治疗遗传病的RNA药物研究进展

RNA药物能够通过识别互补序列靶向对应基因以抑制特定蛋白或RNA的表达,或通过翻译合成目的基因编码的蛋白来发挥遗传性疾病治疗作用。RNA药物主要分为寡核苷酸药物（包括反义寡核苷酸、小干扰RNA和RNA适配体）和信使RNA药物等。其中,反义寡核苷酸和小干扰RNA已用于临床治疗遗传病,而RNA适配体和信使RNA药物目前还处于临床试验阶段。当前主要通过对RNA药物进行化学修饰（如对信使RNA进行假尿嘧啶修饰）来降低免疫原性和提升药物疗效,以及开发纳米粒载体、细胞外囊泡和类病毒载体等递送载体来解决RNA药物的稳定性、特异靶向性和安全性等问题。本文概述了目前用于治疗遗传病的11种RNA药物的具体作用分子机制,并简单讨论了RNA药物的化学修饰及递送载体的研究现状。     

微小RNA在白血病中的作用及治疗策略

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类由19～25个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子RNA.其在白血病中扮演着癌基因和抑癌基因的角色,针对miRNA在自血病中的不同作用,可采取相应的治疗策略.对于在白血病中高表达的具有癌基因功能的miRNA,可采用反义寡核苷酸等技术下调或抑制miRNA:而对于在白血病中显...     

基于RNA的基因治疗药物研究进展

基于RNA的基因治疗是基因治疗领域的一种重要技术手段,其中多数技术在mRNA水平调控基因表达,特别是在抑制一些有害基因表达或失控基因过度表达方面取得了很大进步。本文就反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等主要的RNA治疗药物的作用机制、应用研究及存在问题进行综述。     

反义，RNA干扰，基因沉默策略用于疾病治疗是否可行

反义寡核苷酸能调节基因表达,调控细胞功能和分化及细胞对于内外刺激的反应。虽然其作为治疗手段在临床前和临床研究中均已取得了令人鼓舞的结果,但实际运用中,仍有几大难点有待解决,包括效价、脱靶效应、转运及不良反应等。从反义寡核苷酸研究中获得的经验有助于其他基于寡核苷酸药物的研发,如CpG寡核苷酸、RNA干扰和微小RNA等。     

微小RNA与表观遗传调控:肿瘤治疗新策略

人类恶性肿瘤常有微小RNA(microRNA,miRNA)表达紊乱,其机制可能涉及miRNA合成及加工过程中的表观遗传调控异常。miRNA自身亦可通过转录后水平调节DNA甲基转移酶表达或改变组蛋白修饰等多种途径参与构成表观遗传调控网络。文中综述miRNA与表观遗传调控的相互作用及其对肿瘤发生、发展过程的影响,表观遗传学药物及外源性miRNA作为新型治疗工具在恶性肿瘤治疗领域的应用前景。     

微小RNA、循环微小RNA与肿瘤研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种长度为21～25个核苷酸组成的内源性非编码小分子RNA,可以通过与靶基因序列特异性翻译抑制的相互作用在转录水平对基因表达进行调节,从而参与多种重要的生物学进程。miRNA在人体肿瘤的发生和发展过程中发挥非常重要的作用,已发现若干miRNA与某些肿瘤的发生和发展有着密切的关系。不仅是组织中的miRNA,外周血循环中的miRNA也与肿瘤的发生和发展密切相关,部分可作为疾病的诊断标志物,为临床疾病的早期诊断提供了新思路。血中肿瘤特异性miRNA的检出对肿瘤的早期诊断具有至关重要的作用。     

替诺福韦治疗慢性乙肝病毒感染研究

以核苷类药物治疗慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是当前临床研究热点之一,替诺福韦作为广谱抗病毒药物,继研究其抗艾滋病作用之后,发现该药在对于艾滋病毒合并HBV中能够起到明显的抗HBV作用,同时发现其对于其他核苷类药物诱生的HBV变异株同样有很强的抗病毒活性.本文就替诺福韦的基础药理及目前临床研究结果做一综述.     

