The effects of KN-93 on β-MHC and ANF in cardiomyocytes hypertrophy.

目的 探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC) mRNA和心钠素(ANF) mRNA表达的影响.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10 μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达.结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加.KN-93可抑制上述效应.结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达.     

KN-93对肥大心肌细胞β-肌球蛋白重链及心钠素表达的影响

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA和心钠素(ANF)mRNA表达的影响。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达。结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加。KN-93可抑制上述效应。结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达。     

橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响

目的 探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9C2心肌细胞肥大的影响.方法 使用不同浓度橙皮素（0.125、0.25、0.5、1μmol/L）和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞12h,心肌细胞骨架骨骼α肌动蛋白（α-actinin）荧光染色评估H9C2细胞面积改变以及real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物BNP、β-MHC的mRNA表达变化,以观察不同浓度橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响,选择0.25 μmol/L橙皮素和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞6、12、24h,观察橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大抑制作用的时间相关性.结果 橙皮素干预可以缓解AngⅡ诱导H9C2心肌细胞的细胞面积增大;橙皮素抑制了AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞BNP、β-MHC的mRNA表达水平升高.结论 橙皮素能够抑制AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,其有可能成为治疗心肌重构新的潜在药物.     

神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大的钙信号机制

目的探讨钙依赖的信号途径在神经肽Y (NPY)诱导心肌肥大中的作用.方法NPY刺激乳鼠心肌细胞,加入钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环胞素A(CsA)进行干预(5 μg/mL),观察心肌细胞蛋白合成速率(3H-Leu掺入量)、早期肥大反应基因(c-jun mRNA)表达以及胞浆和核内[Ca2+]i的变化.结果经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞3H-Leu掺入量、c-jun mRNA表达以及胞浆和核内[Ca2+]i均明显高于不加药对照组(P<0.05,P<0.01);而CsA干预后的心肌细胞3H-Leu掺入量和c-jun mRNA表达与对照组比较则无显著差别.结论Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在NPY诱导心肌细胞肥大中起重要作用;NPY刺激细胞内[Ca2+]i增加,可能是活化CaN信号途径的始动环节.     

BAPTA对去甲肾上腺素刺激的大鼠心肌细胞蛋白合成及c-fos和β-MHC表达的影响

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)刺激导致的心肌细胞肥大中,钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c-fos和β-MHC表达之间的关系.方法去甲肾上腺素(10-5mol/L)刺激原代培养的心肌细胞,细胞内钙离子络合剂BAPTA(20 μmol/L)阻断钙信号通路,通过3H-leucine掺入测定蛋白质合成,RT-PCR测定c-fos及β-MHC mRNA的表达.结果NE刺激组的心肌细胞3H-leucine摄入量、c-fos及β-MHC的表达均显著高于正常对照组(P＜0.01),BAPTA阻断后明显降低(P＜0.01),单纯BAPTA阻断组的3H-leucine摄入量和β-MHC的表达低于正常对照组(P＜0.01),在正常对照组及单纯BAPTA阻断组未见c-fos明显表达.结论Ca2 信号通路不但参与NE刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加、c-fos及β-MHC的过度表达,且在正常心肌细胞蛋白质合成及β-MHC表达中也起重要作用.     

过氧化物酶体增殖激素型受体对AngⅡ诱导肥厚心肌细胞的影响

目的 探讨同时激活PPARα、PPARs激活剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞的影响.方法 体外原代培养新生大鼠心肌细胞,分别以不同浓度非诺贝特(PPARα激活剂)和或吡格列酮(PPARγ激活剂)预处理24 h后,加用AngⅡ刺激诱导肥大心肌细胞模型.采用软件分析细胞表面积,以MTT比色法测定心肌细胞活力,用RT-PCR法检测α-MHC和胚胎基因β-MHC mRNA的表达.结果 与对照组相比,非诺贝特、吡格列酮显著逆转了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,抑制AngⅡ引起细胞活力改变,增加α-MHC mRNA表达,降低β-MHC mRNA的表达,α/β-MHC mRNA比值明显增加;相对两药处理组,上述指标与两药合用组无显著差异(P＞0.05).结论 PPARs信号通路激活能有效预防心肌细胞肥大,PPARαγ配体合用未见明显叠加效应.     

