雌二醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血脑屏障及基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨雌二醇（E2）对去卵巢后实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠的免疫抑制作用及其机制。方法制备去卵巢后10d的EAE动物模型,随机分为EAE组、E2治疗组和佐剂对照组。E2治疗组于免疫后（pi）0～8d肌注E2（250μg/kg）1次/d。观察各组在不同时间点的临床症状、血清E2浓度、血清和脑脊液中白蛋白含量比值（QA）,通过QA评定血脑屏障（BBB）的损害。在p i8、11、14、17d处死动物并取脑和脊髓,行HE和髓鞘染色;采用Western blot检测各组基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。结果 E2治疗组临床症状评分（0.46±0.62）较EAE组（2.88±1.26）降低（t=2.11,P〈0.05）;E2治疗组发病率（20%）较EAE组（80%）降低（χ2=6.24,P〈0.05）。pi 8～14dE2治疗组血清E2浓度较EAE组升高（F=1 532.63,P〈0.05）。pi 8～17dE2治疗组QA峰值低且出现时间较EAE组延迟（0.36±0.04 vs 0.18±0.03,F=26.20,P〈0.05）。E2治疗组MMP-9表达较EAE组明显下调（F=21.46,P〈0.05）。结论 E2能够有效抑制EAE,其抑制机制与E2下调MMP-9的表达进而保护BBB的结构和功能有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎脑内咪唑啉受体密度变化初步观察

目的:探讨咪唑啉2受体(I2R)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系.方法:采用放射性受体-配体饱和实验,以[3H]idazoxan标记I2R,检测EAE大鼠脑内I2R受体密度和亲和力变化.结果:EAE大鼠脑组织的I2R受体密度上调74.5%(n=3,P＜0.05),I2R亲和力与对照组相比无统计学差异.结论:I2R在EAE大鼠脑组织中受体密度上调,可能与EAE发病有联系.     

黄岑苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的观察不同浓度黄岑苷(baicalin)对实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型的作用,并研究其初步机制。方法建立实验性自身免疫性脊髓炎小鼠模型,免疫后第3天给予高低剂量黄岑苷灌胃,每天1次,共20 d。对小鼠活动进行神经功能评分,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡情况,ATP水平检测试剂盒检测脊髓组织ATP含量水平,免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、cleaved cas-9和cleaved cas-3蛋白表达水平。结果黄岑苷能够提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,延后发病时间;黄岑苷干预后,Tunel染色结果显示脊髓组织凋亡细胞数下降,ATP水平下降,免疫印迹法结果显示Bcl-2的蛋白表达显著上升,Bax、cleaved cas-9和cleaved cas-3的蛋白表达显著下降。结论黄岑苷可通过抑制线粒体内源性凋亡途径抑制细胞凋亡,保护线粒体,提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,为预防疾病提供了实验理论依据。     

妊娠对实验性自身免疫性妊娠对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的 明确妊娠期实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的神经功能的变化情况,并进一步探索其可能的作用机制.方法 采用MOG35-55多肽诱导制作雌性EAE小鼠模型,按雌雄小鼠2:1比例合笼受孕,以成功妊娠的小鼠为妊娠组(n=10);未配...     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的研究

目的 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽（MOG35-55）诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型。研究EAE的病理变化，探讨多发性硬化（MS）发病机制。方法 应用MOG35-55。抗原加完全弗氏佐剂免疫C57BL／6小鼠，用光镜、电镜观察EAE小鼠神经组织病理学改变。结果 免疫10～16d后小鼠即发病，发病率为100％。光镜下可见小血管周围炎性细胞浸润，呈袖套状改变，血管周围神经元脱髓鞘，神经元变性。Biesehowsky银染显示轴索肿胀和轴索卵形体形成。11／NEL标记可见神经元和淋巴细胞凋亡。电镜下可见髓鞘结构松散、断裂和融合，轴索细胞器消失。脊髓病变广泛，程度重于脑部。结论 以MOG35-55为抗原免疫C57BL/6小鼠诱发EAE，具有模型稳定，发病率高和慢性一非缓解特点，是研究MS较理想的动物模型。其病理改变除血管周围炎性浸润及髓鞘脱失外，还有轴索损害和神经元凋亡。提示EAE模型髓鞘脱失和轴索损害并存；轴索损害与临床症状进行性加重相关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的构建

