金黄色葡萄球菌耐药性（R）质粒的鉴定

金黄色葡萄球菌是重要的化脓菌之一。该菌引起的感染涉及临床许多领域；细菌易形成耐药性是该菌的另一重要特性，从基因水平分析，金黄色葡萄球菌的耐药怀可能是由细菌染色体基因决定的，也可能是南粒基因所编码。因此，对耐药性（Ｒ）质粒的检测是研究金区区２耐药基因的常用方法。但是，由于金葡菌细胞壁厚而坚固，抽提Ｒ质粒通常使用溶葡萄球菌素。该试剂需进口且昂贵。本文使用一种经过改进的ｋａｄｏ和Ｌｉｕ质粒抽提法对耐药悸     

11年间731例菌生症患者细菌感染谱和耐药性的变迁

目的 研究１１年间菌血症患者细菌感染谱和耐药性的变迁。方法 用纸片扩散法对由菌血症患者分离出的细菌进行药敏试验。 结果 表皮葡萄球菌菌血症的构成增高非常显著。在金黄色葡萄球菌（以下简称金葡萄）菌血症中，耐甲氧西林金葡菌（ＭＲＳＡ）菌血症的构成增高非常显著。ＭＲＳＡ和对甲氧西林敏感的金葡菌（ＭＳＳＡ）对青霉素和庆大霉素的耐药性增高均非常显著。与１９８６￣１９９０年比较，１９９１￣１９９６年，表皮葡萄     

11年间731例菌血症患者细菌感染谱和耐药性的变迁

研究１１年间菌血症患者细菌感染谱和耐药性的变迁。方法用纸片扩散法对由菌血症患者分离出的细菌进行药敏试验。结果表皮葡萄球菌菌血症的构成增高非常显著。在金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）菌血症中，耐甲氧西林金葡菌（ＭＲＳＡ）菌血症的构成增高非常显著。ＭＲＳＡ和对甲氧西林敏感的金葡菌（ＭＳＳＡ）对青霉素和庆大霉素的耐药性增高均非常显著。与１９８６～１９９０年比较，１９９１～１９９６年，表皮葡萄球菌对青霉素、红霉素和甲氧西林的耐药性增高非常显著，绿脓杆菌对羧苄西林和哌啦西林的耐药性，大肠杆菌对庆大霉素和头孢哌酮的耐药性，克雷白菌对氨苄西林和羧苄西林的耐药性增高均非常显著。产生诱导型β－内酰胺酶的肠杆菌科细菌对第一至第三代头孢菌素均有较高的耐药性。结论细菌对常用的抗菌药物产生了程度不等的耐药性     

金黄色葡萄球菌耐药表型检测

目的 检测金黄色葡萄球菌（金葡菌）的耐药表型,指导临床合理用药。方法 对临床分离的金葡菌用琼脂筛选法区分耐甲氧西林金葡菌（ＭＲＳＡ）和甲氧西林敏感金葡菌（ＭＳＳＡ）,用碘试管法和酸试管法测定β－内酰胺酶,用Ｋ－Ｂ法进行药敏试验。结果 ６６株金葡菌中,ＭＲＳＡ占４５．５％,产两种β－内酰胺酸疼的百分率分别是８４．８％（青霉素酶）和５７．６％（头孢菌素酶）,ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ产酶率无明显差异。除万古霉     

金黄金葡萄球菌肠毒素基因定研究

对４０株产１种或１种以上肠毒素的金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）进行分析，结果全部金葡菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ，１２／１２）、金葡菌肠毒素Ｃ（ＳＥＣ，１９／１９）、大部分金葡菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ，２３／２８）的产生不因质粒的消除而消失，说明ＳＥＡ、ＳＥＣ的基因位点在染色体上。有５株金葡菌因质粒消除而推动产ＳＥＢ的能力，其基因位点，可能在质粒或染色体上。４株金葡菌亦均因质粒消除失去产金葡菌肠毒素Ｄ的能力，其     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印普杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３｀寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份传阅耕ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩     

PCR扩增nuc基因快速检测金黄色葡萄球菌

为快速检测标本中金黄色葡萄球菌，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增金葡萄ｎｕｃ基因，并与培养法进行比较分析。结果只有金葡菌扩增出一条特异的ＤＮＡ条带，平行对照的其它菌株均为阴性，说明用ＰＣＲ检测金葡菌的方法简便、快速、特异、敏感。     

医院内感染甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的调查研究

医院内感染甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的调查研究上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科高健，林之莓上海第二医科大学附属瑞金医院检验科倪语星，项明洁甲氧西林耐药金葡菌（ＭＲＳＡ）是院内感染的重要病原菌之一，在医院内呈散发或暴发流行。该菌除对甲氧西林耐药外，...     