反义:衰而未败

20年来，反义核酸药物的发展非常缓慢，仅有一个反义药物进入市场，其他大部分都在Ⅲ期临床试验中遭遇失败，有关反义新药的申请也很快被FDA驳回。人们开始把目光投向竞争RNA技术平台尤其是小干扰RNA，这是否意味着反义核酸药物没有发展前途了呢？本文就反义药物的发展现状、发展前途以及可能突破现状的切入点作了详细分析，为反义药物的继续发展指出了方向。     

lncRNA ANRIL在银屑病患者病变皮肤组织中的表达及其临床意义

目的评估长链非编码RNA(lncRNA) INK4位点的反义非编码RNA(ANRIL)在银屑病患者病变皮肤组织中的表达水平及其与疾病严重程度和炎症因子的关联。方法连续纳入204例银屑病患者,钻取银屑病病变组织和正常皮肤组织标本,采用荧光定量聚合酶链反应检测病变组织及配对正常皮肤组织的lncRNA ANRIL以及炎症因子的表达量。采用银屑病皮损面积及严重度指数(PASI)评估银屑病的严重程度。结果lncRNA ANRIL在病变皮肤组织中的表达量高于配对正常皮肤组织(P<0.001)。受试者工作特征曲线显示,lncRNA ANRIL表达水平可以较好地区分银屑病病变皮肤组织和配对正常皮肤组织（曲线下面积：0.711,95%CI：0.656～0.766)。患者病变皮肤组织的lncRNA ANRIL表达量与PASI评分正相关(r=0.261,P<0.001)。进一步行多元线性回归分析,结果显示,病变皮肤组织lncRNA ANRIL高表达(P=0.013)、受累体表面积较大(P<0.001)和同时接受局部治疗(P=0.008)是患者较高PASI评分的独立相关因素。此外,病变皮肤组织的lncRNA ANRIL表达量与促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF|α)(r=0.248, P<0.001)、白细胞介素|6(IL|6)(r=0.219, P=0.002)和IL|17(r=0.252, P<0.001)的表达水平正相关。结论lncRNA ANRIL在银屑病病变皮肤组织中高表达,且与患者的疾病严重程度和炎症因子水平正相关。     

原发性IgA肾病中微小RNA的差异表达研究

目的 借助微小RNA(microRNA,miRNA)芯片研究IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)中miRNA的差异表达. 方法 收集11例IgAN患者肾穿标本作为IgAN组,3例镜下病理检查止常的肾皮质作为对照组.使用Trizol试剂提取每组总RNA,分离miRNA,采用miRNA芯片筛选出差异表达显著的miRNA,荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术验证芯片结果的可靠性.结果 IgAN组中miRNA表达出现显著差异的有66个,其中表达显著上调35个,显著下调31个.挑选has-miR-637、has-miR-492进行Real-time PCR相埘定量检测,结果显示2个miRNA的表达趋势与芯片结果相符,证明了芯片结果的可靠性. 结论 IgAN是一种经典的多因素、多基因病,本实验通过芯片技术表明miRNA在IgAN中出现显著差异表达.     

Apoptosis of drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP induced by survivin antisense oligonucleotides

Currently, surgery-oriented treatment plays a major role in the treatment of ovarian cancer patients. But 5-year survival rate of patients is still around 30%. One of the main reasons for the Iow survival rate is the drug resistance of tumor cells against chemotherapy.1,2 The function of antiapoptosis in the course of initiation and progress of cancer has a close relationship with drug resistance of tumor cells. Survivin is a new discovered anti-apoptosis gene, its expression levels correlating with more aggressive disease and poor clinical outcome in many of these tumors. It has been reported that survivin is expressed during fetal development and in cancer tissues.3 Furthermore,survivin overexpression, by disrupting the balance between cell proliferation/differentiation and apoptosis, may relate with the resistance to a variety of apoptotic stimuli, including chemotherapy.4,5 We designed antisense oligonucleotides of survivin to treat the drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP, and studied its effects on inducing COC1/DDP apoptosis. The purpose of this study was to find a novel approach to improve the sensitivity of ovarian carcinoma chemotherapy.     