目的 通过髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG_35-55)多肽两次免疫C57BL/6J小鼠,构建实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。方法 将8周龄C57BL/6J雌性小鼠按随机数字表法分为EAE组和对照组,每组10只。EAE组采用MOG_35-55多肽与完全弗式佐剂混合后的抗原乳剂,于小鼠双侧腹股沟和后肢分4点皮下注射,首次免疫后6 d注射相同剂量的抗原乳剂加强免疫,并且于首次免疫后0、48 h腹腔注射百日咳毒素;对照组采用不含MOG_35-55多肽的CFA,其余方法同EAE组。观察两组小鼠的行为学表现并进行神经功能评分;免疫后第19天,取两组小鼠的脑和脊髓组织进行Black Gold髓鞘染色和髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫荧光染色,检测其脱髓鞘情况;小胶质细胞特异性标志物(Iba-1)免疫荧光染色检测两组脑和脊髓组织中小胶质细胞的增殖活化情况。结果 EAE组小鼠在首次免疫后第12天左右开始发病,第19天症状达到高峰,随后开始缓解,发病率为100%,而对照组小鼠只在首次免疫后第14天出现短暂的尾巴无力症状。Black Gold髓鞘...     

二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠细胞免疫的影响

目的观察二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(EAE)细胞免疫的影响。方法皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)与完全弗氏佐剂(CFA)混合的抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素(PTX),建立EAE模型。造模后每天记录各组小鼠体质量及神经功能评分;用流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞;采用HE染色进行脑组织病理学观察。结果模型组小鼠造模后第9天陆续发病,第22天达到高峰,发病急性期(造模后第25天)T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+明显比正常组增高(P<0.01),CD4/CD8比值也有所升高(P<0.05);发病缓解期(造模后第40天)T淋巴细胞亚群CD8+和NK细胞明显下降(P<0.05);病理检查发现EAE小鼠脑组织神经元细胞核固缩,小静脉周围炎性细胞浸润形成袖套样改变。二黄胶囊治疗后,EAE小鼠神经功能评分比模型组明显降低(P<0.05),脑组织炎性浸润程度减轻,发病急性期外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.01);恢复期T淋巴细胞亚群(CD3+、CD8+)及NK细胞明显增加(P<0.05)。结论二黄胶囊可在EAE小鼠发病的不同时期通过调节T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+)及NK细胞而起到防治EAE作用。     

妊娠对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的明确妊娠期实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠的神经功能的变化情况,并进一步探索其可能的作用机制。方法采用MOG35-55多肽诱导制作雌性EAE小鼠模型,按雌雄小鼠2:1比例合笼受孕,以成功妊娠的小鼠为妊娠组(n=10);未配孕的小鼠为对照组(n=10)。比较2组神经功能评分(5分评分法),脊髓实质内炎症细胞的浸润(HE法)及神经脱髓鞘(Bielshowsky’s-Luxol fast blue staining染色)情况,血清IFN-γ、IL-17、IL-10浓度(ELISA法),脾脏中Treg细胞数百分比(流式细胞术)。结果妊娠组小鼠神经功能缺损程度在妊娠后第10、13天较对照组显著降低(P<0.05),且妊娠组小鼠脊髓病灶区炎症细胞浸润程度较对照组显著降低(P<0.05);2组小鼠的脑和脊髓白质内均可见神经脱髓鞘改变,妊娠组的脱髓鞘程度较对照组轻(P<0.05);妊娠组小鼠血清的IFN-γ、IL-17浓度较对照组显著降低(P<0.05),但血清IL-10浓度较对照组显著升高(P<0.05);妊娠组小鼠脾脏中调节性T细胞(Treg细胞)数百分比较对照组显著升高(P<0.05)。结论妊娠期EAE小鼠的临床症状缓解且脊髓实质内炎症反应减轻;其可能的作用机制为上调Treg细胞的抗炎因子和抑制促炎因子的分泌。     

巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠纤维蛋白沉积的影响

目的:观察巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠发病情况及脑组织纤维蛋白沉积的影响.方法:将50只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE对照组、巴曲酶低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,采用MOG35-55免疫C57BL/6小鼠诱发EAE动物模型.观察小鼠发病潜伏期、进展期和高峰期神经功能障碍评分变化;免疫组化染色法检测脑组织纤维蛋白沉积,计算其相对阳性面积.结果:与EAE对照组比较,巴曲酶各治疗组的潜伏期明显延长,进展期明显缩短,发病高峰期神经功能障碍评分明显降低,呈剂量依赖关系;巴曲酶各治疗组中纤维蛋白沉积量较EAE组明显减少,且呈剂量依赖关系;EAE对照组、巴曲酶各治疗组的纤维蛋白沉积量与潜伏期呈明显负相关,与进展期及发病高峰期神经功能障碍评分呈明显正相关.结论:巴曲酶通过减少脑组织纤维蛋白沉积而发挥对EAE的保护作用.     