金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

从临床标本中共分离出金黄色葡萄菌７６株，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）３２株，占４２％；对甲氧西林敏感的金黄色葡萄菌（ＭＳＳＡ）４４株，占５８％，同时用９种常用药物对金黄色葡萄球菌进行了药敏试验。发现万古霉素、氟哌酸、丁胺卡那，卡那霉素对ＭＳＳＡ敏感率分别为：１００％、１００％、７３％、５５％；万古霉素、氟哌酸对ＭＲＳＡ的敏感率分别为：８８％、５０％。对９种抗生素的耐药率ＭＲＳＡ显然高于ＭＳＳＡ（Ｐ＜０．０５）。产β─内酰胺酶ＭＲＳＡ为６９％高于ＭＳＳＡ的４５％，总产酶率为６１％。     

MRSACM分离培养MRSA方法学评价及临床应用研究

本文对文献报道的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌选择培养基（ＭＲＳＡＣＭ）用于分离培养耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的效果进行了评价。并对我院９６年９月至９７年６月ＭＲＳＡ临床分离率及临床常见用抗生素敏感性进行了调查分析。结果显示：该培养基敏感性达１００％，特异性＞９７％：且方法简便、快速、准确。我院ＭＲＳＡ分离率占金葡萄的７１．１％。占感染标本的２３．７％。ＭＲＳＡ具有多重耐药性。     

Occurrence of resistance to antibiotics,metals, and plasmids in clinical strains of Staphylococcus spp

BACKGROUND: Presence of staphylococci resistant to antibiotics is of concern, as is the possible spread of resistance determinants among Staphylococcus species. During the past several years, a series of staphylococcal isolates that demonstrated reduced susceptibility to vancomycin or other glycopeptides has been reported. However, there are no useful data on species sensitivity of coagulase-negative staphylococci to heavy metals. METHODS: A total of 22 Staphylococcus spp. isolates recovered from clinical sources was studied for antibiotic and heavy metal resistance patterns and plasmid profiles. Isolated strains were biochemically identified by conventional tests followed by use of API Staph system. Isolates were tested for antimicrobial susceptibility by standard methods. Resistance patterns to nickel chloride (NiCl(2)), zinc sulfate (ZnSO(4)), lead acetate Pb(CH(3)COO)(2), cobalt chloride (CoCl(2)), copper sulfate (CuSO(4)), potassium chromate (K(2)Cr(2)O(7)), silver nitrate (AgNO(3)), and mercuric chloride (HgCl(2)) were surveyed by agar-dilution method. Plasmid DNA was prepared according to a previously described modification of alkaline lysis procedure. RESULTS: In this study, isolated strains included eight (36.4%) Staphylococcus xylosus, five (22.7%) Staphylococcus aureus, four (18.2%) nonidentifiable Staphylococcus spp., one (4.5%) Staphylococcus capitis, one (4.5%) Staphylococcus lentus, one (4.5%) Staphylococcus epidermidis, one (4.5%) Staphylococcus sciuri, and one (4.5%) Staphylococcus chromogenes. All strains showed widest resistance profile to both antibiotics and metals. Methicillin resistance of Staphylococcus aureus (MRSA) was 40%. Resistance to oxacillin was 53% in coagulase-negative staphylococci (CNS) strains. No isolate was resistant to vancomycin. All isolates were resistant to K(2)Cr(2)O(7) and Pb(CH(3)COO)(2); on the other hand, all isolates were sensitive to AgNO(3). Highest incidence of metal-antibiotic multiple resistance existed between K(2)Cr(2)O(7), Pb(CH(3)COO)(2), and penicillin-G. Plasmid content and profile studies showed that isolates carried plasmids ranging from 2.224 to 20.650 kb in size. CONCLUSIONS: Fifty percent of studied strains harbored plasmids and association between occurence of plasmids and resistance to antibiotics and heavy metals was observed.     