人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的探讨传统中药人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）所诱发心肌肥大的影响。方法采用酶消化法分离新生大鼠心室肌细胞,培养心肌细胞随机分为3组：正常对照组、Ang Ⅱ组、AngⅡ＋Rg1组。在接受药物处理24h后,检测心肌细胞总蛋白含量,β-MHC、TNF-α和IL-1β的mRNA表达量。结果 Ang Ⅱ处理导致培养心肌细胞的总蛋白含量以及β-MHC mRNA表达量显著增加,提示心肌肥大的发生;人参皂苷Rg1显著抑制了Ang Ⅱ的促心肌细胞肥大作用。同时,AngⅡ增加心肌细胞对TNF-α和IL -1βmRNA表达的效应也被人参皂苷Rg1所抑制。结论人参皂苷Rg1抑制了 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大以及心肌细胞对炎性介质TNF-α、IL-1β的释放,这可能是人参皂苷Rg1对心脏疾病具有保护作用的细胞学基础。     

罗格列酮对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞转化生长因子-β1和层黏连蛋白表达的影响

目的:观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)转化生长因子-β1(TGF-β1)和层黏连蛋白(FN)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性的改善作用及其机制.方法:体外培养NRK细胞,在无血清DMEM低糖培养基同步化24 h后,随机分为7组:正常对照组,CsA 0.25 mg/L组,CsA 0.5 mg/L组,CsA 1.0 mg/L组,CsA 2.0 mg/L组,CsA 1.0 mg/L加RGZ 10 μmol/L组,CsA 1.0 mg/L加RGZ 15 μmol/L组,继续培养24 h后,收集细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中TGF-β1 mRNA表达,用蛋白印迹(Western blotting)方法检测FN蛋白的表达.结果:不同质量浓度的CsA均可促进TGF-β1 mRNA和FN蛋白表达(P＜0.05),罗格列酮能显著下调CsA引起的TGF-β1 mRNA和FN蛋白的高表达.结论:罗格列酮可通过下调CsA引起的TGF-β1和FN的高表达,抑制CsA导致的肾脏成纤维细胞外基质的蓄积.     

右美托咪定诱导心肌细胞代偿性肥大发挥心肌保护作用实验研究

目的:探讨右美托咪定(DEX)诱导心肌细胞代偿性肥大从而发挥心肌保护作用。方法:新生乳鼠(1～3 d)心脏提取分离培养，建立离体心肌细胞群。实验分组：正常心肌细胞对照组(C组)、DEX组(D组)。荧光显微镜观察两组心肌细胞的形态变化，Western blot检测两组心肌细胞肥大指标的差异表达，CCK8检测细胞活性。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大，建立离体心肌肥厚模型(A组),药物孵育24 h后停药24 h, Western blot检测三组细胞心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链基因(β-MHC)蛋白的表达水平。结果:与C组对比，D组心肌细胞形态增大；心肌肥大相关指标ANP、BNP和β-MHC蛋白水平表达增加，差异有统计学意义(均P<0.05);CCK8检测细胞活性增高，差异有统计学意义(P<0.05);D组停药后ANP、BNP和β-MHC蛋白表达明显恢复，接近C组。而A组停药后ANP、BNP和β-MHC蛋白表达并未恢复正常。结论:右美托咪定可能是通过诱导大鼠心肌细胞可逆代偿性肥大来保护心肌细胞的功能。     

一氧乙酰旋覆花内酯对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞的保护性作用

目的 探讨ABL在心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法 体外培养H9C2心肌细胞,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）构建心肌细胞肥大模型;模型组给予1μmol/L AngⅡ刺激24h、ABL处理组给予AngⅡ刺激,同时给予5μmol/L和10μmol/L ABL处理24h。采用心肌细胞肌动蛋白α-actinin染色评价心肌细胞大小,采用RT-PCR检测肥厚相关基因心房利钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、肌球蛋白重链β（β-MHC）的表达;蛋白印迹（Western blot）法检测信号通路蛋白的表达。结果 与模型组比较,5μmol/L和10μmol/L ABL处理组心肌细胞面积明显降低（P<0.05）;ANP、BNP、β-MHC肥厚相关基因表达降低（P<0.05）,且其抗心肌细胞肥大呈现剂量依赖性（P<0.05）。Western blot法检测结果显示ABL处理组AMPKa磷酸化水平增高（P<0.05）,而Akt、mTOR、GSK3β的磷酸化明显抑制（P<0.05）;AMPKa拮抗剂Compound C可阻断ABL的心肌保护作用。结论 ABL可通过激活AMPKa信号通路,调节Akt/Mtor/GSK3β对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大发挥保护性作用。     