骨髓基质干细胞对过继免疫实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响及免疫调节机制

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对过继免疫实验性自身免疫性脑脊髓炎(AT-EAE)的治疗作用及相关免疫调节机制。方法分离纯化培养BMSCs,建立EAE动物模型,在EAE动物模型发病高峰期取淋巴细胞,加入MBP刺激并与BMSCs共培养,并设未共培养的单纯MBP刺激对照组。将培养后的淋巴细胞对大鼠进行过继免疫回输,通过体外增殖实验,流式细胞仪检测以及体内临床评分评估BMSCs对EAE的治疗作用及其机制。结果BMSCs共培养MBP组与MBP组相比,淋巴细胞增殖明显被抑制,CD4+Foxp3+细胞显著增高而CD4+IL-17+细胞显著降低,培养后的淋巴细胞进行过继免疫回输后,干细胞共培养组临床评分显著降低(P<0.05)。结论BMSCs通过调节免疫系统的调节性T细胞(Treg)和Th17的细胞平衡,即上调调节性T细胞分化和下调Th17细胞功能,对EAE起治疗作用。     

葛根素抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用

  目的  探索葛根素（Puerarin）治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的作用和机制。  方法  将C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组、Puerarin处理EAE组（Puerarin组）。从诱导EAE当日开始，Puerarin组用葛根素（80 mg/kg）灌胃，其余2组用同体积生理盐水灌胃，每日1次。每天记录神经功能评分及体重变化；劳克坚劳蓝（luxol fast bBlue，LFB）髓鞘染色检测脊髓脱髓鞘情况；ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-22和TGF-β的水平；Western 印迹法检测脊髓组织NF-κB、IκBα、IL-17、Foxp3等蛋白表达。  结果  Puerarin组小鼠神经功能评分及平均分均较EAE组明显降低（P < 0.01），而体重明显增加（P < 0.01）。应用葛根素后，EAE小鼠脱髓鞘面积（P < 0.01）及病理评分（P < 0.05）均明显下降。Puerarin组小鼠促炎因子IL-6、IL-17和IL-22水平显著降低（P < 0.01），抑炎因子IL-10和TGF-β显著增加（P < 0.05）。应用葛根素后:NF-κB及IL-17表达明显减少（P < 0.05）；IκBα及Foxp3表达显著增加（P < 0.01）。  结论  葛根素可缓解EAE小鼠症状，减少脱髓鞘。作用机制是抑制NF-κB通路，调节IL17/Tregs平衡，实现对免疫功能的调节。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎及免疫治疗研究进展

实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoiummune Encephalomyelitis，EAE)在自身免疫病的病因、发病机制及免疫治疗的研究中应用十分广泛，并且在评价免疫抑制药物中也是一个极有价值的动物模型。同时因其在临床表现、病理特征及免疫异常方面与人类多发性硬化病(Multiple Selemsis，MS)极为相似，而被国际上普遍用作MS的标准实验动物模型，     

不同剂量2-BFI对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的 观察不同剂量的2-BFI对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响.方法 将60只SD大鼠分为对照组、EAE组和2-BFI(0.75、1.5、3及6mg/kg)组,采用动物行为学、常规HE染色和LFB髓鞘染色观察大鼠的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化.结果 EAE组9只大鼠出现典型的EAE行为学改变,CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失.经2-BFI干预后,大鼠EAE发病率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润减少和髓鞘脱失减轻.但与EAE组比较,仅3 mg/kg 2-BFI在EAE临床症状和CNS内炎性细胞浸润方面差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3 mg/kg 2-BFI对EAE大鼠有神经保护作用.     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓GFAP及mRNA表达的影响

目的探讨咪唑克生（Ida）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）Lewis大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）蛋白及其mRNA表达的影响。方法将30只雌性Lewis大鼠分为三组：正常对照组、EAE组和Ida组。以豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）诱发制备大鼠EAE模型,并于给予GPSCH当日开始分别腹腔注射10mg/kgIda（Ida组）和生理盐水（EAE组和对照组）连续10d,观察EAE症状并评分。用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测GFAP蛋白及mRNA在脊髓中的表达。结果10d后Ida组大鼠的临床症状和病理学改变减轻（〈0.05）。脊髓组织中GFAP蛋白及其mRNA的表达,EAE模型组显著高于对照组,Ida组较EAE组显著增高,差异有统计学意义（〈0.05）。结论Ida可促进GFAP在EAE大鼠脊髓中的表达,可能是其保护EAE大鼠的部分作用机制。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的改良