金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒DNA的抽提及检测

本文报道了用溶菌酶合并使用少量溶葡萄菌素作为破壁酶提取金黄色葡萄球菌质粒DNA,然后用琼脂糖凝胶电泳来检测的方法。比较研究了一株自南京地区分离的金黄色葡萄球菌多剂耐药株(22)及用大黄素处理后所得的不同耐药性消除菌株的质粒DNA。结果证明,在金黄色葡萄球菌(22)中含有4条质粒带。分子量较小的二条质粒带可能与四环素耐药性及青霉素耐药性有关。它们的分子量约为2.6及2.0 Mdal。     

喹诺酮类抗菌药对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用

以喹诺酮类药物作为质粒消除剂,进行抗生素耐药质粒定位实验。通过10株金黄色葡萄球菌耐药株的实验,确定其中3株菌具有氯霉素、四环素和红霉素耐药质粒。并比较了喹诺酮类与SDS的消除作用,发现在不同浓度的消除剂及不同菌株中其消除作用不相同。     

临床分离葡萄球菌中mecR1和mecI基因突变缺失研究

目的了解临床分离的耐甲氧西林葡萄球菌携带的mecR1和mecI基因的突变缺失情况,并探讨这种突变和缺失对mecA基因表达和耐药表型的影响。方法收集本院2006年临床分离的葡萄球菌,使用PCR法检测mecA基因和调控基因mecR1和mecI,然后对mecI基因测序并与金黄色葡萄球菌N315株(Genbank登录号:BA000018)携带的mecI基因比对。结果在60株金黄色葡萄球菌、58株表皮葡萄球菌和37株溶血葡萄球菌中检测到mecA基因,但有6株表皮葡萄球菌和4株溶血葡萄球菌的mecA基因仅能用引物mecA2-F、mecA2-R而不能用引物mecA1-F、mecA1-R检测到。金黄色葡萄球菌携带的完整mecR1基因要多于表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌(P<0.001),但表皮葡萄球菌与溶血葡萄球菌携带的完整mecR1基因并无差别(P>0.0125)。mecI基因的缺失突变严重,在155株葡萄球菌中仅有14株(占9%)携带野生型mecI基因,202位点(C→T)的点突变发生在36株中。结论mecA的基因表达在金黄色葡萄球菌中可能主要来自mecR1基因的诱导而在凝固酶阴性葡萄球菌中则来自其他因素;mecI基因的突变缺失在临床分离的葡萄球菌中是一种普遍现象,可能存在一种能绕开mecI基因的抑制作用而使mecA基因表达的机制。     

用溶菌酶—SDS微量法提取金黄色葡萄球菌质粒DNA

本文报道了检测金黄色葡萄球菌质粒DNA的微量方法(溶菌酶-SDS微量法),无需使用溶葡萄球菌素(Lyostaphin)。方法用少量的斜面培养物,经溶菌酶、SDS、EDTA裂解细胞,碱酚和氯仿-异戊醇一次脱蛋白,乙醇沉淀DNA,便得到可以直接用于琼脂糖凝胶电泳检测的质粒DNA。将该法与常规的溶葡萄球菌素法进行比较,分别检测了30株从南京地区临床分离的耐药性金黄色葡萄球菌。两种方法对细胞的裂解率为100%,质粒检出率为96.6%。用两种方法所得到的质粒电泳图谱基本相同,有些菌株发现有大质粒带。     

医院内感染耐药菌质粒的调查

目的：了解医院内感染耐药性菌质粒的分布情况。方法：运用质粒图谱,限制性内切酶谱,质粒消除,接合传递等系列补充实验对医院内感染细菌的R－质粒进行综合分析。结果：医院内感染以革兰氏阴性杆菌为主,占79．6％,其中71％的革兰氏阴性杆菌含R－质粒,DNA分子在2．3－23．1KB间,75．2％的铜绿假单胞菌经质粒消除后,对先锋V,庆大霉素,氨卞青霉素和羟卞青霉素由原来的耐药变为敏感,说明这部分细菌的抗药性是由质粒介导的。另外24．8％的菌株虽然质粒被消除了,但抗药性并未发生改变,铜绿假单胞菌20KB的质粒可转化到受体菌中,使受体菌带有铜绿假单胞菌相同的抗药性,表明这一质粒可在不同种属间传递,有成为“流行质粒”的倾向。结论：医院内感染以革兰氏阴性菌为主,质粒在耐药菌株的传播流行中起重要作用。     