神经肽Y经Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶途径诱导心肌细胞肥大

目的 观察神经肽Y(NPY)诱导心肌细胞肥大效应,及Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)途径在其中起的作用.方法 用NPY(10、100nmol)刺激心肌细胞,用环胞索A(CsA)特异性抑制CaN活性.测定心肌细胞蛋白合成速率(3H-Leu掺入量)、CaN-蛋白表达、c-jun mRNA表达、CaN酶活性、细胞内游离钙含量.结果 (1)在100nmol NPY作用下,心肌细胞3H-Leu掺入量及c-jun mRNA表达量均较对照组显著增高(P<0.05,P<0.001).NPY+CsA组和对照组相比无显著差别.(2)在100 nmol NPY作用下,NPY组心肌细胞内CaN酶比活力、CaN-α表达、胞浆及核内钙含量较对照组显著增高(P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.001).结论 NPY可刺激心肌细胞肥大,CaN信号途径在其中起重要作用.     

神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大的钙信号机制

目的 探讨钙依赖的信号途径在神经肽Y（NPY）诱导心肌肥大中的作用。方法 NPY刺激乳鼠心肌细胞，加入钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂环胞素A（CsA）进行干预（5μg／mL），观察心肌细胞蛋白合成速率（^3H-Leu掺入量）、早期肥大反应基因（c-jun mRNA）表达以及胞浆和核内[Ca^2＋]i的变化。结果 经100nmol／L NPY刺激24h后，心肌细胞^3H-Leu掺入量、c-jun mRNA表达以及胞浆和核内[Ca^2＋]i均明显高于不加药对照组（P〈0．05，P〈0．01）；而CsA干预后的心肌细胞^3H-Leu掺入量和c-jun mRNA表达与对照组比较则无显著差别。结论 Ca^2＋／CaM依赖的CaN信号途径在NPY诱导心肌细胞肥大中起重要作用；NPY刺激细胞内[Ca^2＋]i增加，可能是活化CaN信号途径的始动环节。     

钙调神经磷酸酶对血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G表达的影响

目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中蛋白激酶G(PKG Iα)表达的影响.方法:对大鼠VSMCs培养并行细胞鉴定,分为对照组、低浓度环孢菌素A(CsA,0.5 mg/L)干预组、高浓度CsA(5 mg/L)干预组以及苯肾上腺素(PE)刺激组(5 mg/L CsA 10 μmol/L PE).其中CsA为CaN特异性抑制剂,PE为已知的CaN激活剂,能够刺激细胞增殖.应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot法定性及定量测定VSMCs增殖中PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平.结果:0.5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平与对照组相比差异无统计学意义,而5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA及蛋白的表达明显高于对照组,5 mg/L CsA 10 μmol/L PE组中PKG Iα mRNA的表达比5 mg/L CsA组减少了32.2%,蛋白的表达减少了36.7%,但仍明显高于对照组.结论:CaN能够调节培养VSMCs中PKG Iα的表达,增殖细胞用CaN特异性抑制剂CsA灭活CaN后,PKG Iα的表达明显增加,给予PE再次激活CaN后,PKG Iα的表达明显减少.     