反义硫代寡核苷酸对786-O细胞survivin基因的表达及生长抑制作用

目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/LASODN转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。     

核仁素表达下调对顺铂诱导人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖抑制和凋亡的影响

目的:观察核仁素(C23)表达下调对顺铂(DDP)诱导人骨肉瘤细胞株SaOS-2增殖抑制和凋亡的影响。方法:将细胞随机分为5组:对照组、DDP组、S+DDP组(转染C23正义寡核苷酸后再用DDP)、AS+DDP(转染C23反义寡核苷酸后再用DDP)与R+DDP(转染随机寡核苷酸后再用DDP);用MTT法检测各组细胞增殖率;用Western印迹和RT-PCR检测各组C23,Bcl-2和Bax蛋白与mRNA的表达;用DAPI染色方法和流式细胞术检测各组细胞凋亡核百分率、细胞凋亡率。结果:C23反义寡核苷酸显著抑制了C23蛋白和mRNA的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);AS+DDP组与DDP组比较,细胞增殖率下降约18%(P<0.01),C23与Bcl-2蛋白和mRNA表达均降低(P<0.01),但Bax表达增高(P<0.01);细胞凋亡核百分率与细胞凋亡率均增高(P<0.01)。结论:C23表达下调能促进DDP诱导的SaOS-2细胞增殖抑制和凋亡。     

靶向Livin反义寡核苷酸对结肠癌LoVo细胞增殖及对卡铂敏感性的影响

目的探讨靶向Livin反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌LoVo细胞增殖及Livin基因表达的影响,并观察其对卡铂敏感性的变化。方法 (1)用靶向Livin ASODN、随机寡核苷酸(RODN)分别转染LoVo细胞,反转录-聚合酶链式扩增反应检测Livin mRNA表达量变化;(2)流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;(3)采用CCK-8法检测卡铂联合靶向Livin ASODN作用对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果 Livin ASODN转染LoVo细胞明显抑制Livin mRNA表达,与空白对照组、RODN组比较差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞术碘化丙锭单染色显示,空白对照组、RODN组均未出现细胞亚二倍体峰;Livin ASODN组存在LoVo早期凋亡细胞,200、400 nmol.L-1的Livin ASODN组细胞亚二倍体百分率分别为(10.59±1.05)%、(11.63±1.27)%;卡铂单药半数抑制浓度(IC50)为3.33 mg.L-1,卡铂与Livin ASODN(100 nmol.L-1)联合,IC50为0.22 mg.L-1,表现为协同作用(Q≥1.15),增敏倍数15.14。结论靶向Livin ASODN下调Livin mRNA表达,诱导LoVo细胞凋亡并提高其对卡铂的敏感性。     

Inhibitory effect of 2′-o-methoxyethyl-modified antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor A on SKOV3 human ovarian cancer cells

Background  Ovarian cancers are often at an advanced stage at diagnosis because early detection is difficult. The poor prognosis of ovarian cancers highlights the crucial need to develop better therapeutic agents and strategies. The objective of this study was to investigate the inhibitory effects of a new modified antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) in SKOV3 ovarian cancer cells.

Methods  Antisense oligonucleotides targeting VEGF-A was designed, synthesized and transfected into SKOV3 ovarian cancer cells. Western blotting and real-time RT-PCR were used to analyze the inhibitory effects of antisense oligonucleotides on VEGF-A protein and mRNA expression. Transwell matrix assay was used to detect cell migration inhibition.

Results  The antisense oligonucleotides targeting VEGF-A significantly decreased VEGF-A protein and mRNA expression and inhibited cell migration in SKOV3 ovarian cancer cells.

Conclusions  This new modified antisense oligonucleotides targeting VEGF-A can decrease VEGF-A expression and inhibit cell migration in SKOV3 ovarian cancer cells. This new oligonucleotides may be a promising therapeutic agent for ovarian cancers.