目的：提取并纯化正常人脑脊髓的髓磷脂碱性蛋白(MBP)，鉴定其活性，并用其诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型。方法：以人脑脊髓为原料，通过去脂、酸溶解、CM—52柱层析等步骤提取人MBP，鉴定其纯度后在Wistar大鼠诱导EAE。结果：所提取的MBP具有纯度高、免疫话性好的特点，与抗MBP抗体能特异性结合，并可成功地诱导出EAE动物模型，病理学证实发病大鼠的脑脊髓具有典型的脱髓鞘改变和胶质结节形成。结论：用人MBP在不加百日咳杆菌的条件下，同样可以诱导出EAE，这种动物模型体内的病理学改变与人类的多发性硬化症(MS)更具有相似性，适用于对MS的研究。     

基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9与卵巢上皮性癌血管生成的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对卵巢上皮性癌(EOC)血管生成的影响。方法 采用免疫组织化学法(SP法)检测60例卵巢上皮性癌组织中MMP-2以及MMP-9的表达,并对标本微血管密度(MVD)进行检测,与10例正常卵巢组织和16例卵巢良性肿瘤组织进行对比分析。结果 卵巢上皮性癌组织及卵巢良性肿瘤中的MMP-2及MMP-9的阳性表达率显著性高于正常卵巢组织(均P<0.01);MMP-2及MMP-9在卵巢癌组织中的表达与MVD呈正相关(均P<0.05)。结论 MMP-2及MMP-9可能在卵巢上皮性癌血管生成中起重要的作用,MMP-2和MMP-9的表达增强,血管生成的能力也显著增强。     

瘦素对实验性自身免疫性脑脊髓炎的促发作用

实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是中枢神经系统炎性脱髓鞘白质脑病如多发性硬化的动物模型.用致脑炎的相关抗原免疫敏感动物可制造EAE模型.致EAE的相关抗原有许多,主要有全脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、髓鞘少突胶质糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)、髓鞘蛋白脂质蛋白(myelin proteolipid protein,PLP)等.     

神经生长因子对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型,探讨神经生长因子（hNGF)对豚鼠EAE的保护作用。方法 豚鼠经一次足跖真皮内注射完全福氏佐剂－豚鼠全脊髓匀浆,诱发EAE疾病;在豚鼠致炎前注射hNGF,观察其对EAE临床症状、发病率及脊髓病变的影响。结果 模型组豚鼠免疫注射后相继出现明显的EAE症状,发病率为9／10。豚鼠在致炎前注射hNGF,可明显控制病情,降低EAE发病率,明显改善脊髓的病理改变,且hNGF的作用呈剂量依赖性。结论 hNGF对实验性自身免疫性脑脊髓炎有显著的保护作用。     

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的 检测雌激素在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的预防性治疗作用并初步探讨其体内作用机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)和完全弗氏佐剂(CFA)免疫C57BL/6J小鼠制备EAE模型;雌激素于建模始每日皮下注射50 μmol/L进行治疗,通过发病指数评分、脊髓病理分析、炎症因子水平检测,并应用流式细胞仪(FACS)及实时荧光定量PCR(qPCR)评价治疗效果;进一步通过分析小鼠脾细胞及脊髓相关功能分子CD4/PD-l、CD19/PD-L1、CD4/CD25/Foxp3、CD19/CD21/CD23及CD 19/CD5/CDl dhigh的表达变化,探讨雌激素可能的作用机制.结果 雌激素预防性治疗可有效延缓EAE小鼠的发病,减轻脱髓鞘病变.病理结果显示,雌激素治疗能减少小鼠脊髓组织炎性细胞的浸润,同时下调外周炎性因子TNF-a及IL-17A的分泌表达(P＜0.01);与模型组相比,雌激素治疗下调T淋巴细胞表面活化分子CD69的表达(P＞0.05)并可显著上调CD4+T细胞表面PD-1的表达(P＜0.05);同时,雌激素治疗后PD-1的配体CD19+B细胞表面PD-L1的表达明显上调(P＜0.01),脾细胞中CD19+CD21highCD23low(P＜0.01)及CD19+CD5+CD1dhigh(P＜0.01)的比例也有不同程度的升高,但对脾细胞中CD4+CD25Toxp3*的表达无明显作用.结论 雌激素预防性治疗可延缓EAE小鼠的发病进程,其作用机制可能与上调PD-1/PD-L1通路并上调调节性B细胞水平有关.     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9在动脉粥样硬化中的研究进展

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）是一类可降解细胞外基质的蛋白水解酶。其中,MMP-2和MMP-9与动脉粥样硬化的发生发展密切相关,在动脉粥样硬化相关疾病的诊断和预后中起重要作用。本文就MMP-2和MMP-9在动脉粥样硬化及其相关疾病中的最新研究进展作一综述,以期为动脉粥样硬化及其相关疾病的诊疗提供帮助。