大鼠肥厚心肌组织CaN Aβ基因沉默的实现及对细胞肥大抑制作用

目的 诱导钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)Aβ基因沉默,探索防治心肌肥厚的新方法.方法 成年Wistar 大鼠(30只) 随机分为假手术组,"一肾一夹"模型组,CaN Aβ心包腔内干扰组,心包腔干扰阴性对照组,CaN Aβ舌下静脉干扰组,舌下静脉干扰阴性对照组.转染6d 后,处死大鼠并取材,测定血浆常规肝肾功能、心肌酶指标,RT-PCR 法检测心肌组织CaN Aβ、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF) 及β- 重链肌球蛋白(myosin heavy chain,β-MHC) 基因mRNA 水平,免疫荧光检测CaN Aβ蛋白表达.结果 模型组心肌CaN Aβ、ANF、β-MHC 基因mRNA 水平高于假手术组(P<0.05) ;切取左心室前壁心外膜下薄层心肌组织,心包腔内干扰组CaN、ANF、β-MHC mRNA 水平明显低于模型组及心包腔内阴性对照组(P<0.05) ;CaN Aβ蛋白免疫荧光显示心包腔内干扰组较模型组心外膜下心肌细胞荧光减弱;各手术组之间血浆GPT/GOT,Ua/Cr/UN,CK/CK-MB/LDH 无明显差异.结论 心包腔内注射辅以微泡+酶类的使用及超声导入,可改善质粒在动物水平心肌组织的转染效率,CaN Aβ干扰可抑制肥大相关基因ANF、β-MHC 的表达,对心、肺、肝及肾等组织无明显损伤.     

大鼠心脏非心肌细胞对心肌细胞收缩功能的影响及其与血管紧张素的关系

目的研究大鼠心脏非心肌细胞对心肌细胞α-肌球蛋白重链(α-MHC)及β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达的影响及与血管紧张素受体的关系。方法分离、纯化、培养出生1~3 d的SD乳鼠心肌细胞(MC),同时制备非心肌细胞条件培养液(NMCM)。培养细胞的分组及药物干预:M组:MC+新鲜培养液;C组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM;L组:MC+新鲜培养液+AT1受体阻断剂〔氯沙坦(Losartan,10-6mol/L);〕CL组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM+Losartan;P组:MC+新鲜培养液+AT2受体阻断剂(PD123319,10-6mol/L);CP组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM+PD123319;LP组:MC+新鲜培养液+Losartan+PD123319;CLP组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM+Losartan+PD123319)。药物干预后24 h检测心肌细胞α-MHC及β-MHC mRNA的表达情况。结果C组、CP组的α-MHC表达明显低于其他组,差异有统计学意义(P<0.001),其余各组间差异无统计学意义。-βMHC mRNA表达的变化与此相反。结论非心肌细胞培养液可使心肌细胞MHC mRNA的表达从α亚型向β亚型转移。这种作用可能是非心肌细胞产生的AngⅡ通过AT1受体实现的。     

哮喘气道重塑中钙调神经磷酸酶与蛋白激酶活性的相互调节

目的:研究钙调神经磷酸酶(CaN)信号途径与蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)和蛋白激酶A(PKA)的相互调节在哮喘气道重塑发病中的作用.方法:建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,实验分为:哮喘组、CaN抑制剂环孢霉素A(CsA)组和对照组,采用磷酸化和去磷酸化方法测定肺组织CaN活性、MAPK活性、PKC活性、PKA活性.在离体培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中,以尾加压素Ⅱ(UⅡ)为刺激因素,测定CaN,PKC和MAPK活性以及它们之间的相互调节.结果:(1)哮喘组CaN活性、MAPK活性和PKC活性分别较对照组高19%(P<0.01)、28%(P<0.01)和35%(P<0.05),PKA活性较对照组低53%(P<0.01).CsA组CaN活性、MAPK活性和PKC活性分别较哮喘组低52%(P<0.01)、18%(P<0.05)和52%(P<0.01),PKA活性较哮喘组高2.65倍(P<0.01).(2)UⅡ 10-7 mol/L孵育20 min引起ASMC PKC和MAPK活性分别较对照组增加44%和24%(P<0.01),并呈时间依赖性引起ASMC中CaN活性增加,24 h为对照组的1.67倍(P<0.01).(3)与单用UⅡ 10-7 mol/L组比,CaN抑制剂CsA 10-6 mol/L使CaN活性降低了45%(P<0.01),MAPK抑制剂PD98059 50 μmol/L对CaN活性无明显影响(P>0.05),PKC抑制剂H7 50 μmol/L使CaN活性下降21%(P<0.05).(4)CsA 10-6 mol/L 作用使UⅡ 10-7 mol/L刺激的ASMC PKC活性下降了14%(P<0.05),对MAPK活性无明显影响(P>0.05).结论:在哮喘气道重塑的发生过程中,CaN与MAPK、PKC和PKA之间存在相互调节.     