     

靶向线粒体抗神经退行性疾病新型药物研究进展

线粒体是广泛存在于神经元细胞中的细胞器,它既能通过氧化磷酸化作用为各种生命活动提供能量,也参与了如钙稳态和细胞凋亡等多种病理生理性活动的调节。大量研究证明线粒体功能障碍在帕金森病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病的早期发生过程中发挥重要作用。探索线粒体在该类疾病发生过程中的变化,对认识神经退行性疾病的发病机制,开发新型神经保护药物具有重要意义。事实上,一些线粒体靶向性药物已用于神经退行性疾病的临床治疗或正处于不同研究阶段。本文通过对有关线粒体在神经退行性疾病中相关证据的讨论,综述线粒体靶向性神经保护剂的研究进展,论证其作为神经退行性疾病治疗药物的可行性。     

治疗癌症的新途径:靶向肿瘤微环境

传统的癌症治疗方法是以直接杀死肿瘤细胞为基础近年来靶向肿瘤微环境成为治疗肿瘤的新途径.肿瘤微环境主要通过诱导新生血管形成、抑制免疫监视和免疫反应、孕育肿瘤干细胞等促进肿瘤发生及转移.理论上靶向肿瘤微环境的肿瘤治疗应有高教、低毒、广谱的特点.限于对肿瘤微环境的了解,目前以肿瘤微环境为靶成功治疗肿瘤的例子并不多.本文就肿瘤...     

多重耐药鲍曼不动杆菌gyrA基因高效反义肽核酸序列筛选及其体外抗菌活性观察

目的 筛选出能与多重耐药鲍曼不动杆菌gyrA基因的mRNA紧密结合的反义肽核酸序列,评估其体外抗菌活性.方法 利用Mfold、RNA Structure 4.6两种计算机软件对多重耐药鲍曼不动杆菌gyrA基因的mRNA进行二级结构分析计算,根据最低自由能原则在其mRNA局部杂交松弛区设计反义寡核苷酸,与体外转录的地高辛标记的gyrAmRNA进行斑点杂交,根据杂交信号的强弱筛选出与gyrA mRNA紧密结合的反义寡核苷酸,根据其序列合成肽核酸(pep-tide nucleic acid,PNA),另加设1条与靶序列有6个碱基错配的PNA作为阴性对照,2条PNA分别连接穿膜肽形成肽-肽核酸(peptide-PNA,PPNA).测定经不同浓度PPNA处理的细菌光密度[D(600)]值并进行平板菌落计数,观察其对细菌生长的抑制作用,采用RT-PCR检测gyrA mRNA的表达水平.结果 斑点杂交结果显示,计算机软件设计的10条反义寡核苷酸探针中有5条与gyrA mRNA显示出杂交信号,其中1条信号最强,能够与gyrA mRNA稳定结合,将其以肽-肽核酸的形式合成处理细菌,结果表明其在5 μmol/L浓度可完全抑制gyrA mRNA的表达,并抑制鲍曼不动杆菌的生长,在10μmol/L浓度具有杀菌活性,而具有错配碱基的PPNA对细菌生长无明显抑制作用.结论计算机辅助设计联合斑点杂交可在体外模拟体内环境对寡核苷酸与靶基因结合的有效性进行验证,实现在体外高通量筛选高效反义序列.经筛选得到的靶向gyrA基因反义肽-肽核酸可在体外高效抑制多重耐药鲍曼不动杆菌生长.     

MicroRNA早期诊断子宫内膜异位症的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类非编码RNA分子,被公认为是一种与人类多种疾病相关的转录后调节因子。目前研究发现了数百种在疾病中表达失调的miRNA,其中不少可以作为有前景的生物标志物。子宫内膜异位症（EMT）影响全球大约1.9亿育龄女性,是一种可导致痛经、慢性盆腔疼痛、不孕症等的慢性疾病。与其他慢性病比较,EMT的确诊时间往往延迟,目前还没有准确、容易获得、非侵入性的诊断工具。一些miRNA已被确定为EMT的潜在生物标志物,并且能够将EMT病理生理学的目标基因与功能途径联系起来。该文通过总结组织和循环中的miRNA在EMT中的表达差异,对miRNA中可作为早期诊断EMT的生物标志物的研究进展进行综述。