。结果:隔区和皮层NGF组MAP-2阳性神经元分化率高于隔区和皮层对照组;其细胞面积除隔区NGF组与皮层NGF组之外,其它各组间差异均有统计学意义;而其周长各组之间差异均有统计学意义。AChE阳性神经元的数量及细胞面积和周长,隔区NGF组最佳,皮层NGF组次之,隔区对照组再次之,皮层对照组较差。三项指标各组间差异有统计学意义。结论:NGF可诱导大鼠胚脑皮层和隔区神经干细胞向神经元分化;隔区神经干细胞较皮层神经干细胞更易于向AChE阳性神经元分化;这种区域特异性可在NGF诱导下发生改变。     

Neurogenesis by Activation of Inherent Neural Stem Cells in the Rat Hippocampus after Cerebral Infarction

Objective To investigate the changes of neural stem cells （NSCs） in the rat hippocampus after cerebral infarction （CI） and to evaluate the neurogenesis caused by the activation of NSCs. Methods CI models of rats were made and rats were assigned to 6 groups： sham-operated, 1 day, 3 days, 7 days, 14 days, and 28 days after CI. The dynamic expression of bromodeoxyuridine （BrdU）, polysialylated neural cell adhesion molecule （PSA-NCAM）, glial fibrillary acidic protein （GFAP）, and neuronal nuclear antigen （NeuN） were determined by immunohistochemistry and immunofluorescence staining. BrdU was used to mark the proliferated NSCs. PSA-NCAM was used to mark the plasticity of activated NSCs. GFAP and NeuN were used to mark the differentiated NSCs. Results Compared with the controls, the number of BrdU^＋ cells in the hippocampus increased significantly at 1 day after CI（P〈0.05）, reached peak at 7 days after CI （P〈0.05）, decreased but still elevated compared with the controls at 14 days after CI （P 〈 0.05）, and nearly unchanged at 28 days after CI. The number of Brd^U＋/PSA-NCAM^＋ cells increased significantly at 7 days after CI （P〈0.05）, reached peak at 14 days after CI （P 〈 0.05）, and decreased but still elevated compared with the controls at 28 days after CI （P 〈 0.05）. The number of BrdU^＋/PSA-NCAM^＋ cells was equal to 60% of the number of BrdU^＋ cells in all the same period. The number of BrdU^＋/NeuN^＋ cells in the hippocampus increased significantly at 14 days after CI （P 〈 0.05） and reached peak at 28 day after CI （P 〈 0.05）. The number of BrdU^＋/GFAP^＋ cells in the hippocampus nearly unchanged after CI. Conclusion CI can stimulate the proliferation of inherent NSCs, and most proliferated NSCs may differentiate into neurons and represent neural plasticity.     

癫痫大鼠海马区增殖的内源性神经前体细胞演变过程的研究

目的 追踪观察匹罗卡品诱导癫痫模型大鼠海马区增殖的内源性神经前体细胞的分化及演变过程，从而探讨痫性发作对增殖的内源性神经前体细胞的影响。方法 氯化锂和匹罗卡品联合诱导大鼠癫痫模型，正常对照组注射生理盐水，干预后14d腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶（BrdU）标记海马DG区增殖的内源性神经前体细胞；用免疫组化方法分别观察标记后5、14、28d海马DG区BrdU／神经元核性蛋白（NeuN）、BrdU／胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达；TUNEL标记方法观察BrdU／TUNEL的表达。结果 与正常对照组相比，癫痫模型组大鼠海马区出现的BrdU阳性细胞明显增多，增殖的细胞大多数分化为神经元（约70％），只有少数分化为星形胶质细胞。随标记时间延长，存活的增殖细胞逐渐减少，部分BrdU阳性细胞表现为TUNEL阳性。结论 癫痫发生后出现了神经前体细胞的增殖，增殖的细胞大多数分化为神经元。但只有少部分细胞存活下来参与海马结构的重组。