熊果酸抑制AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大实验研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其可能机制。方法 按常规方法分离并培养新生大鼠心肌细胞。CCK-8法确定UA（2、4、8、16μmol/L）对心肌细胞的最佳作用浓度,利用AngⅡ诱导建立新生大鼠心肌细胞肥大模型。实验分对照组（control组）、AngⅡ组、UA干预组、LY294002（PI₃K/Akt通路抑制剂）干预组共4组。UA和LY294002均预处理心肌细胞30min。以心肌细胞表面积、β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA和脑钠肽（BNP）mRNA表达作为心肌细胞肥大标志,同时使用蛋白免疫印迹法检测T-Akt（total Akt）和p-Akt（phospho-Akt）蛋白表达。结果 显微镜下观察各组心肌细胞生长良好。与control组相比,AngⅡ组和UA干预组大鼠心肌细胞表面积增加（P<0.05）,LY294002干预组心肌细胞表面积差异无统计学意义（P>0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组大鼠心肌细胞表面积减小（P<0.05）。与control组相比,AngⅡ组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达显著增加（P<0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均降低（P<0.05）;UA干预组和LY294002干预组之间p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均差异无统计学意义（P>0.05）;4个实验组间T-Akt蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 （1）AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大模型中,心肌细胞表面积增加,BNP mRNA和β-MHC mRNA表达升高,同时伴有p-Akt蛋白表达增加,提示PI₃K/Akt通路在AngⅡ致心肌细胞肥大中起重要作用。（2）UA能减轻AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小,p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达减少,这与LY294002作用一致,提示UA可能是通过抑制PI₃K/Akt通路而发挥抗心肌肥大作用。     

阿托伐他汀对心肌肥大的抑制作用及FoxO1表达的影响

目的探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞的抑制作用及对转录因子FoxO1表达的影响。方法将H9C2细胞分为3组,对照组:未给予任何干预;心肌肥大组:给予AngⅡ(10-7 mol/L)刺激细胞;阿托伐他汀组:预先给予atorvastatin(10-5 mol/L),30min后AngⅡ(10-7 mol/L)刺激细胞。western-blotand real time PCR检测H9C2细胞FoxO1蛋白及mRNA含量,脑钠肽(brain natriuretic pepide,BNP)作为判断心肌肥大的指标。结果 AngⅡ诱导心肌细胞肥大后FoxO1表达较正常心肌细胞明显降低(P<0.05),而给予阿托伐他汀干预的肥大心肌细胞其FoxO1表达较肥大心肌明显升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过上调FoxO1表达,从而抑制心肌肥大。     

Study of the induction condition of ICA on α-MHC and β-MHC produced by MSCs

目的 寻找淫羊藿苷(ICA)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳诱导时间和浓度.方法 把MSCs随机分为6组,即正常对照组、4个浓度的ICA组(10-6,10-7,10-8,10-9 mol/L)、5 -氮胞苷(5-Aza)组,每组又分为4个诱导时间组,即24h+1 d、24h+1周、48 h+1 d、48 h+1周.利用RT-PCR方法检测各组的--心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)表达量.结果 与其他时间组相比,ICA( 10-7 mol/L)在培养24h+1周时,α-MHC和β-MHC表达最高.结论 ICA( 10-7mol/L)与MSCs共同培养24 h +1周时,能更好地促进α-MHC和β-MHC的表达.     

17β-雌二醇对体外机械牵张诱导心肌细胞肥大的影响

目的:研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对体外机械牵张诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:以机械牵张刺激体外培养的新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,采用免疫荧光方法分析心肌细胞表面积、Western blot方法检测肥大指标之一β-MHC的表达,以观察E2对机械牵张诱导的心肌细胞肥大的影响,并采用Western blot方法检测心肌细胞整合素β1(inte-grinβ1)表达的变化。结果:与对照组相比,机械牵张24 h后,心肌细胞表面积、心肌细胞胎儿型蛋白β-MHC表达增加,表明机械牵张24 h可诱导心肌细胞肥大。同时,机械牵张24 h心肌细胞整合素β1水平亦显著增加。100 nmol/L E2预处理30 min可明显减轻机械牵张诱导的心肌细胞表面积和β-MHC蛋白水平的增加,降低机械牵张诱导的心肌细胞整合素β1增加,该效应可被雌激素受体非特异性拮抗剂ICI182780逆转。结论:一定水平的E2可改善机械牵张诱导的心肌细胞肥大反应,并且能降低机械牵张诱导的integrinβ1表达的增加。