肺炎克雷伯杆菌产β-内酰胺酶耐药性质粒的提取及鉴定

目的探讨耐药性质粒在肺炎克雷伯杆菌中的耐药机制。方法采用琼脂稀释法测定临床分离的31株肺炎克雷伯杆菌对阿奇霉素、氨苄西林和头孢菌素类抗生素的耐药性，采用质粒DNA小量制备的碱裂解法对耐药菌株进行质粒提取，通过转化试验对质粒的耐药性进行鉴定。结果31株肺炎克雷伯杆菌对阿奇霉素、氨苄西林和头孢菌素类抗生素有不同程度的耐药现象。其中从两株耐药性肺炎克雷伯菌中分离出两种质粒，经转化后鉴定为耐药性质粒，大小分别为2．3kb和8．2kb。结论肺炎克雷伯杆菌的临床分离株的耐药性部分决定于耐药性质粒的存在。     

鲍曼不动杆菌质粒指纹图谱分析及质粒与其耐药性关系的研究

目的监测鲍曼不动杆菌的院内感染状况,探讨质粒与其耐药之间的关系.方法用琼脂纸片扩散法(K-B法)测定鲍曼不动杆菌对14种抗生素的敏感性.微量碱裂解法快速提取质粒DNA,通过琼脂糖凝胶电泳获得质粒指纹图谱.对单质粒菌株采用质粒消除试验研究其与耐药性之间的关系.结果抗生素敏感性测试结果表明,大多数菌株显示出多重耐药性.71株临床分离株中有43株检测到质粒,根据质粒图谱可分为8个型别.质粒消除试验显示32.0 kb的质粒消除后耐药性无明显变化,22.0 kb的质粒消除后,该菌对部分抗菌药物的耐药性丢失.结论亚胺培南、舒普深和头孢吡肟具有较高的抗菌活性,可作为鲍曼不动杆菌感染的治疗药物.质粒指纹技术仍可作为院内感染流行病学调查的一种重要手段,其结果表明该院鲍曼不动杆菌感染呈散发的流行态势.22.0 kg的质粒与该菌对氨苄西林、哌拉西林、庆大霉素、阿米卡星的耐药性有关.     

金黄色葡萄球菌CCC型及OC型质粒的检测

采用已报道的金黄色葡萄球菌质粒DNA的检测方法(简称LL法)。从1982年在南京地区临床分离的131株金黄色葡萄球菌中的125株(95.4%)中检出质粒,可分为21质粒谱。经单向及双向二步琼脂糖凝胶电泳法鉴别,按分子量共有16个CCC型质粒带(P_1～P_(16))。用改良的LL法制备E.coli V517菌株质粒DNA,建立了简便的测定金黄色葡萄球菌质粒DNA分子量的参考系统。结果表明:要本实验条件下,P_1～P_(16)的分子量为1.42 Md～22.24±0.73 Md;以含有14.88、2.66±0.06 Md质粒谱的菌株较常见,占总数的25.2%;2.66±0.06 Md的质粒最常见,在73.3%的菌株中检出。     

双黄连、清开灵对耐药大肠埃希菌R质粒及β-内酰胺酶的影响

目的探讨清热解毒中药双黄连、清开灵对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌R质粒的消除作用及对β-内酰胺酶活性的影响。方法取分离于临床的ESBLs阳性大肠埃希菌,用质粒提取试剂盒提取质粒,应用琼脂糖凝胶电泳、紫外凝胶成像仪分析中药作用前后质粒消除情况;以超声破碎法获取β-内酰胺酶提取液,用Bradford法进行蛋白定量,以头孢硝噻吩(Nitrocefin)为底物测定β-内酰胺酶活性。结果对双黄连、清开灵作用前后质粒图谱比较发现经中药处理后均丢失了一条质粒带;肉汤菌、经舒巴坦、双黄连以及清开灵作用后细菌β-内酰胺酶活性分别为(13.43±0.40)、(3.49±0.12)、(3.54±0.27)、(3.35±0.12)U/mg,与肉汤菌相比,经双黄连、清开灵作用后酶活性降低,差异具有统计学意义(P<0.01);其作用与舒巴坦相当。结论双黄连及清开灵具有一定消除耐药大肠埃希菌质粒的作用,并且可抑制其β-内酰胺酶活性。